Khảo sát khả năng sinh trưởng và phát triển của nấm đông trùng hạ thảo cordyceps militaris trên nhộng tằm và giá thể tổng hợp nghiên cứu khoa học

TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN THAM GIA XÉT THƯỞNG NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG NĂM 2015 – 2016 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO Cordyceps militaris TRÊN NHỘNG TẰM VÀ GIÁ THỂ TỔNG HỢP Mã số đề tài: Thuộc nhóm ngành khoa học: CƠNG NGHỆ SINH HỌC – NƠNG NGHIỆP Bình dương,4/3/2016 TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN TÊN ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO Cordyceps militaris TRÊN NHỘNG TẰM VÀ GIÁ THỂ TỔNG HỢP Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Ngọc Bảo Châu Sinh viên thực hiện: Nguyễn Nguyễn Minh Hoàng Nam Dân tộc: Kinh Lớp: DH13VS01, Công nghệ sinh học Năm thứ: 3/ Số năm đào tạo: Ngành học: Công nghệ sinh học Bình Dương,4/3/2016 THÀNH VIÊN THAM GIA THỰC HIỆN ĐỀ TÀI Sinh viên thực hiện: Phạm Nữ Kiều Diễm Dân tộc: Kinh Lớp, Khoa: DH13SH01 Năm thứ: 3/ Số năm đào tạo: Ngành học: Công nghệ sinh học Sinh viên thực hiện: Trần Thị Xuân Hường Dân tộc: Kinh Lớp, Khoa: DH13SH01 Năm thứ: 3/ Số năm đào tạo: Ngành học: Công nghệ sinh học Sinh viên thực hiện: Lê Thị Mộng Tuyền Dân tộc: Kinh Lớp, Khoa: DH13SH01 Năm thứ: 3/ Số năm đào tạo: Ngành học: Công nghệ sinh học Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Cúc Anh Dân tộc: Kinh Lớp, Khoa: DH13SH01 Năm thứ: 3/ Số năm đào tạo: Ngành học: Công nghệ sinh học Nữ Nữ Nữ Nữ THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Thông tin chung: - Tên đề tài: Khảo sát khả sinh trưởng phát triển nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris nhộng tằm giá thể tổng hợp - Sinh viên thực hiện: Nguyễn Nguyễn Minh Hồng - Lớp: DH13VS01 Khoa: Cơng nghệ sinh học - Năm thứ: 03 Số năm đào tạo: 04 - Người hướng dẫn: TS Nguyễn Ngọc Bảo Châu Mục tiêu đề tài: Tìm giá thể ni cấy tối ưu cho phát triển nấm Cordyceps militaris, đồng thời thu hoạt chất thứ cấp Adenosine, Cordycepin,… với hoạt tính cao Tính sáng tạo Thực nuôi cấy nấm Cordyceps militaris giá thể tổng hợp có thành phần tự nhiên, khơng cần bổ sung hóa chất (muối khống, vitamin,…) chất điều hòa sinh trưởng, mà cho khả đậu thể hoạt chất thứ cấp có hoạt tính cao Kết nghiên cứu: - Khảo sát khả phát triển nấm Cordyceps militaris nhân giống môi trường khác PDA tự nhiên, PDA tổng hợp, Peptone - Bước đầu tìm tỉ lệ thành phần môi trường tối ưu cho phát triển nấm Cordyceps militaris cho thể với chiều cao định khoảng thời gian cho phép đề tài nghiên cứu Đóng góp mặt kinh tế - xã hội, giáo dục đào tạo, an ninh, quốc phòng khả áp dụng đề tài: Như biết, Đông trùng hạ thảo loại dược phẩm quý chữa nhiều bệnh tăng cường hệ miễn dịch, bệnh tim, ngăn ngừa ung thư,… hoạt chất thứ cấp có thể chúng tạo ra, nhiên Đông trùng hạ thảo ngồi tự nhiên cơng ty sản xuất bán với giá cao nên khó đến tay với người tiên dùng, đặc biệt đối tượng người có thu nhập trung bình thấp Vì lý , Đơng trùng hạ thảo đề tài nghiên cứu nuôi cấy mơi trường có mơi trường hồn