Bài viết khảo sát đặc điểm di truyền học phân tử của bệnh bạch cầu cấp tiền tủy bào (APL: Acute Promyelocytic Leukemia), tạo cơ sở theo dõi bệnh tồn lưu tế bào ác tính (MRD: Minimal residual disease) bằng phương pháp PCR định lượng tại bệnh viện Truyền máu Huyết học TP. Hồ Chí Minh.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 ĐẶC ĐIỂM DI TRUYỀN HỌC PHÂN TỬ CỦA BỆNH BẠCH CẦU CẤP TIỀN TỦY BÀO Nguyễn Quốc Dũng*, Huỳnh Hữu Thân**, Lê Nguyễn Kim Dung*, Phan Cao Thanh Thảo*, Phan Thị Xinh**, Nguyễn Tấn Bỉnh*** TÓM TẮT Mục tiêu: Khảo sát đặc điểm di truyền học phân tử bệnh bạch cầu cấp tiền tủy bào (APL: Acute Promyelocytic Leukemia), tạo sở theo dõi bệnh tồn lưu tế bào ác tính (MRD: Minimal residual disease) phương pháp PCR định lượng bệnh viện Truyền máu Huyết học TP Hồ Chí Minh Phương pháp: Ứng dụng kỹ thuật FISH để khảo sát chuyển vị t(15;17) kỹ thuật PCR phiên mã ngược (RT-PCR) để khảo sát tổ hợp gen PML/RARA 130 bệnh nhân (BN) chẩn đoán APL từ tháng 02/2012 đến tháng 02/2018 Kết quả: Trong 130 BN khảo sát, 106/111 BN (95,50%) có chuyển vị t(15;17) kỹ thuật FISH, 119/122 BN (97,54%) có biểu tổ hợp gen PML/RARA kỹ thuật RT-PCR 98/103 BN (95,15%) biểu đồng thời chuyển vị t(15;17) tổ hợp gen PML/RARA kỹ thuật Trong đó, đặc biệt có trường hợp có biểu tổ hợp gen PML/RARA kiểu bcr3 kỹ thuật RT-PCR không phát chuyển vị t(15;17) kỹ thuật FISH; trường hợp có chuyển vị t(15;17) kỹ thuật FISH không phát tổ hợp gen PML/RARA kỹ thuật RT-PCR; trường hợp phát có bất thường NST 17 kỹ thuật FISH kết RT-PCR âm tính Kết luận: Sự kết hợp kỹ thuật FISH RT-PCR giúp khảo sát xác bất thường NST 15 17, tránh bỏ sót trường hợp chuyển vị t(15;17) kiểu tổ hợp gen PML/RARA không chuẩn gặp Từ đó, giúp bác sĩ đưa định điều trị xác kịp thời, góp phần giảm tỷ lệ tử vong đông máu nội mạch lan tỏa (DIC) tạo sơ sở theo dõi MRD hiệu quả, nâng cao tỷ lệ lui bệnh hoàn toàn cho BN Từ khóa: bạch cầu cấp dòng tủy tiền tủy bào, FISH, RT-PCR, t(15;17), PML/RARA ABSTRACT CYTOGENETIC AND MOLECULAR CHARACTERISTICS OF ACUTE PROMYELOCYTIC LEUKEMIA Nguyen Quoc Dung, Huynh Huu Than, Le Nguyen Kim Dung, Phan Cao Thanh Thao, Phan Thi Xinh, Nguyen Tan Binh * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 – No - 2019: 310 – 316 Purpose: To evaluate cytogenetics and molecular characteristics in acute promyelocytic leukemia (APL), for monitoring minimal residual disease (MRD) by quantitative PCR method at Blood Transfusion Hematology hospital Methods: Using fluorescence in situ hybridization (FISH) for detecting translocation t(15;17) and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for investigating PML/RARA fusion gene in 130 APL patients diagnosed during period of time from February 2012 to February 2018 Results: In total samples examined, FISH analysis revealed the translocation t(15;17) in 106 of 111 patients (95.5%) and RT-PCR analysis showed PML/RARA fusion gene in 119 of 122 patients (97.54%) In addition, the results of a simultaneous application of FISH and RT-PCR analysis in 103 APL cases reported 98 positive cases *Bệnh viện Truyền máu - Huyết học **Đại học Y dược TP Hồ Chí Minh ***Sở Y tế TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS.TS.BS Phan Thị Xinh ĐT: 0932728115 Email: phanthixinh@gmail.com 310 Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6* 2019 Nghiên cứu Y học in both techniques (95%) Unexpectedly, two cases had expression of bcr-3 iso-form PML/RARA fusion gene by RT-PCR but the translocation t(15;17) could not be identified in FISH result In contrast, one case found the translocation t(15;17) by the FISH analysis but RT-PCR did