biến nạp plasmid vào tế bào khả biến

... tƣợng biến nạp vi khuẩn 2.1.1 Giới thiệu tƣợng biến nạp Biến nạp phƣơng pháp đơn giản có để đƣa DNA tái tổ hợp vào tế bào Trong trƣờng hợp tế bào E coli biến nạp có nghĩa đƣa DNA plasmid vào tế bào ... DNA 35 Hình 4.1 Biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn thể tích 10:1.5 38 Hình 4.2 Biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn thể tích 3:0.5 39 Hình 4.3 Sản phẩm tách chiết plasmid gel agarose ... tƣợng biến nạp Tế bào vi khuẩn cho DNA xâm nhập vào tế bào đƣợc giai đoạn tăng trƣởng tế bào, bề mặt tế bào có diện điểm tiếp nhận đặc biệt gọi nhân tố dung nạp (competent factor) Nhân tố có khả...

Ngày tải lên: 27/10/2012, 10:53

... nghiên cứu 3.3.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn Nhiễm sắc thể + CaCl2 + DNA plasmid Màng tế bào trở nên khả nạp sốc nhiệt ổn định tế bào Màng tế bào hồi phục plasmid bắt đầu chép Nhân ... mục đích tăng cƣờng khả biến nạp, ngƣời ta thƣờng xử lý tế bào chủ phƣơng pháp hóa học hay vật lý Tế bào chủ sau đƣợc xử lý phƣơng pháp gọi tế bào khả nạp Tế bào E.coly tế bào chủ đƣợc sử dụng ... Chọn lọc vi khuẩn biến nạp với nồng độ kháng sinh 100µg/ ml Hình 4.5 Kết cấy vi khuẩn biến nạp đối chứng Biến nạp có tế bào khả nạp khơng có plasmid ( thể tích 30μl tế bào khả nạp) phục hồi 800μl...

Ngày tải lên: 31/10/2012, 09:35

... nghiên cứu 3.3.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn Nhiễm sắc thể + CaCl2 + DNA plasmid Màng tế bào trở nên khả nạp sốc nhiệt ổn định tế bào Màng tế bào hồi phục plasmid bắt đầu chép Nhân ... mục đích tăng cƣờng khả biến nạp, ngƣời ta thƣờng xử lý tế bào chủ phƣơng pháp hóa học hay vật lý Tế bào chủ sau đƣợc xử lý phƣơng pháp gọi tế bào khả nạp Tế bào E.coly tế bào chủ đƣợc sử dụng ... Chọn lọc vi khuẩn biến nạp với nồng độ kháng sinh 100µg/ ml Hình 4.5 Kết cấy vi khuẩn biến nạp đối chứng Biến nạp có tế bào khả nạp khơng có plasmid ( thể tích 30μl tế bào khả nạp) phục hồi 800μl...

Ngày tải lên: 16/11/2012, 16:15

Ngày tải lên: 21/03/2013, 12:03

... nghiên cứu 3.3.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn Nhiễm sắc thể + CaCl2 + DNA plasmid Màng tế bào trở nên khả nạp sốc nhiệt ổn định tế bào Màng tế bào hồi phục plasmid bắt đầu chép Nhân ... mục đích tăng cƣờng khả biến nạp, ngƣời ta thƣờng xử lý tế bào chủ phƣơng pháp hóa học hay vật lý Tế bào chủ sau đƣợc xử lý phƣơng pháp gọi tế bào khả nạp Tế bào E.coly tế bào chủ đƣợc sử dụng ... Chọn lọc vi khuẩn biến nạp với nồng độ kháng sinh 100µg/ ml Hình 4.5 Kết cấy vi khuẩn biến nạp đối chứng Biến nạp có tế bào khả nạp khơng có plasmid ( thể tích 30μl tế bào khả nạp) phục hồi 800μl...

Ngày tải lên: 07/04/2013, 21:46

... THẢO LUẬN 4.1 Các quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn B A C Hình 4.1 Biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn thể tích 10:1.5 (A) Biến nạp với tỷ lệ tế bào khả nạp plasmid theo thể tích (µl) ... tƣợng biến nạp vi khuẩn 2.1.1 Giới thiệu tƣợng biến nạp Biến nạp phƣơng pháp đơn giản có để đƣa DNA tái tổ hợp vào tế bào Trong trƣờng hợp tế bào E coli biến nạp có nghĩa đƣa DNA plasmid vào tế bào ... chuẩn bị tế bào E coli khả nạp, biến nạp plasmid vào tế bào theo phƣơng pháp hóa chất sốc nhiệt, sau ơng đƣa cơng thức tính hệ số biến nạp N = A x10n x OV/PV 21 N: hệ số biến nạp, tính CFU/µg plasmid...