tồn từ thiên nhiên cà chua, nước dừa, bắp, gạo lức,… chúng loại thực phẩm có chứa nhiều chất điều hòa sinh trưởng giúp cho nấm Cordyceps militaris phát triển tốt tạo thể, góp phần làm giảm giá thành sản phẩm góp phần đến tay với nhiều người tiêu dùng Ngày tháng năm Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài (ký, họ tên) Nhận xét người hướng dẫn đóng góp khoa học sinh viên thực đề tài: Với tinh thần học hỏi, siêng năng, sáng tạo, nhóm sinh viên bước đầu khảo sát tốc độ lan tơ sợi nấm Cordyceps militaris nhộng giá thể hữu tổng hợp Nhóm nghiên cứu bước đầu xây dựng quy trình bao gồm thành phần tỉ lệ phù hợp thành phần bồ sung giá thể để nuôi cấy thành công đông trùng hạ thảo từ nguồn nấm Cordyceps militaris, đánh giá tốc độ lan tơ thời gian hình thành thể nấm Cordyceps militaris Hiện nay, có nhiều sản phẩm đông trùng hạ thảo sản xuất bán thị trường với giá khác Vì vậy, tiếp tục khảo sát, tối ưu hóa quy trình sản xuất để sản xuất thành công thể đông trùng hạ thảo hội có ý nghĩa khơng cho nghiên cứu khoa học sinh viên mà cịn góp phần phát triển sản phẩm đơng trùng hạ thảo thị trường, đáp ứng nhu cầu xã hội Xác nhận đơn vị (ký tên đóng dấu) Ngày tháng năm Người hướng dẫn (ký, họ tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM THÔNG TIN VỀ SINH VIÊN CHỊU TRÁCH NHIỆM CHÍNH THỰC HIỆN ĐỀ TÀI SƠ LƯỢC VỀ SINH VIÊN: Họ tên: NGUYỄN NGUYỄN MINH HOÀNG Ảnh 4x6 Sinh ngày: 28 tháng 09 năm 1995 Nơi sinh: Thành phố Hồ Chí Minh Lớp: DH13NN01 Khóa: 2013 – 2017 Khoa: Công nghệ sinh học Địa liên hệ: Hẻm 84, Huỳnh Văn Lũy, Tp Thủ Dầu Một, Tỉnh Bình Dương Điện thoại: 096.508.8587 Email: nguyen2minhhoang95@gmail.com II QÚA TRÌNH HỌC TẬP: * Năm thứ 1: Ngành học: Công nghệ sinh học Khoa: Công nghệ sinh học Kết xếp loại học tập: Khá * Năm thứ 2: Ngành học: Công nghệ sinh học Khoa: Công nghệ sinh học Kết xếp loại học tập: Khá Ngày tháng năm I Đ Xác nhận đơn vị (ký tên đóng dấu) Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài (ký, họ tên) ĐẶT VẤN ĐỀ Bên cạnh loài nấm ni trồng có tác dụng hỗ trợ việc điều trị ung thư Agaricus blazei, Cariolus versicolor, Ganoderma lucidum, gần Bảo tàng giống chuẩn vi sinh vật (VTCC) thuộc trung tâm Công nghệ sinh học (ĐHQG Hà Nội) phát triển chủng nấm ăm khơng nghiên cứu giới xác định có nhiều tác dụng y học, khả kìm hãm phát triển tế bào ung thư Đó nấm Nhộng Trùng Thảo (Cordyceps militaris (L.ex Fr) Link) Nhộng Trùng Thảo (Cordyceps militaris) (C.M), Trung Quốc gọi Đơng Trùng Hạ Thảo lồi nấm thuộc họ Clavivipitaceae, chi Cordyceps, phân khu Ascomycotina, chi với Đông trùng hạ thảo (Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.) – loài nấm quý, đắt tiền khó phân lập Ký sinh nhộng nhiều lồi trùng cánh phấn, sâu non, nhộng sâu trưởng thành số lồi trùng, lớp nhện (Shimizu 1997) Hàm lượng hoạt chất Cordyceps militaris so với nấm Đông trùng hạ thảo khơng thua kém, chí cịn cao rõ rệt: Cordycipin 2% 0,48% D-Manitol 8% 6,8% Cordypolysaccarid 13% 12% SOD 584 (IU/mg) 183 (IU/mg) (SOD Superoxide dismutase) Gần nhiều nghiên cứu tập trung vào tính chất dược lý loại nấm có tác dụng chữa trị nhiều bệnh như: rối loạn chức gan (Nan J.X et al.2001), ung thư (Yoo H.S at el.2004), lão hóa , chức viêm tấy (Won S.Y and Park E.H.2005), kìm hãm phát triển vi khuẩn lao Mycobaerium tuberculosis H37Rv, đẩy nhanh trình chuyển hóa acid nuclein protein tụy, có tác dụng kích tố sinh dục nam, chống lại thiếu oxi, tăng cường lưu thông máu, giảm hàm lượng cholesterol huyết thanh, Hơn nữa, dịch chiết từ Nhộng Trùng Thảo cịn có tiềm to lớn việc chữa trị ung thư máu (leukemia), ức chế miễn dịch khối u, kìm hãm phát triển số virus vi khuẩn, xác nhận Đặc biệt đánh giá có tác dụng tốt thận phổi theo y học cổ truyền Trung Quốc Nhộng Trùng Thảo khơng dược liệu q cịn sử dụng việc pha chế rượu trà Hơn thức ăn có thêm Nhộng Trùng Thảo cịn làm tăng mức độ ngon miệng có tác dụng làm tăng cường sức khỏe cho thể Do giá trị nói trên, việc ni cấy nhân tạo Nhộng Trùng Thảo mở rộng Trung Quốc nhiều nước khác Theo nhà khoa học, Đông trùng hạ thảo có tới 400 lồi khác Trong đó, tính riêng Trung Quốc tìm thấy khoảng 60 loài Tuy nhiên người ta sâu nghiên cứu số lồi có giá trị dược liệu tốt người Cordyceps sinensis Cordyceps militaris Ở Việt Nam, việc nghiên cứu Đông trùng hạ thảo thu số kết định, nhiều cơng trình nghiên cứu Đơng trùng hạ thảo công bố chẳng hạn: Năm 2009, PGS Phạm Quang Thu thuộc Viện Khoa học Lâm Nghiệp Việt Nam đưa công bố phát thêm chủng Cordyceps Cordyceps gunni vườn Quốc gia Tam Đảo (Vĩnh Phúc) Cordyceps militaris vườn quốc gia Hoàng Liên (Lào Cai) Năm 2009, GS Phạm Thị Thùy Viện Bảo vệ Thực vật tìm thêm giống Cordyceps nutans Vườn quốc gia Cúc Phương (Ninh Bình) Cordyceps militaris Vũ Quang (Hà Tĩnh) Trần Ngọc Lân, Thái Thị Ngọc Lam, Nguyễn Thị Thúy, Trần Văn Cảnh Nguyễn Thị Thu (2011), Nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm ký sinh côn trùng Isaria tenuipes (Peck) Samson Vườn quốc gia Pù Mát khu bảo tồn thiên nhiên Pù Huống, tỉnh Nghệ An Nghiên cứu cho thấy nhà khoa học nuôi Đông trùng hạ thảo hai phương pháp môi trường nhân tạo nhân sinh khối lượng nuôi trực tiếp ký chủ nhộng tằm “Với ký chủ nhộng tằm, ta chủ động nguồn cung cấp lồi trùng làm thức ăn cho người nên không gây hại (TS Phạm Nhạ) Hiện nay, nhu cầu mẫu Cordyceps militaris để nghiên cứu phân tích dược tính nhiều Tuy nhiên, Cordyceps militaris tự nhiên ngày khan khó thu thập, giá thành cao, nhiều nghiên cứu hướng tới việc nuôi trồng Cordyceps militaris Trước u cầu đó, nhóm chúng tơi nhận thấy việc nghiên cứu tăng trưởng Cordyceps militaris nhộng giá thể hữu cần thiết Đặc biệt đánh giá khả sinh trưởng, phát triển nấm Cordycepsmilitaris nhộng tằm giá thể hữu cơ, môi trường tốt đồng thời tạo hợp chất thứ cấp với hoạt tính cao Trên sở đó, nhóm đề xuất đề tài: “Khảo sát khả sinh trưởng phát triển nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris nhộng tằm giá thể tổng hợp” Phần I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Khái niệm nấm Cordyceps militaris 1.1 Sơ lược lịch sử nghiên cứu nấm Đông trùng hạ thảo Nấm Đông trùng hạ thảo nhà khoa học Trung Quốc xác định đầu xuất từ vùng núi