Việc sản xuất kháng thể đặc hiệu cho một kháng nguyên là bước quan trọng và cần thiết cho các thử nghiệm miễn dịch. Hầu hết các kháng nguyên đều cĩ cấu trúc phức tạp, chứa nhiều epitope khác nhau dẫn đến sự chọn lọc các dịng tế bào B khác nhau. Kết quả của quá trình đáp ứng miễn dịch ở vật chủ là tạo ra kháng thểđa dịng gồm nhiều kháng thểđơn dịng, trong đĩ mỗi kháng thểđơn dịng là đặc hiệu cho một epitope của kháng nguyên [6].Để tạo được kháng thể cĩ hiệu giá cao các yếu tố cần được quan tâm là:
- Liều lượng kháng nguyên: liều lượng kháng nguyên tối ưu giúp gây đáp ứng miễn dịch mạnh nhất; lượng kháng nguyên quá thấp hoặc quá cao sẽ dẫn đến hiện tượng dung nạp hơn là kích thích đáp ứng miễn dịch. Thơng thường, đối với thỏ, liều tiêm thấp nhất khoảng 10μg/lần tiêm, phổ biến là 100μg/lần tiêm. Liều dành cho chuột thì giảm 10 lần so với thỏ.
- Vật chủ: nhiều lồi động vật cĩ xương sống cĩ thể dùng để sản xuất kháng huyết thanh và kháng thể trong đĩ dùng trong phịng thí nghiệm chủ yếu là thỏ,
chuột và bọ. Thơng thường, cĩ thể thu được 25ml huyết thanh/lần từ thỏ, 100 - 200 µl/lần từ chuột, 1 - 2 ml/lần từ bọ.
- Tá chất (adjuvant): cĩ vai trị kích thích hệ miễn dịch và tăng thời gian tồn tại của kháng nguyên trong cơ thể vật chủ. Tá chất thường được dùng là hỗn hợp dầu, complete Freund’s adjuvant (CFA), ngồi ra cịn cĩ thể chứa thành phần vách tế bào vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis. Tuy nhiên, CFA cĩ thể gây viêm, loét khi được tiêm với liều cao hay tiêm nhiều lần. Do vậy, CFA chỉ được dùng ở
lần tiêm đầu tiên cịn các lần tiếp theo nĩ được thay bằng incomplete Freund’s adjuvant (IFA). IFA cĩ thành phần tương tự như CFA nhưng khơng mang vách tế
bào vi khuẩn lao.
- Vị trí tiêm: được chọn lựa tùy từng mục đích. Tiêm dưới da thường được dùng cho thỏ, chuột, bọ. Các vật liệu được tiêm vào sẽ di chuyển nhanh chĩng đến hệ thống bạch huyết và tập trung tại hạch bạch huyết gần vị trí tiêm. Thỏ thường
được tiêm trên lưng; chuột, bọ được tiêm sau cổ hoặc hai bên háng. Tiêm vào cơ được dùng nhằm mục đích phĩng thích chậm kháng nguyên. Chất tiêm vào sẽ tích tụ tại các mơ cơ và kháng nguyên sẽ di chuyển dần đến các khoảng gian bào lân cận và sau đĩ đến các hạch bạch huyết lân cận. Phương pháp này khĩ sử dụng cho những động vật gặm nhấm nhỏ như chuột, nhưng được dùng phổ biến cho thỏ và những động vật lớn hơn. Tiêm vào da tại nhiều vị trí khác nhau trên lưng được dùng phổ biến cho những động vật lớn cho phép phĩng thích kháng nguyên với tốc
độ rất chậm, thường dùng với kháng nguyên cĩ nồng độ cao. Tiêm vào tĩnh mạch
được dùng đối với hầu hết các động vật nuơi ở phịng thí nghiệm khi tiến hành tiêm nhắc kể từ lần thứ hai trở về sau, hiếm khi dùng để tiêm lần đầu. Tá chất khơng an tồn và khơng thích hợp cho phương pháp này, nên sử dụng các dung dịch đệm sinh lý. Tiêm vào khoang bụng được sử dụng cho chuột, bọ.