KẾT QUẢ PHÂN TÍCH HẠT BÍ ĐỎ

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Kết kiểm tra nguyên liệu hạt bí Bảng 3.1: Thành phần hữu ích hạt bị Thành phần Vỏ Nhân Tỉ lệ (%) 25 75 Bảng 3.2: Thành phần hóa học hạt bí Thành phần Tỉ lệ (%) Độ ẩm 5.65 Tro 3.64 Đường 10.77 Xơ 17.09 Lipid 51.67 Hàm lượng xơ hạt bí làm tăng độ bền học hạt bí, ảnh hưởng khơng tốt đến suất trích ly Chất xơ nhiều khó thủy phân giải phóng dầu (TLTK 81, JAST) Trong độ ẩm cao làm chậm trình khuếch tán gây kết dính phân tử Đồng thời độ ẩm cao lại tốn nhiều lượng để tách nước Nước lại nguyên liệu liên kết protêin chất háo nước khác, điều ngăn chặn thấm dung môi, làm chậm trình khuyếch tán phân tử đối lưu (TLTK 81, JAST) Qua kết kiểm tra cho thấy: - Tỉ lệ vỏ:nhân 1:3 tương đồng với nghiên cứu Lưu Thị Lệ Thủy cộng (2008) Tỉ lệ ảnh hường đến hàm lượng dầu bí, hàm lượng nhân cao vỏ hàm lượng dầu cao Ngược lại vỏ nhiều hàm lượng xơ nhiều, dầu (TLTK 81, JAST) - Hàm lượng ẩm 5.65% cao so với hàm lượng ẩm theo nghiên cứu Lưu Thị Lệ Thủy cộng (2008) cao so với hàm ẩm theo nghiên cứu Gohari Ardabili công (2011) Nếu độ ẩm cao thời gian tách nước lâu, tốn lượng để tách dầu từ hạt bí Độ ẩm thích hợp phù hợp với điều kiện - trích ly thơng thường (TLTK 81, JAST) Hàm lượng tro 3.64% thấp so với hàm lượng tro theo nghiên cứu Lưu Thị Lệ Thủy cộng (2008) thấp so với hàm lượng tro theo nghiên cứu - Gohari Ardabili công (2011) (TLTK 81, JAST) Hàm lượng đường 10.77% gần với hàm lượng đường theo nghiên cứu Lưu Thị Lệ Thủy cộng (2008) thấp so với hàm lượng đường theo nghiên cứu Gohari Ardabili công (2011) Không ảnh hưởng đến hàm - lượng dầu hạt bí (TLTK 81, JAST) Hàm lượng xơ 17.09% cao so với hàm lượng xơ theo nghiên cứu Lưu Thị Lệ Thủy cộng (2008) cao so với hàm lượng xơ theo nghiên cứu Gohari Ardabili công (2011) Hàm lượng xơ nhiều khả hút nước nhiều tốn nhiều lượng tách nước tách dầu Hàm lượng xơ cao nên - hiệu suất trích ly dầu thấp (TLTK 81, JAST) Hàm lượng lipid 51.67% gần với hàm lượng lipid theo nghiên cứu Lưu Thị Lệ Thủy cộng (2008) gần với hàm lipid theo nghiên cứu Gohari Ardabili công (2011) Hàm lượng lipid biết phần trăm lipid chứa hạt hiệu suất thu trích ly dầu (TLTK 81, JAST) 3.2 Kết khảo sát trích ly dầu từ hạt bí với nước 3.2.1 Kết khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ hạt : nước đến hàm lượng dầu thu nhận Bảng 3.3: Ảnh hưởng tỉ lệ hạt:nước đến hàm lượng dầu thu nhận Tỉ lệ hạt : nước 1:4 1:6 1:8 1:10 1:12 1:14 Tỉ lệ dầu (%) 5.39a 7.46b 8.40c 10.22d 5.81a 3.56e Hình 3.1: Ảnh hưởng tỉ lệ hạt : nước hàm lượng dầu thu Theo kết phân tích ANOVA cho thấy, hiệu suất trích ly tỉ lệ khác có khác biệt mặt thống kê với mức ý nghĩa 5% lần lặp khơng có khác biệt (Phụ lục + 2) Theo đồ thị hình 3.1 tăng tỉ lệ hạt : nước, hàm lượng dầu thu tăng, hàm lượng dầu thu tăng từ tỉ lệ 1:04 đến tỉ lệ 1:10 Cặp tỉ lệ 1:04 1:12 có lượng dầu thu nhận giống Các tỉ lệ hạt : nước lại khác khoảng tin cậy 95% Hàm lượng dầu cao với tỷ lệ 1:10 10.22% Khi tiếp tục tăng tỉ lệ nước hàm lượng dầu thu lại giảm Theo Tạp chí KHKT Nơng nghiệp 2007 tỉ lệ dung mơi ngun liệu có ảnh hưởng đến hàm lượng dầu thu (ảnh hưởng nào?) Kết cho thấy tỉ lệ 1:12 tốt (tốt với nguyên liệu gì?) Khi lượng nước tăng làm tăng khả khuếch tán, giải phóng chất tế bào ngồi (như vitamin, chất béo, protein…), tạo môi trường hoạt động cho enzyme (enzyme gì?)