Khảo sát tác dụng chống viêm cấp theo phƣơng pháp gây viêm tai

- Động vật thí nghiệm: Chuột nhắt trắng chủng Swiss, cả hai giống, khỏe mạnh, trọng lƣợng từ 18-22g.

- Tiến hành: 70 chuột nhắt trắng đƣợc chia ngẫu nhiên thành 6 lô, mỗi lô 10 con.

Lô 1 (chứng): gây mô hình viêm ở tai phải và uống nƣớc cất 0,2mg/10g TT chuột.

Lô 2 (methylprednisolon): gây mô hình viêm ở tai phải và uống Methylpred- nisolon với liều 20 mg/kg một lần duy nhất.

Lô 3 (cao ethanol liều thấp): gây mô hình viêm ở tai phải và uống cao chiết ethanol (liều tƣơng đƣơng lâm sàng) 2,11g cao/kg TT/ngày với thể tích 0,2 ml/10g TT trong 3 ngày liên tiếp.

Lô 4 (cao ethanol liều cao): gây mô hình viêm ở tai phải và uống cao chiết ethanol (liều gấp 3 lần liều tƣơng đƣơng lâm sàng) 6,33g cao/kg TT/ngày với thể tích 0,2 ml/10g TT trong 3 ngày liên tiếp.

Lô 5 (cao nƣớc liều thấp): gây mô hình viêm ở tai phải và uống cao sắc nƣớc (liều tƣơng đƣơng) 3,54g cao/kg TT/ngày với thể tích 0,2 ml/10g TT trong 3 ngày liên tiếp.

Lô 6 (cao nƣớc liều cao): gây mô hình viêm ở tai phải và uống cao sắc nƣớc liều cao (liều gấp 3 lần liều tƣơng đƣơng lâm sàng) 10,62g cao/kg TT/ngày với thể tích 0,2 ml/10g TT trong 3 ngày liên tiếp.

- Tác nhân gây viêm tai chuột là dầu croton pha trong aceton.

Cách pha: Pha 40mg dầu croton vào 2ml aceton (nhƣ vậy trong mỗi 20µl hỗn hợp sẽ chứa 0,4mg dầu croton).

- Tiến hành:

Chuột đƣợc uống thuốc thử 2 ngày trƣớc khi làm nghiên cứu và ngày thứ 3 trƣớc khi gây mô hình 1h với liều lƣợng nhƣ trên. Một giờ sau khi uống thuốc thử lần thứ 3, toàn bộ chuột đƣợc gây mô hình bằng dầu croton trên tai phải.

Trƣớc khi gây mô hình bằng dung dịch dầu croton (trong aceton), chuột đƣợc đo chiều dày tai ở tất cả các lô. Đo chiều dày tai tại vị trí sát đỉnh của tai cách xa chóp sụn vành tai.

Gây mô hình viêm: Bôi lên mặt ngoài tai phải chuột 20µl dung dịch dầu croton để gây mô hình viêm tai trên chuột ở tất cả các lô. Ở tất cả các chuột bôi croton, tai trái không gây mô hình và không bôi thuốc gì.

6h sau khi gây mô hình, chuột đƣợc gây mê bằng thiopental. Tai chuột đƣợc đo lại chiều dày, sau đó dùng sinh thiết cắt ở phần trung tâm với đƣờng kính 7mm để đo cân nặng [33].

Kết quả_Nhận xét

+ Về cân nặng: Cân nặng đƣợc thể hiện ở bảng sau

Bảng 3.7. Cân nặng trung bình của các lô chuột

Lô Thuốc thử Cân nặng (  SD, g)

1 Chứng 24,41,3

2 Methylprednisolon 25,12,0

3 Cao ethanol liều thấp 25,21,8

4 Cao ethanol liều cao 25,01,3

5 Cao nƣớc liều thấp 24,41,2

6 Cao nƣớc liều cao 24,41,2

Bảng 3.7. cho thấy không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (test ANOVA) về cân nặng giữa các lô với nhau. Khi so sánh từng lô với lô chứng (t-test student) cũng không cho thấy sự khác biệt có ý nghĩa thống kê. Điều này đảm bảo sự tƣơng đồng về mặt sinh học giữa các lô chuột thí nghiệm.

+ Về chiều dày tai chuột:

Bảng 3.8. dƣới đây thể hiện sự thay đổi vể chiều dày tai trƣớc và sau khi gây mô hình 6h.

Bảng 3.8. Chiều dày tai bên phải của chuột trƣớc và sau khi gây mô hình 6h

Lô Thuốc thử n

Chiều dày tai chuột

(  SD,µm)

Trƣớc Sau 6h

1 Chứng 10 21,20  3,29 27,00  3,68+

2 Methylprednisolon 10 21,00  4,32 23,40  3,12* 3 Cao ethanol liều thấp 10 21,80  3,71 25,40  3,86+ 4 Cao ethanol liều cao 10 19,80  2,39 26,00  4,71+ 5 Cao nƣớc liều thấp 10 20,60  4,01 25,40  3,53+ 6 Cao nƣớc liều cao 10 19,80  3,05 25,20  3,29+

Chú thích: +: Khác biệt so với trước, test t ghép cặp, p < 0,05

*: Khác biệt so với lô chứng tại cùng thời điểm, test t-Student, p < 0,05

Từ kết quả bảng 3.8. thấy:

Không có sự khác biệt về chiều dày tai bên phải ở thời điểm trƣớc nghiên cứu giữa các lô (test ANOVA). Kết quả này phù hợp với kết quả ở bảng 3.8: Tƣơng đồng sinh học giữa các lô chuột đƣợc đảm bảo.

