Nghiên cứu phân tích cây sinh dòng dựa trên gen mã hóa p72 cho thấy các chủng duy nhất thuộc genotype II, nằm cùng phân nhánh và tương đồng rất cao với các chủng đã được công bố trước đây ở Phía Bắc nước ta (2019) và Trung Quốc (2018). Sự tương đồng cao khi so sánh giữa chủng thực địa với các chủng ứng viên vắc-xin hiện nay cho thấy sự hứa hẹn về khả năng hiệu quả. Mời các bạn tham khảo!
KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 ĐẶC ĐIỂM DI TRUYỀN CỦA VIRUS DỊCH TẢ HEO CHÂU PHI TỪ CÁC Ổ DỊCH TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA NAM TỪ 2019 ĐẾN 2020 Ngơ Thị Ngọc Trâm1, Nguyễn Thị Mỹ Duyên1, Nguyễn Quang Hợp1, Nguyễn Minh Nam2, Đỗ Tiến Duy1*, *Email: duy.dotien@hcmuaf.edu.vn TÓM TẮT Dịch tả heo Châu Phi (ASF) bệnh truyền nhiễm xuyên biên giới heo nhà heo rừng, gây thiệt hại nghiêm trọng ngành chăn nuôi heo, gây vi-rút ASF (ASFV), DNA kép lớn với cấu trúc phức tạp Nghiên cứu thực nhằm xác định diện đặc điểm di truyền ASFV 10 tỉnh phía Nam Việt Nam Tổng số 118/148 (79,2%) ca bệnh nghi ngờ xét nghiệm dương tính ASFV PCR khảo sát 10/118 chủng ASFV giải trình tự phân tích đoạn gen mã hóa p72 Phân tích sinh dịng dựa gen mã hóa p72 cho thấy chủng thuộc genotype II, nằm phân nhánh tương đồng cao với chủng công bố trước Phía Bắc nước ta (2019) Trung Quốc (2018) Sự tương đồng cao so sánh chủng thực địa với chủng ứng viên vắc-xin cho thấy hứa hẹn khả hiệu Từ khóa: ASFV, đặc điểm di truyền, p72, heo The genetic characteristics of African Swine Fever Virus from outbreaks in Southern provinces of Vietnam from 2019 to 2020 Ngo Thi Ngoc Tram, Nguyen Thi My Duyen, Nguyen Quang Hop, Nguyen Minh Nam, Do Tien Duy SUMMARY African swine fever (ASF) is reported as a transboundary infectious disease of domestic and wild pigs, the most severe constraint to the pig industry, caused by ASF virus (ASFV) a large enveloped DNA virus with a complex structure There are 24 genotypes of ASFV described to date; however, in Vietnam, only genotype II had been previously described This study was conducted to identify the presense and genetic characteristics of ASFV in the southern provinces of Vietnam A total of 148 cases with ASF-suspected clinical signs from outbreaks in 10 provinces The presence of ASFV was detected by PCR assay 10/118 strains of ASFV were sequenced based on p72-encoded gene The prevalence of ASFV was determined to be 79.2% Analysis of the phylogenetic tree based on the gene encoding p72 showed that only genotype II strains, located in the same clade and highly similar to those previously published in the North of Vietnam and China The genetic homology of field strains with current vaccine candidate isolates shows promise in terms of efficacy Keywords: African Swine Fever virus (ASFV), genetic characteristics, p72, pig I ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh dịch tả heo Châu Phi (African Swine