(có sẵn ngun liệu) thủy phân vách tế bào (TLTK?) Tăng nước mức khối lượng nguyên liệu ban đầu cố định, hàm lượng dầu cố định, khối lượng dầu giảm thời gian đun nhiều nước để nhiệt độ tăng tốn nhiều lượng Đồng thời nước tạo nhũ với dầu nên ảnh hưởng đo hàm lượng béo Theo kết khảo sát chúng tôi, tỉ lệ hạt : nước 1:10 cho hiệu suất trích ly dầu từ hạt bí cao 3.2.2 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian trích ly đến hàm lượng dầu thu Bảng 3.4: Ảnh hưởng thời gian trích ly đến hàm lượng dầu thu nhận Thời gian trích ly (phút) 30 60 90 Tỉ lệ dầu (%) 6.48a 7.80b 9.99c 120 150 180 10.82d 10.95d 10.26e 210 240 9.83c 9.05f Hình 3.2: Ảnh hưởng thời gian trích ly hàm lượng dầu thu Theo kết phân tích ANOVA cho thấy, hiệu suất trích ly thời gian khác có khác biệt mặt thống kê với mức ý nghĩa 5% lần lặp khơng có khác biệt (Phụ lục + 4) Lượng dầu trích ly giống cặp thời gian 90, 210 phút 120, 150 phút Các mốc thời gian lại có lượng dầu trích khác với khoảng tin cậy 95% Theo đồ thị hình 3.2, thời gian trích ly lâu hàm lượng dầu thu tăng Hàm lượng dầu thu tăng theo thời gian trích ly từ 30 phút đến 150 phút, hàm lượng dầu lớn 10.95% 150 phút Sau bắt đầu giảm Thời gian trích ly dài kéo theo gia tăng suất trích ly Nhưng khơng nên trích ly với thời gian q dài khơng làm gia tăng hiệu suất dầu Bởi dầu cịn lại bã ngày giảm, chí dầu bị tổn thất (TLTK?) Thời gian tăng, tăng hội tiếp xúc nhiệt độ nước, tăng trích ly chất ngoài??? Thời gian tăng mức, trình oxi hóa diễn ra, hàm lượng dầu giảm Với kết nhận được, nhận thấy thời gian trích ly tối ưu 120 phút, tiết kiệm thời gian giữ hiệu suất trích ly dầu cao tương đương 150 phút Kết tương đồng với nghiên cứu Ugur Salgin Hasan Korkmaz (2011) trích ly lượng dầu lớn từ hạt bí ngơ (TLTK 45) 3.2.3 Tối ưu hóa q trình trích ly dầu từ hạt bí với nước Sử dụng phương pháp quy hoạch thực nghiệm mơ hình … (CCC, CCF, gì?) với 11 thí nghiệm, thí nghiệm tâm để tìm thơng số tối ưu cho hai yếu tố tỉ lệ hạt : nước thời gian trích ly nhẳm thu nhận tối đa hàm lượng dầu trích ly từ hạt bí với nước Bảng 3.5: Ảnh hưởng tỉ lệ hạt : nước thời gian trích ly đến hàm lượng dầu hạt bí Mẫu M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M1 Tỉ lệ 1:0 hạt:nước 1:0 1:0 1:10 1:10 1:10 1:10 1:10 1:1 1:12 1:12 Thời gian 120 trích ly (phút) 150 180 120 150 150 150 180 120 150 8.40 8.36 7.98 10.8 10.8 10.9 11.05 10.2 % dầu M11 180 5.81 6.33 6.36 Với X1 tỉ lệ hạt bí : nước, X2 thời gian trích ly (Bảng ANOVA lấy từ Modde 5) (Bảng Coefficients lấy Modde 5) Phương trình