cao nguyên Tây Tạng, loại dược liệu thực chất tượng ấu trùng loài bướm thuộc chi Thitarodes bị nấm Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc ký sinh Năm 1878 nhà khoa học phát nấm ký sinh sâu non (ấu trùng) loài trùng thuộc chi Thitarodes armoricanus, ngồi cịn 46 lồi khác thuộc chi Thitarodes bị Cordyceps sinensis ký sinh Vào cuối mùa thu chất da sâu non họ ngài đêm (Noctuidae) tương tác với bào tử nấm tạo hệ sợi nấm, sợi nấm đâm sâu vào ấu trùng, coi chúng chất dinh dưỡng để phát triển Đến đầu mùa hè năm sau, nấm phát siinh mạnh gây chết sâu, sau chúng hình thành chồi, phát triển chui khỏi mặt đất, gốc dính vào đầu sâu Do nhiều người gọi nấm Đơng trùng hạ thảo mùa đơng nấm sống thể trùng, mùa hè nấm phát triển thể giống câu cỏ Đầu ký XVIII, người truyền giáo Châu Âu đưa Đông trùng hạ thảo đến với nước Pháp để nghiên cứu, họ coi nước Pháp nước có y học đại Đến nhiều nước nghiên cứu, điều tra thu thập nấm Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris ngồi tự nhiên để làm nguyên liệu sản xuất thực phẩm chức phục vụ cho người [1] Hình 1: Nhộng Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris (Nguồn: http://duocthaothienphuc.vn/vi/0/39/news/detail/gia-trithuc-va-tac-dung-cua-dong-trung-ha-thao-viet-nam/2278) * Bảng 4.3.3 Bảng đánh giá khả phát triển nấm Cordyceps militaris mơi trường nhân tạo thơng qua tiêu chí số ngày bắt đầu mọc thể nghiệm thức Số ngày bắt đầu hình STT Nghiệm thức Đối chứng 37,33 b A 39,83 b B 38,17 b C 32,83 a cv(%) 7,49 thành thể Trong cột, số liệu có mẫu tự khơng khác biệt có ý nghĩa mức độ p ≤ 0,05 qua phép thử Duncan Số liệu trình bày giá trị trung bình nghiệm thức Kết p-value = 0,0021 Kết từ bảng 4.3.3 cho thấy có khác biệt có ý nghĩa nghiệm thức p ≤ 0,05 Trong nghiệm thức C cho số ngày mà nấm bắt đầu hình thành thể với số ngày ngắn (32,83%) nghĩa khoảng sau 32 ngày kể từ nấm lan tồn mơi trường nấm bắt đầu hình thành thể Nghiệm thức Đối chứng, A, B, C khơng có khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê Ở nghiệm thức đối chứng, A, B ta thấy số ngày mọc nghiệm thức khơng có khác biệt dao động khoảng 37 – 38 ngày, tỉ lệ thành phần môi trường nghiệm thức không chênh lệch nhiều Tuy nhiên q trình tiến hành thí nghiệm, ta thấy nghiệm thức Đối chứng, ngày mọc thể nhanh chút so với nghiệm thức A nghiệm thức B, nhiên tốc độ phát triển thể nghiệm thức Đối chứng chậm so với nghiệm thức trên, việc phát triển thể việc ảnh hưởng điều kiện bên (nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng,…) chúng cịn phụ thuộc vào thành phần mơi trường Nên nghiệm thức Đối chứng phần có số ngày mọc thể nhanh chút so với nghiệm thức tốc độ phát triển thể lại chậm so với nghiệm thức A nghiệm thức B 31 Ở nghiệm thức C, kết thống kê kết trình tiến hành thí nghiệm, cho kết nghiệm thức C với tỉ lệ thành phần mơi trường cung cấp đầy đủ chất dinh dưỡng cần thiết giúp cho phát triển thể số ngày ngắn (khoảng 32 ngày) Đối chứng A B C Hình 9: Hình chiều cao thể mọc nghiệm thức Đối chứng, A, B, C sau 30 ngày kể từ bắt đầu mọc thể Nghiệm thức Đối chứng: thể