THỰC PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ THỰC VẬT PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ XÁC ĐỊNH ĐA DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT – PHẦN 2 – PHƯƠNG PHÁP CHIẾT VÀ LÀM SẠCH

Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8424-2:2010 EN 12393-2:2008 THỰC PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ THỰC VẬT PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ XÁC ĐỊNH ĐA DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT – PHẦN – PHƯƠNG PHÁP CHIẾT VÀ LÀM SẠCH Foods of plant origin - Multiresidue methods for the gas chromatographic determination of pesticide residues - Part 2: Methods for extraction and cleanup Lời nói đầu TCVN 8424-2:2010 hồn tồn tương đương với EN 12393-2:2008; TCVN 8424-2:2010 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F13 Phương pháp phân tích lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Bộ TCVN 8424 (EN 12393), Thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật - Phương pháp sắc ký khí xác định đa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật bao gồm phần sau: TCVN 8424-1:2010 (EN 12393-1:2008), Phần 1: Xem xét chung; TCVN 8424-2:2010 (EN 12393-2:2008), Phần 2: Phương pháp chiết làm sạch; TCVN 8424-3:2010 (EN 12393-3:2008), Phần 3: Phương pháp xác định phép thử khẳng định Lời giới thiệu Tiêu chuẩn đưa loạt phương pháp xác định đa dư lượng có giá trị ngang nhau: khơng có phương pháp coi phương pháp chính, phương pháp tiếp tục xây dựng Các phương pháp chọn tiêu chuẩn xác nhận hiệu lực và/hoặc sử dụng rộng rãi tồn châu Âu Vì phương pháp áp dụng cho phạm vi rộng hàng hoá thực phẩm/các hỗn hợp thuốc bảo vệ thực vật, có sử dụng hệ thống khác để xác định, có thay đổi thiết bị, cách chiết, phương pháp làm điều kiện sắc ký phù hợp để tăng hiệu phương pháp, xem Điều THỰC PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ THỰC VẬT PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ XÁC ĐỊNH ĐA DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT – PHẦN – PHƯƠNG PHÁP CHIẾT VÀ LÀM SẠCH Foods of plant origin - Multiresidue methods for the gas chromatographic determination of pesticide residues - Part 2: Methods for extraction and cleanup Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp chiết làm mẫu thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật Đối với mục đích sử dụng dung mơi khác Các dư lượng thuốc bảo vệ thực vật thường lẫn với hợp chất chiết mà gây nhiễu đến phép phân tích Để tinh chất chiết thơ cần phân tích, sử dụng vài phương pháp Tiêu chuẩn bao gồm phương pháp chiết làm sau qua nghiên cứu liên phòng thử nghiệm và/hoặc chấp nhận toàn Châu Âu: - Phương pháp L: Chiết axeton, chiết phân đoạn lỏng-lỏng diclorometan làm cột silica-gel/than [1]; - Phương pháp M: Chiết axeton chiết phân đoạn lỏng-lỏng diclometan/dầu nhẹ, cần làm cột Florisil ®1) [2], [3], [4]; - Phương pháp N: Chiết axeton, chiết phân đoạn lỏng-lỏng diclorometan xyclohexan/etyl axetat làm thẩm thấu gel sắc ký silica gel [5], [6]; - Phương pháp P: Chiết etyl axetat, có làm sắc ký thẩm thấu gel, cần [7] ví dụ sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn này, không ấn định phải sử dụng chúng 1) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Tiêu chuẩn qui định chi tiết phương pháp từ L đến P để chiết làm mẫu thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật Một số dung mơi tích khác dùng để chiết Các kỹ thuật làm liệt kê chiết phân đoạn lỏng-lỏng, sắc ký lỏng chất hấp phụ khác sắc ký thẩm thấu gel Bảng cung cấp cặp chất nền/thuốc bảo vệ thực vật nghiên cứu liên phòng thử nghiệm danh mục khả áp dụng phương pháp loại thuốc bảo vệ thực vật khác đưa cho phương pháp, Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 8424-1:2010 (EN 12393-2:2008), Thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật - Phương pháp sắc ký khí xác định đa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật - Phần 1: Xem xét chung TCVN 8424-3:2010 (EN 12393-3:2008), Thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật - Phương pháp sắc ký khí xác định đa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật - Phần 3: Phương pháp xác định phép thử khẳng định Nguyên tắc Như nêu phần giới thiệu, tùy trường hợp cụ thể, thay đổi thiết bị sử dụng, điều kiện chiết, làm sắc ký để nâng cao hiệu phương pháp Những điều chỉnh phải lập thành văn rõ ràng chứng minh cho kết hợp lệ Các dư lượng thuốc bảo vệ thực vật chiết khỏi mẫu cách sử dụng dung môi thích hợp, cho thu hiệu chiết tối đa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật giảm thiểu chất bị chiết mà làm tăng gây nhiễu đến phép xác định Loại bỏ hết chất gây nhiễu khỏi dịch chiết mẫu để thu dung dịch chứa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật dung mơi thích hợp cho việc định lượng phương pháp xác định chọn u cầu chung: Tóm tắt qui trình 4.1 Chiết Qui trình chiết nêu Bảng Bảng - Qui trình chiết Phương pháp a) Thể tích dung môi (VS) Khối lượng mẫu (MS) g Tỷ lệ MS/VS g/ml ml L 100 Axeton: 200 1/2 M 100 Axeton: 200 1/2 N 100 a Axeton: 200 1/2 P 50 Etyl axetat: 100 1/2 Chỉ liên quan hàm lượng nước chất lớn 70 % 4.2 Làm 4.2.1 Chiết phân đoạn lỏng-lỏng Các qui trình chiết phân đoạn lỏng-lỏng nêu Bảng Bảng – Chiết phân đoạn lỏng-lỏng Phương pháp Phần dịch chiết Thể tích nước (AE) ml thêm vào (VW) Thể tích dung mơi (VS) ml Tỷ lệ AE/VW ml L 50 (= 20 %) 250 50 1/5 M 80 200 - N 200 xa 100 - LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 a a Công ty luật Minh Khuê Phương pháp www.luatminhkhue.vn Phần dịch chiết Thể tích nước (AE) ml thêm vào (VW) Thể tích dung mơi (VS) ml Tỷ lệ AE/VW ml a Phụ thuộc vào hàm lượng nước chất Hai kỹ thuật chiết phân đoạn lỏng-lỏng khuyến nghị: - có bổ sung nước (các phương pháp L, N); - không bổ sung nước (phương pháp M) 4.2.2 Cột sắc ký hấp phụ Các phương pháp: L, M, N với chất hấp phụ khác nhau: silica gel, than, Florisil®, sử dụng dạng tinh khiết hỗn hợp 4.2.3 Sắc ký thẩm thấu gel với BioBeads® S-X 32) Phương pháp N có kết hợp với phương pháp P, cần Phương pháp L: Chiết axeton, chiết phân đoạn lỏng-lỏng diclometan làm cột silica gel/than hoạt tính 5.1 Nguyên tắc Phần mẫu thử cắt nhỏ đồng hóa axeton, sau dịch đồng