Ngày tải lên: 25/02/2014, 15:20

... THẢO LUẬN 4.1 Các quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn B A C Hình 4.1 Biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn thể tích 10:1.5 (A) Biến nạp với tỷ lệ tế bào khả nạp plasmid theo thể tích (µl) ... trình chuẩn bị tế bào khả nạp phƣơng pháp hóa học, tế bào khả nạp tế bào khả nạp giữ -70oC với glycerol thời gian tháng - Hoàn thiện đƣợc quy trình biến nạp plasmid pBluescript SK(+/-) vào vi khuẩn ... agar/X-gal/IPTG, ủ qua đêm 370C 39 A B C D Hình 4.2 Biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn thể tích 3:0.5 (A )Biến nạp với tỷ lệ tế bào khả nạp plasmid theo thể tích (µl) 3:0.5 phục hồi 200µl mơi...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 02:21

... chuẩn bị tế bào E coli khả nạp, biến nạp plasmid vào tế bào theo phƣơng pháp hóa chất sốc nhiệt, sau ơng đƣa cơng thức tính hệ số biến nạp N = A x10n x OV/PV 21 N: hệ số biến nạp, tính CFU/µg plasmid ... hết, biến nạp plasmid vào tế bào chủ, sau nuôi cấy tế bào chủ môi trƣờng chọn lọc thích hợp thu nhận sinh khối tế bào Q trình tách chiết plasmid từ tế bào chủ công đoạn cuối nhằm thu nhận plasmid ... nhƣng khơng cho DNA plasmid vào tế bào khả nạp để làm đối chứng Quy trình - Hút 3µl dịch huyền phù tế bào khả nạp đƣợc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5ml, thêm 0.5µl DNA plasmid vào, đảo nhẹ, giữ...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 02:22

