4.4.1. Ảnh hưởng của thời gian đến khả năng sinh tổng hợp laccase
Để khảo sát ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy đến khả năng sinh tổng hợp laccase của chủng BV1, chúng tôi tiến hành nuôi lỏng trong môi trường Basal ở 300C, lắc 200 vòng/phút. Kết quả theo dõi sau 7 ngày nuôi được thể hiện ở Đồ thị 3:
`
Đồ thị 3: Ảnh hưởng của thời gian tới khả năng tổng hợp laccase của BV1
Qua Đồ thị 3 ta thấy chủng BV1 sinh tổng hợp laccase mạnh nhất sau 6 ngày nuôi cấy (pha cân bằng), đây cũng là thời điểm chủng sinh trưởng tốt và cho sinh khối cao nhất. Sau ngày đầu tiên của quá trình nuôi, hoạt độ laccase xác định được là thấp nhất 1093 U/ml do ở thời điểm này chủng đang phải trải qua quá trình thích nghi với
môi trường mới, quá trình trao đổi chất diễn ra chậm. Đến ngày thứ 2, chủng nuôi đã dần thích nghi với môi trường, mặc dù lượng sinh khối tăng không nhiều (kết quả thể hiện ở đường cong sinh trưởng) quá trình tổng hợp enzyme tăng nhanh hơn hẳn ngày đầu và hoạt độ thu được đạt 9826 U/ml. Điều này cũng có thể cho thấy laccase từ chủng BV1 là enzyme được tổng hợp ở pha sớm của quá trình sinh trưởng. Ở những ngày theo dõi tiếp theo, hoạt độ laccase tiếp tục tăng chậm cùng với quá trình phát triển sinh khối tế bào. Nhưng đến ngày thứ 5 khi bước vào pha tăng trưởng do gặp điều kiện nuôi cấy thích hợp sinh khối tế bào tăng nhanh, các hoạt động trao đổi chất diễn ra thuận lợi nên lượng enzyme tổng hợp được nhiều, hoạt độ enzyme xác định được ở thời điểm này là 20107 U/ml và đạt cao nhất là 24327 U/ml ở ngày nuôi thứ 6 khi chủng bước vào pha cân bằng. Ở pha suy vong do chủng nấm mốc gặp phải những điều kiện bất thuận, sinh trưởng giảm mạnh dẫn đến sự tổng hợp enzyme cũng giảm đi nhanh chóng. Như vậy chủng BV1 sinh tổng hợp enzyme laccase cho hoạt tính cao nhất sau 6 ngày nuôi cấy. Kết quả này được dùng cho các thí nghiệm tiếp theo.