hóa lọc Phần dịch lọc pha loãng với nước chiết diclometan Pha hữu cô đặc, cột silica gel than hoạt tính Các dư lượng thuốc bảo vệ thực vật rửa giải hỗn hợp diclometan, toluen axeton Dịch rửa giải cô đặc để xác định sắc ký khí (GC) 5.2 Thuốc thử 5.2.1 Yêu cầu chung Sử dụng tất thuốc thử có độ tinh khiết thích hợp để phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật phù hợp với Điều TCVN 8424-1:2010 (EN 12393-1:2008) 5.2.2 Axeton 5.2.3 Diclometan 5.2.4 n-Hexan 5.2.5 Toluen 5.2.6 Hỗn hợp rửa giải: diclometan/toluen/axeton, với tỷ lệ : : (tính theo thể tích) 5.2.7 Dung dịch natri clorua, bão hịa 5.2.8 Natri sulfat Được nung 500 oC h, để nguội bảo quản chai có nắp đậy kín 5.2.9 Than hoạt tính 5.2.10 Silica gel 60 dùng cho cột sắc ký, cỡ hạt từ 63 đến 200 (70 mesh đến 230 mesh) 5.2.11 Celite ® 5453) (tùy chọn) 5.3 Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm TCVN 8424-1:2010 (EN 12393-1:2008) cụ thể thiết bị, dụng cụ sau: 5.3.1 Máy trộn tốc độ cao máy đồng hóa, có cốc trộn thích hợp 5.3.2 Bộ làm bay dung mơi, có nồi cách thủy, khả trì nhiệt độ 40 oC 5.3.3 Cột sắc ký, có đĩa thủy tinh xốp van khóa polytetrafluoroethylene (PTFE), đường kính 25 mm, dài 400 mm Biobeads® ví dụ sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn này, khơng ấn định phải sử dụng chúng 3) Celite® ví dụ sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thông tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn này, không ấn định phải sử dụng chúng 2) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 5.4 Cách tiến hành 5.4.1 Chuẩn bị mẫu Cắt mẫu thành miếng nhỏ trộn kỹ 5.4.2 Chiết Cân 100 g mẫu nghiền thơ vào cốc có mỏ lít, thêm 200 ml axeton đồng hóa khoảng 30 s Có thể sử dụng Celite ® 545 để hỗ trợ cho việc lọc, cần Tráng đồng hóa 50 ml axeton dùng để tráng ln cốc có mỏ sau tráng phễu Buchner Lọc dịch đồng hóa cách hút qua giấy lọc làm ẩm đựng phễu Buchner Rửa miếng giấy lọc 50 ml axeton mà trước dùng để rửa Lắc kỹ dịch lọc đo thể tích phần dịch lọc Lấy xác phần năm phần dịch lọc lắc mạnh với 250 ml nước, 25 ml dung dịch natri clorua (5.2.7) 50 ml diclometan phễu chiết lít Nếu phần dịch lọc khơng lắc kỹ, độ thu hồi bị giảm đáng kể Lặp lại việc chiết dùng 50 ml diclometan Gộp pha chiết diclometan làm khô 30 g natri sulfat (5.2.8) 30 Lọc chất chiết làm khơ qua giấy lọc Tráng bình giấy lọc ba lần lần dùng 30 ml diclometan Làm bay dịch lọc đến khoảng ml xoay bình tay để loại bỏ hết dung mơi Hịa tan phần lại 10 ml diclometan 5.4.3 Chuẩn bị cột Cho diclometan vào cột sắc ký (5.3.3) đến lớp dày cm Làm nhão g silica gel (5.2.10) 15 ml hỗn hợp rửa giải (5.2.6) rót hỗn hợp nhão lên cột Gạn lớp phía Tiếp theo, trộn kỹ 15 g silica gel g than hoạt tính cốc có mỏ 50 ml thêm từ từ 35 ml hỗn hợp rửa giải (Cẩn thận: Có phát nhiệt) Khơng thêm q 35 ml hỗn hợp rửa giải, khơng huyền phù bị tách pha thành phần khó qua cột Cho hỗn hợp gel silica-than hoạt hóa vào silica gel cột sắc ký, cách rót qua phễu, lần rót từ từ, sau rót mạnh, đồng thời khuấy liên tục mở khóa van Sử dụng hết dịch rửa giải qua cột để tráng bình Rút hỗn hợp rửa giải đến mức cịn cm cách phía vật liệu nhồi cho lên đỉnh cột lượng nhỏ natri sulfat tổng số g Tiếp theo tráng cột sơ 50 ml hỗn hợp rửa giải 5.4.4 Làm Chuyển lượng dung dịch diclometan thu từ 5.4 sang cột chuẩn bị, cuối chuyển tổng số ml diclometan Thu lấy chất lỏng chảy qua cột sau rửa giải bình cầu đáy trịn 250 ml Rửa giải cột với 140 ml hỗn hợp rửa giải (5.2.6) Làm bay dịch rửa giải thu đến khoảng 30 ml Chuyển vào bình cầu đáy trịn 50 ml cho bay lại đến khoảng ml Trước làm rỗng phận thu nhận cô quay Không làm bay dung dịch đến khô cô quay Chuyển dung dịch sang ống nghiệm chia độ pha loãng n-hexan đến 5,0 ml 5.5 Sắc ký khí Sử dụng hệ thống sắc ký thích hợp để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật nhóm halogen hữu cơ, phospho hữu nitơ hữu 5.6 Các nghiên cứu cộng tác Các cặp chất dư lượng thuốc bảo vệ thực vật qua nghiên cứu cộng tác 4) Bảng Bảng - Chất thuốc bảo vệ thực vật cà rốt bromophos + khoai tây bắp cải savoa rau chân cà chua vịt + bromopropylate + + captan chlorpropham đậu vàng + + + chlorpyrifos + cypermethrin + + Đối với nghiên cứu cộng tác, sử dụng hoạt tính, silicagel 60 , 63 đến 200 (70 mesh đến 230 mesh) công ty Merck Thông tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn, không ấn định phải sử dụng chúng 4) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn cà rốt p’-DDE + p, p'-DDE + p'-DDT + p, p'-DDT + diazinon + dichlofluanid + khoai tây bắp cải savoa rau chân cà chua vịt + + + dicofol dieldrin + + + + + + + + -endosulfan sulfate endosulfan + + + + endrin + ethion + fenarimol + + + fenpropathrin + folpet + -HCH heptachlor epoxit + + + iprodione Lindane (y-HCH) + + + + + malathion + mecarbam + parathion + + permethrin phosalone + + + + + + + pirimiphos-metyl + + + procymidone + + + + propham + quintozene + tetradifon + + tolclofos-metyl vinclozoline + + -endosulfan fenitrothion đậu vàng + + + + + 5.7 Khả áp dụng Các loại thuốc bảo vệ thực vật sau phân tích phương pháp này: Aldrin Dieldrin Metribuzin Ametryn Dimethachlor Mevinphos Atrazine Dimethoate Naled Azinphos-etyl Dioxathion Nitrofen Azinphos-metyl Disulfoton Paraoxon LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Aldrin Dieldrin Metribuzin Aziprotryne Ditalimfos Parathion Bifenthrin -Endosulfan Metyl parathion Bromacil -Endosulfan Pendimethalin Bromophos Endosulfan sulfate Permethrin Bromophos-etyl Ethion Perthane Bromopropylate Ethoprophos Phenkapton Bupirimate Etrimfos Phorate Captafol Fenamiphos Phosalone Captan Fenarimol Pirimiphos-metyl Carbophenothion Fenchlorphos Procymidone Chlorbenside Fenitrothion Profenofos Chlorfenson Fenpropathrin Profluralin Chlorfenvinphos Fenson Prometryn Chlorflurenol Fensulfothion Propazine Chlorpropham Fenthion Propham Chlorobenzilate Fenvalerate Propyzamide Chloropropylate Fluchloralin Prothiofos Chlorpyrifos Flucythrinate Pyrazophos Chlorpyrifos-metyl Fluorodifen Pyrethrins Chlorthal Fluvalinate Quinalphos Chlorthiophos Folpet Quintozene Cyanazine Fonofos Simazine Cyanofenphos Formothion Sulfotep Cyanophos -HCH Tecnazene Cyfluthrin -HCH Terbacil Heptachlor Terbufos Cypermethrin Heptachlor