tối ưu Y = 10.91 – 1.04* X1 – 3.5* X12 – 0.305* X22 + 0.2425*X1*X2 (Nhận xét phương trình theo bậc 1, 2, tương tác) Điều cho thấy tỉ lệ hạt : nước thời gian trích ly ảnh hưởng trực tiếp đến hàm lượng dầu thu Nếu tăng tỉ lệ hạt:nước thời gian trích ly giá trị Y giảm Theo kết chạy Modde 5, R2 = 0.996 Q2 = 0.962 Giá trị R2 > 0.8, Q2 > 0.5 R2-Q2 < 0.3 chứng tỏ mơ hình hồi quy có khả dự dốn với độ xác cao (Eriksson cộng sự, 2000) Hình 3.3: Đồ thị 2D dùng mode với ảnh hưởng tỉ lệ hạt : nước thời gian trích ly nước đến hàm lượng dầu thu Hình 3.4: Bề mặt đáp ứng tối ưu giá trị thu nhận béo trích ly với nước theo tỉ lệ hạt : nước thời gian trích ly Theo hình 3.3 vùng tối ưu có giá trị X1[8.7 : 10.7] X2[95 : 195] Kết tối ưu X1 = 9.6933; X2 = 144.632 với giá trị hàm lượng dầu thu nhận tối ưu 10.9969% 3.3 Kết khảo sát trích ly dầu từ hạt bí với enzyme cellulase 3.3.1 Kết khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ enzyme cellulose đến hàm lượng dầu thu nhận Bảng 3.6: Ảnh hưởng tỉ lệ enzyme cellulase đến hàm lượng dầu thu nhận Tỉ lệ enzyme 0% 0.10% 0.20% 0.30% 0.40% 0.50% Tỉ lệ dầu (%) 10.08a 10.44a 11.30b 11.89c 11.48c 11.00c Hình 3.5: Ảnh hưởng tỉ lệ enzyme hàm lượng dầu thu Theo kết phân tích ANOVA cho thấy, hiệu suất trích ly với tỉ lệ khác có khác biệt mặt thống kê với mức ý nghĩa 5% lần lặp khơng có khác biệt (Phụ lục + 6) So sánh mẫu khảo sát trên… Enzyme góp phần làm phá vỡ vách tế bào làm túi dầu bên tế bào để dầu dễ dàng khuếch tán vào dung môi, với thời gian trích ly làm hàm lượng dầu bị biến đổi bị khuếch tán nhiều vào dung mơi ảnh hưởng đến q trình chiết Hàm lượng dầu thu tăng từ tỉ lệ enzyme từ 0% đến 0.30%, hàm lượng dầu lớn tỉ lệ enzyme 0.30% 11.89% Sau giảm Theo kết nghiên cứu Nguyễn Thị Minh Nguyệt 2009 hàm lượng enzyme carbohydrate để tách dầu cám gạo 0.1% So với nghiên cứu chúng tôi, hàm lượng enzyme cellulase sử dụng 0.3% thiết bị phòng thí nghiệm cịn hạn chế nên tốn nhiều enzyme để trích ly Enzyme cellulase giúp thủy phân cellulose, giải phóng chất bên có chất béo Tăng tỉ lệ enzyme giúp trình tiếp xúc nhiều, dầu giải phóng nhiều Nhưng tăng q mức với lượng chất xác định, tăng tỉ lệ enzyme khơng tăng q trình thủy phân Đồng thời, enzyme mức ức chế enzyme làm cho hàm lượng dầu giảm Theo nghiên cứu Lưu Thị Lệ Thủy cộng sự, 2008, hàm lượng dầu bí thu sử dụng enzyme Alcalase với tỉ lệ 1.5% 67.2% với enzyme Viscozyme tỉ lệ 3% 69.6% Nghiên cứu thu nhận dầu thấp điều kiện phịng thí nghiệm cịn hạn chế Với kết này, chúng tơi nhận thấy sử dụng tỉ lệ enzyme 0.3% tối ưu nhất… 3.3.2 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian thủy phân enzyme cellulase đến hàm lượng dầu thu nhận Bảng 3.7: Ảnh hưởng thời gian thủy phân enzyme cellulase đến hàm lượng dầu thu Thời gian thủy phân với enzyme cellulase (phút) 30 60 90 120 150 180 210 Tỉ lệ dầu (%) 10.12a 10.91b 11.89c 12.47d 14.66e 14.13f 11.30g 10.16a Hình 3.6: Ảnh hưởng thời gian thủy phân enzyme hàm lượng