Fever, ASF) bệnh truyền nhiễm nguy hiểm, gây thiệt hại lớn kinh tế cho người chăn nuôi nhiều nước giới (OIE, 2019) Bệnh lây lan rộng làm chết nhiều heo nhiễm bệnh Ngay sau xâm nhập vào nước ta, lây lan Khoa Chăn nuôi Thú y, Trường Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh TT Nghiên cứu Di truyền Sức khỏe sinh sản, Khoa Y, Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh 67 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 ASF diễn nhanh, phức tạp, sau - tháng dịch bệnh đạt đỉnh vòng tháng lây truyền xảy 8.200 xã thuộc 63 tỉnh thành Theo Cục chăn nuôi Việt Nam (2020), sau năm, thiệt hại bệnh gây báo cáo thức lớn, số heo mắc bệnh tiêu hủy khoảng triệu (chiếm 21,5% tổng đàn), tương ứng tổng trọng lượng thịt heo thiệt hại 342.091 tấn, chiếm 9% tổng sản lượng thịt heo sản xuất nước Căn nguyên gây bệnh loại vi-rút DNA sợi đôi (ASFV), thuộc chi Asfivirus, họ Asfarviridae; ASFV có kích thước lớn khoảng 170 - 193 kbp với 150 - 167 khung đọc mở (ORFs) mã hóa 150 - 200 protein (Dixon ctv, 2013) Ba protein phổ biến gồm protein capsid p72, p54 p30 p72 p54 thường sử dụng cho giải trình tự gen, xét nghiệm đánh giá khả gây bệnh Trong đó, p72 protein capsid kháng nguyên chiếm khoảng 32% tổng khối lượng protein virion có tính ổn định kháng ngun cao (Lopez-Otin ctv, 1990) Protein p72 có trọng lượng phân tử khoảng 73,2 kDa, protein kháng nguyên quan trọng mã hóa gen B646L Kết giải trình tự gen B646L mã hóa protein p72 xác định 22 kiểu gen (genotypes) ASFV (Boshoff ctv, 2007) gần 24 kiểu gen công bố (Achenbach ctv, 2017) Do đó, nghiên cứu xác định đặc trưng kiểu gen chủng ASFV Việt Nam dựa vào gen mã hóa p72 cần thiết để xác định chủng lưu hành, nguồn gốc, đa dạng gen trang trại khảo sát Thực tế, nghiên cứu đặc trưng kiển gen ASFV thu thập từ ổ dịch phía Nam Việt Nam cịn hạn chế Do đó, mục tiêu nghiên cứu nhằm xác định đặc trưng kiểu gen ASFV gây bệnh để tìm hiểu nguồn gốc so sánh tương đồng với chủng ứng viên vắc-xin II NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Nghiên cứu thực từ 03/2020 đến 03/2021 với hai nội dung (1) Xác định tỷ lệ nhiễm ASFV heo ổ dịch tỉnh thành khảo sát (2) Phân tích đặc điểm di truyền chủng ASFV thu thập 2.1 Bố trí nghiên cứu thu thập mẫu Heo khảo sát có dấu hiệu lâm sàng nghi ngờ nhiễm ASFV (sốt cao, bỏ ăn, suy sụp, xuất huyết da, ói máu, tiêu chảy có máu) từ 10 ổ dịch/trại thuộc 10 tỉnh phía Nam, Việt Nam (Hình 1) Hình Bản đồ vị trí tỉnh khảo sát ổ dịch, thu mẫu nghiên cứu 68 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Tổng số 148 heo thu thập mẫu máu mô Mẫu sử dụng để tách chiết DNA xét nghiệm phương pháp PCR Phòng xét nghiệm sinh học phân tử, Bệnh Viện Thú Y, Trường ĐHNL Tp.HCM Mẫu huyết dương tính ASFV từ 10 trại 10 tỉnh khác chọn ngẫu nhiên để khuếch đại giải trình tự, phân tích đặc trưng gen mã hóa p72 2.2 Phát ASFV phương pháp PCR Mồi (primers) sử dụng nghiên cứu