epoxit Terbutryn p,p'-DDD Heptenophos Tetrachlorvinphos o,p'-DDE lodofenphos Tetradifon p,p'-DDE Iprodione Tetramethrin o,p'-DDT Isofenphos Tetrasul p,p'-DDT Lindane Thionazin Deltamethrin Malaoxon Tolclofos-metyl Desmetryn Malathion Tolylfluanid Dialifos Mecarbam Triadimefon Diazinon Metalaxyl Tri-allate Dichlobenil Metazachlor Triazophos Oichlofenthion Methidathion Trichloronat Dichlofluanid Methoprotryne Trifluralin Dichlorvos Methoxychlor Vinclozolin -Cyhalothrin LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Aldrin Dieldrin Dicofol Metolachlor www.luatminhkhue.vn Metribuzin Phương pháp thử nghiệm loại trồng loại thực phẩm sau: Táo Nho Dứa Mơ Bắp cải Mận Cà tím Mật ong Khoai tây Đậu Cải củ Củ cải (lớn loại nhỏ) Cà rốt Tỏi tây Bắp cải đỏ Cần củ Rau diếp Bắp cải Xavoa Anh đào Quýt Rau chân vịt Ớt Nấm Dâu Cải bắp Trung quốc Cam Ớt Salad ngô Mùi tây Cà chua Dưa chuột Đào Rau xà lách Cây bồ công anh Lê Rau diếp quăn Đậu Hà lan Phương pháp M: Chiết axeton chiết phân đoạn lỏng-lỏng diclometan/dầu nhẹ, làm Florisil®, cần 6.1 Nguyên tắc Phần mẫu thử cắt nhỏ đồng hóa axeton phần mẫu đồng lọc Lấy phần dịch lọc chiết với hỗn hợp dầu nhẹ, diclometan sau chiết diclometan Pha hữu bơm trực tiếp vào máy sắc ký khí có detector thích hợp mà khơng cần phải làm tinh cột Florisil ® Dịch rửa giải đặc để kiểm tra sắc ký khí 6.2 Thuốc thử 6.2.1 Yêu cầu chung Sử dụng tất thuốc thử có độ tinh khiết thích hợp để phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật phù hợp với Điều TCVN 8424-1:2010 (EN 12393-1:2008) 6.2.2 Axeton 6.2.3 Dầu nhẹ, có nhiệt độ sơi khoảng từ 40 oC đến 60 oC 6.2.4 Natri clorua Được nung 500 oC h, để nguội bảo quản chai có nắp đậy kín 6.2.5 Diclometan 6.2.6 Acetonitril 6.2.7 Natri sulfat Được nung 500 oC h, để nguội bảo quản chai có nắp đậy kín 6.2.8 Florisil ® (Floridin tương đương), cỡ hạt từ 150 mesh) đến 250 (60 mesh đến 100 Được hoạt hóa cách gia nhiệt 130 oC đến 135 oC h, để nguội bình hút ẩm chuyển sang bình có nắp đậy kín khí Chất hấp phụ xử lý giữ hoạt tính ngày Có thể phải tái hoạt hóa cách xử lý tương tự Hoạt độ chất hấp phụ cần kiểm tra thường xuyên cách rửa giải chất chuẩn thuốc bảo vệ thực vật mô tả phương pháp 6.2.9 Dietyl ete, khơng chứa peroxit, có chứa % etanol (phần thể tích) 6.2.10 Dung dịch rửa giải A: ete dietyl/dầu nhẹ với tỷ lệ : 94 (tính theo thể tích) 6.2.11 Dung dịch rửa giải B: ete dietyl/dầu nhẹ với tỷ lệ 15 : 85 (tính theo thể tích) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 6.2.12 Dung dịch rửa giải C: ete dietyl/dầu nhẹ với tỷ lệ 50 : 50 (tính theo thể tích) 6.2.13 Dung dịch rửa giải D: diclometan/dầu nhẹ với tỷ lệ 20 : 80 (tính theo thể tích) 6.2.14 Dung dịch rửa giải E: diclometan/dầu nhẹ/acetonitril với tỷ lệ 50 : 49,65 : 0,35 (tính theo thể tích) 6.2.15 Dung dịch rửa giải F: diclometan/dầu nhẹ/acetonitril với tỷ lệ 50 : 48,5 : 1,5 (tính theo thể tích) 6.3 Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm TCVN 8424-1:2010 (EN 12393-1:2008) cụ thể sau: 6.3.1 Máy trộn tốc độ cao máy đồng hóa, có cốc trộn phù hợp 6.3.2 Cột sắc ký, có van khóa PTFE, đường kính 22 mm, dài 300 mm 6.3.3 Bộ làm bay dung môi, Kuderna Danish loại tương đương 6.4 Cách tiến hành 6.4.1 Chuẩn bị mẫu Phần mẫu thử cắt nhỏ trộn kỹ để thu phần mẫu thử đồng Nếu hàm lượng nước mẫu nhỏ 30 %, chỉnh đến khoảng 80 % cách thêm nước 6.4.2 Chiết chiết phân đoạn Cân 100 g (m) mẫu chuẩn bị vào cốc trộn (6.3.1) thêm 200 ml axeton Trộn tốc độ cao Chuyển hỗn hợp vào phễu Buchner có chứa giấy lọc làm ẩm axeton lọc vào bình Buchner đo thể tích dịch lọc Rót 80 ml dịch lọc vào phễu chiết lít với 100 ml diclometan 100 ml dầu nhẹ (6.2.3) Lắc tách lớp Chuyển pha nước phía sang phễu chiết lít thứ hai Làm khơ lớp hữu phía phễu chiết thứ cách cho qua lớp natri sulfat (6.2.7) dày cm để thủy tinh rửa dày 10 cm phễu thu nhận bình cầu đáy tròn Cho g natri clorua vào pha nước lắc 30 s natri clorua (6.2.4) hòa tan Thêm 100 ml diclometan lắc Để cho tách lớp Chuyển pha nước sang phễu chiết thứ ba làm khô lại pha hữu loại natri sulfat Cho vào phễu chiết thứ ba 100 ml diclometan lắc min, tách pha loại bỏ pha nước làm khô pha diclometan lớp natri sulfat Rửa natri sulfat 50 ml diclometan cô đặc tất pha hữu đến ml Thêm 100 ml dầu nhẹ, cô đặc lại đến ml lặp lại hết hẳn diclometan Thêm 20 ml axeton cô đặc lại đến ml (Vfinal) Phần đặc bơm trực tiếp vào máy sắc ký khí trang bị HECD (Hall detector), NPD FPD (phương pháp M) Trong số trường hợp, nên có bước làm xác định ECD: phương pháp M1 M2 Để tinh sạch, cần cô đặc dịch chiết mẫu đến ml axeton (thay ml) pha lỗng dầu nhẹ đến 10 ml 6.4.3 Làm 6.4.3.1 Phương pháp M1 Đặt nút sợi vào đáy cột sắc ký (6.3.2) rót dầu nhẹ (6.2.3) đến 20 cm Đổ 20 g Florisil ® (6.2 8) gõ thành cột để nén chất hấp phụ Phủ lên lớp chất hấp phụ lớp natri sulfat (6.2.7) dày khoảng từ cm đến cm Rửa chất hấp phụ khoảng 30 ml dầu nhẹ Đặt bình làm bay cột đề thu lấy dịch rửa giải Chuyển dịch chiết để tinh mô tả 6.4.2, sang cột, với tốc độ không ml/min Tráng rửa vật chứa hai lần, lần dùng ml dầu nhẹ, cho nước rửa vào cột, rửa thành cột sắc ký với lượng nhỏ dầu nhẹ vá rửa giải với tốc độ ml/min 200 ml dung môi rửa giải A (6.2.10) Rửa giải tiếp với 200 ml dung môi rửa giải B (6.2.11) vào bình nhận riêng rẽ với 200 ml dung môi rửa giải C (6.2.12) Cô đặc dịch rửa giải thu đến thể tích thích hợp (V final) để kiểm tra GC 6.4.3.2 Phương pháp M2 Đặt nút sợi vào đáy cột sắc ký (6.3.2) rót dầu nhẹ (6.2.3) đến 20 cm Đổ 20 g Florisil ® (6.2.8) gõ thành cột để nén chất hấp phụ Phủ lên lớp chất hấp phụ lớp natri sulfat (6.2.7) dày khoảng từ cm đến cm LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Rửa chất hấp phụ khoảng 30 ml dầu nhẹ Đặt bình làm bay cột để thu lấy dịch rửa giải Chuyển dịch chiết sang cột để tinh mô tả 6.4.2 , với tốc độ không ml/min Tráng vật chứa hai lần, lần dùng ml dầu nhẹ, cho nước tráng vào cột, tráng thành cột sắc ký với lượng nhỏ dầu nhẹ rửa giải với tốc độ ml/min 200 ml dung môi rửa giải D (6.2.13) Rửa giải tiếp 200 ml dung môi rửa giải E (6.2.14) vào bình nhận riêng rẽ cuối với 200 ml dung môi rửa giải F (6.2.15) Cô đặc dịch rửa giải để thu thể tích thích hợp (V final) để dùng cho GC 6.5 Sắc ký khí tính tốn Sử dụng hệ thống sắc ký khí thích hợp để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật nhóm halogen hữu cơ, phospho hữu nitơ hữu Khối lượng tương đương mẫu tính milligam microlit dịch chiết cuối tính theo cơng thức (1): Trong đó: p đương lượng mẫu tính milligam microlit (mg/ ); m khối lượng phần mẫu thử, tính gam (g) (trong trường hợp này: 100 g); w lượng nước có mẫu, tính gam (g); tỷ trọng nước, milligam microlit (mg/ ); Vfinal thể tích dung dịch chiết cuối cùng, tính mililit (ml); 10 ml thể tích đặc Thể tích đặc lấy 10 ml mẫu có chứa 80 g/100 g đến 95 g/100 g nước dùng 200 ml axeton để chiết Tham khảo tài liệu tham khảo hàm lượng nước trung bình thành phần thực phẩm Ví dụ hàm lượng nước trung bình số trồng rau nêu Bảng A.1 Hàm lượng nước phần lớn loại rau tươi giả định khoảng 85 g/100 g CHÚ THÍCH : Lượng mẫu dịch chiết cuối việc làm Florisil ® sắc ký có tính xác cách đo tổng thể tích dịch chiết axeton ban đầu Phương pháp N: Chiết axeton, chiết phân đoạn lỏng-lỏng diclometan xyclohexan/etyl axetat, làm thẩm thấu gel sắc ký gel silica 7.1 Nguyên tắc Phần mẫu thử cắt nhỏ đồng hóa axeton sau bổ sung nước, tùy thuộc vào hàm lượng nước tự nhiên mẫu để đảm bảo tỷ lệ axeton nước : (tính theo thể tích) Dịch đồng hóa lọc Phần dịch lọc bão hòa với natri clorua pha loãng diclometan, làm tách phần nước dư Cách khác, bổ sung natri clorua hỗn hợp etyl axetat xyclohexan vào dịch đồng hóa lắc trộn mạnh hỗn hợp Pha hữu cô đặc làm sắc ký thẩm thấu gel (GPC) BioBeads S-X3® (gel polystyren) sử dụng hỗn hợp etyl axetat xyclohexan làm chất rửa giải Các phần có chứa dư lượng đặc phân tích trực tiếp sắc ký sử dụng detector chọn lọc nitơ phospho Đối với phép phân tích sử dụng detector bắt giữ electron số trường hợp detector chọn lọc nitơ cần phải làm thêm cột silica gel nhỏ Trong bước làm này, loại thuốc bảo vệ thực vật chiết vài phân đoạn, cung cấp thêm thơng tin cho việc nhận dạng 7.2 Thuốc thử 7.2.1 Yêu cầu chung Sử dụng tất thuốc thử có độ tinh khiết thích hợp để phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật phù hợp với Điều TCVN 8424-1:2010 (EN 12393-1:2008) 7.2.2 Axeton 7.2.3 Diclometan LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 7.2.4 Etyl axetat 7.2.5 Xyclohexan 7.2.6 Hỗn hợp rửa giải GPC: xyclohexan/etyl axetat với tỷ lệ : (tính theo thể tích) 7.2.7 n-Hexan 7.2.8 Isooctan 7.2.9 Toluen 7.2.10 Nước, chưng cất dụng cụ thủy tinh 7.2.11 Chất rửa giải 1: n-hexan/toluen với tỷ lệ 65 : 35 (tính theo thể tích) 7.2.12 Chất rửa giải 2: toluen 7.2.13 Chất rửa giải 3: toluen/axeton với tỷ lệ 95 : (tính theo thể tích) 7.2.14 Chất rửa giải 4: toluen/axeton với tỷ lệ 80 : 20 (tính theo thể tích) 7.2.15 Chất rửa giải 5: axeton 7.2.16 Natri clorua Nung nhiệt độ 500 oC h, để nguội bảo quản chai có nắp đậy kín 7.2.17 Natri sulfat, dạng bột Nung nhiệt độ 500 oC h, để nguội bảo quản chai có nắp đậy kín 7.2.18.Hỗn hợp muối: natri sulfat/natri clorua: với tỷ lệ : (tính theo khối lượng) 7.2.19 Celite® 545 7.2.20 Silica gel 60 cột sắc ký, cỡ hạt từ 63 khử hoạt tính 1,5 % nước đến 200 (70 mesh đến 230 mesh), Làm nóng silica gel h 130 oC, để nguội bình hút ẩm bảo quản vật chứa có nắp đậy kín để bình hút ẩm Cho 1,5 ml nước chảy giọt từ buret vào 98,5 g silica gel khơ đựng bình nón 300 ml (có khớp nối mài), xoay bình liên tục Đậy nắp bình nút mài lắc mạnh hết mảng vón cục, sau cho lắc tiếp h máy lắc bảo quản vật chứa có nắp đậy kín 7.2.21 Bơng thủy tinh, chiết kỹ axeton 7.2.22 Bông vải sợi, chiết kỹ với axeton 7.2.23 BioBeads S-X3 ®, 38 đến 75 (200 mesh đến 400 mesh) 7.2.24 Giấy lọc, đường kính cm 13,5 cm, tốc độ lọc nhanh, chiết kỹ axeton 7.3 Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm TCVN 8424-1:2010 (EN 12393-1:2008) cụ thể sau: 7.3.1 Máy trộn tốc độ cao máy đồng hóa, có cốc trộn thích hợp 7.3.2 Bộ làm bay dung mơi, có nồi cách thủy 7.3.3 Dụng cụ dùng cho GPC, ví dụ GPC Autoprep 1001 1002 ®5), trang bị cột sắc ký, đường kính 25 mm, 50 cm, hai mươi ba vòng mẫu ml; cột nhồi 50 g resin BioBeads S-X3 ®, làm trương nở qua đêm hỗn hợp rửa giải GPC, cột cao khoảng 32 cm, nhồi 7.4.3 7.3.4 Cột sắc ký, có đầu mở rộng, đường kính mm, dài 230 mm 7.4 Cách tiến hành 7.4.1 Chiết 7.4.1.1 Yêu cầu chung Hàm lượng nước trung bình số trồng loại thực phẩm nêu Phụ lục A GPC Autoprep 1001 1002 là ví dụ sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thông tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn này, không ấn định phải sử dụng chúng 5) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn CHÚ THÍCH: Thực tế cho thấy rằng, số chất cho thấy hiệu hấp phụ ngẫu nhiên số chất phân tích định resin BioBeads ® cho kết âm tính giả dương tính giả 7.4.3.4 Làm dịch chiết thơ Thêm xác 7,5 ml etyl axetat vào phần dịch chiết thô cô đặc thu 7.4.2.1 4.2.2 hòa tan cách xoay nhẹ Thêm khoảng g hỗn hợp muối (7.2.18) để hút hết phần nước cịn lại, xoay bình lần thêm xác 7,5 ml xyclohexan để có tổng thể tích 15,0 ml (VR2) Lắc khoảng 20 s, hỗn hợp muối lắng xuống, lọc qua giấy lọc nhanh bơm dịch lọc vào vòng mẫu sắc ký thẩm thấu gel (VR3) Rửa giải cột thẩm thấu gel hỗn hợp rửa giải GPC với tốc độ dòng 5,0 ml/min Bộ phận chuyển mạch máy sắc ký thẩm thấu gel điều chỉnh để kiểm tra thể tích dịch rửa giải Việc cài đặt phụ thuộc vào thuốc bảo vệ thực vật mục tiêu Việc cài đặt điển sau (xem thêm Bảng 4): - chế độ thải (dump) chuyển sang 18 để loại bỏ 90 ml, - chế độ thu nhận chuyển sang 15 để thu 75 ml; - chế độ rửa chuyển sang để tráng cột dùng 10 ml Cô đặc thể tích thu đến khoảng ml quay (quay chậm, ngâm nhẹ bình cầu), dùng pipet cho lượng vào ống nghiệm chia độ đậy nút mài, tráng cô quay etyl axetat pha loãng etyl axetat đến 5,0 ml (VR4) Việc bổ sung etyl axetat không bỏ qua để đảm bảo hịa tan hồn tồn dư lượng Để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật riêng rẽ, cài đặt dụng cụ để thu lượng nhỏ hơn, phù hợp với hợp chất tương ứng theo giá trị nêu Bảng 7.4.4 Sắc ký cột nhỏ silica gel 7.4.4.1 Chuẩn bị cột Nhồi cột sắc ký (7.3.4) theo thứ tự sau: nút thủy tinh (7.2 21), 1,0 g silica gel khử hoạt tính (7.2.20), lớp natri sulfat (7.2.17) dày từ mm đến 10 mm, nút thủy tinh Trước sử dụng, tráng cột ml n-hexan loại bỏ dịch rửa giải Ngay sau n-hexan rút khỏi đỉnh lớp