Nghiên cứu ảnh hưởng của phương thức cấy giống trên nhộng tằm đến sinh trƣởng, phát triển và năng suất nấm đông trùng hạ thảo (cordyceps militaris) tại trƣờng đại học hồng đức

TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC KHOA NÔNG LÂM NGƢ NGHIỆP NGUYỄN THỊ TÚ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA PHƢƠNG THỨC CẤY GIỐNG TRÊN NHỘNG TẰM ĐẾN SINH TRƢỞNG, PHÁT TRIỂN VÀ NĂNG SUẤT NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO (CORDYCEPS MILITARIS) TẠI TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC Ngành đào tạo: Nơng học THANH HĨA, NĂM 2019 TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC KHOA NÔNG LÂM NGƢ NGHIỆP KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA PHƢƠNG THỨC CẤY GIỐNG TRÊN NHỘNG TẰM ĐẾN SINH TRƢỞNG, PHÁT TRIỂN VÀ NĂNG SUẤT NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO (CORDYCEPS MILITARIS) TẠI TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC Ngƣời thực hiện: Nguyễn Thị Tú Lớp: K18 – Nơng Học Khố: 2015 - 2019 Giảng viên hƣớng dẫn: TS Trịnh Lan Hồng THANH HÓA, NĂM 2019 LỜI CẢM ƠN Trong suốt q trình thực tập tốt nghiệp vừa qua, ngồi cố gắng nỗ lực thân, nhận đƣợc nhiều quan tâm, giúp đỡ nhiệt tình thầy cô giáo, bạn bè, ngƣời thân quan đơn vị Trƣớc tiên, xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu Trƣờng Đại Học Hồng Đức, Ban chủ nhiệm Khoa Nông Lâm Ngƣ nghiệp, thầy giáo cô giáo khoa tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành tốt đề tài nghiên cứu Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành sâu sắc đến cô: ThS Trịnh Lan Hồng đồng hành, dành nhiều thời gian, công sức, hƣớng dẫn dạy tỉ mỉ cho phƣơng pháp khoa học, cách thức thực nội dung đề tài phần kiến thức thân chƣa nắm vững Sau cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, ngƣời thân, bạn bè bạn sinh viên lớp ĐH Nơng học K18 ln nhiệt tình chia sẻ, giúp đỡ khích lệ tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thiện báo cáo Trong q trình nghiên cứu, thân cố gắng để hoàn thành báo cáo, tham khảo nhiều tài liệu trao đổi, tiếp thu ý kiến thầy cô, bạn bè Song, điều kiện thời gian trình độ nghiên cứu thân cịn tồn số hạn chế nên nghiên cứu khó tránh khỏi thiếu sót Vì vậy, tơi mong nhận đƣợc quan tâm đóng góp ý kiến thầy bạn để báo cáo đƣợc hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Thanh Hóa, tháng năm 2019 Sinh viên Nguyễn Thị Tú MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu, yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục tiêu: 1.2.2 Yêu cầu cần đạt 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 2.1 Giá trị dƣợc liệu nấm Đông trùng hạ thảo 2.1.1 Các hợp chất dược liệu 2.1.2 Các thành phần hóa học nâm Cordyceps militaris 11 2.1.3 Tác dụng chữa bệnh nấm Đông trùng hạ thảo 12 2.2 Đặc điểm nấm Đông trùng hạ thảo 15 2.2.1 Chu trình sống nấm Cordyceps militaris 15 2.2.2 Ký chủ 16 2.2.3 Tế bào học di truyền học Cordyceps militaris 17 2.