3. Đối tượng nghiờn cứu
4.2. Xõy dựng đường chuẩn biểu diễn sự phụ thuộc của diện tớch peak vào
vào nồng độ
Dóy chuẩn α-tocopherol được khảo sỏt cú nồng độ như sau: 10ppm; 20ppm; 45ppm. Phõn tớch cỏc chuẩn với cỏc điều kiờn tối ưu đó khảo sỏt:
- Cột sắc ký: cột sắc ký pha thuận NP-18. - Tốc độ dũng: 0.5 ml/phỳt.
- Pha động: 1,4-dioxan/n-hexan: 1,2/98,8) - Nhiệt độ lũ cột: 300C
- Phỏt hiện: Đo huỳnh quang, bước súng Kớch thớch: 295nm, bước súng phỏt xạ: 330nm.
+ Tiến hành chạy mỏy HPLC thu được kết quả như sau:
Hỡnh 4.2.2. Sắc đồ mẫu chuẩn α-tocopherol cú nồng độ 20ppm
+ Từ kết quả xỏc định phương trỡnh hồi quy tuyến tớnh dựa vào diện tớch cỏc peak.
Nồng độ
chuần Diện tic pic m b R
2
10ppm 874,76288
77,59163 59,09645 0,99936 20ppm 1661,65234
45ppm 3411,18286
Bảng 4.2.1. Diện tớch pic của α-tocopherol tương ứng với từng nồng độ chuẩn
+ Sử dụng chương trỡnh Microsoft Excel để xõy dựng đường chuẩn, ta cú phương trỡnh đường chuẩn xỏc định hàm lượng α-tocopherol như sau:
Phương trỡnh hồi quy của đường chuẩn theo diện tớch peak cú dạng: y = mx +b x là nồng độ, y diện tớch pic
m = 77,59163 b = 59,09645 Hệ số hồi quy tuyến tớnh là R2 =0,99936
Hỡnh 4.2.4. Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ giữa diện tớch pic thu được và nồng độ cỏc chuẩn α-tocopherol
+ Từ giỏ trị diện tớch peak đo được ta tớnh được hàm lượng C (mg/g). + Sau đú ta tớnh hàm lượng α-tocopherol (mg/g) cú trong mẫu bơ và xốt trứng gà tươi theo cụng thức:
C = (C0/ m) .Vdm.f
Trong đú: C: nồng độ α-tocopherol cú trong mẫu tớnh bằng (mg/g) Co: nồng độ α-tocopherol trong dịch chiết từ đường chuẩn (ppm) Vdm: Thể tớch bỡnh định mức mẫu(ml)
f : hệ số pha loóng (nếu cú) m :khối lượng mẫu (mg)
Mẫu Cỏc mẫu C0 (ppm)
Khối lượng
mẫu (mg) Diện tich pic C (mg/g)
1 Bơ 5.44835 2,0006.103 481,84274 0,067901 2 Xốt trứng gà tươi 7.98866 2,0003.103 678,94958 0,099843
Bảng 4.2.2. Kết quả phõn tớch hàm lượng α-tocopherol trong mẫu xốt trứng gà tươi và mẫu bơ
+ Hàm lượng α-tocopherol (ppm) cú trong mẫu dầu gấc được tớnh theo cụng thức: C = (C0/ V) .Vdm.f
Trong đú: C : nồng độ α-tocopherol cú trong mẫu tớnh bằng (ppm) Co: nồng độ α-tocopherol trong dịch chiết tớnh từ đường chuẩn (ppm) V : Thể tớch lấy của mẫu lấy để phõn tớch (ml)
Vdm: Thể tớch bỡnh định mức mẫu(ml) f : hệ số pha loóng (nếu cú)
Mẫu Cỏc mẫu C0 (ppm) Thể tớch mẫu (ml)
Diện tich
peak C (ppm)
1 Dầu gấc 16,10281 5ml 1308,53931 161,0281
Bảng4.2.3. Kết quả phõn tớch hàm lượng α-tocopherol trong mẫu dầu gấc