dầu thu Theo kết phân tích ANOVA cho thấy, hiệu suất trích ly với tỉ lệ khác có khác biệt mặt thống kê với mức ý nghĩa 5% lần lặp khơng có khác biệt (Phụ lục + 8) Khi thời gian thủy phân enzyme lâu lượng dầu thu nhiều, hàm lượng dầu thu tăng từ thủy phân phút đến 120 phút Hàm lượng dầu thu nhiều 120 phút 14.66% Sau giảm Theo kết nghiên cứu Nguyễn Thị Minh Nguyệt 2009 thời gian thủy phân enzyme thích hợp 30 phút đến 120 phút Điều cho thấy, khoảng thời gian thích hợp để enzyme hoạt động tối đa Kết chúng tơi thời gian trích ly thích hợp 120 phút Thời gian thủy phân lâu, enzyme có hội tiếp xúc với cellulose phá vỡ tế bào làm cho lượng dầu thu nhiều Nhưng q trình trích ly lâu q hạt dầu bị khuếch tán vào dung mơi lớp bã mịn Thời gian lâu, tăng phản ứng oxi hóa dầu, dầu phân tán vào lớp bã làm cho hàm lượng dầu thu Theo nghiên cứu Lưu Thị Lệ Thủy cộng sự, 2008, hàm lượng dầu bí thu sử dụng enzyme Alcalase thủy phân 75.7% enzyme Viscozyme thủy phân 70.3% Kết nghiên cứu chúng tơi thấp loại enzyme sử dụng khác điều kiện thí nghiệm, dụng cụ hạn chế Theo nghiên cứu chúng tơi, thời gian trích ly tối ưu 120 phút để trích ly dầu từ hạt bí enzyme … 3.3.3 Tối ưu hóa q trình trích ly dầu từ hạt bí với enzyme cellulase Khảo sát ảnh hưởng đồng thời hai yếu tố tỉ lệ enzyme thời gian thủy phân enzyme cellulase lên hàm lượng dầu thu nhận từ hạt bí Xử lý kết theo modde 5, kết với thí nghiệm tâm Bảng 3.8: Ảnh hưởng tỉ lệ enzyme thời gian thủy phân enzyme cellulase đến hàm lượng dầu hạt bí Mẫu M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M10 M11 Tỉ lệ 0.2 enzyme (%) 0.2 0.2 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.4 0.4 0.4 Thời gian 90 thủy phân (phút) 120 150 90 120 120 120 150 90 120 150 11.52 13.8 14.4 12.4 14.5 14.7 14.6 14.1 13.6 13.4 12.64 % dầu Với X1 tỉ lệ enzyme X2 thời gian thủy phân Phương trình tối ưu: Y = 14.5047 + 0.59*X - 0.6018*X12 - 0.9668*X22 0.975*X1*X2 Điều cho thấy tỉ lệ enzyme thời gian thủy phân ảnh hưởng đến hàm lượng dầu thu Nếu tăng tỉ lệ enzyme thời gian thủy phân giá trị Y giảm dần Theo kết chạy Modde 5, R2 = 0.940 Q2 = 0.511 Giá trị R2 > 0.8, Q2 > 0.5 Chứng tỏ phương trình hồi quy thu nhận mơ hình tìm mơ tả tốt liệu hồi quy hàm lượng béo đốn thơng số tối ưu gần thực nghiệm Hình 3.7: Đồ thị 2D dung modde với ảnh hưởng tỷ lệ enzyme thời gian thủy phân enzyme cellulase đến hàm lượng dầu thu Hình 3.8: Bề mặt đáp ứng tối ưu giá trị thu nhận béo trích ly với enzyme cellulase theo tỉ lệ enzyme thời gian thủy phân enzyme cellulase Theo hình 3.7 vùng tối ưu có giá trị X1[0.17 : 0.35] X2 [115 : 156] Kết tối ưu X1 = 0.2575; X2 = 135.567 với hàm lượng dầu thu nhận tối ưu 14.6576 3.4 Kết khảo sát trích ly dầu từ hạt bí với lị vi sóng 3.4.1 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian trích ly lị vi sóng đến hàm lượng dầu thu nhận 10 Phụ lục 5: Kết phân tích ANOVA lần lặp tỉ lệ enzyme đến hàm lượng dầu thu Anova: Single Factor SUMMARY 26 Groups