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến sinh trƣởng nấm Đông trùng hạ thảo 18 2.3.1 Ảnh hưởng điều kiện mơi trường đến q trình ni trồng nấm 18 2.3.2 Ảnh hưởng dinh dưỡng môi trường nuôi nấm 19 2.3.3 Ảnh hưởng điều kiện môi trường nuôi cấy 19 2.4 Các bệnh thƣờng gặp nấm Đông trùng hạ thảo 20 2.5 Các kết nghiên cứu phƣơng pháp cấy giống nấm Đông trùng hạ thảo môi trƣờng nhộng tằm 21 2.5.1 Kết nghiên cứu Việt Nam 21 2.5.3 Kết nghiên cứu giới 24 PHẦN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 Vật liệu nghiên cứu 26 3.2 Nội dung nghiên cứu 26 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 26 3.3.1 Thời gian, địa điểm 26 3.3.2 Cơng thức thí nghiệm 26 3.3.3 Quy trình kỹ thuật ni trồng nấm Đơng trùng hạ thảo 27 3.3.4 Chỉ tiêu theo dõi phương pháp theo dõi tiêu 27 3.3.5 Hiệu nuôi trồng 28 3.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 28 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 29 4.1 Ảnh hƣởng phƣơng thức cấy giống nhộng tằm đến khả sinh trƣởng, phát triển suất nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) 29 4.1.1 Ảnh hưởng phương thức cấy giống nhộng tằm đến tỷ lệ nhiễm hóa vũ nấm Đơng trùng hạ thảo 29 4.1.2 Ảnh hưởng phương thức cấy giống nhộng tằm đến khả sinh trưởng, phát triển nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) 31 4.1.3 Ảnh hưởng phương thức cấy giống nhộng tằm đến suất nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) 33 4.2 Ảnh hƣởng phƣơng thức cấy giống nhộng tằm đến hiệu nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) 34 PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 36 5.1 Kết luận 36 5.2 Đề nghị 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 4.1 Ảnh hƣởng phƣơng thức cấy giống nhộng tằm đến tỷ lệ nhiễm hóa vũ nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) 29 Bảng 4.2 Ảnh hƣởng phƣơng thức cấy giống nhộng tằm đến khả sinh trƣởng, phát triển nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) 31 Bảng 4.3 Ảnh hƣởng phƣơng thức cấy giống nhộng tằm đến suất nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) 33 Bảng 4.4 Ảnh hƣởng phƣơng thức cấy giống nhộng tằm đến hiệu nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) 34 PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài Đơng trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) lồi nấm ký sinh côn trùng đƣợc sử dụng nhƣ loại dƣợc liệu quý y học cổ truyền hàng kỷ Ngoài tự nhiên loài nấm phân bố cao nguyên cao mặt biển từ 4.000 đến 5.000m nhƣ Tây Tạng, Tứ Xuyên, Vân Nam Vào mùa đông nấm bắt đầu ký sinh vào sâu non làm chết sâu non ăn hết chất dinh dƣỡng chúng Đến mùa hè, nấm bắt đầu mọc khỏi sâu nhƣ cỏ vƣơn lên khỏi mặt đất Đầu nấm thể đệm hình trụ thn nhọn Vị thuốc có chứa thành phần bổ dƣỡng hoạt hất sinh hoạc quý nhƣ protein, chất béo, nucleosides, cordycepin, adenosine, polysaccharides, ergosterol, vitamin, amino acid nguyên tố vi lƣợng cần thiết cho thể Trong năm gần đây, việc nghiên cứu nuôi trồng nấm dƣợc liệu có bƣớc phát triển nhảy vọt nhiều nƣớc có Việt Nam Giống nấm (Cordyceps militaris) đƣợc cấy phổ biến hai môi trƣờng môi trƣờng tổng hợp môi trƣờng nhộng tằm sống Việc ni cấy trực tiếp nhộng tằm địi hỏi kĩ thuật cao phức tạp môi trƣờng tổng hợp tỷ lệ phát triển thành công thấp Tuy nhiên, nấm Đông trùng hạ thảo đƣợc nuôi môi trƣờng nhộng tằm sống cho chất lƣợng giá trị kinh tế cao nhiều so với nuôi trồng giá thể tổng hợp hình thức gần với hình thức sống Đơng trùng hạ thảo ngồi tự Một nguyên nhân gây tỷ lệ thành công thấp phƣơng thức cấy giống hay phƣơng thức nhiễm nấm vào nhộng tằm Ở Việt Nam, việc nghiên cứu nấm Đông trùng hạ thảo nhộng tằm sống nhiều hạn chế số lƣợng chất lƣợng Vì vậy, nghiên