... bản, phiên mã dịch mã Trong số tiến kỹthuật góp phần tạo bùng nổ lĩnh vực sinh học phân tử phải kể tới kỹthuậtPCR (Polymerase Chain Reaction) KỹthuậtPCR Kary Mullis đề suất vào năm 1985, ... chuyên biệt 21 - Real – Time PCR đánh giá tích lũy sản phẩm định lượng qPCR (quantitative PCR – PCR định lượng) Ngồi số kỹthuậtPCR khác nữa… VIII RT – PCR Như biết, PCRkỹthuật nhân bội ADN mạch ... chung KỹthuậtPCR (phản ứng chuỗi trùng hợp - PolymeraseChain Reaction) phương pháp in vitro để nhân nhanh đoạn AND đó, có độ nhạy cao, mà cần khối lượng mẫu ban đầu hạn chế II Nguyên lý Kỹ thuật...
... nghi m thành cơng, ph m vi báo cáo này, chúng tơi ch đ c p t i k thu t Polymerasechainreaction (PCR) S ñ i c a k thu t PCR ñã ñưa l i m t cu c cách m ng vi c nghiên c u, phân tích gen h gen ... “Xây d ng quy trình xác đ nh vi khu n Verotoxigenic Escherichia coli th t b ng k thu t PCR (Polymerase chain reaction) ” Nghiên c u cho phép xác ñ nh nhanh xác tiêu chu n vi sinh đ i v i vi khu n ... O73, O75, O82, O84, O91, O100, O103, O104, O111, O113, O114, O115, O117, O118, O119, O121, O125, O126, O128ab, O132, O145, O146, O153, O163, O165, O166 m t s ch ng chưa ñư c ñ nh typ khác Trư...
... 2.2.2 Kỹthuật xét nghiệm Máu tồn phần trích ly RNA với thuốc thử chuẩn hoá Chomczynski [2] Khuếch đại týp gene tổ hợp BCR-ABL b2a2 b3a2 kỹthuật RT -PCR (Reverse Transcription -Polymerase Chain Reaction) ... samples from 60 Chronic Myeloid Leukemia patients were tested by RT -PCR (Reverse Trancription -Polymerase Chain Reaction) and Real-Time PCR to detect Philadelphia chromosome containing BCR-ABL fusion ... gây bệnh gen tổ hợp BCR-ABL (Joanna Gora-Tybor 2008) [3], điều giải thích chúng tơi sử dụng kỹthuật RT -PCR phát diện gen tổ hợp BCR-ABL 59/60 bệnh nhân CML (98,33%) Carol D Jone CS (2003) [1] Susan...
... KỸTHUẬTPCR (Polymerase Chain Reaction) I MỞ ĐẦU: KỹthuậtPCR (viết tắt từ chữ PolymeraseChain Reaction) , hay gọi phản ứng tổng hợp dây chuyền nhờ polymerase phản ứng ... rãi kỹthuậtPCR đòi hỏi phải biết rõ trình tự ADN khn mẫu Đây điểm giới hạn kỹthuật này, nghĩa phải dựa vào tảng kỹthuật công nghệ di truyền không thay kỹthuật Do người ta không sử dụng kỹthuật ... (multiplex -PCR) , PCR ngược (Reverse -PCR) , RAPD -PCR vv… tất dựa nguyên tắc phản ứng PCRPCR “tổ”: Để đạt mức độ nhạy cảm cao PCR, người ta thực PCR liên tiếp Trên điện di đồ, đoạn đạt sau PCR thứ...
... SMN TLN % SMN TLN % Thành phố Huế (50 mẫu) SMN TLN % 12 24 12 14 28 15 30 10 9 20 18 12 18 12 24 12 10 16 12 22 19 12 15 44 38 24 18 30 10 12 18 SMN: số mẫu nhiễm 38 TLN: tỷ lệ nhiễm Chúng nhận ... giản PCR chép lặp lại nhiều lần đoạn chuỗi ADN kép với tham gia hai mồi xi ngược giúp nhận diện có mặt ADN xúc tác Taq polymerase/ MgCl2, loại dNTP [31] 2.10.2 Nguyên tắc kỹthuậtPCR Tất ADN polymerase ... cầu trùng từ mẫu phân gà thu - Tách ADN từ Oocysts cầu trùng phân lập - Sử dụng kỹthuậtPCR (polymerase chain reaction) để phát số lồi cầu trùng có phân gà 3.2 Nguyên liệu phương pháp nghiên...
