Kháng thể kháng SEA và kháng thể kháng SEB sau khi tinh chếđược cộng hợp với enzyme horse-radish peroxidase (HRP) để làm vật liệu cho qui trình ELISA phát hiện độc tố SEA, SEB. Kháng thể sau khi cộng hợp với HRP được pha lỗng và kiểm tra khả năng phát hiện độc tố SEA và SEB bằng phương pháp ELISA trực tiếp. Kết quả thu nhận được trình bày trên Bảng 3.8 và Hình 3.8.
Bảng3.8. Kết quả kiểm tra hoạt tính của kháng thể kháng SEA, kháng thể kháng SEB cộng hợp HRP bằng phản ứng ELISA trực tiếp
Độ pha lỗng kháng thể cộng hợp Anti SEA-HRP (OD405nm) Anti SEB-HRP (OD405nm) 1/100 3,075 2,937 1/200 2,598 2,638 1/400 2,533 2,409 1/800 2,448 1,531 1/1600 2,216 1,257 1/3200 1,450 1,079 1/6400 0,916 0,767 1/12800 0,709 0,468 Blank 0,098 0,103
Kết quả trên Bảng 3.8 và Hình 3.8 cho thấy ở độ pha lỗng > 10.000 lần, trị
số OD thu được > ODmax của tín hiệu nền (0,1) (chứng blank)chứng tỏ kháng thể
cộng hợp vẫn giữ được hoạt tính của kháng thể và của enzyme HRP. Ở độ pha lỗng 3.200 lần trở xuống OD đều lớn hơn 10 lần tín hiệu nền nên cĩ thể dùng kháng thể cộng hợp ở độ pha lỗng 3.200 lần để làm ELISA trực tiếp hoặc ELISA sandwich. Như vậy, chúng tơi đã cộng hợp thành cơng kháng thể kháng SEA và SEB với HRP và cĩ thể dùng 2 kháng thể cộng hợp này để phát triển qui trình ELISA sandwich phát hiện độc tố SEA, SEB. Khả năng phản ứng chéo của kháng thể kháng SEA cộng hợp với độc tố SEB và của kháng thể kháng SEB cộng hợp
với độc tố SEA đã được kiểm tra trình bày trên Hình 3.8 và Bảng 3.9. Kết quả cho thấy OD của 2 giếng A (kháng thể kháng SEA, kháng nguyên SEB) và giếng B (kháng thể kháng SEB, kháng nguyên SEA) tương đương với OD của tín hiệu nền (blank), chứng tỏ kháng thể kháng SEA và kháng thể kháng SEB cĩ độ đặc hiệu cao, khơng gây phản ứng miễn dịch chéo với kháng nguyên khác.
H B D E F G
A C
OD lần 1
A B C D E F G
Hình 3.8. Kết quả ELISA trực tiếp kiểm tra khả năng phát hiện độc tố SEA và SEB của kháng thể cộng hợp bằng phương pháp ELISA trực tiếp. Kháng thể đánh dấu cĩ độ pha lỗng giảm dần từ trái qua phải
H OD lần 2 OD lần 2 OD lần 1 Độc tố A Độc tố B
Bảng3.9. Kết quả kiểm tra phản ứng chéo giữa kháng thể kháng SEA cộng hợp với SEB và của kháng thể kháng SEB cộng hợp với SEA
1 2
A 0,086 0,110
B 0,084 0,088
TB 0,085 0,099
Blank 0,081
A, Trường hợp kháng thể kháng SEA cộng hợp với kháng nguyên SEB; B, Trường hợp kháng thể kháng SEB cộng hợp với kháng nguyên SEA; 1, 2, Hai lần thử nghiệm lặp lại