Hai cặp mồi công bố trước (Bastos ctv, 2003; Aguero ctv, 2004) sử dụng nghiên cứu này, trình bày Bảng Bảng Thơng tin trình tự mồi kích thước sản phẩm Đoạn mồi Trình tự (5’- 3’) PPA1 AGTTATGGGAAACCGACCC PPA2 CCCTGAATCGGAGCATCCT P72U GGCACAAGTTCGGACATGT P72D GTACTGTAACGCAGCACAG Cặp mồi đặc hiệu PPA1/PPA2 dùng để xét nghiệm diện ASFV P72U/P72D dùng giải trình tự gen mã hóa p72 (478bp) Xử lý mẫu Mẫu mơ nghiền nhỏ, tạo huyễn dịch 10% với PBS1x ly tâm lấy dịch nổi; Mẫu máu tách huyết Tách chiết DNA tổng số theo quy trình kỹ thuật kít thương mại Wizard® Gienomic DNA Purification Kit (Promega, Mỹ) DNA tách chiết bảo quản -20oC Quy trình PCR Phản ứng khuếch đại PCR sử dụng master mix MyTaq TM HS Mix, 2x (Bioline, Mỹ) Thành phần phản ứng PCR chu trình nhiệt thực theo mô tả Aguero ctv (2004) 3μL sản phẩm PCR trộn với thuốc nhộm GelRed (Merck, Đức) điện di gel agarose 1% (Invitrogien, Thermo Fisher Scientific, USA) Tiếp theo, sử dụng thang chuẩn 1Kb Plus (Invitrogien, Thermo Fisher Scientific, USA) để xác định kích thước sản phẩm PCR khuếch đại máy chiếu tia UV 2.3 Giải trình tự phân tích gen mã hóa p72 Mười mẫu huyết dương tính ASFV từ 10 trại/tỉnh chọn để thực Phản ứng PCR khuếch đại đoạn gen mã hóa p72, với tổng thể tích 25μL bao gồm 12μL master mix, 5μL Kích thước sản phẩm Nguồn 257bp Aguero ctv, 2004 478bp Bastos ctv, 2003 DNA mẫu, 1μL mồi p72U 10μM, 1μL mồi P72D 10μM 6μL nước tinh (khơng chứa DNA) Chu trình nhiệt gồm bốn giai đoạn: (1) tiền biến tính 95°C phút, (2) lặp lại 35 chu kì gồm biến tính phút 95°C, bắt cặp 30s 50°C, kéo dài 50s 72°C, (3) kéo dài cuối 72°C phút Sản phẩm PCR điện di trình bày phần trên, để kiểm tra kích thước sản phẩm đặc hiệu 478bp, u cầu sản phẩm sáng, rõ nét khơng có band phụ Sản phẩm khuếch đại tinh kít TopPURER PCR/GEL DNA PURIFICATION kit (ABT, Việt Nam) giải trình tự Phịng thí nghiệm Macrogen, Hàn Quốc Trình tự gen mã hóa protein p72 phân tích đặc trưng, tương đồng mối liên hệ phân tử với chủng ASFV tham khảo từ Việt Nam quốc gia khác (Genebank, NCBI) (Bảng 2); chủng sử dụng nghiên cứu vắc-xin nước HLJ/18 (Trung Quốc), Georgia_2007/1 (Georgia), OURT_88/3 (Bồ Đào Nha), Benin97/1 (Benin) Trình tự nucleotide sản phẩm p72 kiểm tra chất lượng phần mềm Chromas version 2.6.6 chỉnh phần mềm CLUSTALW Cây sinh dòng thiết lập theo phương pháp Neighbor Joining với giá trị bootstrap 1.000 phần mềm MEGA X (https://www megasoftware.net/) 69 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Bảng Các chủng ASFV giải trình tự tham khảo Tên chủng 70 Thời gian Nơi phân lập P72 genotype Mã số VN/DN 2020 Việt Nam II - VN/BP 2019 Việt Nam II - VN/BD 2020 Việt Nam II - VN/LA 2019 Việt Nam II - VN/TG 2020 Việt Nam II - VN/HCM 2019 Việt Nam II - VN/VL 2019 Việt Nam II - VN/CT 2019 Việt Nam II - VN/BRVT 2019 Việt Nam II - VN/BenTre 2020 Việt Nam II - Hanoi/2019 2019 Việt Nam II MT332151 NgheAn/2019 2019 Việt Nam II MT180393 