- Thí nghiệm 1: Đánh giá đặc điểm nông sinh học, năng suất, chất lượng, tính chín chậm, khả năng kháng xoăn vàng lá và mốc sương của các THL F1.
3.2.3.Chọn lọc các cá thể có gen ức chế sự chín rin
20 H13.162.7/1315 Thơm Chua dịu Trung bình mềm mịn Khô nhẹ 0,8 4,
3.2.3.Chọn lọc các cá thể có gen ức chế sự chín rin
Mục tiêu của nghiên cứu này nhằm xác định và chọn ra các cá thể có khả
năng kháng mốc sương, kháng xoăn vàng lá và chín chậm. Các thí nghiệm ở phần trên đã xác định được 32 cá thểđồng hợp tử về gen Ph-3, đồng hoặc dị hợp về gen kháng Ty-3. Như vậy, ở thí nghiệm này chúng tôi ưu tiên thực hiện phản ứng PCR
để xác định các cá thể có gen ức chế sự chín rin nhằm tăng số cây mang đồng thời cả 3 tính trạng mục tiêu.
Gen ức chế sự chín rinđược xác định nằm trên nhiễm sắc thể số 5 (Vrebalov et al., 2002a) và Zhang (2010) đã thiết kế cặp mồi rinF/R dựa trên trình tự phần cuối của gen rin được công bố bởi Vrebalov et al. (2002a). Cặp mồi này cho sản phẩm PCR là một đoạn DNA dài 850 bp ở các cây có gen rin, cây không chứa gen rin
không cho sản phẩm. Ứng dụng chỉ thị này trên 32 cá thể nghiên cứu, chúng tôi đã xác định được 21 cá thể có gen ức chế sự chín rin (bảng 3.11; hình 3.5). 21 cá thể
này sau đó được trồng ra đồng ruộng để đánh giá đặc điểm nông sinh học chọn ra các cá thể tốt và tiếp tục xác định 2 gen kháng xoăn vàng lá còn lại là Ty-2 và Ty-1.
Hình 3.5. Ảnh điện di phát hiện gen rin ở một số cá thể bằng cặp mồi rinF/R
L: 100 – 1000 bp DNA ladder; các cá thể 16, 22, 26, 54, 59: không có gen rin; các cá thể còn lại: có gen rin
Bảng 3.11. 21 cá thể có gen rin chọn được từ 32 cá thể nghiên cứu bằng cặp mồi rinF/R Quần thể Các cá thể có gen rin 331/1219 3, 7, 21, 25, 31, 37, 39, 44, 46, 48, 49, 66, 77, 81, 86, 93, 103, 109, 118, 130, 151 L 3 7 16 21 22 25 26 31 37 39 44 46 48 49 54 59 850 bp
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 60