Count lần Su Averag Varian m e ce 66 11.063 0.4754 38 33 67 65 lần 97 0.4405 10.995 ANOVA Source of P- Variation SS Between 0.0140 Groups 08 Within 4.5800 Groups 83 df MS F value F crit 0.0140 0.0305 0.8646 4.9646 08 85 59 03 0.4580 10 08 4.5940 Total 92 11 27 Phụ lục 6: Kết phân tích ANOVA tỉ lệ enzyme đến hàm lượng dầu thu Phụ lục 7: Kết phân tích ANOVA lần lặp thời gian thủy phân enzyme đến hàm lượng dầu thu Anova: Single Factor 28 SUMMARY Averag Varianc e Groups Count Sum e lần 95.7 11.9625 2.83425 95.5 3.00296 lần 11.9425 SS df MS ANOVA Source Variation of Between F P-value F crit 0.00054 0.98165 4.6001 Groups 0.0016 0.0016 Within 40.860 2.91860 Groups Total 40.862 15 14 29 1 Phụ lục 8: Kết phân tích ANOVA thời gian thủy phân enzyme đến hàm lượng dầu thu Phụ lục 9: Phương pháp xác định độ ẩm • • Nguyên tắc: áp dụng phương pháp sấy khô đến khối lượng không đổi Tiến hành: Sấy cốc cân tủ sấy nhiệt độ 1050C đến khối lượng không đổi Dùng cân phân tích cân xác định khối lượng cốc cân m g Cân khoảng 10g mẫu, đem cân phân tích, ghi nhận khối lượng, tổng khối lượng cốc mẫu m1 g 30 Đặt cốc vào tủ sấy nhiệt độ 105 0C Sấy đến khối lượng khơng đổi cho vào bình hút ẩm Cân cốc mẫu, ghi nhận khối lượng m2 g Kết tính độ ẩm: (W) W= % • (Theo TCVN 8548:2011) Phụ lục 10: Phương pháp xác định tro • Nguyên tắc: tro hóa mẫu nhiệt Sau xác định hàm lượng tro phương pháp khối lượng • Tiến hành: Rửa cốc nung nước Sấy tủ sấy 105 0C đến khối lượng không đồi làm nguội bình hút ẩm Cân cốc m0 g Cân khoảng g mẫu m1 Cô bếp cách thủy sấy tủ sấy nhiệt độ 105 0C đến khô Đốt cẩn thận bếp điện đến than hóa Nung nhiệt độ 525±25 0C thu tro màu trắng ngà (khi có mặt Fe có màu đỏ gạch, có mặt Cu Mn có màu xanh nhạt Làm nguội bình hút ẩm Nung đến khối lượng không đổi Cân m2 g • Kết quả: Hàm lượng tro tính theo % theo công thức: % (Theo TCVN 6351:2010) Phụ lục 11: Phương pháp xác định lipid • Nguyên tắc: Dùng ete nóng để hịa tan tất chất béo tự có thực phẩm Sau để bay hết ete, cân chất béo cịn lại tính hàm lượng lipit có 100g thực phẩm 31 • Tiến hành: Cân khoảng 5g mẫu (m) nghiền nhỏ, đồng gói vào giấy lọc Cho gói giấy vào ống chiết Sấy cân khối lượng cốc đựng dầu m1 Lắp dụng cụ bình cầu, cho ete vào bình đến 2/3 thể tích Cho chảy nước lạnh vào ống sinh hàn Đun từ từ bình cầu, chiết đến hoàn toàn hết lipid Thử hết lipid cách lấy vài giọt ete ống nhỏ lên mặt giấy lọc khơng có vết loang xem hết lipid Khi ete chảy hết xuống bình, lấy gói giấy Lấy cốc đựng dầu để bay hết ete nhiệt độ thường cho vào tủ sấy 1050C 90 phút Để nguội bình hút ẩm 30 phút, cân xác định khối lượng m2 • Kết quả: Hàm lượng dầu tính theo %: % (Giáo trình thực hành Hóa sinh thực phẩm – ĐH Cơng Nghiệp tp.HCM, 2008) Phụ lục 12: Phương pháp xác định xơ 32 • Nguyên tắc: Thủy phân chất hữu cellulose acid kiềm cồn, phần cịn lại cellulose thơ định phân phương pháp khối lượng • Tiến hành: Cân m (g) mẫu Tách lipid: dùng hệ thống soxhlet Thủy phân với