... tƣợng biến nạp 2.3 Sự biến nạp nhân tạo vào tế bào E.coly 2.3.1 Khái niệm biến nạp nhân tạo 2.3.2 Sự điều hoà gen operon Lac E.coly .5 2.3.3 Chuẩn bị tế bào khả nạp ... bị tế bào khả nạp .29 3.3.5 Biến nạp plasmid pBluescript vào tế bào vi khuẩn E.coly DH5α phƣơng pháp sốc nhiệt 30 3.3.6 Chọn lọc khuẩn lạc mong muốn tính hiệu suất biến nạp ... 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu .26 3.3.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn 26 3.3.2 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E.coly DH5α kiểm tra .27 3.3.3 Xác định mật...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... DNA vào tế bào chủ DH5α Quy trình sử dụng cho thí nghiệm tạo dòng áp dụng trực tiếp phòng thí nghiêm Các bƣớc quy trình Chuẩn bị khả nạp Dịch tế bào chuẩn bị để làm khả nạp phải có mật độ tế bào ... CaCl2 100mM lạnh vào hòa tan phần kết tủa Thêm 20μl glycerol 98% vào trữ -700C Biến nạp plasmid vào khả nạp Bƣớc 1: Hút 3µl dịch huyền phù tế bào competen cell đƣơc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5 ... phẩm cắt vào tế bào, chuyển gen hoàn chỉnh vào tế bào chủ kiểm soát biểu của gen 59 Nếu trƣờng hợp khơng đủ hố chất để tách chiết plasmid theo quy trình sử dụng SDS - Kiềm nên tách chiết plasmid...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... chiết từ tỉ lệ biến nạp theo thể tích tế bào khả nạp plasmid :0.5 (lần 1), (DC1) plasmid gốc (chưa biến nạp) , (DC2, DC3) plasmid đối chứng từ sản phẩm tách chiết Kết hình cho thấy plasmid đƣợc ... sản phẩm PCR vào plasmid ta đƣợc plasmid tái tổ hợp Biến nạp plasmid tái tổ hợp vào vi khuẩn E.coly DH5α khả nạp, thu đƣợc kết nhƣ sau 52 a b Hình 4.16 Kết cấy vi khuẩn biến nạp plasmid tái tổ ... phóng to b a Hình 4.17 Kết cấy vi khuẩn biến nạp plasmid tái tổ hợp với đoạn DNA 580bp môi trƣờng LB/amp/ X-gal/IPTG (a )Biến nạp với tỉ lệ tế bào khả nạp plasmid tái tổ hợpvới đoạn DNA 580bp theo...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... Chọn lọc vi khuẩn biến nạp với nồng độ kháng sinh 100µg/ ml Hình 4.5 Kết cấy vi khuẩn biến nạp đối chứng Biến nạp có tế bào khả nạp khơng có plasmid ( thể tích 30μl tế bào khả nạp) phục hồi 800μl ... trường LB agar/ Amp(60μg/ml)/ X-gal/ IPTG, ủ qua đêm 37oC.(DC) biến nạp có tế bào khả nạp khơng có plasmid ( thể tích 30μl tế bào khả nạp) phục hồi 800μl môi trường LB lỏng, cấy 150μl dịch phục ... chọn lọc thể biến nạp Biến nạp 60 giây với tỉ lệ khả nạp : plasmid 30 : ; 10 : ; : 0.5 đối chứng đƣợc thể Hình 4.4 Kết tƣơng tự với kết biến nạp 90 giây Nhƣ vậy, quy trình biến nạp khơng có khác...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... nối vào tế bào vi khuẩn E.coly DH5α khả nạp (theo quy trình Sambrook cộng sự, 1989 có chỉnh sửa) Thực biến nạp theo quy trình sau Hút 10µl dịch huyền phù tế bào competen cell đƣơc chuẩn bị cho vào ... lại khơng theo dõi thực tế chúng tơi cần biết điều kiện làm thí nghiệm này, để đạt đƣợc mật số tế bào 108 tế bào/ ml giá trị OD tƣơng ứng Bảng 4.1 Gía trị đo OD số tế bào/ ml theo thời gian nuôi ... DNA plasmid tái tổ hợp vào, đảo nhẹ, giữ lạnh đá 20 phút Chuyển nhanh eppendorf vào bồn nhiệt 420C, giữ 90 giây Chuyển nhanh eppendorf vào bình nƣớc đá, giữ phút Thêm 200µl mơi trƣờng LB lỏng vào...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... nghiên cứu 3.3.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn Nhiễm sắc thể + CaCl2 + DNA plasmid Màng tế bào trở nên khả nạp sốc nhiệt ổn định tế bào Màng tế bào hồi phục plasmid bắt đầu chép Nhân ... chiết plasmid, kiểm tra Sơ đồ 3.2 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn 26 3.3.2 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E.coly DH5α kiểm tra + CaCl2 Vi khuẩn Ecoly DH5α Khả nạp Plasmid ... nhƣng khơng cho DNA plasmid vào tế bào khả nạp để làm đối chứng Quy trình Hút 3µl dịch huyền phù tế bào khả nạp đƣợc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5 ml, thêm 0.5µl DNA plasmid vào, đảo nhẹ, giữ...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... nạp plasmid tái tổ hợp vào tế bào vi khuẩn E.coly phƣơng pháp Calcium chloride Sambrook cộng (1989), đƣa phƣơng pháp chuẩn bị tế bào E.coly khả nạp, biến nạp plasmid vào tế bào theo phƣơng pháp ... chuẩn bị tế bào khả nạp nhƣ sau: 10mM Pipes, 55mM MnCl2, 15mM CaCl2, 250mM KCl Zhiming Tu cộng (2004), nghiên cứu cải thiện phƣơng pháp chuẩn bị tế bào khả nạp nâng cao hệ số biến nạp plasmid ... nghiên cứu ông cho thấy sử dụng tế bào đầu phage log ảnh hƣởng lớn đến thành công việc chuẩn bị tế bào khả nạp Giá trị OD600 thích hợp dịch ni cấy chuẩn bị tế bào khả nạp với chủng vi khuẩn nhƣ sau:...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... mục đích tăng cƣờng khả biến nạp, ngƣời ta thƣờng xử lý tế bào chủ phƣơng pháp hóa học hay vật lý Tế bào chủ sau đƣợc xử lý phƣơng pháp gọi tế bào khả nạp Tế bào E.coly tế bào chủ đƣợc sử dụng ... chiết từ thể biến nạp PHẦN TỔNG QUAN TÀI LYỆU 2.1 Hiện tƣợng biến nạp vi khuẩn 2.1.1 Hiện tƣợng biến nạp Biến nạp tƣợng tiếp nhận DNA từ bên vào tế bào vi khuẩn Hiện tƣợng biến nạp đƣợc chứng ... cho phép tạo tế bào E.coly khả nạp có hiệu biến nạp cao (5x108 khuẩn lạc/µg plasmid DNA) Thứ hai, phƣơng pháp Inoue dễ lặp lại phƣơng pháp Hanahan tạo tế bào khả nạp có hiệu biến nạp từ 1x108...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

Ngày tải lên: 10/06/2017, 12:11

... độc lập Khi lai F+ x F-, yếu tố F đƣợc truyền cho tế bào nhận F- biến các tế bào Fthành tế bào F+ Tế bào F+ sau truyền yếu tố F cho tế bào F- tế bào F+ Hiện tƣợng tiếp hợp xảy tần số thấp F+ x ... vận chuyển các ion dƣơng vào tế bào cho việc dự trữ phospho Hình 2.7 Vách tế bào vi khuẩn Gram (+) 2.2.2 Cấu tạo vách tế bào Gram (-) So với tế bào Gram (+) vách tế bào Gram (-) phức tạp nhiều.Thành ... chất hệ gen 2.2 Vách tế bào vi khuẩn Vách tế bào thành phần quan trọng tế bào, phần lớn các vi khuẩn có vách kín, giúp cho tế bào giữ đƣợc hình dạng ổn định bảo vệ tế bào tránh đƣợc tác...

Ngày tải lên: 05/11/2012, 13:58