cứu phƣơng thức cấy giống nấm nhộng tằm phù hợp để phát triển nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) nhằm tăng quy mơ sản xuất, nâng cao suất, chất lƣợng góp phần giảm giá thành sản phẩm đáp ứng nhu cầu thị trƣờng địa phƣơng nƣớc cần thiết Từ sở lý luận thực tiễn, tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu ảnh hưởng phương thức cấy giống nhộng tằm đến sinh trưởng, phát triển suất nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) trường Đại học Hồng Đức” 1.2 Mục tiêu, yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục tiêu: Xác định ảnh hƣởng phƣơng thức cấy giống nhộng tằm đến hiệu nuôi trồng nấm Đơng trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) từ lựa chọn phƣơng thức phù hợp tạo sở phổ biến nhân rộng, góp phần giảm giá thành sản phẩm nâng cao thu nhập địa bàn tỉnh Thanh Hóa 1.2.2 Yêu cầu cần đạt - Xác định đƣợc tiêu sinh trƣởng, phát triển suất nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) theo phƣơng thức cấy giống khác nhộng tằm; - Đánh giá đƣợc hiệu kinh tế nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) theo phƣơng thức cấy nhộng tằm 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.3.1 Ý nghĩa khoa học Kết nghiên cứu đề tài góp phần cung cấp liệu khoa học mối quan hệ phƣơng thức cấy giống môi trƣờng nhộng tằm với khả sinh trƣởng, phát triển suất nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) trƣờng Đại học Hồng Đức 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn Kết nghiên cứu đề tài sở để khuyến cáo, nhân rộng mơ hình ni trồng nấm Đơng trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) mơi trƣởng nhộng tằm, góp phần giảm giá thành sản phẩm nâng cao thu nhập cho ngƣời dân địa bàn tỉnh Thanh Hóa PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 2.1 Giá trị dƣợc liệu nấm Đông trùng hạ thảo 2.1.1 Các hợp chất dược liệu Các hợp chất dƣợc liệu loại nấm (Cordyceps militaris) ứng dụng điều trị bệnh nâng cao sức khỏe ngƣời, lồi nấm có giá trị kinh tế cao Nấm (Cordyceps militaris) khan tự nhiên Do đó, việc sản xuất quy mô lớn chiết xuất từ nấm phục vụ nghiên cứu điều trị bệnh từ (Cordyceps militaris) vấn đề cấp thiết + Các hợp chất chống ung thư: Hợp chất cordycepin (3′-deoxyadenosine) từ nấm cho thấy có hoạt tính kháng vi sinh vật, kháng ung thƣ, ngừa di căn, điều hòa miễn dịch (Shonkor et al, 2010) + Hoạt tính kháng oxy hóa: Các nghiên cứu cho thấy hợp chất CM-hsCPS2 chứa dịch chiết nấm C.militaris có tính kháng DPPH, hoạt tính khử tạo phức nồng độ (8 mg/ml) 89%, 1,188 85% + Tăng số lượng tinh trùng: Nghiên cứu lợn cho thấy dùng chế phẩm từ (Cordyceps militaris) , số lƣợng tinh trùng tăng, số phần trăm tinh trùng di động hình dạng bình thƣờng tăng Hiệu đƣợc trì chí sau tuần ngƣng sử dụng chế phẩm Lƣợng cordycepin tế bào tăng thời gian sử dụng chế phẩm nên có khả chất làm tăng lƣợng tinh dịch chất lƣợng tinh trùng lợn (Lin et al, 2007) + Hạn chế vius cúm: Acidic polysaccharide (APS) tách chiết từ nấm (Cordyceps militaris) trồng đậu nành nảy mầm có khả ứng dụng điều trị cúm A Chất góp phần điều hịa hoạt động miễn dịch đại thực bào (Yuko et al, 2007) + Kháng khuẩn kháng nấm kháng ung thư: C militaris: protein (CMP) tách chiết từ nấm có kích thƣớc 12kDa, pI 5,1 có hoạt tính khoảng pH 7-9 Protein ức chế nấm (Fusariumoxysporum) gây