promoter gen MMP-9
Tương tự như mẫu mô, sau khi khuếch đại được đoạn ADN chứa vị trắ
biến đổi -1562, chúng tôi cũng tiến hành cắt sản phẩm PCR bằng enzyme SphI.
Như trong hình ảnh, nếu xuất hiện biến đổi C-1562T thì enzyme cắt sản phẩm PCR thành hai băng với kắch thước lý thuyết là 358bp và 238bp. Ngược lại nếu không xuất hiện biến đổi thì sản phẩm PCR không bị cắt và kắch thước lý thuyết bằng 596bp. Thực hiện ở mẫu máu của 14 bệnh nhân ung thư đại trực tràng, chúng tôi phát hiện được 2 mẫu có chứa biến đổi C→T tại vị trắ -1562. Như vậy biến đổi C-1562T cũng xuất hiện ở mẫu máu người bệnh. Thực hiện ở mẫu máu của 30 người bình thường cho máu, chúng tôi phát hiện được 9 mẫu có chứa biến đổi C →T tại vị trắ -1562. Như vậy biến đổi C-1562T cũng xuất hiện ở mẫu máu của người khỏe mạnh. Hình ảnh kết quả cắt enzyme được thể hiện ở hình 16.
Hình 16: Hình ảnh cắt enzyme giới hạn sản phẩm PCR từ mẫu máu người bình thường cho máu và mẫu máu bệnh nhân UTĐTT
Giếng 1: Băng chuẩn ADN 100bp
Giếng 2-3: Sản phẩm PCR và sản phẩm cắt enzyme từ mẫu máu của người bình thường cho máu (mã 29093)
Giếng 4-5: Sản phẩm PCR và sản phẩm cắt enzyme từ mẫu máu của bệnh nhân mã 16756
44
Để đánh giá sự xuất hiện của biến đổi C-1562T trên các vị trắ mô khác nhau ở cùng một bệnh nhân UTĐTT, tiến hành nghiên cứu và phân tắch ADN ở mẫu mô lân cận u, mẫu mô u và mẫu máu của cùng một bệnh nhân. Kết quả được thể hiện ở hình 17.
Hình 17: Hình ảnh điện di sản phẩm PCR-RE mẫu mô u-mô lân cận u và mẫu máu của cùng một bệnh nhân (mã 16678)
Giếng 1: Thang chuẩn ADN 100bp
G2-3: Sản phẩm PCR và sản phẩm cắt enzym của mẫu mô lân cận u G4-5: Sản phẩm PCR và sản phẩm cắt enzyme của mẫu mô u G6-7: Sản phẩm PCR và sản phẩm cắt enzyme của mẫu máu
Như trên hình 17, sản phẩm PCR từ mẫu mô lân cận u không bị cắt bằng enzyme, chỉ xuất hiện 1 băng có kắch thước khoảng 596bp, mẫu mô u được cắt tạo 2 băng với kắch thước khoảng 358bp và 238bp, còn mẫu máu thì cũng chỉ xuất hiện một băng với kắch thước khoảng 596bp. Như vậy, biến đổi chỉ xuất hiện ở mẫu mô u mà không xuất hiện ở mẫu mô lân cận u và mẫu máu. Từ kết quả này, chúng tôi dự đoán đây là biến đổi C-1562T có thể là biến đổi soma.