- Thí nghiệm 1: Đánh giá đặc điểm nông sinh học, năng suất, chất lượng, tính chín chậm, khả năng kháng xoăn vàng lá và mốc sương của các THL F1.
20 H13.162.7/1315 Thơm Chua dịu Trung bình mềm mịn Khô nhẹ 0,8 4,
3.2.1. Chọn lọc các cá thể mang gen kháng mốc sương Ph-
Theo Truong et al. (2013) chỉ thị SCAR SCU602 là một chỉ thị đồng trội cho phép phát hiện các cá thể mang gen kháng Ph-3 cả dạng đồng và dị hợp tử. Theo đó, các cá thể có sản phẩm PCR với kích thước 400 bp là có gen Ph-3 đồng hợp tử, có 2 sản phẩm 400 và 450 bp là có gen Ph-3 dị hợp tử, các cá thể không có gen Ph-3 chỉ xuất hiện 1 đoạn 450 bp. Khi sử dụng cặp mồi này để thực hiện phản ứng PCR trên các giống đối chứng là dòng bố 1219 (Ph-3/Ph-3), dòng mẹ
331 (ph-3/ph-3) và con lai F1 331/1219 chúng tôi đã thu được các sản phẩm PCR
đúng như báo cáo của tác giả Kết quả ứng dụng chỉ thị SCU602 xác định các cá thể có gen kháng Ph-3 từ 152 cá thể thuộc quần thể 331/1219 F2 của chúng tôi
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 57
gel agarose 1,5% sau khi nhuộm Ethydiumbromide, 33 cá thể xuất hiện đoạn DNA 450 bp và 78 cá thể xuất hiện 2 đoạn DNA 400 và 450 bp. Như vậy, thông qua phản ứng PCR chúng tôi đã chọn ra được 41 cá thể chứa gen kháng Ph-3
đồng hợp tử và 78 cá thể dị hợp tử (hình 3.3 và bảng 3.9). Từ 41 cá thể chứa gen kháng Ph-3 đồng hợp tử vừa chọn được chúng tôi tiếp tục thực hiện phản ứng PCR để xác định các cá thể mang các gen kháng Ty-3.
Hình 3.3. Kết quả PCR phát hiện các cá thể mang gen kháng Ph-3 bằng cặp mồi SCU602 F3/R3
L: 100-1000 bp DNA ladder; các cá thể 3, 7, 11: kiểu gen Ph-3/Ph-3; các cá thể 4, 6, 10, 12, 15: kiểu gen Ph-3/ph-3; các cá thể khác: không có gen Ph-3
Bảng 3.9. Danh sách các cá thể mang gen Ph-3 đồng hợp tử chọn được bằng cặp mồi SCU602F3/R3 Quần thể Các cá thể có kiểu gen Ph-3/Ph-3 331/1219 3, 7, 11, 16, 17, 19, 21, 22, 25, 26, 30, 31, 33, 35, 37, 39, 44, 46, 48, 49, 54, 59, 63, 66, 70, 77, 81, 83, 86, 90, 93, 97, 98, 103, 109, 118, 130, 135, 138, 143, 151