độc tế bào ung thƣ bàng quan Hợp chất cordycepin cho thấy khả kháng vi khuẩn Clostridium Các hợp chất dẫn xuất từ nấm đƣợc mong đợi ứng dụng việc điều trị bệnh nhiễm khuẩn đƣờng ruột Cordycepin ngăn biểu gen T2D chịu trách nhiệm điều hòa bệnh tiểu đƣờng thông qua việc ức chế đáp ứng phản ứng viêm phụ thuộc NF-κB, đƣợc hy vọng ứng dụng đƣợc nhƣ chất điều hòa miễn dịch dùng điều trị bệnh miễn dịch (Byung-Tae et al, 2009) + Tan huyết khối: Enzyme tiêu sợi huyết tách chiết từ nấm Cordyceps militaris có hoạt tính gắn fibrin, xúc tiến việc phân hủy fibrin Enzyme có khả sử dụng điều trị tan huyết khối tƣơng tự nhƣ enzym fibrinolytic mạnh khác nhƣ nattokinase enzyme chiết từ giun đất Khi enzyme sản xuất quy mô lớn giải pháp thay hữu hiệu cho enzym fibrinolytic giá thành cao đƣợc sử dụng cho bệnh tim lão hóa ngƣời + Tính kháng viêm: Để xác định tác dụng kháng viêm nấm, dịch chiết từ thể nấm Cordyceps militaris (CMWE) đƣợc thử nghiệm tác dụng kiểm sốt lipopolysaccharide (LPS) (chịu trách nhiệm kích thích việc sản xuất nitric oxide), việc phóng thích yếu tố hoại tử khối u α (TNF-α) interleukin-6 (IL-6) tế bào RAW 264,7 Các đại thực bào đƣợc xử lý với nồng độ khác CMWE làm giảm đáng kể LPS, TNF-α IL-6 mức độ giảm theo nồng độ dịch chiết Những kết cho thấy CMWE có tác dụng ức chế mạnh đến việc sản xuất chất trung gian gây viêm tế bào (Wol et al., 2010) + Các ứng dụng lâm sàng nấm Cordyceps militaris: Mặc dù nấm Cordyceps sinensis đƣợc sử dụng rộng rãi Cordyceps militaris, nhiên ứng dụng lâm sàng chúng tƣơng tự Các chiết xuất từ nấm Cordyceps militaris đƣợc sử dụng trƣờng hợp suy giảm chức phổi, ho có đờm, chóng mặt 10 - Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm: Nhộng tằm sau cấy giống đƣợc ni bình với số lƣợng 05 con/bình Mỗi cơng thức thí nghiệm bố trí 10 bình, nhắc lại lần, điều kiện ni cấy đảm bảo ổn định giống 3.3.3 Quy trình kỹ thuật nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo Áp dụng quy trình cơng nghệ ni trồng nấm Đơng trùng hạ thảo phổ biến cụ thể nhƣ sau: Giống gốc Nhân giống cấp Nhân giống cấp Cấy giống nhộng tằm Ƣơm sợi điều kiện tối hoàn tồn Kích bật mầm thể Ni thể điều kiện phù hợp Thu hoạch 3.3.4 Chỉ tiêu theo dõi phương pháp theo dõi tiêu Tỷ lệ nhiễm: Trong giai đoạn ƣơm sợi, định kỳ hàng ngày kiểm tra tình hình nhiễm mốc để loại bỏ bình có nhộng tằm bị nhiễm mốc Tính tỷ lệ nhiễm: Tỷ lệ nhiễm = (Tống số bình bị nhiễm)/(tổng số bình ni trồng) x 100 Tỷ lệ hóa vũ: 27 Sauk hi cấy giống, định kỳ hàng ngày kiểm tra tình hình nhiễm nấm Đơng trùng hạ thảo vào nhộng để loại bỏ bình có nhộng tằm bị hóa vũ Tỷ lệ hóa vũ = (Số bình nhộng hóa vũ)/(tổng số bình ni trồng) x 100 Thời gian ƣơm sợi (ngày): Số ngày từ ngày cấy giống đến có 50% số bình ni trồng có hệ sợi nấm lan trắng kín tồn bình nhộng tằm Thời gian hình thành thể (ngày): Số ngày từ cấy giống đến có 50% số bình có nhộng tằm nuôi trồng xuất thể nấm Thời gian thu hoạch (ngày): Số ngày từ cấy giống đến thu hoạch Số lƣợng thể (quả thể/con nhộng tằm): Đếm số lƣợng thể/ nhộng tằm thu hoạch tính số lƣợng thể trung bình cơng thức thí nghiệm Chiều dài thể (mm): Đo từ điểm gốc sát nhộng tằm đến đỉnh thể dài nhộng tằm thu hoạch tính chiều dài trung bình Năng suất (kg/vụ): Cân khối lƣợng thể công thức sau thu hoạch 3.3.5 Hiệu nuôi trồng Lãi (VNĐ) = Tổng