... bản, phiên mã dịch mã Trong số tiến kỹthuật góp phần tạo bùng nổ lĩnh vực sinh học phân tử phải kể tới kỹthuậtPCR (Polymerase Chain Reaction) KỹthuậtPCR Kary Mullis đề suất vào năm 1985, ... chuyên biệt - Real – Time PCR đánh giá tích lũy sản phẩm định lượng qPCR (quantitative PCR – PCR định lượng) Ngồi số kỹthuậtPCR khác nữa… B RT – PCR Như biết, PCRkỹthuật nhân bội ADN mạch kép ... tắc kỹthuậtPCRKỹthuậtPCR (polymerase chain reaction) phương pháp tổng hợp DNA dựa mạch khn trình tự đích DNA ban đầu, khuếch đại, nhân số lượng khuôn thành hàng triệu nhờ hoạt động enzyme polymerase...
... bản, phiên mã dịch mã Trong số tiến kỹthuật góp phần tạo bùng nổ lĩnh vực sinh học phân tử phải kể tới kỹthuậtPCR (Polymerase Chain Reaction) KỹthuậtPCR Kary Mullis đề suất vào năm 1985, ... Nguyễn Bá Lộc - Real – Time PCR đánh giá tích lũy sản phẩm định lượng qPCR (quantitative PCR – PCR định lượng) Ngoài số kỹthuậtPCR khác nữa… RT – PCR Như biết, PCRkỹthuật nhân bội ADN mạch kép ... chung KỹthuậtPCR (phản ứng chuỗi trùng hợp - PolymeraseChain Reaction) phương pháp in vitro để nhân nhanh đoạn AND đó, có độ nhạy cao, mà cần khối lượng mẫu ban đầu hạn chế Nguyên lý Kỹ thuật...
... THUẬTPCR Nhân phân tử RNA kỹthuậtPCR Cần có đoạn mồi kết hợp với khn RNA, sau tổng hợp phân tử DNA nhờ enzyme reverse trancriptase theo kỹthuậtPCR Enzyme Tth DNA -polymerase thực phản ứng ... Phản ứng PCR tiến hành khoảng 25-40 chu kỳ Trong kỹthuậtPCR thông thêng ngêi ta thùc hiƯn bíc biÕn tÝnh ADN tríc bước vào chu kỳ Bước thư ờng thùc hiƯn ë 94-95oC, 2-3 Ph¶n øng PCR - bước ... lượng Q trình cần có ion mangan 2 Kỹthuật RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) Kỹthuật RAPD thực theo bước sau: – – – Tách chiết DNA tổng số, nhân DNA máy PCR; Điện di gel; Xác định tính...
... PCR TRONG PHÁT HIỆN VI SINH VẬT GÂY BỆNH TRONG THỰC PHẨM 1.6.1.Nguyên tắc kĩ thuậtPCR [3], [4] PCR (Polymerase Chain Reaction) phương pháp in vitro để tổng hợp DNA dựa khuôn trình tự đích ĐNA ... [8] 19 T T 1.5.3 Phương pháp PCR (Polymerase chain reaction) [6], [7] 20 T T 1.5.4.So sánh ưu nhược điểm phương pháp 20 T T 1.6.KĨ THUÂTPCR TRONG PHÁT HIỆN VI SINH VẬT GÂY BỆNH ... DNA cho phản ứng PCR 39 T T 2.2.10.Điều kiện phản ứng PCR 39 T T 2.2.11.Phân tích sản phẩm PCR điện di gelagarose 39 T T 2.2 .12. Khảo sát điều kiện tối ưu phản ứng PCR 39 T...
... thấy kỹthuậtPCR có độ nhạy 83,5%, độ đặc hiệu 99% [71] Trên vài thành tựu điển hình, kỹthuậtPCR phát triển mạnh mẽ nhiều lĩnh vực, đặc biệt lĩnh vực y học 1.4.3 Tình hình ứng dụng kỹthuậtPCR ... dụng phương pháp khác Hiện nay, việc ứng dụng kỹthuậtPCR nước ta đem lại nhiều hiệu cao [72] Sau số ứng dụng kỹthuậtPCR tiêu biểu, ứng dụng kỹthuậtPCR trong: - Chẩn đoán viêm gan siêu vi B ... dụng kỹthuậtPCR chẩn đoán lao màng não [66] KỹthuậtPCR sử dụng chẩn đốn trực khuẩn lao kháng thuốc INH thiếu gen catalase (gen Kat G) Zhang cộng sự, 1993 [73] Một thành tựu khác ứng dụng kỹ thuật...