silica gel, cho dung dịch mẫu lên đỉnh cột, phù hợp với 7.4.4.3 7.4.4.2 Kiểm tra hiệu chiết silica gel Cho lên cột rửa sơ 7.4.4.1 sau: 1,0 ml dung dịch chứa 0,05 μg/ml HCB, 0,10 μg /ml lindan, 0,20 μg /ml heptaclo epoxit, 0,25 μg/ml α-endosulfan, 0,25 μg /ml dieldrin 1,25 μg/ml endosulfan sulfat n-hexan Với điều kiện hoạt tính silica gel điều chỉnh đúng, hợp chất bổ sung có mặt sau rửa giải 7.4.4.3 phép phân tích sắc ký khí bắt giữ electron phân đoạn sau đây: - dịch rửa giải 1: HCB (100 %), lindan (100 %), heptaclo epoxit (một phần), α -endosulfan (một phần); - dịch rửa giải 2: Heptaclo epoxit (lượng lại), α -endosulfan (lượng lại), endosulfan sulfat (từ 95 % đến 100 %), dieldrin (100 %) 7.4.4.3 Phân đoạn chất chiết mẫu Dùng pipet lấy 2,5 ml (VR5)) dung dịch thu 7.4.3.4 cho vào bình cầu đáy trịn cổ dài ml isooctan Cho bay cẩn thận đến ml (không để đến khô) cô quay (quay chậm, nhúng nhẹ bình cầu) Nếu dung dịch cịn mùi etyl axetat, lại thêm isooctan làm bay Dùng pipet lấy dung dịch lại sau bay cho lên cột silica gel rửa sơ 7.4.4.1 tráng rửa ml n-hexan Sau tráng bình ml chất rửa giải (7.2.11), hexan rút khỏi đỉnh cột nhồi, cho nước tráng lên cột Lúc thu lấy dịch rửa giải vào ống nghiệm chia độ Sau tiếp tục rửa giải với ml chất rửa giải đổ đầy chất rửa giải vào ống thu nhận đến 10 ml (Vend) Dung dịch thu dịch rửa giải Tráng rửa bình cầu sử dụng để làm bay dịch rửa giải GPC với ml toluen (chất rửa giải 2) Sau cho nước rửa sang cột Thu lấy dung dịch vào ống nghiệm chia độ thứ hai rửa giải với ml toluen Cho toluen vào ống nghiệm thứ hai đến 10 ml (Vend) để thu dịch rửa giải Tiếp tục chạy sắc ký theo qui trình thực liên tục với chất rửa giải (7.2.13), chất rửa giải (7 2.14) axeton (chất rửa giải 5) (7.2.15) Mỗi lần, tráng rửa bình ml, rửa giải tiếp với ml pha loãng dịch rửa giải đến 10 ml (Vend) để thu dịch rửa giải 3, Một ví dụ phân bố hợp chất dịch rửa giải khác nêu Bảng LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Bảng - Khoảng thể tích rửa giải sắc ký thẩm thấu gel phân bố hợp chất dịch rửa giải từ cột sắc ký silica gel Các hợp chất Dịch rửa giải silica gel *) Khoảng thể tích rửa giải GPC ml Acephate từ 115 đến 145 0 0 Aclonifen từ 115 đến 145 0 Alachlor từ 125 đến 150 0 0 Aldrin từ 120 đến 150 0 0 Ametryn từ 115 đến 190 0 từ 115 đến 145 0 Anilazine từ 105 đến 135 0 0 Anthraquinon từ 145 đến 185 0 Atrazine từ 110 đến 135 0 Azinphos-etyl từ 130 đến 160 0 0 Azinphos-metyl từ 145 đến 180 0 0 Azoxystrobin từ 120 đến 155 0 Benfluralin từ 100 đến 130 0 0 Benzoylprop-etyl từ 125 đến 150 3 0 Bifenox từ 115 đến 150 3 ũ Bifenthrin từ 090 đến 120 0 Binapacryl từ 100 đến 130 0 Bitertanol từ 100 đến 130 0 Boscalid từ 105 đến 130 0 0 từ 105 đến 140 0 Bromophos từ 120 đến 150 0 Bromophos-etyl từ 110 đến 140 0 Bromopropylate từ 095 đến 135 0 3 Bromoxynil từ 120 đến 150 0 Camphechlor (Toxaphene) từ 110 đến 150 0 Captafolc từ 120 đến 150 0 0 từ 120 đến 150 0 0 Carbophenothion từ 120 đến 140 0 Carbophenothion-metyI từ 120 đến 160 0 Chinomethionat từ 170 đến 200 0 (Quinomethionate) từ 170 đến 200 0 Chlorbensided từ 120 đến 155 0 0 Chlorbenside sulfone từ 130 đến 160 0 0 α-chlordane từ 110 đến 140 0 0 γ-chlordane từ 100 đến 130 0 0 Chlorfenapyr từ 085 đến 105 0 Chlorfenprop-metyl từ 125 đến 150 0 Amidithion a Bromacil Captan b c LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Các hợp chất www.luatminhkhue.vn Dịch rửa giải silica gel *) Khoảng thể tích rửa giải GPC Chlorfenson từ 120 đến 150 0 Chlorfenvinphos từ 110 đến 140 0 Chloridazon từ 130 đến 155 0 Chlormephos từ 115 đến 145 3 0 Chlorobenzilate từ 100 đến 135 0 Chloroneb từ 145 đến 170 0 Chloropropylate từ 100 đến 135 0 Chlorothalonil từ 125 đến 165 0 Chlorotoluron từ 115 đến 150 0 Chloroxuron từ 130 đến 155 0 Chlorpropham từ 110 đến 135 0 Chlorpyrifos từ 110 đến 140 0 Chlorpyrifos-metyl từ 120 đến 150 0 Chlorthal-dimetyl từ 135 đến 160 0 Chlorthiophos từ 115 đến 155 0 Clodinafop-propargyl từ 100 đến 125 0 0 Clomazone từ 115 đến 145 0 0 Cloquintocet-1-mexyl từ 105 đến 130 0 Coumaphos từ 135 đến 165 0 0 Crotoxyphos từ 105 đến 145 0 Crufomate từ 100 đến 140 0 Cyanazine từ 110 đến 135 0 Cyanofenphos từ 115 đến 145 0 Cyanophos từ 115 đến 150 0 0 Cyfluthrin từ 090 đến 120 0 λ-Cyhalothrin từ 090 đến 110 0 Cymoxanile từ 110 đến 130 0 Cypermethrin từ 100 đến 135 0 Cyprodinil từ 105 đến 135 0 0 o, p', DDD từ 110 đến 140 0 0 p.p '-DDD từ 100 đến 140 0 0 o.p '-DDE từ 120 đến 150 0 0 p, p'-DDE từ 120 đến 150 0 0 o, p'-DDT từ 120 đến 150 0 0 p.p '-DDT từ 110 đến 140 0 0 f từ 115 đến 135 0 Deltamethrin từ 100 đến 135 0 Demeton-S-metyl từ 125 đến 155 0 0 Demeton-S-metyl sulfone từ 120 đến 160 0 Demeton-S sulfoneg từ 115 đến 140 0 3 DEF LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Các hợp chất www.luatminhkhue.vn Dịch rửa giải silica gel *) Khoảng thể tích rửa giải GPC Demeton-S sulfoxid h từ 140 đến 170 0 0 N-Desetyl-pirim iphos-metyl từ 120 đến 155 0 Dialifos từ 110 đến 140 3 0 Di-allate từ 120 đến 150 0 Diazinon từ 105 đến 135 0 0 Dichlobenil từ 125 đến 155 0 Dichlofenthion từ 110 đến 140 3 0 từ 100 đến 140 3 0 từ 125 đến 155 0 Dichlorvos từ 115 đến 140 0 Diclofop-methyl từ 135 đến 165 0 0 Dicloran từ 105 đến 145 0 Dicofolk từ 100 đến 150 0 Dicrotophos từ 130 đến 160 0 0 Dieldrin từ 120 đến 150 0 Diethofencarb từ 105 đến 130 0 0 Difenoconazol từ 110 đến 140 0 3 Diflufenican từ 105 đến 125 0 0 Dimefox từ 120 đến 155 0 0 Dimethachlor từ 135 đến 165 0 Dimethoate từ 120 đến 150 0 3 l Dinitramine từ 105 đến 130 0 Dinobuton từ 110 đến 140 0 Dinocap từ 100 đến 120 0 Dioxathion từ 110 đến 140 3 Diphenylamin từ 130 đến 160 0 Disulfoton m từ 115 đến 150 0 Disulfoton sulfone từ 110 đến 140 0 0 Disulfoton sulfoxide từ 120 đến 150 0 0 Ditalimfos từ 120 đến 150 0 Edifenphos từ 130 đến 160 0 0 α-Endosulfan từ 110 đến 150 0 β-Endosulfan từ 110 đến 150 0 Endosulfan sulfate từ 100 đến 140 0 Endrin từ 130 đến 160 0 EPN từ 135 đến 160 0 Ethion từ 100 đến 140 0 Ethofumesate từ 110 đến 135 0 0 Ethoprophos từ 120 đến 155 0 Etrimfos từ 105 đến 140 0 0 Dichlofluanid i p.p'-Dichlorobenzophenone j LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Các hợp chất www.luatminhkhue.vn Dịch rửa giải silica gel *) Khoảng thể