thu – Tổng chi Tổng thu (triệu đồng/kg) = Năng suất x giá bán Tổng chi (triệu đồng/kg) = Các chi phí: Giống, ngun vật liệu, tiền cơng 3.3.6 Phương pháp xử lý số liệu Kết thí nghiệm đƣợc xử lý chƣơng trình Excel 28 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 4.1 Ảnh hƣởng phƣơng thức cấy giống nhộng tằm đến khả sinh trƣởng, phát triển suất nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) 4.1.1 Ảnh hưởng phương thức cấy giống nhộng tằm đến tỷ lệ nhiễm hóa vũ nấm Đơng trùng hạ thảo Trong q trình nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo, đặc biệt giai đoạn ƣơm sợi nhiễm bệnh hay nhiễm nấm dại tƣợng không mong muốn ảnh hƣởng lớn đến thành công, suất chất lƣợng nấm Nấm bị nhiễm nhộng tằm Bên cạnh đó, yếu tố khác ảnh hƣởng khơng nhỏ đến tỷ lệ thành cơng q trình ni nấm Đơng trùng hạ thảo nhộng tằm sống tỷ lệ hóa vũ (hóa bƣớm) nhộng tằm q trình sau cấy đến lan sợi Trong thí nghiệm nghiên cứu nuôi trồng, tỷ lệ nhiễm nấm dại tỷ lệ hóa vũ thể nhƣ bảng 4.1 Bảng 4.1 Ảnh hƣởng phƣơng thức cấy giống nhộng tằm đến tỷ lệ nhiễm hóa vũ nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) TT Công thức Chỉ tiêu theo dõi Ghi CT1 CT2 CT3 Số bình theo dõi 10 10 10 Số bình nhiễm (bình) 3 Số bình hóa vũ (bình) Số bình cịn lại (bình) Từ kết ta thấy, cơng thức có tỷ lệ nhiễm bệnh khác tƣơng đối cao tất công thức Tỷ lệ nhiễm cao công thức công thức công thức phun nhúng nhộng tằm 3/10 bình (30%) Tỷ lệ 29 nhiễm bệnh CT1 thấp 2/10 bình (20%) Tỷ lệ nhiễm bệnh nguyên nhân thao tác cấy giống, điều kiện vô trùng, yếu tố nhiễm bẩn phịng bị nhiễm chéo từ thí nghiệm vi sinh khác Do vậy, cần khắc phục đồng thời tất yếu tố để giảm tỷ lệ nhiễm bệnh xuống mức tối thiểu góp phần nâng cao hiệu nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo Về tỷ lệ nhộng tằm hóa vũ, số bình có nhộng tằm bị hóa vũ cơng thức cao (5/10 bình) tiếp đến cơng thức cơng thức với số bình có tỷ lệ hóa vũ 3/10 bình Vấn đề việc bị nhiễm nấm dại hóa vũ nhộng tằm gây khó khăn q trình ni trồng nấm Đông trùng hạ thảo nhộng tằm sống Điều đƣợc tìm thấy nghiên cứu tác giả Nguyễn Ngọc Trai (2017) ơng thí nghiệm tiêm dịch giống ni nấm Cordyceps militaris tên hai vị trí khác phần ngực phần bụng nhộng tằm Tỷ lệ thành công Nguyễn Ngọc Trai dừng lại tỷ lệ 47,93% đến 48,89% Ngoài ra, năm 2017 tác giả Nguyễn Ngọc Trai kết luận khác biệt lớn tỷ lệ thành công phụ thuộc vào tuổi nhộng khác Nhộng tằm 12 ngày tuổi có tỷ lệ phát triển nấm cao (53,88%) đạt thấp (43,33%) nhộng tằm có tuổi đời ngày Đối tƣợng nhộng tằm 12 ngày tuổi đƣợc ghi nhận có 50% nhộng hóa bƣớm Từ nhận định cho thấy nghiên cứu phƣơng thức cấy giống khác nên có thêm thí nghiệm sau tuổi nhộng tằm để lựa chọn đƣợc nhộng tằm sống với ngày tuổi phù hợp để giảm tỷ lệ nhiễm nấm dại tỷ lệ hóa vũ Do tỷ lệ nhiễm nấm dại tỷ lệ hóa vũ khơng mong muốn q trình sau cấy giống không nhỏ nên dẫn đến việc giảm số lƣợng bình nấm Đơng trùng hạ thảo thí nghiệm ba cơng thức CT1, CT2 CT3 30 4.1.2 Ảnh hưởng phương thức cấy giống nhộng tằm đến khả sinh trưởng, phát triển nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) Ở phƣơng pháp cấy giống nấm khác yếu tố ảnh hƣởng đến tình hình sinh trƣởng phát triển nấm khác Ở đây, phƣơng pháp cấy giống nấm tiêm, phun, nhúng cho kết khác Kết so sánh đƣợc thể nhƣ bảng 4.2 Bảng 4.2 Ảnh