... Hà nội, Năm 2004 PCR (Polymerase chain reaction) I Những kiến thức PCRPCR từ viÕt t¾t cđa cơm tõ PolymeraseChainReaction tiÕng Anh Có nhiều cách dịch cho cụm từ ... sách dịch phản ứng tổng hợp dây chuyền nhờ Polymerase, có tài liệu dịch phản ứng chuỗi trùng hợp, hay đơn giản kỹthuậtPCR dùng đơn giản kỹthuậtPCRKỹthuật Kary Mullis cộng phát minh vào thập ... khác mắc phải trở ngại suốt trình phát triển kỹthuậtPCR Taq ADN polymerase đơn giản cải thiện PCR: Ban đầu E coli ADN polymerase đợc sử dụng kỹthuật PCR, nhng enzyme không bền nhiệt bị phá huỷ...
... polymerase Các dạng khác PCR: - RT PCR (reverse transcriptase PCR) : RNA cDNA DNA - RT – PCR (Realtime PCR – PCR định lượng): xác định hàm lượng sản phẩm PCR tạo thời điểm Nguyên tắc: xác ... PCR - Ngoại nhiễm: Xử lí: Khử trùng khu vực thao tác Việc thiết lập phản ứng PCR phân tích sản phẩm tiến hành khu vực khác - Nhân không đặc hiệu: - Các sai sót Taq polymerase Các dạng khác PCR: ... hạn chế sản phẩm “kí sinh” - PCR thực mẫu không bảo quản tốt Enzyme : - Enzyme polymerase chịu nhiệt tách chiết từ Thermus aquaticus Taq polymerase - Enzyme Pfu DNA polymerase thu nhận từ vi khuẩn...
... Taq polymerase Làm để phân lập gen Các bước PCR Nguyên tắc máy PCR phản ứng PCR I Giới thiệu Kary Mullis 1985 Nobel 1993 Giới thiệu PCR: phản ứng chuỗi trùng hợp Là kỹthuật tổng ... DNA khuyếch đại ngẫu nhiên, kỹthuật phát vào năm 1990 (Welsh McClelland; William ctv.) Dùng nghiên cứu khác biệt di truyền loài khác Kỹthuật RAPD dựa kỹthuật PCR, cách sử dụng primer ngắn ... hợp với kỹthuật cao cấp khác để đánh giá đa dạng di truyền nhận diện thị phân tử có độ tin cậy cao Hạn chế Kỹthuật RAPD có độ xác khơng cao, không ổn định Khả nhân phản ứng PCR cao...
... PCR( PolymeraseChain Reaction) kỹthuật phổ biến sinh học phân tử nhằm khuyếch đại (tạo nhiều sao) đoạn DNA mà không ... vào) tình trạng sợi đơi ỨNG DỤNG KỹthuậtPCR ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực khác nhau, từ nghiên cứu khoa học đến sản xuất đời sống xã hội Những ứng dụng kỹthuậtPCR là: - Xác định đoạn trình ... mà khơng thể bắt cặp chuỗi DNA khác ngồi chuỗi đích, sản phẩm PCR đặc hiệu thử nghiệm PCR đặc hiệu (2) Khởi động men polymerase men polymerase bắt đầu tổng hợp sợi bổ sung cho chuỗi DNA đích nhận...
... động UDG bị bất hoạt To cao PCR CÁC LOẠI PCR RT -PCR One-step RT -PCR Two-step RT -PCR Multiplex PCR Nested PCR, hemi-nested PCR Non-stop nested PCR Touch-down PCR RT -PCR RNA cDNA Reverse Transcription ... PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION) NGUYÊN TẮC VÀ ỨNG DỤNG TS BS Đỗ Thị Thanh Thủy MỤC TIÊU BÀI GIẢNG Trình bày nguyên tắc PCR Trình bày cách chống ngoại nhiễm PCR Trình bày ứng dụng PCRPCRPOLYMERASE ... enzym polymerase, thực ống nghiệm, có độ nhạy cao PCR POLYMERASECHAINREACTIONPCR NGUYÊN TẮC PHẢN ỨNG Amplicon 35-40 chu kì nhiệt Số copies = 2n.y n: Số cycle y: số copies ban đầu PCR POLYMERASE...