- Thí nghiệm 1: Đánh giá đặc điểm nông sinh học, năng suất, chất lượng, tính chín chậm, khả năng kháng xoăn vàng lá và mốc sương của các THL F1.
3.2.2.Chọn lọc các cá thể mang gen kháng xoăn vàng lá Ty-
20 H13.162.7/1315 Thơm Chua dịu Trung bình mềm mịn Khô nhẹ 0,8 4,
3.2.2.Chọn lọc các cá thể mang gen kháng xoăn vàng lá Ty-
Sau khi thực hiện phản ứng PCR xác định được 41 cá thểđồng hợp tử về gen kháng mốc sương Ph-3, chúng tôi tiếp tục sử dụng cặp mồi P6-25 F2/R5 để xác
định các cá thể mang gen kháng Ty-3 ở 41 cá thể kể trên. Theo Ji et al. (2007a) gen
Ty-3 nằm trên nhiễm sắc thể 6, được phát hiện và lai backcross vào cà chua trồng từ
các mẫu giống cà chua dại LA2779, LA1932 và LA1969 thuộc loài dại S. chilense.
L 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
450 bp 400 bp
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 58
Cặp mồi P6-25 F2/R5 được thiết kế để nhân lên vùng DNA thuộc gen G8 gần gen
Ty-3, cách gen này khoảng 5 cM. Do có sự khác nhau ở vùng DNA được nhân lên trong 3 vùng chuyển vị có nguồn gốc từ 3 mẫu giống cà chua dại kể trên nên sản phẩm tạo ra sẽ là một đoạn DNA dài 450 bp với alen kháng Ty-3 từ LA2779, một
đoạn DNA 630 bp với alen Ty-3 từ LA1932 (Ty-3a), và một DNA 660 bp với alen
Ty-3 từ LA1969 (Ty-3b), alen mẫn cảm ty-3 cho một đoạn 320 bp. Kết quả PCR của chúng tôi với cặp mồi P6-25F2/R5 cho thấy dòng bố 1219 xuất hiện một đoạn DNA 450 bp, cho thấy alen kháng này bắt nguồn từ mẫu giống LA2779. Sử dụng cặp mồi này để thực hiện phản ứng PCR với 41 cá thểđồng hợp tử về gen Ph-3 chúng tôi đã xác định được 13 cá thể xuất hiện đoạn DNA dài 450 bp, 9 cá thể xuất hiện đoạn 320 bp và 19 cá thể còn lại xuất hiện 2 đoạn DNA 450 và 320 bp. Như vậy, qua phân tích dữ liệu thu được từ phản ứng PCR sử dụng chỉ thị P6-25 chúng tôi đã chọn ra được 13 cá thể có gen Ty-3 đồng hợp tử và 19 cá thể dị hợp tử, tổng cộng chọn được 32 cá thể có gen Ty-3 (bảng 3.10; hình 3.4).
Hình 3.4. Kết quả PCR phát hiện các cá thể có gen Ty-3 bằng cặp mồi P6- 25F2/R5
L: 250 – 10000 bp DNA Ladder; cá thể 16, 21, 22, 25, 31: kiểu gen Ty3/Ty3; cá thể
3, 7, 26: kiểu gen Ty-3/ty-3; các cá thể còn lại: không có Ty-3
Bảng 3.10. Kết quả xác định các cá thể có gen Ty-3 từ 41 cá thểđồng hợp tử gen Ph-3 bằng cặp mồi P6-25F2/R5 Quần thể Kiểu gen Ty-3/Ty-3 Kiểu gen Ty-3/ty-3 331/1219 16, 21, 22, 25, 31, 39, 54, 70, 77, 90, 97, 109, 143 3, 7, 26, 37, 44, 46, 48, 49, 59, 66, 81, 83, 86, 93, 103, 118, 130, 138, 151 L 3 7 11 16 17 19 21 22 25 26 30 31 33 35 450 bp 320 bp
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 59