cao từ 8mm – 1,2 cm Nghiệm thức A: thể cao từ mm – 2cm Nghiệm thức B: thể cao từ – 1,5 cm Nghiệm thức C: thể cao từ – 2,5 cm Nhận xét: Tại ta thấy mơi trường nghiệm thức C cung cấp đầy đủ chất dinh dưỡng kích thích thể mọc với chiều cao lớn Nghiệm Đối chứng có chiều cao nhỏ mơi trường khơng bổ sung đầy đủ thành phần môi trường, tương đương với môi trường nghiệm thức B tỉ lệ thành phần môi trường bị giảm Tại nghiệm thức A có chiều cao thể tương đương (1 – 1,5 cm) nghiệm thức tỉ lệ thành phần môi trường cung cấp với tỉ lệ vừa phải Kết luận: Thông qua việc đánh giá khả phát triển nấm dựa vào việc thay đổi tỉ lệ thành phân môi trường tiến hành thí nghiệm 4.3 thơng qua tiêu chí: số ngày nấm bắt đầu mọc, số ngày nấm lan phủ tồn mơi trường, số ngày nấm bắt đầu hình thành thể, nhóm kết luận rằng, tỉ lệ thành 32 phần nghiệm thức C phù hợp để nấm Cordyceps militaris phát triển hiệu thời gian ngắn Thí nghiệm 4: Đánh giá ảnh hưởng việc bổ sung nhộng tằm đến khả phát triển nấm Cordyceps militaris môi trường nhân tạo Ngày bắt đầu cấy nấm vào môi trường ngày 28/12/2015 thực Trường Đại học Mở TP.HCM sở Bình Dương * Bảng 4.4.1 Bảng đánh giá khả ảnh hưởng nhộng tằm lên phát triển nấm Cordyceps militaris qua tiêu chí số ngày nấm bắt đầu mọc môi trường nhân tạo STT Nghiệm thức Số ngày nấm bắt đầu mọc Không nhộng 5,167 b nhộng 3,667 a nhộng 3,333 a nhộng 5,500 b cv(%) 16,79 Trong cột, số liệu có mẫu tự khơng khác biệt có ý nghĩa mức độ p ≤ 0,05 qua phép thử Duncan Số liệu trình bày giá trị trung bình nghiệm thức Kết p-value = 0,0001 Kết từ bảng 4.4.1 cho thấy khác biệt có ý nghĩa nghiệm thức p ≤ 0,05 Trong nghiệm thức nhộng, nhộng cho kết số ngày nấm bắt đầu ngắn (nghiệm thức nhộng: 3,667%, nhộng: 3,333 %) nghĩa trung bình khoảng – ngày kể từ cấy nấm nấm Cordyceps militaris bắt đầu mọc môi trường nhân tạo nghiệm thức Trong nghiệm thức khơng nhộng nhộng cho số ngày nấm bắt đầu mọc lâu (nghiệm thức không nhộng: 5,167%, nhộng: 5,500%) nghĩa trung bình khoảng từ – ngày sau cấy nấm bắt đầu mọc Các nghiệm thức nhộng nhộng, không nhộng nhộng khơng có khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê 33 Ở nghiệm thức nhộng nhộng, cho ta kết số ngày nấm bắt đầu mọc ngắn Và nghiệm thức không nhộng nhộng cho số ngày nấm bắt đầu mọc dài nhất, tỉ lệ thành phần môi trường khác giữ nguyên (bảng 3.3.2.2) Cũng cho ta giả thiết số lượng chất dinh dưỡng nhộng tằm ảnh hưởng đến phát triển nấm Cordyceps militaris, nhiên số lượng nhộng thích hợp từ – nhộng tằm phù hợp Và khơng có nhộng tằm (nghiệm thức đối chứng) số lượng nhộng tằm vượt ( > nhộng tằm) làm cho nấm Cordyceps militaris bị ức chế ngược lại làm cho nấm phát triển chậm lại * Bảng 4.4.2 Bảng đánh giá khả ảnh hưởng nhộng tằm lên phát triển nấm Cordyceps militaris qua tiêu chí số ngày nấm bắt đầu bao phủ tồn môi trường nhân tạo Số ngày nấm bao phủ STT Nghiệm thức Không nhộng 28,67 c 2 nhộng 28,00 bc nhộng 26,17 a nhộng 26,83 ab cv(%) 4,39 tồn mơi trường Trong cột, số liệu có mẫu tự khơng khác biệt có ý nghĩa mức độ p ≤ 0,05 qua phép thử Duncan Số liệu trình bày giá