acid: Cho vào bình cầu mẫu tách béo, thêm 200ml H 2SO4 1.5% đun sôi Lắp ống sinh hàn vào đun sơi Sau giữ nhiệt độ sôi 30 phút, để nguội Lắc tránh mẫu bị cacbon hóa Lọc, rửa phần kết tủa cellulose nhiều lần nước cất nóng đến nước rửa khơng cịn acid Thủy phân với kiềm: Chuyển tiếp vào bình cầu, tráng giấy lọc nước cất đun sôi Tổng lượng nước cất 100ml, cho 100ml NaOH 2-5% đun sơi Lắp ống sinh hàn vào đun sơi Sau giữ nhiệt độ sôi 30 phút Lọc giấy lọc không tro biết khối lượng m3, rữa bã nước cất sơi đến trung tính Để ráo, rửa cồn 96 lần, lần 5ml Cho giấy lọc vào chén nung sấy cân Sấy tủ sấy 105 0C đến khối lượng không đổi Đem hút ẩm cân m Sau đem nung 550 0C đến tro trắng, đem hút ẩm cân m2 • Kết quả: Hàm lượng xơ tính theo %: % (Các phương pháp phân tích hóa học trông thức ăn gia súc, TS Lê Đức Ngoan) Phụ lục 13: Phương pháp xác định protein • Ngun tắc: Mẫu vơ hóa acid sulfuric đậm đặc, nitơ có mẫu chuyển thành amoni sulfat Dùng kiềm mạnh đẩy ammoniac khỏi amoni sulfat hệ thống cất đạm tạo thành amoni hydroxit rùi định lượng acid • Tiến hành: 33 Vơ hóa mẫu: Cân 1g mẫu cho vào bình Kjeldahl với 20ml H 2SO4 đậm đặc khoảng 2g hỗn hợp chất xúc tác Đậy bình phễu nhỏ Để nghiêng bình Kjeldahl 45 bếp điện Đun sôi dung dịch suốt có màu xanh lơ CuSO4, để nguội - Chưng cất: Chuẩn bị bình hứng: hút 50ml H2SO4 0.1N cho vào erlen 250ml Cho thêm giọt MR vào erlen Lắp erlen vào ống sinh hàn cho đầu ống sinh hàn ngập dung dịch Chuẩn bị dịch chưng cất: Chuyển dung dịch vơ hóa bình Kjeldahl vào bình chưng cất máy cất đạm, tráng nhiều lần dung dịch phân giải nước cất chuyển vào bình chưng cất, thêm giọt thị phenolphthalein 1% Trung hòa dung dịch bình chưng cất NaOH 30% dung dịch chuyển sang màu hồng Thêm 2ml dung dịch NaOH 30% khóa phễu lại Cho nước cất lên phễu để kiểm tra độ kín Chưng cất: Cho 800ml nước cất vào bình đun Mở nước ống sinh hàn Chưng liên tục 40 phút kể từ bình sơi Hạ bình hứng Rửa đầu ống sinh hàn nước cất Thử pH (pH không đổi màu hoàn tất) Định lượng H2SO4 dư bình hứng dung dịch NaOH 0.1N đến dung dịch chuyển sang màu xanh mạ 34 A: Bình đun B: Bình thu dịch thải C: Bình cất D: Phễu E: Hệ thống sinh hàn F: Bình thu NH3 P1, P2: Các khóa • Kết quả: Hàm lượng Nitơ tồn phần = % Trong đó: V1: Số ml H2SO4 0.1N cho vào bình hứng để kết hợp với NH3 (V1 = 50ml) N1: Nồng độ đương lượng dung dịch H2SO4 cho vào bình hứng (N1 = 0.1N) V2: Số ml NaOH 0.1N dùng để chuẩn độ H2SO4 dư N2: Nồng độ đương lượng dung dịch NaOH dùng để chuẩn độ (N2 = 0.1N) m: Khối lượng mẫu ban đầu Hàm lượng Protein = Hàm lượng Nitơ toàn phần * 5.85 (%) 35 (Theo TCVN 8133-1:2009) Phụ lục 14: Phương pháp xác định đường • Nguyên tắc: Lượng đường xác định phương pháp thể tích cách sử dụng dung dịch kiềm đồng sulfat, chất loại đường khử thành oxit đồng màu đỏ Quy trình bao gồm việc xác định thể tích dung dịch đường cần để khử khối lượng dung dịch Fehling biết trước thể tích sử dụng xanh methylen làm thị Khơng khí loại