M Ở ĐẦU
2.3.1. Xác định hoạt độ lectin bằng phương pháp ngưng kết hồng cầu
Hồng cầu được sử dụng trong các thí nghiệm xác định hoạt độ NKHC của lectin là hồng cầu thỏ2% đã xử lý trypsin.
Tiến hành:
- Cho 25µL NaCl 0,85% vào mỗi giếng của đĩa 96 giếng đáy chữ V.
- Thêm 25µL mẫu dịch lectin cần kiểm tra hoạt độ ngưng kết hồng cầu vào giếng
đầu tiên, trộn đều, pha loãng sang các giếng tiếp theo với tỷ lệ pha là 1/2n (n: số lần pha loãng).
- Tiếp tục cho 25µL hồng cầu thỏ2% đã xử lý trypsin vào tất cả các giếng. - Lắc nhẹ, giữở nhiệt độ phòng. Sau 2 giờ, đọc kết quả.
Đọc kết quả:
- Kết quảdương tính: hồng cầu trong giếng bị ngưng kết hơn 50%.
Đơn vị hoạt độ
1 đơn vị hoạt độlectin hay 1 đơn vị hoạt độ NKHC trên 1 mL (HU/mL) chính là giá trị nghịch đảo của độ pha loãng lớn nhất mà dịch lectin còn có khả năng làm ngưng kết hơn 50% lượng hồng cầu cho vào phản ứng.
Hoạt độ lectin được xác định theo 2 chỉ số:
- Hoạt độ tổng (Utổng): là tổng số đơn vị hoạt tính có trong một thể tích nhất định.
Đơn vị: HU
Utổng = V. 2n
Trong đó: V: tổng thể tích (mL) n: số lần pha loãng
- Hoạt độ riêng (Uriêng): là số đơn vị hoạt độ lectin có trong 1mg protein. Đơn vị:
HU/mg
ê = U
Protein
Trong đó: Utổng: tổng sốđơn vị hoạt tính. Proteintổng: tổng hàm lượng protein.
- MAC (minimum agglutination concentration) là nồng độ nhỏ nhất có khảnăng gây ngưng kết hồng cầu thỏđã được xửlý trypsin. Đơn vị (mg/HU).