hƣởng phƣơng thức cấy giống nhộng tằm đến khả sinh trƣởng, phát triển nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) Công thức TT Chỉ tiêu theo dõi CT1 CT2 CT3 Thời gian đen cứng (ngày) 10 15 13 Thời gian lan sợi (ngày) 21 28 26 Thời gian hình thành thể (ngày) 28 36 32 Thời gian thu hoạch (ngày) 61 64 62 Số lƣợng thể (quả thể/con) 6 Chiều dài thể trung bình (mm) 32,2 34,0 30,5 Đƣờng kính (mm) 3,0 2,4 2,7 Các bình nhộng tằm sau cấy giống với phƣơng thức khác đƣợc đem nuôi vào điều kiện tối nhiệt độ 21oC để theo dõi trình nhiễm sợi nấm Đông trùng hạ thảo vào nhộng tằm nhƣ biến đổi nhộng tằm sống từ cấy giống đến sợi nấm ăn lan hoàn toàn Qua thí nghiệm cho thấy, nhộng tằm sau đƣợc cấy giống trở nên yếu dần, có 31 tƣợng đổi màu đen dần thể trở nên cứng Sau nhộng tằm trở nên đen cứng hoàn tồn, sợi nấm Đơng trùng hạ thảo bắt đầu xuất nhộng với sợi có màu trắng đồng nhất, thời gian ăn sợi nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris Từ kết cho thấy, công thức sử dụng phƣơng pháp cấy giống phun làm cho nhộng tằm đen cứng lâu 15 ngày sau phun Ngƣợc lại công thức sử dụng phƣơng pháp cấy giống tiêm cho thời gian nhộng tằm đen cứng sớm (10 ngày) Đối với công thức sử dụng phƣơng pháp tiêm hệ sợi phát triển ăn kín bề mặt môi trƣờng sau 21 ngày kể từ ngày cấy giống tiếp đến CT3 CT2 lần lƣợt 26 ngày 28 ngày Do công thức có thời gian lan sợi sớm CT2 CT3 nên cho thời gian hình thành thể nấm sớm cơng thức cịn lại (28 ngày) tiếp đến CT3 CT2 cho thời gian hình thành thể dài lần lƣợt 32 ngày 36 ngày Sau thời gian lan sợi nấm Cordyceps militaris nhộng tằm bình ni, bình nấm đƣợc chuyển phịng ni thể nhiệt độ 16oC điều kiện tƣới phun sƣơng chiếu sáng Nấm sau đƣợc chiếu sáng chuyển từ màu trắng sang màu vàng cam đặc trƣng nấm Đơng trùng hạ thảo Những ngày sau đó, từ vị trí nấm sợi thể nấm bật mầm phát triển thể thành dạng sợi dài màu vàng cam Về yếu tố cấu thành suất nhƣ số lƣợng thể, chiều dài thể, đƣờng kính cơng thức đƣợc thể bảng Cơng thức có số lƣợng thể trung bình tƣơng ứng với cơng thức 06 thể lớn số lƣợng thể cơng thức với trị số trung bình 01 thể Chiều dài thể công thức dao động từ 30.5 – 34.0 mm với trị số lớn công thức nhỏ công thức Bên cạnh yếu tố chiều dài đƣờng kính nấm thể dao động từ 2.4 – 3.0 mm lớn công thức nhỏ 32 công thức Nhƣ vậy, nhìn cách tổng quan thơng qua yếu tố thấy phƣơng thức cấy giống cách tiêm giống tạo ƣu tốt yếu tố số lƣợng thể, chiều dài đƣờng kính nấm Đơng trùng hạ thảo 4.1.3 Ảnh hưởng phương thức cấy giống nhộng tằm đến suất nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) Năng suất nấm mục tiêu nhà nghiên cứu ứng dụng sản xuất kinh doanh Năng suất nấm Đông trùng hạ thảo nuôi nhộng tằm cao hay thấp phụ thuộc nhiều vào yếu tố nhƣ: điều kiện nhiệt độ, độ ẩm môi trƣờng, loại nhộng tằm, độ thơng thống, nấm bệnh, trùng …Do đó, phƣơng pháp cấy giống khác tạo điều kiện khác nấm dẫn đến khác suất nấm Bảng 4.3 Ảnh hƣởng phƣơng thức cấy giống nhộng tằm đến suất nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) Công thức TT Chỉ tiêu theo dõi CT1 CT2 CT3 Số bình cho thu hoạch (bình/tổng bình ni trồng) Khối lƣợng nấm nhộng tằm (g/ ) 1,4 1,1 1.2 Năng suất nấm (g/vụ nuôi trồng) 35 11 18 Từ kết bảng cho thấy suất nấm vụ có giao động lớn công thức công thức với giá trị 11, 18 35 g/vụ tƣơng ứng