biến nạp plasmid vào tế bào e coli

Ngày tải lên: 11/03/2014, 08:20

... gene was designed successfully The expression of plasmid pCA19 in E coli MGI655 was carried out by reporter gene system A reporter gene is a gene that encodes an assayable protein whose expression ... TOXIC GENE DNA EXPRESSION IN E COLI In vivo expression technology was used to the determine Salmonella typhimurium LT2 virulence gene The result obtained that plasmid pCA 19 which contained toxic ... expression is easily detectable In this study lacZ reporter gene was used to encode for enzyme ~ - galactosidase This enzyme converts colorless substrate X - gal into galactose (colorless) and blue product...

Ngày tải lên: 11/03/2014, 20:20

... nhƣ: isolongifolene, cadinene, selinene… Hình 1.11 Một số sesquiterpene đa vòng 1.3.3 Vai trò ứng dụng sesquiterpene Sesquiterpene hợp chất thuộc nhóm terpene chứa đơn vị isoprene với cơng thức ... dƣợc chứa sesquiterpene đƣợc khai thác từ lâu y học nhƣ tinh dầu gừng (sesquiterpene: zingiberene), tinh dầu Rái (sesquiterpene: germacrene D, caryophyllene) [1] Một số 15 sesquiterpene có tác ... sesquiterpene, diterpene, steroid, ketone aroma, tác giả xác định đƣợc CYP264B1 có khả hydroxy hóa nhiều hợp chất thuộc nhóm sesquiterpene sesquiterpenoid (nhƣ nootkatone, valencene, -longipinene,...

Ngày tải lên: 25/03/2017, 11:53

Ngày tải lên: 28/03/2017, 00:07

... Density PCR Polymerase Chain Reaction RE Restriction Enzyme RNA Ribonucleic acid RFLP Restriction fragment length polymorphism SDS Sodium dodecyl sulfate TAE Tris Acetate EDTA Taq Thermus aquaticus ... kilobase dATP deoxyadenosine triphosphate dGTP deoxyguanosine triphosphate dCTP deoxycytidine triphosphate dTTP deoxythymidine triphosphate Tris- HCL (hydroxymethyl) aminomethane hydrochloride UV ... endonuclease nhằm làm tăng lƣợng plasmid tích lũy tế bào Thông thƣờng ngƣời ta gây đột biến gen endA (endA) gen mã hóa cho endonuclease I Việc endonuclease làm tăng sản lƣợng plasmid cải biến chất...

Ngày tải lên: 27/10/2012, 10:53

... tính endonuclease nhằm làm tăng lƣợng plasmid tích luỹ tế bào Thông thƣờng ngƣời ta gây đột biến gen endA (endA-) gen mã hóa cho endonuclease I Việc endonuclease làm tăng sản lƣợng plasmid cải ... axit nucleic cần cho vào môi trƣờng phản ứng mồi axit nucleic DNA polymerase I(từ E. coly) chuỗi polypeptide với ba hoạt động enzym: DNA polymerase (tổng hợp) 5’ exonuclease 5’ 3’, exonuclease (thủy ... (catabolyte gen activator protein) hay CRP (cAMP recepter protein) phức hợp cAMPCAP cố định promoter làm tăng khả lyên kết RNA polymerase với promoter Nhằm trì tồn vector bacteriophage tế bào chủ,...

Ngày tải lên: 31/10/2012, 09:35

Ngày tải lên: 21/03/2013, 12:03

... LUẬN 4.1 Các quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn B A C Hình 4.1 Biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn thể tích 10:1.5 (A) Biến nạp với tỷ lệ tế bào khả nạp plasmid theo thể tích (µl) 10:1.5 ... kilobase dATP deoxyadenosine triphosphate dGTP deoxyguanosine triphosphate dCTP deoxycytidine triphosphate dTTP deoxythymidine triphosphate Tris- HCL (hydroxymethyl) aminomethane hydrochloride UV ... endonuclease nhằm làm tăng lƣợng plasmid tích lũy tế bào Thông thƣờng ngƣời ta gây đột biến gen endA (endA) gen mã hóa cho endonuclease I Việc endonuclease làm tăng sản lƣợng plasmid cải biến chất...