trị trung bình nghiệm thức Kết p-value = 0,0078 Kết từ bảng 4.4.2 cho thấy khác biệt có ý nghĩa nghiệm thức p ≤ 0,05 Trong nghiệm thức nhộng cho số ngày nấm lan bao phủ tồn mơi trường số ngày ngắn (26,17%) nghĩa trung bình khoảng 26 ngày kể từ ngày nấm bắt đầu mọc sợi tơ nấm lan bao phủ tồn mơi trường Nghiệm thức Không nhộng cho số ngày nấm lan bao phủ tồn mơi trường số ngày dài (28,67%) nghĩa khoảng 28 – 29 ngày kể từ nấm bắt đầu mọc nấm lan bao phủ tồn mơi trường Các nghiệm thức nhộng nhộng, Khơng nhộng nhộng khơng có khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê 34 Ở nghiệm thức nhộng nhộng, ta thấy số ngày mà nấm lan bao phủ toàn mơi trường nhanh trung bình khoảng 26 – 27 ngày nấm bao phủ toàn mơi trường nhân tạo Ngun nhân, nghiệm thức chất dinh dưỡng có mơi trường thành phần môi trường cung cấp đầy đủ sợi nấm phát triển cách tốt Tuy nhiên nghiệm thức không nhộng nhộng lại cho số ngày nấm lan bao phủ toàn môi trườn chậm nhất, nguyên nhân nghiệm thức khơng bổ sung nhộng chất dinh dưỡng khơng cung cấp đầy đủ nghiệm thức nên cho số ngày mọc lan lâu so với nghiệm thức Điều cho thấy nguồn protein vitamin có trùng (nhộng tằm) cần thiết cho trình phát triển nấm đơng trùng hạ thảo Trong 100g nhộng tằm có 79,7g nước, 13g protid; 6,5g lipid cung cấp tới 206 calo Hàm lượng protein nhộng tằm cao, chiếm tới 73,5%, gồm nhiều axit amin quan trọng leucin, isoleucin, lysin, threonin, cystein, phenylalanin, tyrosin, valin, arginin, alanin, glycin, serin… Bên cạnh đó, nhộng tằm cịn loại thực phẩm bổ dưỡng với hàm lượng vitamin phong phú (vitamin A, B1, B2, PP, C ) * Bảng 4.4.3 Bảng đánh giá khả ảnh hưởng nhộng tằm lên phát triển nấm Cordyceps militaris qua tiêu chí số ngày nấm bắt đầu hình thành thể môi trường nhân tạo Số ngày nấm bắt đầu STT Nghiệm thức Không nhộng 52,00 c 2 nhộng 38,00 b nhộng 33,17 a nhộng 53,67 c cv(%) 7,3 hình thành thể Trong cột, số liệu có mẫu tự khơng khác biệt có ý nghĩa mức độ p ≤ 0,05 qua phép thử Duncan Số liệu trình bày giá trị trung bình nghiệm thức Kết p-value = 0,0000 35 Kết từ bảng 4.4.3 cho thấy có khác biệt có ý nghĩa nghiệm thức p ≤ 0,05 Trong nghiệm thức nhộng cho số ngày hình thành thể số ngày ngắn (33,17%) nghĩa trung bình khoảng 33 ngày kể từ nấm bao phủ tồn mơi trường nấm bắt đầu hình thành thể môi trường nhân tạo, nghiệm thức nhộng cho số ngày hình thành thể số ngày dài (53,67%) nghĩa trung bình khoảng 53 – 54 ngày kể từ nấm bao phủ tồn mơi trường nấm bắt đầu hình thành thể môi trường nhân tạo, nghiệm thức Khơng nhộng nhộng khơng có khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê Ở nghiệm thức nhộng, với số ngày hình thành thể khoảng 33 ngày, cho ta thấy với nồng độ thích hợp tỉ lệ thành phần mơi trường giữ cũ số nhộng tăng lên vừa phải (tăng thêm nhộng so với nghiệm thức nhộng) cho ta kết đậu thể cao Ở nghiệm thức nhộng, tỉ lệ thành phần môi trường giữ nguyên tỉ lệ đậu thể bình thường so với nghiệm thức nhộng lại có dấu hiệu chậm lại khơng phát triển bằng, thấy rằng, số lượng q nhiều chất có nhộng ức chế ngược lại phát triển nấm Cordyceps