tích rửa giải GPC Famophos tứ 125 đến 155 0 0 Fenamidone từ 105 đến 140 0 Fenamiphos từ 105 đến 140 0 Fenarimol từ 125 đến 150 0 Fenazaquin từ 105 đến 145 0 Fenchlorphos từ 120 đến 150 0 Fenitrothion từ 120 đến 150 0 Fenoxycarb từ 120 đến 145 0 0 Fenpiclonil từ 100 đến 130 0 3 Fenpropathrin từ 100 đến 120 0 Fenson từ 130 đến 160 0 Fensulfothion từ 120 đến 150 0 3 Fenthion từ 130 đến 160 0 từ 105 đến 135 0 Flubenzimine từ 085 đến 120 0 Fluchloralin từ 100 đến 120 0 Flucythrinat từ 090 đến 120 0 Fludioxonil từ 090 đến 120 0 0 Fluoroglycofen-etyl từ 090 đến 115 0 0 Fluotrimazole từ 100 đến 140 0 Fluquinconazol từ 095 đến 125 0 3 Flurtamone từ 085 đến 105 0 Flutriafol từ 115 đến 135 0 3 Fluvalinate từ 095 đến 120 0 Folpet từ 140 đến 180 0 Fonofos từ 120 đến 150 0 từ 120 đến 150 0 từ 120 đến 160 0 Genite từ 135 đến 165 0 αHCH- từ 120 đến 150 0 0 β- HCH từ 100 đến 130 0 0 δ-HCH từ 100 đến 130 0 0 ε-HCH từ 105 đến 135 0 0 Heptachlor từ 110 đến 140 0 0 cis-Heptachlor epoxit từ 125 đến 155 3 0 trans-Heptachlor epoxit từ 125 đến 155 3 0 Heptenophos từ 120 đến 150 0 Hexachlorobenzene từ 140 đến 165 0 0 từ 120 đến 150 0 0 từ 095 đến 120 0 0 Fenvalerate i Formothion Fuberidazole Imazalil hl Indoxacarb l LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Các hợp chất www.luatminhkhue.vn Dịch rửa giải silica gel *) Khoảng thể tích rửa giải GPC lodofenphos từ 120 đến 150 0 loxynil từ 125 đến 155 0 Iprodione từ 115 đến 145 0 Iprovalicarb từ 085 đến 110 0 lsobenzan từ 105 đến 140 0 0 Isocarbamid tử 130 đến 165 0 Isodrin từ 120 đến 150 0 0 Isopropalin từ 110 đến 135 0 0 δ-Keto-endrin từ 135 đến 165 0 Kresoxim-metyl từ 120 đến 155 0 0 Lenacil từ 130 đến 160 0 Leptophos từ 120 đến 150 0 Lindane (γ-HCH) từ 110 đến 140 0 0 Linuron từ 120 đến 140 0 Malaoxon từ 110 đến 140 0 từ 110 đến 140 0 0 từ 115 đến 145 0 0 Mecarbam từ 105 đến 145 0 0 Mefenpyr-dietyl từ 100 đến 130 0 0 Mephosfolan từ 140 đến 170 0 Merphosn từ 125 đến 145 0 0 Metalaxyl từ 115 đến 150 0 Metconazol từ 085 đến 115 0 Methabenzthiazuron từ 150 đến 180 0 Methamidophos từ 120 đến 150 0 0 Methidathion từ 130 đến 165 0 0 Methoprotryne từ 115 đến 140 0 Methoxychlor từ 125 đến 155 0 Metolachlor từ 130 đến 160 0 Metribuzin từ 125 đến 150 0 Mevinphos từ 120 đến 150 0 Mirex từ 130 đến 160 0 0 Monocrotophos từ 115 đến 140 0 0 Monolinuron từ 125 đến 150 0 Morphothion từ 130 đến 170 0 từ 115 đến 155 0 Napropamid từ 135 đến 165 0 Nitralin từ 115 đến 145 0 Nitrofen từ 135 đến 165 0 Nitrothal-isopropyl từ 105 đến 135 Malathion MCPA-(2-butoxyetyl) ester Naled e LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Các hợp chất www.luatminhkhue.vn Dịch rửa giải silica gel *) Khoảng thể tích rửa giải GPC Nuarimol từ 130 đến 155 0 Octachlorodipropyl ete (S 421) từ 110 đến 130 0 0 Omethoate từ 140 đến 160 0 0 Oxadiazon từ 115 đến 145 0 0 từ 100 đến 160 0 0 từ 135 đến 165 0 0 Paraoxon từ 110 đến 140 0 Paraoxon-metyl từ 140 đến 170 0 Parathion từ 110 đến 140 0 Metyl parathion từ 120 đến 150 0 Pendimethalin từ 125 đến 155 0 Pentachloroaniline từ 110 đến 140 0 0 Pentach loroa nisole từ 125 đến 160 0 0 Pentachlorobenzene từ 125 đến 165 0 0 Permethrin từ 115 đến 145 0 Perthane từ 110 đến 140 0 Phenkapton từ 115 đến 145 3 0 Phenmedipham từ 105 đến 130 0 3 Phenthoate từ 115 đến 150 0 từ 115 đến 145 0 Phosalone từ 110 đến 140 0 0 Phosphamidon từ 110 đến 145 0 Phoxim từ 120 đến 150 0 từ 100 đến 130 0 0 từ 100 đến 130 0 Pirimicarb từ 130 đến 170 0 Pirimiphos-etyl từ 100 đến 135 0 0 Pirimiphos-metyl từ 105 đến 145 0 0 Procymidone từ 120 đến 150 0 0 Profenofos từ 130 đến 155 0 Profluralin từ 100 đến 125 0 0 Propachlor từ 125 đến 150 0 0 Propanil từ 105 đến 130 0 Propham từ 100 đến 180 0 0 Propiconazole từ 120 đến 150 0 Propoxur từ 110 đến 130 0 Propyzamide từ 095 đến 125 0 0 Prosulfocarb từ 120 đến 145 0 Prothiofos từ 105 đến 145 0 0 Pyrazophos từ 110 đến 140 0 0 Oxychlordane (Octachlor epoxit) Oxydemeton-metyl Phorate h p Picoxystrobin Piperonyl butoxide e LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Các hợp chất www.luatminhkhue.vn Dịch rửa giải silica gel *) Khoảng thể tích rửa giải GPC Pyrethrin1 từ 100 đến 130 0 Pyridaben từ 095 đến 125 0 0 Pyrifenox từ 125 đến 165 0 Pyriproxyfen từ 105 đến 135 0 Quinaiphos từ 115 đến 155 0 0 Quintozene từ 135 đến 165 0 0 l từ 120 đến 160 0 0 Resmethrinee từ 100 đến 130 0 Salithion từ 125 đến 165 0 Silthiofam từ 090 đến 120 0 0 từ 095 đến 135 0 từ 085 đến 105 0 0 Strobane T từ 125 đến 160 0 0 Sulfotep từ 100 đến 130 0 Sulprofos từ 115 đến 155 0 Tebufenpyrad từ 105 đến 145 0 0 Tecnazene từ 130 đến 160 0 0 Terbacil từ 120 đến 145 0 Terbufos từ 125 đến 155 0 Terbutryn từ 115 đến 175 0 2,3,4, 5-Tetrachloronitrobenzene từ 130 đến 160 0 Tetrachlorvinphos từ 120 đến 140 0 Tetradifon từ 120 đến 150 0 Tetramethrin từ 120 đến 150 0 0 Tetrasul từ 125 đến 155 0 0 Thionazin từ 120 đến 150 0 Rabenzazole Simazine Spiroxamin q Tolclofos-metyl từ 130 đến 165 0 i từ 105 đến 135 3 0 Triadimefon từ 100 đến 130 0 3 Triadimenol từ 100 đến 130 0 Tri-allate từ 120 đến 150 0 Triamiphos từ 125 đến 160 0 0 Triazophos từ 120 đến 140 0 Triazoxide từ 165 đến 195 0 Trichlorfon h từ 100 đến 140 0 0 Trichloronat từ 110 đến 140 0 Trifloxystrobin từ 090 đến 110 0 0 Triflumizol từ 085 đến 105 0 Trifluralin từ 100 đến 130 0 0 Triticonazol từ 100 đến 125 0 Tolylfluanid LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Các hợp chất www.luatminhkhue.vn Dịch rửa giải silica gel *) Khoảng thể tích rửa giải GPC Vinclozolin từ 100 đến 130 0 Zoxamid từ 085 đến 125 0 0 *) Silica gel dịch rửa giải; n-Hexan-toluen với tỷ lệ 65 : 35 (tính theo thể tích) toluen toluen, axeton với tỷ lệ 95 : (tính theo thể tích) toluen, axeton với tỷ lệ 80 : 20 (tính theo thể tích) axeton CHÚ THÍCH Các số bảng cho thấy mức thu hồi: = 90%; = khoảng từ 60 % đến 905 , = khoảng từ 30% đến 60%; = khoảng từ 10% đến 30%; = nhỏ 10 %; = không thu hồi a Chiết mẫu phân tích có bổ sung kali axetat; GC, bơm lượng dung dịch mẫu có bổ sung axit axetic b Chiều cao pic thuộc vào dung mơi c Cột sắc ký khí ổn định tốt d Khi chạy sắc ký silica gel, quan sát thấy có thêm pic có thời gian lưu lâu e Được phân tích GC/MS f Cũng từ Merphos g Bơm dung dịch chuẩn vòng