trừ khỏi hỗn hợp phản ứng cách đun chất lỏng sơi suốt q trình chuẩn độ Những loại đường không khử saccarose cần phải thủy phân thành đường khử trước chuẩn độ • Tiến hành: Chuẩn bị mẫu: Cân 10g mẫu Xay nhuyễn cho vào 30ml nước cất nóng Lấy dịch chiết đun cách thủy 800C 15 phút Lắng cạn lấy phần dịch cho vào bình định mức 250ml Tiến hành trích ly lần Cho vào 1ml kaliferocyanua 15%, lắc đều, để yên 2-3 phút Thêm 5ml kẽm acetat 30%, khuấy mạnh Tiến hành lọc rửa cặn nước cất nóng Cho dung dịch vào bình định mức 250ml Trung hòa acid hữu mẫu NaOH 10% đến pH = Xác định hàm lượng đường: Cho vào erlen 250ml: 10ml feling A, 10ml feling B, 10ml dịch mẫu, 20ml nước cất Đun sôi phút Tiến hành lọc Cho 20ml dung dịch Fe 2(SO4)3 vào phần cặn để hịa tan Cu2O Lọc tiếp bình khác, thêm 5ml H2SO4 20% Chuẩn độ dung dịch KMnO4 0.1N đến xuất màu hồng nhạt bền vững 15 giây • Kết quả: Hàm lượng đường khử tính theo % % Trong đó: a: Số mg đường nghịch chuyển hay đường glucose (Tra bảng) 36 Gbd: lượng mẫu cân ban đầu, g Vxd: Thể tích dịch mẫu (Vxd = 10ml) Vdm: Thể tích KMnO4 0.1N (ml) (Giáo trình thực hành Hóa sinh thực phẩm – ĐH Công Nghiệp tp.HCM, 2008) Phụ lục 15: Xác định số axit dầu • Nguyên tắc: Mẫu thử hịa tan hỗn hợp dung mơi thích hợp axit có mặt chuẩn độ dung dịch kali natri hydroxit etanol metanol • Tiến hành: + Cân khoảng 5g chất béo vào erlen 250ml + Hịa tan mẫu 100ml cồn nóng trung hòa + Nhỏ vào erlen giọt PP 1% + Dùng KOH 0.1N chuẩn trực tiếp xuống dung dịch mẫu dung dịch có màu hồng nhạt bền 30 giây ngưng + Đọc kết buret VKOH • Kết quả: Chỉ số axit (WAV) tính theo cơng thức sau: Trong C nồng độ dung dịch chuẩn natri hydroxit sử dụng, c = 0.1N V thể tích dung dịch chuẩn natri hydroxit sử dụng, tính mililit (ml) m khối lượng phần mẫu thử, tính gam (g) Phụ lục 16: Xác định số peroxyt dầu • Ngun tắc: Phần mẫu thử hịa tan isooctan axit axetic bổ sung kali iodua Iốt giải phóng bời peroxit xác định chuẩn độ iốt với chất thị hồ tinh bột dung dịch chuẩn natri thiosulfat Điểm kết thúc chuẩn độ xác định phương pháp chuẩn độ iod • Tiến hành: + Cân khoảng 2g mẫu thử + Thêm 50ml dung dịch axit axetic/isooctane 0.5ml dung dịch KI bão hịa + Đậy bình, lắc phút 37 + Thêm 100ml nước, 0.5ml dung dịch hồ tinh bột + Chuẩn độ dung dịch Na 2S2O3 0.01N đến màu tím đặc trưng iod Ghi kết + Tiến hành với mẫu trắng song song • Kết quả: Chỉ số peroxit (PV) biểu thị mili đương lượng oxy hoạt hóa kilogam, xác định theo cơng thức: milimol/kg Trong đó: + V0 thể tích dung dịch Na 2S2O3 0.01N dùng để chuẩn độ mẫu trắng, tính mililít + V thể tích dung dịch Na2S2O3 0.01N dùng để chuẩn độ, tính mililít + C nồng độ dung dịch Na2S2O3 0.01N sử dụng + m khối lượng phần mẫu thử, tính gam Phụ lục 17: Xác định số iod dầu • Ngun tắc: Hịa tan phần mẫu thử dung môi cho thêm thuốc thử Wijs Sau thời gian quy định, bổ sung dung dịch kali iodua nước, chuẩn độ iốt giải phóng dung dịch natri thiosulfat Tiến hành: + Cân khoảng 150mg mẫu