với công thức CT2, CT3 CT1 Sự khác biệt tỷ lệ bình phát triển nấm thành công cho thu hoạch khác Đồng thời, khối lƣợng nấm trung bình nhộng tằm có giao động từ 1,1 đến 1,4 g/con với giá trị 33 lớn công thức với phƣơng thức tiêm giống thấp cơng thức với phƣơng thức phun giống Nhìn chung, giá trị số bình cho thu hoạch (bình/tổng bình ni cấy), khối lƣợng nấm nhộng tằm (g/con) suất nấm (g/ vụ nuôi trồng) cao công thức sử dụng phƣơng pháp cấy nấm khác 4.2 Ảnh hƣởng phƣơng thức cấy giống nhộng tằm đến hiệu nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) Hiệu kinh tế yếu tố quan trọng định mục đích cuối để đƣa thực tế sản xuất Tính đƣợc hiệu kinh tế giúp lựa chọn mức đầu tƣ hợp lý, tránh tƣợng đầu tƣ mức gây lãng phí Đồng thời giúp xác định đƣợc phƣơng thức cấy giống nấm Đông trùng hạ thảo nhộng tằm phù hợp vừa mang lại hiệu giá trị kinh tế cao vừa tiết kiệm tối đa chi phí đầu vào Kết hiệu nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo đƣợc thể nhƣ bảng 4.4 Từ số liệu thí nghiệm nghiệm tổng hợp cho thấy, chi phí đầu tƣ cơng thức tƣơng đối tƣơng đồng với khác biệt không lớn công thức CT1, CT2 CT3 tƣơng ứng 685.000đ, 710.000d 745.000đ Sự khác biệt chi phí đầu tƣ cơng thức chi phí cho lƣợng giống sử dụng khác phƣơng thức cấy khác Lƣợng giống sử dụng ngất phƣơng thức tiêm (CT1) nhiều phƣơng thức nhúng (CT3) Bảng 4.4 Ảnh hƣởng phƣơng thức cấy giống nhộng tằm đến hiệu nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) Công thức STT Chỉ tiêu theo dõi Tổng chi phí (đồng) CT1 CT2 CT3 685.000 710.000 745.000 34 Năng suất (kg) 35 11 18 Giá thành ( đồng) 100.000 100.000 100.000 Tổng thu ( đồng) 3.500.000 1.100.000 1.800.000 Lãi Thuần ( đồng) 2.815.000 390.000 1.055.000 Từ kết hiệu nuôi trồng nấm công thức sử dụng phƣơng pháp cấy giống khác ta thấy, sau tính tổng giá trị nấm cơng thức cơng thức có tổng chi phí thấp nhất, nhƣng CT1 cơng thức cho suất (35g) lãi (2.815.000đ) cao Công thức thu lại lãi thấp (390.000đ) Hiệu kinh tế nấm nuôi trồng công thức hầu nhƣ phụ thuộc vào suất nấm công thức Nhƣng suất bị biến động khác biệt tỷ lệ bình nấm cho thu hoạch nên dẫn đến hiệu nuôi trồng bị biến động theo nhƣ bảng 4.4 Từ kêt này, khuyến cáo sử dụng phƣơng pháp cấy giống tiêm để mang lại hiệu cao 35 PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Qua nghiên cứu nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo trƣờng Đại học Hồng Đức với phƣơng pháp cấy giống khác nhau, chúng tơi có số kết luận sau: Ba phƣơng thức cấy giống khác tiêm giống, phun giống nhúng giống cho kết tƣơng ứng thời gian nhộng đen cứng 10, 15 13 ngày, thời gian lan sợi 21, 28 26 ngày, thời gian hình thành thể 28, 36 32 ngày Đồng thời, tỷ lệ nhiễm hóa vũ nhộng tằm thấp phƣơng thức tiêm cao phƣơng thức phun giống Phƣơng thức tiêm giống có chi phí đầu tƣ thấp nhƣng cho suất hiệu kinh tế với lãi cao hai phƣơng thức lại với giá trị 2.815.000 đồng Bƣớc đầu khuyến cáo sử dụng hình thức cấy giống nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris nhộng tằm phƣơng thức tiêm giống 5.2 Đề nghị Từ kết đạt đƣợc nhƣ trên, khuyến cáo nên áp dụng rộng rãi phƣơng thức tiêm để cấy giống nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris nhộng tằm Tuy nhiên, nghiên cứu cần đƣợc tiến hành thêm số vụ khác để khẳng định xác kết 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Hồng