VN/Pig/NA/1393 2020 Việt Nam II MN711740 CN201801 2018 Trung Quốc II MH722357 Wuhan/2019 2019 Trung Quốc II MN393476 HLJ/18 2018 Trung Quốc II MK333180 Pol18 2018 Ba Lan II MT847621 Georgia_2007/1 2007 Georgia II NC_044959 Etalle/2018 2018 Bỉ II MK543947 LT14/1490 2014 Lithuania II MK628478 ZAM/14/Chipata 2014 Zambia II LC174751 ETH/3 2011 Ethiopia XXIII KT795360 MOZ_10 2006 Mozambique XXIV KY353989 RSA/3/96 1996 South_African XIX DQ250127 NAM/1/95 1995 Namibia XVIII DQ250122 TAN/2003/1 2003 Tanzania XV AY494552 MFUE6/1 1982 Zambia XIII AY351561 SPEC/154 2016 South_Africa VII DQ250113 OURT_88/3 1989 Bồ Đào Nha I AM712240 Li20/1 1983 Malawi VIII AY261361 Kenya-1950 1950 Kenya X AY261360 MZUKI/1979 1979 South_Africa I AY261362 Warmbaths NK Namibia IV AY261366 MOZ/60 1960 Mozambique V AF270708 Benin97/1 1997 Benin I AM712239 KAB/62 1983 Zambia XI AY351522 SUM 14/11 1983 Zambia XIII AY351542 TMB 89/1 1989 Zambia VIII AY351557 SPEC/53 - South_Africa XXI DQ250111 Ken05/Tk1 2014 Kenya X KM111294 Ken06Bus 2014 Kenya IX KM111295 ZAM/13/Kalomo NK Zambia XIV LC174752 ZAM/14/Kasempa NK Zambia XIV LC174753 R8 NK Uganda IX MH025916 RSA_2/2008 2008 South_Africa XXII MN336500 RSA_2/2004 2004 South_Africa XX MN641877 Liv13/33 - Pháp I MN913970 RSA W1 1999 South_Africa IV MN641876 Nguồn Nghiên cứu NCBI KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Tỷ lệ nhiễm ASFV cao (79,2%), 118/148 ca bệnh khảo sát (Bảng 3) 3.1 Tỷ lệ nhiễm ASFV heo khảo sát Bảng Tỷ lệ nhiễm ASFV tỉnh khảo sát] Tỷ lệ nhiễm Thứ tự Tỉnh/Thành phố Ca bệnh n % Đồng Nai 16 13 81,25 Bình Phước 17 52,94 Bình Dương 64 50 78,13 Long An 20 20 100 Tiền Giang 15 10 66,67 Hồ Chí Minh 1 100 Vĩnh Long 1 100 Cần Thơ 1 100 Vũng Tàu 1 100 10 Bến Tre 12 12 100 148 118 79,73 Tổng Kết phù hợp với báo cáo dịch bệnh theo trích dẫn OIE (2019), ASF xuất 63 tỉnh thành Việt Nam Mặc dù, ASFV mầm bệnh có đặc tính lây lan chậm điều kiện tự nhiên tốc độ lây lan bệnh ASF nước ta nhanh, rộng; sau tháng công bố dịch, ASFV diện đàn heo nước, trừ trang trại áp dụng nghiêm ngặt an toàn sinh học (Nguyễn Tất Toàn ctv, 2019; Đỗ Tiến Duy, 2020) Thực trạng chăn nuôi heo nhỏ lẻ, hạn chế không áp dụng biện pháp an toàn sinh học, tập quán sinh hoạt người dân, nhiều địa điểm giết mổ tiêu thụ thịt tươi nằm gần khu vực chăn nuôi góp phần cản trở hiệu phịng chống bệnh 3.2 Đặc điểm di truyền chủng ASFV khảo sát 3.2.1 Sự tương đồng đặc trưng kiểu gen Độ tương đồng (%) trình tự nucleotide acid amin gen mã hóa p72 10 chủng nghiên cứu 100% Sự tương đồng trình tự nucleotide acid amin chủng ASFV so với chủng tham khảo dao động khoảng 83,44 - 100% 74,05 - 100%, tương ứng Khi so sánh chủng nghiên cứu với chủng tham khảo thuộc genotype II, % tương đồng nucleotide acid amin 98,40 100% 97,28-100%, tương ứng Đặc biệt, chủng ASFV thực địa có tương đồng hồn tồn (100%) với chủng báo cáo Việt Nam (VN/Pig/Hanoi/2019; MT332151) Trung