militaris Điều phản ánh rõ nghiệm thức Không nhộng nhộng tiêu số ngày nấm Cordyceps militaris hình thành thể cụ thể với nghiệm thức nhộng với tỉ lệ thành phần môi trường giữ nguyên tăng số lượng nhộng tằm lên số ngày nấm phát triển để đậu thể lại chậm nghiệm thức đối chứng khơng có bổ sung nhộng tằm Điều phản ánh rằng, số lượng nhộng nhiều ( > nhộng tằm) có chiều hướng làm phát triển nấm Cordyceps militaris để hình thành thể đạt chất lượng nhiều thời gian 36 Khơng nhộng nhộng nhộng nhộng Hình 10: Hình so sánh kích thước thể nghiệm thức sau 15 ngày Nghiệm thức Không nhộng: thể cao khoảng 1mm Nghiệm thức nhộng: thể cao từ – mm Nghiệm thức nhộng: thể cao từ 5mm – 2cm Nghiệm thức nhộng: thể cao khoảng 1mm Kết luận: Thông qua việc đánh giá khả phát triển nấm dựa vào việc thay đổi tỉ lệ thành phần môi trường tiến hành thí nghiệm 4.4 thơng qua tiêu chí: số ngày nấm bắt đầu mọc, số ngày nấm lan phủ tồn mơi trường, số ngày nấm bắt đầu hình thành thể, nhóm kết luận rằng, tỉ lệ thành phần nghiệm thức nhộng phù hợp để nấm Cordyceps militaris phát triển hiệu thời gian ngắn nhất, tỉ lệ thành phần môi trường nghiệm thức nhộng, Không nhộng nhộng 37 Phần IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận - Đối với thí nghiệm nhân giống nấm Cordyceps militaris tiến hành môi trường PDA tự nhiên, Peptone, PDA tổng hợp cho kết việc nấm mọc phát triển mơi trường PDA tổng hợp có hiệu cao hẳn so với môi trường cịn lại - Trên thí nghiệm so sánh phát triển nấm Cordyceps militaris giá thể nhộng tằm mức nồng độ khác 104 108 Cho kết nồng độ 104 thấy phát triển xâm nhiễm nấm vào thể nhộng tằm tiến triển tốt đặn xảy mẫu bị hư hại so với nồng độ 108 - Trên thí nghiệm khảo sát khả sinh trưởng phát triển nấm Cordyceps militaris môi trường nhân tạo cách thay đổi tỉ lệ thành phần mơi trường ta kết luận tỉ lệ thành phần môi trường dinh dưỡng nghiệm thức C xem tối ưu cho phát triển nấm Cordyceps militaris - Trên thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nhộng tằm đến phát triển nấm Cordyceps militaris môi trường nhân tạo Ở nghiệm thức không nhộng, nhộng, nhộng, nhộng, đạt cho kết luận, tỉ lệ thành phần môi trường dinh dưỡng nghiệm thức thay đổi số lượng nhộng bổ sung vào, mức độ nhộng tằm bổ sung vào khoảng – nhộng tằm cho phát triển nấm đạt kết tốt Cịn trường hợp khơng bổ sung bổ sung q số lượng làm ảnh hưởng đến phát triển nấm gây ức chế phát triển Kiến nghị - Phân tích hoạt tính hợp chất Adenosine Cordycepin có mẫu nghiệm thức cho thể - Tiếp tục thực hện thí nghiệm tìm mơi trường hữu tốt rút ngắn thời gian tạo thể nấm Cordyceps militaris Đồng thời cho hàm lượng chất Adenosine Cordycepin với hoạt tính cao - Tiếp tục hồn thiện quy trình ni cấy nấm đông trùng hạ thảo từ nguồn nấm Cordyceps militaris nhộng tằm môi trường hữu tổng hợp nhằm giảm chi phí giá thành sản phẩm để dễ dàng tiếp cận với nhiều người tiêu dùng 38 Tài liệu tham khảo Tài liệu Internet http://luanvan.co/luan-van/nghien-cuu-moi-truong-nuoi-cay-nam-dong-trung-ha- thao-cordyceps-militaris-5927/ http://www.slideshare.net/luongnguyenthanh/graduation-thesis-cordyceps