thử + Thêm 25ml thuốc thử Wijs, lắc mạnh để bóng tối + Sau thêm 20ml dung dịch KI 150ml nước + Chuẩn độ Na2S2O3 0.1N đến màu vàng iốt, thêm vài giọt hồ tinh bột • tiếp tục chuẩn đến màu xanh + Ghi lại thể tích dung dịch natri thiosulfat + Tiến hành với mẫu trắng song song • Kết quả: Chỉ số iốt (I) xác định theo cơng thức: Trong đó: + C nồng độ xác dung dịch Na2S2O3 sử dụng, tính mol lít; + V1 thể tích dung dịch Na2S2O3 0.1N sử dụng cho mẫu trắng, tính mililit; + V2 thể tích dung dịch Na2S2O3 0.1N để xác định, tính mililit; + m khối lượng mẫu thử, tính gam Phụ lục 18: Xác định số xà phịng hóa dầu 38 • Ngun tắc: Đun sơi mẫu thử với dung dịch kali hydroxit etanol dư hệ thống có lắp sinh hàn hồi lưu sau chuẩn đổ lượng kali hydroxit dư với dung dịch chuẩn axit clohydric • Tiến hành: + Cân khoảng 2g mẫu thử + Hút 25ml dung dịch kali hydroxit etanol + Gắn ống sinh hàn khí, đun sơi bếp cách thủy 60 phút, lắc nhẹ Nếu dầu mỡ có điểm nóng chảy cao khó bị xà phịng hóa phải đun + Lấy cho mẫu vào erlen, thêm 0.5ml dung dịch phenolphthalein chuẩn độ HCl 0,5N đến màu hồng hoàn toàn + Tiến hành với mẫu trắng song song • Kết quả: Chỉ số xà phịng hóa (Is) xác định theo cơng thức: Trong đó: + V0 thể tích dung dịch HCl 0.5N sử dụng cho mẫu trắng, tính mililít; + V1 thể tích dung dịch HCl 0.5N sử dụng cho phép xác định tính mililít; + C nồng độ xác dung dịch HCl, tính mol lit; + m khối lượng mẫu thử, tính gam Phụ lục 19: Xác định tỷ trọng dầu • Nguyên tắc: Xác định khối lượng 200C thể tích chất lỏng đựng bình tỷ trọng tích xác định, sau khối lượng thể tích tương đương nước 200C Tính khối lượng riêng cách chia khối lượng thể tích chất lỏng cho thể tích • Tiến hành: + Cân bình tỷ trọng khơ (cả nút) với độ xác đến 0,0001 g cho nước cất đun sôi để nguội vào bình, xác định khối lượng nước chứa bình cách xác sau để bình điều hồ nhiệt có nhiệt độ 20 0C ± 0.10C Ghi khối lượng nước cất bình (m2) + Cho mẫu thử vào bình tỷ trọng rửa sấy khơ xác định xác khối lượng mẫu chứa bình 200C ghi khối lượng (m1) • Kết quả: Khối lượng riêng dầu (ddầu): *d (g/ml) Trong : + m1: khối lượng xác mẫu thử cho vào bình 200C tính g 39 + m2: khối lượng xác nước cất cho vào bình 200C tính g + d: khối lượng riêng nước 200C 0.9982g /ml + A: số hiệu chỉnh tính A = Pa.m2 + Pa khối lượng riêng khơng khí 0.001 g /ml 40 ... từ hạt bí enzyme cellulose kết hợp với lị vi sóng Khảo sát ảnh hưởng đồng thời hai yếu tố tỉ lệ hạt : nước thời gian lị vi sóng lên hàm lượng dầu thu nhận từ hạt bí Xử lý kết theo modde 5, kết. .. lượng mẫu lớn để có kết tốt - Nghiên cứu vấn đề tinh luyện dầu từ hạt bí đỏ - Khảo sát với dung mơi trích ly khác 20 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết phân tích ANOVA lần lặp tỉ lệ hạt: nước đến hàm lượng... lượng dầu thu nhận từ hạt bí Xử lý kết theo modde 5, kết với thí nghiệm tâm Bảng 3.8: Ảnh hưởng tỉ lệ enzyme thời gian thủy phân enzyme cellulase đến hàm lượng dầu hạt bí Mẫu M1 M2 M3 M4 M5 M6