Quốc (China/2018; MH722357) Kết tương đồng gen chứng tỏ nguồn gốc ASFV từ nguồn lây nhiễm vào Miền Bắc, Việt Nam từ lan rộng khắp nước ASFV có cấu trúc DNA với ổn định gen; Tần suất đột biến thấp khả tự chỉnh sửa sai sót DNA polymerase nhân sợi đôi đặc điểm cho ổn định gen di truyền (Mai Anh Tuấn ctv, 2020; Dixon ctv, 2020) Đặc biệt, trình tự đoạn gen mã hóa p72 thu thập từ Nghệ An năm 2020 (MN711740), công bố nghiên cứu trước, xuất vài đột biến điểm nucleotide acid amin so với chủng nghiên cứu (Hình 2) Mặc dù vậy, giả thuyết cần xem xét lại (1) thực xuất đa đạng di truyền 71 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 (gen B646L mã hóa protein p72) chủng thực địa so với chủng sử dụng nghiên cứu vắc-xin nước HLJ/18 (Trung Quốc), Georgia_2007/1 (Georgia), OURT_88/3 (Bồ Đào Nha), Benin97/1 (Benin) trình bày Bảng chủng ASFV Việt Nam, (2) nhẫm lẫn phân tích trình tự nucleotide acid amin chất lượng giải trình tự, cần có nghiên cứu sâu để chứng minh Sự tương đồng (%) nucleotide acid amin Bảng % tương đồng nucleotide acid amin chủng thực địa với chủng vắc-xin nghiên cứu Chủng vắc-xin OURT-88/3 Benin 97/1 HLJ/18 Georgia 2007/1 Genotype I I II II Nucleotide 98,87% 98,87% 99,78% 99,78% Acid amin 100 % 100 % 100 % 100 % Trong đó, chủng thực địa có (%) tương đồng cao với chủng vắc-xin nghiên cứu thuộc genotype II Georgia 2007/1 (99,78%), HLJ/18 (99,78%) so với OURT-88/3 (98,87%), Benin 97/1 (98,87%) thuộc genotype I Mặc dù vậy, tương đồng (%) trình tự acid amin chúng (100%) Chủng Georgia 2007/1 chủng sử dụng để nghiên cứu phát triển vắc-xin nhược độc nay, cắt đoạn gen I177L (ASF-G-∆l177L) (Borca ctv, 2020), tương đồng cao với chủng thuộc genotype II lưu hành rộng khắp Thế giới → Hình Trình tự acid amin p72 đoạn chủng từ nghiên cứu chủng tham khảo Dấu mũi tên () vị trí khác biệt acid amin chủng tham khảo VN/Pig/NA/1393 (MN711740) 72 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 3.2.2 Mối liên hệ phân tử chủng ASFV Trình tự đầu 3’ đoạn gien B646L (p72) chủng ASFV thực địa xây dựng sinh dòng với 42 chủng tham khảo (Bảng 2) đại diện cho 24 kiểu gen (Hình 3) Cây sinh dịng cho thấy tất 10 chủng ASFV khảo sát thuộc genotype II có quan hệ gần mặt phân tử với chủng Trung Quốc năm 2019 (China/2018, MH722357; China/ Wuhan/2019, MN393476), Miền Bắc Việt Nam (VN/Pig/Hanoi/2019, MT332151; VN/Pig/NgheAn/2019, MT180393) chủng châu Âu (Georgia 2007, NC 044959; Belgium/Etalle/2018, MK543947; Poland/2018, MT847621) Mặc dù Sự phân tách vào nhánh nhỏ ghi nhận khảo sát chủng Việt Nam (VN/ Pig/NgheAn/2019, MT180393) Trung Quốc (China/Wuhan/2019, MN393476) Hình Cây sinh dịng dựa đoạn gen B646L (p72) xây dựng theo phương pháp Neighbor Joining model phần mềm Mega X với giá trị bootstrap 1000 73 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Trung Quốc quốc gia láng giềng có đường biên giới tiếp giáp với tỉnh phía Bắc Việt