http://dongtrung-hathao.com/tac-dung-cua-dong-trung-ha-thao-trong-viec-chua- benh-160.html) vafs.gov.vn/wp-content/uploads/sites/2/2012/04/44Dong%20trung%20ha%20 thao.pdf Tài liệu Tiếng Việt Lê Phước Thọ, Trần Công Sơn, Nguyễn Thị Ngọc Anh, Lê Văn Huy, Lê Thị Diệu Trang (2013) Sản xuất Đông trùng hạ thảo quy mô phịng thí nghiệm, Viện nghiên cứu Cơng nghệ sinh học Môi trường, Trường Đại học Nông Lâm Phạm Thị Thuỳ (2010) Kết điều tra nghiên cứu nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps sp Việt Nam Nông nghiệp phát triển nông thôn, Số 05:55- 59 Phạm Quang Thu (2009) Phát nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps Gunnii (Berk.) vườn quốc gia tam đảo tỉnh Vĩnh Phúc Nông nghiệp phát triển nông thôn, Số 06: 96-99 Tài liệu Tiếng Anh Ting-chi Wen [a], Guang-rong Li [a], Ji-chuan Kang [a], Chao Kang, etg, (2014) Optimization Of Solid-state Fermentation for Fruiting Body Growth and Cordycepin Production by Cordyceps militaris Ruiying Chen and Masatoshi Ichida December 29 (2001) Infection of the Silkworm, Bombyx mori, with Cordyceps militaris., Journal of Insect Biotechnology and Sericology 71 Page 61 – 63 10 Pooja Pathania, Madhavi Joshi, Anand Sagar (2015) Morphological, Physiological and Molecular studies on wildly collected Cordyceps militaris from North West Himalayas, India, European Journal of Biotechnology and Bioscience, Page 53-62 39 PHỤ LỤC  Thí nghiệm 3: Đánh giá khả phát triển nấm Cordyceps militaris môi trường nhân tạo cách thay đổi tỉ lệ thành phần môi trường nghiệm thức  Khảo sát khả phát triển nấm Cordyceps militaris môi trường nhân tạo qua số ngày mọc nấm Cordyceps militaris 40  Khảo sát khả phát triển nấm Cordyceps militaris môi trường nhân tạo qua số ngày nấm bao phủ tồn mơi trường 41  Khảo sát khả phát triển nấm Cordyceps militaris môi trường nhân tạo qua số ngày nấm bắt đầu mọc thể 42  Thí nghiệm 4: Đánh giá ảnh hưởng việc bổ sung nhộng tằm đến khả phát triển nấm Cordyceps militaris môi trường nhân tạo  Bảng đánh giá khả ảnh hưởng nhộng tằm lên phát triển nấm Cordyceps militaris qua tiêu chí số ngày nấm bắt đầu mọc mơi trường nhân tạo 43  Bảng đánh giá khả ảnh hưởng nhộng tằm lên phát triển nấm Cordyceps militaris qua tiêu chí số ngày nấm bao phủ tồn mơi trường nhân tạo 44  Bảng đánh giá khả ảnh hưởng nhộng tằm lên phát triển nấm Cordyceps militaris qua tiêu chí số ngày nấm bắt đầu mọc thể môi trường nhân tạo 45 ... HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN TÊN ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO Cordyceps militaris TRÊN... nghệ sinh học Nữ Nữ Nữ Nữ THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Thông tin chung: - Tên đề tài: Khảo sát khả sinh trưởng phát triển nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris nhộng tằm giá thể tổng. .. trưởng phát triển nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris nhộng tằm giá thể tổng hợp? ?? Phần I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Khái niệm nấm Cordyceps militaris 1.1 Sơ lược lịch sử nghiên cứu nấm Đông trùng hạ