Ngày tải lên: 25/02/2014, 15:20

... LUẬN 4.1 Các quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn B A C Hình 4.1 Biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn thể tích 10:1.5 (A) Biến nạp với tỷ lệ tế bào khả nạp plasmid theo thể tích (µl) 10:1.5 ... Genetic Engineering Techniques Các website http://www.protocol-online.org/prot/Mmolecular_Biology/ http://brahms.chem.uic.edu/~cgpage/protocol/cloning.html A 51 http://core.eai.edu/biol/foruvellm/farwelebpage/Biotech3100/pvector.200.pfd ... bị tế bào khả nạp phƣơng pháp hóa học, tế bào khả nạp tế bào khả nạp giữ -70oC với glycerol thời gian tháng - Hoàn thiện đƣợc quy trình biến nạp plasmid pBluescript SK(+/-) vào vi khuẩn E coli...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 02:21

... Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn Vi khuẩn Ecoli Xử lí CaCl2 Sốc nhiệt 420C 45 giây Cấy lên đĩa Sơ đồ 3.2 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn E coli Vi khuẩn E coli sau ... coli) chuỗi polypeptide với ba hoạt động enzyme: DNA polymerase (tổng hợp) 5’ 3’ 5’ exonuclease 5’ 3’, exonuclease (thủy giải), 3’ Enzym DNA fragment Klenow enzym DNA polymerase I bị cắt bỏ tiểu ... Calcium chloride Sambrook cộng (1989), đƣa phƣơng pháp chuẩn bị tế bào E coli khả nạp, biến nạp plasmid vào tế bào theo phƣơng pháp hóa chất sốc nhiệt, sau ơng đƣa cơng thức tính hệ số biến nạp N =...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 02:22

... tính endonuclease nhằm làm tăng lƣợng plasmid tích luỹ tế bào Thông thƣờng ngƣời ta gây đột biến gen endA (endA-) gen mã hóa cho endonuclease I Việc endonuclease làm tăng sản lƣợng plasmid cải ... axit nucleic cần cho vào môi trƣờng phản ứng mồi axit nucleic DNA polymerase I(từ E. coly) chuỗi polypeptide với ba hoạt động enzym: DNA polymerase (tổng hợp) 5’ exonuclease 5’ 3’, exonuclease (thủy ... (catabolyte gen activator protein) hay CRP (cAMP recepter protein) phức hợp cAMPCAP cố định promoter làm tăng khả lyên kết RNA polymerase với promoter Nhằm trì tồn vector bacteriophage tế bào chủ,...