Nam Việc giao thương, trao đổi hàng hóa động vật sản phẩm từ động vật diễn thường xuyên (FAO, 2019), gây khó khăn kiểm sốt dịch bệnh Đặc điểm dịch tễ học phức tạp ASFV, lây nhiễm xuyên quốc gia vùng địa lý thường qua đường di chuyển heo rừng, đường vận chuyển heo sống, sản phẩm từ thịt heo, di chuyển người (Guinat ctv, 2016) Trong đó, nguồn truyền lây ASFV có khả cao, yếu quốc gia cho sản phẩm thịt heo nhiễm vi-rút (Kolbasov ctv, 2017) Dịch bùng phát hai tỉnh Phía Bắc Việt Nam (Le ctv, 2019), dự đốn có nguồn gốc ASFV lây truyền từ Trung Quốc (FAO, 2019) Các chủng ASFV thu thập Miền Bắc (Le ctv., 2019; Mai ctv., 2021), Miền Nam (Nguyễn Chế Thanh ctv., 2021) nghiên cứu Việt Nam có tương đồng hồn tồn với so sánh đoạn gen mã hóa p72 (B646L) Hơn nữa, triệu chứng lâm sàng, bệnh tích heo trùng khớp với cơng bố trước đây, đặc trưng gây bệnh ASFV có độc lực cao nhất, thuộc genotype II TÀI LIỆU THAM KHẢO Aguero, M., Fernandez, J., Romero, L., Sanchez Mascaraque, C., Arias, M., & Sanchez-Vizcaino, J M (2003) Highly Sensitive PCR Assay for Routine Diagnosis of African Swine Fever Virus in Clinical Samples Journal of Clinical Microbiology, 41(9), 4431–4434 Achenbach, J E., Gallardo, C., NietoPelegrín, E., Rivera-Arroyo, B., DegefaNegi, T., Arias, M., … & Sánchez-Vizcaíno, J M (2016) Identification of a New Gienotype of African Swine Fever Virus in Domestic Pigs from Ethiopia Transboundary and Emerging Diseases, 64(5), 1393–1404 Borca, M V, Ramirez-Medina, E., Silva, E., Vuono, E., Pruitt, S., Lauren, G H., et al (2020) Development of a Highly Effective African Swine Fever Virus Vaccine by Deletion of the I177L Gene Results in Sterile Immunity against the Current Epidemic Eurasia Strain Journal of Virology, 94(7) IV KẾT LUẬN Bastos, A D S., Penrith, M.-L., Crucière, C., Edrich, J L., Hutchings, G., Roger, F., Couacy-Hymann E.,Thomson, R G (2003) Gienotyping field strains of African swine fever virus by partial p72 giene characterisation Archives of Virology, 148(4), 693–706 Tỷ lệ nhiễm ASFV cao (79,2%) heo có biểu lâm sàng bệnh tích nghi ngờ thu thập từ ổ dịch Các chủng ASFV thuộc genotype II, tương đồng gen cao với chủng Miền Bắc (Việt Nam) Trung Quốc năm 2018 2019 Boshoff, C I., Bastos, A D S., Gerber, L J., & Vosloo, W (2007) Gienetic characterisation of African swine fever viruses from outbreaks in southern Africa (1973–1999) Veterinary Microbiology, 121(1-2), 45–55 Lời cảm ơn: Nghiên cứu phần nhiệm vụ khoa học công nghệ cấp sở mã số CS-SV20-CNTY-01, cấp kinh phí Trường Đại học Nơng Lâm TP HCM Dixon, L K., Chapman, D A G., Netherton, C L., & Upton, C (2013) African swine fever virus replication and gienomics,, Virus Research, 173(1), 3–14 74 Dixon, L K., Stahl, K., Jori, F., Vial, L., & KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Pfeiffer, D U (2020) African Swine Fever Epidemiology and Control Annual Review of Animal