Đối với lô 1 chứng chỉ đƣợc bôi dầu croton, chiều dày của tai phải tăng lên rõ rệt, khác biệt có ý nghĩa thống kê so với ban đầu (test t ghép cặp), điều đó cho thấy tác dụng gây viêm cấp của dầu croton trên tai chuột nhắt.

Lô 2 uống methylprednisolon chiều dày tai có tăng nhƣng không khác biệt có ý nghĩa thống kê so với trƣớc nghiên cứu (test t ghép cặp). Chiều dày tai của lô uống methylprednisolon có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng tại cùng thời điểm (test t Student). Điều này cho thấy methylprednisolon đƣờng uống có tác dụng chống viêm cấp rõ rệt gây ra bởi dầu croton trên tai chuột.

Các lô uống thuốc thử: cao ethanol liều thấp, cao ethanol liều cao, cao nƣớc liều thấp và cao nƣớc liều cao: Đều cho thấy xu hƣớng giảm so với lô chứng, tuy nhiên sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê (test t Student). Ở các lô này, chiều dày tai bên phải tại thời điểm 6h sau khi gây mô hình vẫn tăng có ý nghĩa thống kê so với trƣớc khi gây mô hình.

+ Về khối lượng tai chuột, mức độ ức chế viêm: thể hiện ở bảng sau

Bảng 3.9. Khối lƣợng tai chuột trƣớc và sau khi gây mô hình 6h

Lô Thuốc thử n

Khối lƣợng tai chuột

(  SD,µg)

Tai phải Tai trái

1 Chứng 10 33,80  6,37+ 14,20  2,66

2 Methylprednisolon 10 17,60  3,31+* 12,90  1,45 3 Cao ethanol liều thấp 10 30,10  4,36+ 13,90  1,45 4 Cao ethanol liều cao 10 30,01  2,96+ 14,70  3,20 5 Cao nƣớc liều thấp 10 29,30  3,06+ 14,30  2,54 6 Cao nƣớc liều cao 10 30,90  3,35+ 14,00  1,49

Chú thích: +: Khác biệt so với tai bên trái, test t-Student, p < 0,001 *: Khác biệt so với lô chứng, test t-Student, p < 0,001

Tính mức độ ức chế viêm (%) và vẽ biểu đồ thể hiện mức độ ức chế viêm:

Hình 3.5. Biểu đồ thể hiện mức độ ức chế viêm cấp tại chỗ (%)

Có thể thấy:

Ở lô chứng, khối lƣợng tai phải tăng rõ rệt so với tai bên trái, điều đó chứng tỏ tác dụng gây viêm cấp (phù nề) của dầu croton.

Ở lô uống methylprednisolon, khối lƣợng tai giảm rõ rệt so với lô chứng, mức độ ức chế viêm của methylprednisolon là 44,08 %, điều này cũng phù hợp với các nghiên cứu trƣớc đó cho thấy corticoid có tác dụng mạnh trên mô hình gây viêm cấp bằng dầu croton [33], [34], [39]. X 0 10 20 30 40 50

methylprednisolon cao etoh thấp cao etoh cao

cao nƣớc thấp cao nƣớc cao 44.08 12.43 10.06 12.72 8.88 Mứ c độ ức chế viêm (%) methylprednisolon cao etoh thấp cao etoh cao cao nƣớc thấp cao nƣớc cao

Đối với lô uống cao ethanol liều cao và liều thấp đều cho thấy xu hƣớng giảm khối lƣợng so với lô chứng. Mức độ ức chế viêm ở lô uống cao ethanol liều thấp và liều cao tƣơng ứng là 10,06% và 12,43%. Tuy nhiên sự khác biệt chƣa có ý nghĩa thống kê so với lô chứng.

Tƣơng tự, đối với lô uống cao nƣớc liều thấp và liều cao đều cho thấy xu hƣớng giảm khối lƣợng so với lô chứng. Mức độ ức chế viêm ở lô uống cao nƣớc liều thấp và liều cao tƣơng ứng là 12,72% và 8,8%. Tuy nhiên sự khác biệt chƣa có ý nghĩa thống kê so với lô chứng.

+ Hình ảnh tai cả hai bên của các lô chuột được trình bày ở hình 3.6:

Hình 3.6. Hình ảnh tai chuột ở các lô chuột thí nghiệm

Hình 3.6. trình bày ảnh đại diện của tai chuột các lô nghiên cứu. Ở lô chứng cho thấy hình ảnh rõ nét tai bên phải chuột phù nề, sƣng, đỏ hơn tai bên trái do tác dụng gây viêm của dầu croton. Ở lô chuột uống methylprednisolon cho thấy gần nhƣ không có sự khác biệt giữa tai phải và tai trái chứng tỏ tác dụng ức chế viêm rõ rệt của methylprednisolon. Ở lô uống cao nƣớc và cao ethanol (chuột bên trái đại diện cho liều thấp, bên phải đại diện cho liều cao), cho thấy tai bên phải tuy có giảm

so với lô chứng nhƣng vẫn có thể quan sát rõ phù nề và sƣng đỏ hơn tai bên trái. Điều này cũng phù hợp với các số liệu nghiên cứu đã trình bày ở trên.