Tiến Cơng (2010) Nghiên cứu thành phần loài nấm ĐTHT khu bảo tồn thiên nhiên Tây Yên Tử, huyện Sơn Động, tinh Bắc Giang Báo cáo Khoa học, Đại học Thái Nguyên Nguyễn Thị Minh Hằng, Bùi Văn Thắng (2017) Nghiên cứu nuôi trồng nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) giá thể tổng hợp nhộng tằm Tạp chí Khoa học Công nghệ lâm nghiệp, 4: 10-16 Phạm Quang Thu Lê Thị Xuân, Nguyễn Mạnh Hà (2009) Nghiên cứu đặc điểm sinh học hệ sợi môi trƣờng nuôi cấy khiết chủng nấm ĐTHT Cffrtfaceps miliiaris (L :Frl http://vafs) Phạm Thị Thùy (2010) Nghiên cứu phát triển nguồn nấm Beauveria Metarhizium để ứng dụng phòng trừ sâu hại trồng, rừng phát nguồn nấm Cordyceps sp làm thực phẩm chức cho ngƣời Hội thảo Quốc gia Bệnh hại Thực vật Việt Nam, Nxb Nông nghiệp, tr.224- 231 Tài liệu nước Byung – Tae, Cha S.H., et al (2009) Morphological characteristics of Cordyceps sinensis 16 and production of mycelia and exo-biopolymer from molasses in submerged culture Journal of Industrial and Engineering Chemistry, 12(1), pp.115- 120 Số hóa Trung tâm Học liệu - ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 55 Hyun, Keawsompong S., Hanh V.T., Sivichai S., N.L Hywel-Jones (2008) Effect of Temperature on Cordycepin Production in Cordyceps militaris, Thai Journal of Agricultural Science, 42 (4), pp.219-225 Lin Z., Li P., Zhao D., Tang H., Guo J (2010) Protective effect of extract of Cordyceps sinensis in middle cerebral artery occlusion – induced focal cerebral is chemia in rats Behavioral and Brain Functions Shih, Evans H.C., Latgé J-P (2007) Atlas of entomopathogenic fungi Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, New York Shonkor, N.N (2010), Chemical Kinetics and Chain Reactions, Oxford University Press, London 37 10 Sung J.H., Jones N.L.H., Sung J.M., Luangsa-ard J.J., Shrestha B., Spatafora J.W (2007), “Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi, Studies in Mcology, 57, pp.5–59 11 Wol P (2010) Isolation and in vitro cultivation of the insect pathogenic fungus Cordyceps unilateralis Thailand Mycol Res,109,pp.936-40 12 Yan, Huang L.F., Hu W., He Y.B., Wong K.P (2008) Analysis of the main nucleosids in Cordyceps sinensis by LC/ESI-MS Molecules, 15, pp 305314 13 Yuko H.S., Shin J.W., et al (2007) Effects of C militaris extract on angiogenesis and tumor growth Acta Pharmacol Sin, 25(5), pp.657-65 14 Zhang Z.S., Wang F., Wang X.M., Liu X.L., Hou Y., Zhang Q.B (2010) Extraction of the polysaccharids from five algae and their potential antioxidant activity in vitro Carbohyd Polym, 82, pp.118-121 15 Zheng P., Xia Y., et al (2010) Genome Số hóa Trung tâm Học liệu - ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 59 sequence of the insect pathogenic fungus Cordyceps militaris, a valued traditional chinese medicine Genome Biology 16 Zhou X., Gong Z., Su Y., Lin J., Tang K (2007) Cordyceps fungi: natural products, pharmacological functions and developmental products Journnal of Pharmacy and Pharmacology, 61, pp.279-291 38 MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA Hình Nhộng tằm kén A Hình Nhộng tằm bóc vỏ kén B C Hình Cấy giống phƣơng thức khác : Tiêm (A), Phun (B) Nhúng (C) 39 Hình Nhộng đen cứng hóa vũ Hình Sợi nấm chuyển màu cam Hình Quả thể nấm ĐTHT Hình Phịng nuôi nấm 40 41