3. Đối tượng nghiờn cứu
3.2.2. Tiến hành
3.2.2.1. Chất chuẩn gốc α-tocopherol ≥96%
Bảo quản: Chuẩn gốc bảo quản tại 20C đến 80C, hạn sử dụng dựa
theo khuyến cỏo của nhà sản xuất. Tất cả cỏc dung dịch chuẩn phải được chuẩn bị trước khi phõn tớch.
-Dung dịch chuẩn gốc 100 μg/ml: Cõn 10mg (±0.1mg) chất chuẩn α- tocopherol≥ 96% (M(C29H50O2)=430,7 g/mol) vào bỡnh định mức 100 ml, hũa tan và định mức đến vạch bằng n-hexan.
-Dung dịch chuẩn 10 μg/ml: Hỳt chớnh xỏc 1ml dung dịch chuẩn gốc 100 μg/ml vào bỡnh 10ml. Định mức đến vạch bằng dung dịch pha động.
Mẫu bơ và xốt trứng gà tươi
Cõn chớnh xỏc 2g cỏc loại mẫu
Trộn mẫu với natri sunfat khan Thờm n-hexan Siờu õn trong 5 phỳt Lọc bỏ chất rắn, rữa
Loại bỏ dung mụi bằng bộ cụ quay
Hũa tan phần cặn, định mức 25ml
Dung dịch Bơm qua đầu lọc
Mẫu bơm vào HPLC
- Dung dịch chuẩn 20 μg/ml: hỳt chớnh xỏc 2 ml dung dịch chuẩn gốc 100 μg/ml vào bỡnh định mức 10ml định mức đến vạch bằng dung dịch pha động.
- Dung dịch chuẩn 45 μg/ml: hỳt chớnh xỏc 4.5ml dung dịch chuẩn 100 μg/ml vào bỡnh định mức 10ml định mức đến vạch bằng dung dịch pha động.
Lắc đều và siờu õm 5 phỳt. Lọc dung dịch thu được qua màng lọc dung mụi 13mm - 0,45μm. Thu dịch lọc vào vial dựng cho HPLC, bơm vào mỏy. Cú ghi cỏc ký hiệu của mỗi mẫu chuẩn.
3.2.2.2 Mẫu phõn tớch
Để xỏc định hàm lượng α-tocopherol trong cỏc mẫu dầu gấc,bơ và xốt trứng gà tươi ta cần phải xử lý mẫu và bơm vào mỏy HPLC.
Xử lý mẫu sơ bộ:
- Đối với mẫu tinh dầu gấc: lắc kỹ, dựng pipet loại 5ml lấy 5ml mẫu cho vào bỡnh định mức 50ml thờn 1 lượng n-hexan, siờu õm trong 5 phỳt và định mức đến vạch bằng dung mụi pha động.
- Cỏc mẫu Bơ, xốt trứng gà tươi. Mẫu bơ: Cõn 2,0006g mẫu.
Mẫu xốt trứng gà tươi: cõn 2,0003g mẫu.
Cả hai lượng mẫu đều được trộn với lượng dư natri sunfat khan (nhằm tỏch chất bộo của bơ và xốt trứng gà tươi trước khi pha loảng mẫu), thờn n-hexan và xử lý hỗn hợp trong thiết bị siờu õm, lọc bỏ chất rắn và rữa ớt nhất hai lần bằng n-hexan, loại bỏ dung mụi bằng bộ cụ quay và ỏp suất giảm đến gần khụ (cũn gần 1ml). ở nhiệt độ 79.990C và tốc độ 115 vũng/phỳt. Hũa tan phần cũn lại trong 2 ml n-hexan và cho vào bỡnh định mức 25ml, định mức tới vạch bằng dung mụi pha động thu được cỏc mẫu:
+ Mẫu 1: mẫu xốt trứng gà tươi + Mẫu 2: mẫu bơ
- Định mức chớnh xỏc cỏc mẫu tới vạch bằng n-hexanl (lắc đều và siờu õm trong 5 phỳt). Lọc dung dịch thu được qua màng lọc dung mụi 13mm - 0,45μm. Thu dịch lọc vào vial dựng cho HPLC, bơm vào mỏy HPLC. Cú ghi cỏc ký hiệu của mỗi mẫu.