Biosciences, 8(1) doi:10.1146/ annurev-animal-021419-083741 Đỗ Tiến Duy Nguyễn Phạm Huỳnh (2018) Thực hành Chẩn đoán bệnh học truyền nhiễm heo Nhà xuất Nơng nghiệp, Thành phố Hồ Chí Minh, 164-178 FAO (2019) African Swine Fever threatens People’s Republic of China – A rapid risk assessment of ASF introduction 10 Kolbasov, D., Titov, I., Tsybanov, S., Gogin, A., & Malogolovkin, A (2018) African Swine Fever Virus, Siberia, Russia, 2017 Emerging Infectious Diseases, 24(4), 796– 798 11 Guinat, C., Gogin, A., Blome, S., Keil, G., Pollin, R., Pfeiffer, D U., & Dixon, L (2016) Transmission routes of African swine fever virus to domestic pigs: current knowledge and future research directions Veterinary Record, 178(11), 262–267 12 Lopez-Otin C, Freije JMP, Parra F, Mendez E, Vi˜ nuela E (1990) Mapping and sequence of the giene coding for protein p72, the major capsid protein of African swine fever virus Virology, 175: 477–484 13 Le, V P., Jeong, D G., Yoon, S.-W., Kwon, H.-M., Trinh, T B N., Nguyen, T L., Nga, T T B., Oh, J., Joon, B K., Kwang, M C., Tuyen, N V., Eunhye, B., Hang, T T V., Minjoo, Y., Woonsung, N., Song, D (2019) Outbreak of African Swine Fever, Vietnam, 2019 Emerging Infectious Diseases, 25(7), 1433-1435 14 Mai, N T A., Vu, X D., Huyen, N T T., Tam, V N., Bich, T T N., Yong, J K., HyunJoo, K., KiHyun C., Lan, N T., Nga, B T T., Dae, G J., SunWoo, Y., Thang, T., Aruna, A., Daesub, S., Le, P V (2021) Molecular profile of African swine fever virus (ASFV) circulating in Vietnam during 2019 - 2020 outbreaks Archives of Virology, 166, 885–890 15 Nguyễn Chế Thanh, Nguyễn Quỳnh Như, Lại Công Danh Đỗ Tiến Duy, 2021 Một số đặc điểm bệnh Dịch tả heo Châu Phi qua khảo sát diễn biến ổ dịch Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y Tập XXVIII, số 2: 21-29 16 OIE (2019) African Swine Fever (ASF) situation https://www.oie.int/fileadmin/ Home/eng/Health_standards/tahm/3.08.01_ ASF.pdf?fbclid=IwAR0xd3mFl ultXzSGmCqjLdJVzgV6a13SrJI-sWi84jwKuFRfqHcnOsg 17 Nguyễn Tất Toàn, Đỗ Tiến Duy, Nguyễn Thị Phước Ninh, Nguyễn Thị Thu Năm Lê Thanh Hiền (2019) Tổng quan bệnh heo năm gần Việt Nam từ nghiên cứu đến lâm sàng Kỷ yếu hội nghị khoa học Chăn ni –Thú y tồn quốc 2019, 31-33 Ngày nhận 14-6-2021 Ngày phản biện 22-7-2021 Ngày đăng 15-8-2021 75 ... Mã số VN/DN 2020 Việt Nam II - VN/BP 2019 Việt Nam II - VN/BD 2020 Việt Nam II - VN/LA 2019 Việt Nam II - VN/TG 2020 Việt Nam II - VN/HCM 2019 Việt Nam II - VN/VL 2019 Việt Nam II - VN/CT 2019. .. VN/CT 2019 Việt Nam II - VN/BRVT 2019 Việt Nam II - VN/BenTre 2020 Việt Nam II - Hanoi /2019 2019 Việt Nam II MT332151 NgheAn /2019 2019 Việt Nam II MT180393 VN/Pig/NA/1393 2020 Việt Nam II MN711740... thực từ 03 /2020 đến 03/2021 với hai nội dung (1) Xác định tỷ lệ nhiễm ASFV heo ổ dịch tỉnh thành khảo sát (2) Phân tích đặc điểm di truyền chủng ASFV thu thập 2.1 Bố trí nghiên cứu thu thập mẫu Heo