Ngày tải lên: 16/11/2012, 16:15

... tƣợng biến nạp 2.3 Sự biến nạp nhân tạo vào tế bào E. coly 2.3.1 Khái niệm biến nạp nhân tạo 2.3.2 Sự điều hoà gen operon Lac E. coly .5 2.3.3 Chuẩn bị tế bào khả nạp ... bị tế bào khả nạp .29 3.3.5 Biến nạp plasmid pBluescript vào tế bào vi khuẩn E. coly DH5α phƣơng pháp sốc nhiệt 30 3.3.6 Chọn lọc khuẩn lạc mong muốn tính hiệu suất biến nạp ... loại enzym dùng thí nghiệm 25 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu .26 3.3.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn 26 3.3.2 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E. coly...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... 100mM lạnh vào hòa tan phần kết tủa Thêm 20μl glycerol 98% vào trữ -700C Biến nạp plasmid vào khả nạp Bƣớc 1: Hút 3µl dịch huyền phù tế bào competen cell đƣơc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5 ml, ... Wolgang Schumann, 1995, Genetic Enginereering Techniques Các website http://faculty.plattsbuggh.edu/donald-slysh/transformation.html 12.http://www.mun.ca/Biochem/course/4103/topic/transrormation.html ... RNAse, ủ 370C Bƣớc 7: Cho vào eppendorf 300µl phenol/chloroform/isoamylalcohol (25:24:1) vortex đều, ly tâm 10000 vòng/phút phút 200C Thu dịch cho vào eppendorf tƣơng ứng Bƣớc 8: Cho vào eppendorf...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... DC3 DNA plasmid 3.0kb Hình 4.12 Kết điện di sản phẩm cắt plasmid EcoRV gel agarose 0.8% (EcoRV) sản phẩm cắt enzym EcoRV plasmid tách chiết từ tỉ lệ biến nạp theo thể tích tế bào khả nạp plasmid ... Kết biến nạp plasmid tái tổ hợp Thực phản ứng blunt-end sản phẩm PCR, tinh sản phẩm phản ứng blunt-end, nối đoạn sản phẩm PCR vào plasmid ta đƣợc plasmid tái tổ hợp Biến nạp plasmid tái tổ hợp vào ... tinh từ gel Phản ứng tạo đầu cho đoạn DNA enzym Klenow Fragment không kiểm tra đƣợc phƣơng pháp điện di gel agarose, kết đƣợc kiểm tra chèn vào plasmid (đã đƣợc cắt tạo đầu bằng) biến nạp vào vi...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... Chọn lọc vi khuẩn biến nạp với nồng độ kháng sinh 100µg/ ml Hình 4.5 Kết cấy vi khuẩn biến nạp đối chứng Biến nạp có tế bào khả nạp khơng có plasmid ( thể tích 30μl tế bào khả nạp) phục hồi 800μl ... chọn lọc thể biến nạp Biến nạp 60 giây với tỉ lệ khả nạp : plasmid 30 : ; 10 : ; : 0.5 đối chứng đƣợc thể Hình 4.4 Kết tƣơng tự với kết biến nạp 90 giây Nhƣ vậy, quy trình biến nạp khơng có khác ... đĩa 450, nhƣ theo công thức tính hệ số biến nạp Sambrook cộng đƣa ra, chúng tơi tính đƣợc hệ số biến nạp tỉ lệ 3,073x103CFU/ μg plasmid Kết biến nạp thể tích 10µl khả nạp 1µl plasmid xuất khuẩn...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... 3: Cho capture buffer vào eppendorf chứa gel với tỷ lệ 10 mg gel ≈ 10µl capture buffer Bƣớc 4: Đậy nắp lại ủ 60oC agarose tan hết (5 – 15 phút) Bƣớc 5: Chuẩn bị cột GFX, đặt vào eppendorf tƣơng ... competen cell đƣơc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5 ml, thêm 3µl DNA plasmid tái tổ hợp vào, đảo nhẹ, giữ lạnh đá 20 phút Chuyển nhanh eppendorf vào bồn nhiệt 420C, giữ 90 giây Chuyển nhanh eppendorf ... buffer 3.3.11 Chuyển sản phẩm nối vào tế bào vi khuẩn E. coly DH5α khả nạp (theo quy trình Sambrook cộng sự, 1989 có chỉnh sửa) Thực biến nạp theo quy trình sau Hút 10µl dịch huyền phù tế bào...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... nghiên cứu 3.3.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn Nhiễm sắc thể + CaCl2 + DNA plasmid Màng tế bào trở nên khả nạp sốc nhiệt ổn định tế bào Màng tế bào hồi phục plasmid bắt đầu chép Nhân ... phù tế bào competent cell đƣợc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5 µl, thêm 3µl DNA plasmid vào, đảo nhẹ, giữ lạnh đá 20 phút Chuyển nhanh eppendorf vào bồn nhiệt 420C, giữ 90 giây Chuyển nhanh eppendorf ... phù tế bào competen cell đƣơc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5 ml, thêm 1.5µl DNA plasmid vào, đảo nhẹ, giữ lạnh đá 20 phút Chuyển nhanh eppendorf vào bồn nhiệt 420C, giữ 90 giây Chuyển nhanh eppendorf...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... polymerase (tổng hợp) 5’ exonuclease 5’ 3’, exonuclease (thủy giải) 3’ 5’ 3’ Enzym DNA fragment Klenow enzym DNA polymerase I bị cắt bỏ tiểu đơn vị nhỏ (nhờ protease), phần chịu trách nhiệm exonuclease ... chuẩn bị tế bào E. coly khả nạp, biến nạp plasmid vào tế bào theo phƣơng pháp hóa chất sốc nhiệt, sau ông đƣa công thức tính hệ số biến nạp N = A x10n x OV/PV N: hệ số biến nạp, tính CFU/µg plasmid ... trách nhiệm exonuclease 5’ 3’ Do đó, enzym Klenow có hai hoạt động: hoạt động tổng hợp DNA polymerase 5’ 3’ hoạt động thủy giải exonuclease 3’ 5’ 2.5.2.2 Terminal transferase Enzym đƣợc ly trích...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20