sau bơm dung dịch mẫu h Độ thu hồi cải thiện rửa giải thêm với ml axeton i Chiết phần mẫu thử có bổ sung axit xitric axit oxalic j Sự phân huỷ dicofol k Sự phân huỷ p,p’-dichlorobenzophenone l Đối với việc chuẩn bị mẫu, tiến hành tránh hoàn toàn ánh sáng m Sau sắc ký silica gel, quan sát sulfoxid dịch rửa giải n Một phần bị oxi hoá đến DEF o Khi chạy sắc ký silica gel, quan sát độ thu hồi khác p Một phần bị phân huỷ trình sắc ký silica gel q Dịch rửa giải cần 12 ml axeton để rửa giải hoàn toàn hợp chất 7.5 Sắc ký khí Sử dụng hệ thống sắc ký khí thích hợp để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật nhóm halogen hữu cơ, phospho hữu nitơ hữu TCVN 8424-3:2010 (EN 12393-3:2008) Bơm lượng (Vi) dịch rửa giải thu 7.4.4.3 vào sắc ký khí Đối với phép phân tích có detector ion hóa nhiệt detector quang phổ lửa, bơm lượng (V i) dung dịch thu 7.4.3 (VR4) vào máy sắc ký khí 7.6 Tính dư lượng Dư lượng, R biểu thị miligam kilogam, hợp chất nhận biết, tính theo cơng thức (2): (2) Trong đó: LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Cơng ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn (3) Trong đó: m khối lượng phần mẫu thử, tính gam (g);; VEX thể tích axeton nước thêm vào bước chiết 7.4.1.2 7.4.1.3, cộng với nước có mẫu, lượng thực tế 7.4.2.1 ml 7.4.2.2 15 ml, tính mililit (ml); VR1 phần thể tích VEx sử dụng để chiết phân đoạn 7.4.2, tính mililit (ml); VR2 thể tích dung dịch lại sau cho bay chuẩn bị cho sắc ký thẩm thấu gel phương pháp mô tả 7.4.3.4, tính mililit (ml); VR3 phần thể tích VR2 bơm cho sắc ký thẩm thấu gel (thể tích vịng mẫu), tính mililit (ml); VR4 thể tích dung dịch thu sau sắc ký thẩm thấu gel qui trình mơ tả 7.4.3.4, tính mililit (ml); VR5 phần thể tích VR4 sử dụng cho sắc ký 7.4.4.3, tính mililit (ml); VEND thể tích cuối dịch rửa giải thu 7.4.4.3, tính mililit (ml); Vi phần thể tích VEnd thể tích VR4 bơm vào máy sắc ký khí, tính microlit (μl); Wst lượng hợp chất bơm với dung dịch chuẩn, tính nanogam (ng); FA diện tích pic thu từ Vb FSt chiều cao pic thu từ WSt 7.7.Nghiên cứu cộng tác Các cặp chất thuốc bảo vệ thực vật nghiên cứu cộng tác nêu Bảng Bảng - Chất thuốc bảo vệ thực vật cà rốt khoai cải bắp rau tây chân Savoy vịt acephate cà dưa giống chua chuột cam chanh ngũ cốc đậu loại vàng hạt, bơ + aclonifen + + + + azoxystrobin + + + + + + + + chlorfenapyr + + + + chlorfenprop-metyl + + + + boscalid bromophos + + bromopropylate + + captan + chlorothalonil chlorpropham chlorpyrifos + + + + + clodinafop-propargyl + + + + clomazone + + + + cloquintocet-1 -mexyI + + + + cyprodinil + + + + LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn cà rốt khoai cải bắp rau tây chân Savoy vịt o,p’-DDE + p,p'-DDE + o,p'-DDT + p,p'-DDT + diazinon + dichlofiuartid + dicloran + + ngũ cốc đậu loại vàng hạt, bơ + + + idicofol dieldrin cà dưa giống chua chuột cam chanh + + + + + + + + diethofencarb + + + + difenoconazole + + + + diflufenican + + + + diphenylamin + + + + + + + + + + + + + + fenoxycarb + + + + fenpicloriii + + + + fludioxonil + + + + fluoroglycofen-etyl + + + + fluquinconazole + + + *+ + + + + + + -endosulfan + -endosulfan endosultan sulfate + + + + endrin + ethion + ethofumesate + fenamidone + fenarimol + fenazaquin fenitrothion + + fenpropathrin + flurtamone + flutriafol + folpet HCB + + + + -HCH + heptachlor epoxit + + + + + + + indoxacarb iprovalicarb + + Lindane ( -HCH) iprodione + + + + + + + + + + LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn cà rốt khoai cải bắp rau tây chân Savoy vịt cà dưa giống chua chuột cam chanh kresoxim-metyl + malathion + mecarbam + + ngũ cốc + đậu loại vàng hạt, bơ + + mefenpyr-dietyl + + + + metconazole + + + + napropamide + + + + nuarimol + + + + parathion + + permethrin phosalone + + + + + + picoxystrobin + pirimiphos-metyl + + + + + + procymidone + + propham + prosulfocarfo + pyridaben + pyrifenox + pyriproxyfen + quintozene + + + + + + + + + + + + + + silthiofam + + + + spiroxamine + + + + + + + + + + + + + + + + tebufenpyrad + tetradifon + tolclofos-metyl + trifloxystrobin + triticonazole vinclozolin + + + + + zoxamide + 7.8 Khả ứng dụng Các loại thuốc bảo vệ thực vật phân tích phương pháp nêu Bảng Các loại trồng thực phẩm thử nghiệm phương pháp là: Táo Nho đỏ Hy lạp Đậu Hà lan Bơ Nho Dứa Chuối Bắp cải Mận Đậu Cây hublong Khoai tây Bia Cải củ Bắp cải Savoy Cà rốt Rau diếp Gia vị Bông cải Dưa vàng Rau chân vịt Ngũ cốc Nước nho Dâu LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Táo Nho đỏ Hy lạp Đậu Hà lan Anh đào Các loại hạt Củ cải đường Quả cam quýt Hành tây Ớt Các sản phẩm ca cao Đào Chè sản phẩm tương tư Cà phê, dạng thô Hạt lạc Thuốc Dưa chuột Lê Cà chua Cải xoăn Rượu vang Phương pháp P: Chiết etyl axetat làm sắc ký thẩm thấu gel, cần 8.1 Nguyên tắc Phần mẫu thử cắt nhỏ đồng hóa với natri sulfat etyl axetat phần dịch đồng hóa Iọc Phần dịch lọc đặc bơm trực tiếp vào máy sắc ký khí có detector chọn lọc phospho mà khơng cần phải làm sạch, tinh sắc ký thẩm thấu gel BioBeads®S-X3 dùng hỗn hợp etyl axetat xyclohexan làm chất rửa giải, cần Dịch rửa giải cô đặc để xác định sắc ký khí 8.2 Thuốc thử 8.2.1 Yêu cầu chung Sử dụng tất thuốc thử có độ tinh khiết thích hợp để phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật phù hợp với Điều TCVN 8424-1:2010 (EN 12393-1:2008) 8.2.2 Etyl axetat 8.2.3 Natri sulfat Nung nhiệt độ 500 oC h, để nguội bảo quản chai có nắp đậy kín 8.2.4 Xyclohexan 8.2.5 Hỗn hợp rửa giải GPC: xyclohexan/etyl axetat với tỷ lệ : (tính theo thể tích) 8.2.6 Bio Beads ® S-X3, cỡ hạt từ 38 đến 75 (200 mesh đến 400 mesh) 8.3 Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thông thường cụ thể sau: 8.3.1 Máy trộn tốc độ cao máy đồng hóa, có cốc trộn thích hợp 8.3.2 Bộ làm bay dung mơi, có nồi cách thủy 8.3.3 Dụng cụ dùng cho GPC, ví dụ GPC Autoprep® 1001 1002 ®, trang bị cột sắc ký, đường kính 25 mm, 50 cm hai mươi ba vòng mẫu ml; cột nhồi 50 g resin BioBeads S-X3 ®, làm trương nở qua đêm hỗn hợp rửa giải GPC, cột cao khoảng 32 cm nhồi mô tả 8.4.3.1 8.4 Cách tiến hành 8.4.1 Chuẩn bị mẫu Phần mẫu thử cắt nhỏ trộn kỹ để thu phần mẫu thử đồng 8.4.2 Chiết Cân 50 g mẫu chuẩn bị cho vào cốc trộn (8.3.1), thêm lượng thích hợp 50 g natri sulfat (8.2.3) để hấp thụ phần nước có mẫu (xem Bảng A.1 hàm lượng nước ) 100 ml etyl axetat Trộn từ đến Lọc chất lỏng qua phễu Buchner có đường kính 90 mm, rửa cẩn thận máy trộn bánh lọc hai lần, lần dùng 25 ml etyl axetat Đo thể tích dịch lọc, chuyển phần tư dung dịch (tương đương 12,5 g mẫu) vào bình đặc đến khoảng 2,5 ml cô quay (8.3.2) Chuyển sang ống đong chỉnh axetat etyl đến xác ml Dịch đặc bơm trực tiếp vào sắc ký trang bị detector FPD NPD Trong số trường hợp, có chất gây nhiễu, nên làm GPC 8.4.3 Làm sắc ký thẩm thấu gel (nếu cần) 8.4.3.1 Nhồi cột thẩm thấu gel LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Cơng ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn Để BioBeads® (8.2.6) (khoảng 50 g) trương nở qua đêm hỗn hợp rửa giải GPC (8.2.5) Sau rót tất huyền phù lúc vào cột (dung tích khoảng 180 ml) Ngay sau lớp gel ổn định (khơng có bọt khí) đến mức xấp xỉ 32 cm, chèn pittơng, hạ thấp xuống đến mức xoay vào vị trí Nếu lớp gel bị lún xuống mức thấp sau thao tác kéo dài, phải chỉnh pittơng cho phù hợp (theo hướng dẫn nhà sản xuất) 8.4.3.2 Kiểm tra thể tích rửa giải Đối với cột thẩm thấu gel trước sử dụng lần đầu, cần phải kiểm tra điều kiện rửa giải vài hợp chất có khoảng thể tích rửa giải thấp cao dịch chiết thơ thích hợp Để thực điều này, nạp đầy vịng mẫu dịch chiết thơ hỗn hợp dung dịch chuẩn, rửa giải theo mô tả 8.4.3.3 xác định phương pháp phân tích thích hợp cho dù hợp chất thêm vào thu hồi hoàn toàn chất gây nhiễu sinh tạp chất chưa tách Tương tự, phải kiểm tra cột sau qua khoảng thời gian sử dụng dài 8.4.3.3 Làm dịch chiết thô Thêm ml xyclohexan ml dịch chiết etyl axetat (8.4 2) Lắc khoảng 20 s lọc qua giấy lọc nhanh bơm dịch lọc vào vòng mẫu máy sắc ký thẩm thấu gel Rửa giải cột thẩm thấu gel hỗn hợp rửa giải với tốc độ 5,0 ml/min Bộ phận chuyển mạch máy sắc ký thẩm thấu gel điều chỉnh để kiểm tra thể tích dịch rửa giải Thông thường cài đặt sau: - chế độ thải (dump) chuyển sang 18 để loại bỏ 90 ml; - chế độ thu nhận chuyển sang 15 để thu 75 ml; - chế độ rửa chuyển sang để rửa cột dùng 10 ml Cơ đặc thể tích thu đến khoảng ml quay (quay chậm, ngâm nhẹ bình cầu), dùng pipet cho lượng vào ống nghiệm chia độ đậy nút mài, tráng rửa cô quay etyl axetat pha loãng etyl axetat đến 5,0 ml Việc bổ sung etyl axetat không bỏ qua để đảm bảo hịa tan hồn tồn dư lượng Để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật riêng rẽ, cài đặt dụng cụ để thu lượng nhỏ hơn, phù hợp với hợp chất tương ứng, theo giá trị nêu Bảng 8.5 Sắc ký khí Sử dụng hệ thống sắc ký khí thích hợp để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật nhóm phospho hữu 8.6 Nghiên cứu cộng tác Các cặp chất thuốc bảo vệ thực vật nghiên cứu cộng tác mà khơng có bước làm sạch: - Chất nền: táo; tỏi; bắp cải - Thuốc bảo vệ thực vật: bromophos-etyl, chlorfenvinphos; diazinon; mevinphos; parathion 8.7 Khả áp dụng Các thuốc bảo vệ thực vật sau phân tích rau phương pháp này: acephate dichlofenthion heptenophos phosmet azinphos-etyl dichlorvos isofenphos phoxim azinphos-metyl dimethoate malathion pirimiphos-etyl bromophos dioxathion methamidophos pirimiphos-metyl bromophos-etyl disulfoton methidathion prothoate carbophenothion ditalimfos menazon pyrazophos chlorfenvinfos ethion mevinphos sulfotep chlorpyrifos ethoprophos monocrotophos temephos chlorpyrifos-metyl etrimfos naled TEPP chlorthiophos fenamiphos omethoate tetrachlorvinphos coumaphos fenchlorphos oxydemeton-mEtyl thiometon LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn acephate dichlofenthion heptenophos phosmet cyanofenphos fenitrothion parathion tolclofos-metyl demeton-S-metyl fensulfothion -metyl parathion triamiphos demeton-S-metyl sulfone fenthion phorate triazophos dialifos fonofos phosalone trichlorfon diazinon formothion phosphamidon trichloronate vamidothion Phụ lục A (Tham khảo) Hàm lượng nước trung bình có loại trồng loại thực phẩm Bảng A.1 – Hàm lượng nước trung bình có loại trồng loại thực phẩm Cây trồng thực phẩm Hàm lượng nước trung bình (g/100 g) Bột cacao Ngũ cốc, gia vị (rau thơm), càphê (nguyên liệu), chè sản phảm tương tư 10 Chuối, cải ngựa 75 Đậu Hà Lan, nho Hy lạp (đen), khoai tây, mùi tây, nho 80 Dứa, táo, lê, nho Hy lạp (đỏ), anh đào, cam, mận, rau thơm 85 Súp lơ, đậu (hạt non), cải xanh, dâu tây, bưởi, cải xoăn, su hào, dưa hấu, cà rót, nước nho, hạt tiêu, đào, nấm, củ cải đỏ, bắp cải đỏ, rau chân vịt, cải, chanh, củ cải đường (ăn gốc), hành tây 90 Rau diếp xoăn, rau xà lách, dưa chuột, củ cải, đại hoàng, rau diếp, cần tây, măng tây, cà chua 95 THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Becker, G.: Organohalogen, organophosphorus and triazine compounds In DFG Manual of Pesticide Residue Analysis, VCH Weinheim, Method S 8, in Vol (1987), pp 283 and Vol (1992), pp 313 [2] Luke, Milton A.; Froberg, Jerry E ; Masumoto, Herbert T, Extraction and clean-up of organochlorine, organophosphate, organonitrogen and hydrocarbon pesticides in produce for determination by gasliquid chromatography J Assoc Off Anal Chem 58,1020 -1026,1975 [3] Luke, Milton A.; Froberg, Jerry E.; Doose, Gregory M.; Masumoto, Herbert T Improved multiresidue gas chromatographic determination of organophosphorus, organonitrogen and organohalogen pesticides in produce, using flame photometric and electrolytic conductivity detectors J Assoc Off Anal Chem 64.1187-1195(1981) [4] Pesticide Analytical Manual-Vol 1, Multiresidue methods, Section 302,3rd Edition, 1994 [5] Specht, W.: Organochlorine, organophosphorus, nitrogen-containing and other pesticides In DFG, Manual of Pesticide Residue Analysis, VCH Weinheim, Method S 19, in Vol.1 (1987), pp 383, and VoI.2 (1992) pp 317 [6] Specht W., Pelz, S., Gilsbach, W.: Gas-chromatographic determination of pesticide residues after clean-up by gel-permeation chromatography and mini-silica gel-column chromatography Replacement of dichloromethane by ethyl acetate/cydohexane in liquid- liquid partition and simplified conditions for extraction and liquid- liquid partition, Fresenius J Anal Chem 353,183-190 (1995) [7] Analytical Methods for Residues of Pesticides in Foodstuffs, Sixth edition, The Hague (1996) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162