not demonstrate the PML/RARA fusion gene and two another cases having variant translocation t(v;17), detected by FISH technique, were negative RT-PCR for PML/RARA Conclusions: Both RT-PCR and FISH techniques play a key role in diagnosing of APL cases The combined use of the FISH and RT-PCR allows detect variant translocations or abnormal fusion genes being discovered in small subsets of APL Futhermore, both of them are reliable tools for the monitoring of MRD and of its significance with respect to improving the outcome of the disease Keywords: acute promyelocytic leukemia, FISH, RT-PCR, t(15;17), PML/RARA nhanh tổ hợp gen PML/RARA kỹ thuật ĐẶT VẤN ĐỀ PCR phiên mã ngược (RT-PCR: Reverse Bạch cầu cấp tiền tủy bào (APL: Acute transcription polymerase chain reaction) Promyelocytic Leukemia) dạng bạch phát chuyển vị t(15;17) kỹ thuật lai cầu cấp dòng tủy (AML: Acute Myeloid chỗ phát huỳnh quang (FISH: Fluorescence in Leukemia) Theo hệ thống phân loại FAB, AML situ hybridiztion), dấu ấn đặc hiệu chia thành nhóm từ M0-M7, gặp AML-M3, giúp định điều trị kịp APL thuộc phân nhóm AML-M3(1) thời, tránh biến chứng gây tử vong sớm cho APL đặc trưng chuyển đoạn liên quan bệnh nhân (BN)(2) đến gen PML nhiễm sắc thể (NST) 15 gen Trong nghiên cứu này, ứng dụng RARA NST 17 tạo tổ hợp gen PML/RARA kỹ thuật FISH RT-PCR để khảo sát đặc Các điểm gãy NST 17 nằm intron điểm di truyền chuyển vị t(15;17)(q24;q21) gen RARA Trong đó, gen PML NST tổ hợp gen PML/RARA BN chẩn 15 có vùng điểm gãy: Vùng thứ vùng đoán AML-M3 dựa vào kết tủy đồ Bệnh bcr1 nằm intron gen PML chiếm tỉ lệ viện Truyền máu Huyết học TP Hồ Chí Minh khoảng 45%-55%, vùng thứ hai vùng bcr2 (BV.TMHH TP HCM) nhằm góp thêm liệu exon chiếm khoảng 8%-10% vùng thứ ba việc chẩn đoán điều trị cho BN vùng bcr3 intron chiếm khoảng 37%-45% ĐỐITƯỢNG- PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU Do vị trí gãy vùng bcr1, bcr2 bcr3 khác nên tạo tổ hợp gen Đối tượng nghiên cứu PML/RARA có độ dài khác tương ứng với Các BN chẩn đoán bệnh AML-M3 dạng dài, dạng biến thể dạng ngắn(2,7) tủy đồ BV TMHH TP HCM từ tháng APL chiếm tỷ lệ khoảng 5%-10% AML Bệnh cảnh thường gặp rối loạn q trình đơng máu gây tình trạng xuất huyết đe dọa tính mạng(7) Hiện nay, nhờ áp dụng phác đồ có alltrans-retinoic acid (ATRA) arsenic trioxide (ATO) kết hợp với hóa trị liệu cổ điển làm giảm tỷ lệ tử vong tăng tỉ lệ thời gian sống kéo dài lên đến 90%(8) Trước đây, chẩn đốn AML-M3 thường dựa vào hình thái tế bào tủy đồ với dấu hiệu rối loạn đông máu lâm sàng Ngày nay, với phát triển kỹ thuật sinh học phân tử cho phép chẩn đốn 02/2012 đến 02/2018 có gởi mẫu máu tủy xương để khảo sát chuyển vị t(15;17) kỹ thuật FISH và/hoặc tổ hợp gen PML/RARA kỹ thuật RT-PCR Phương pháp nghiên cứu Thiết kế nghiên cứu Mô tả hàng loạt ca Phương pháp tiến hành Kỹ thuật FISH và/hoặc RT-PCR Kỹ thuật FISH Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học Thu hoạch trực tiếp ml mẫu máu ngoại vi 311 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 tủy xương BN AML-M3 chống đông heparin để thu nhận tế bào bạch cầu cố định tế bào tiêu Tiến hành biến tính lai hóa tiêu 75oC phút với đoạn dò đặc hiệu PML/RARA Translocation, Dual Fusion Probe (Cytocell) Tiếp tục ủ qua đêm 37oC 18 đến 20 Sau ủ, rửa tiêu để loại bỏ mẫu dò không bắt cặp đặc hiệu dung dịch 0,4 x SSC/0,3% NP-40 73oC phút, dung dịch x SSC/0,1% NP-40 nhiệt độ phòng phút Để khơ tiêu phủ 15µl dung dịch DAPI counterstain Phân tích xác định bất thường nhiễm sắc thể 200 tế bào kính hiển vi huỳnh quang BX51 (Olympus) (Hình 1) Đoạn dò vùng 15q24.1 gồm đoạn dài 151kb hướng từ tâm tới gen PML đoạn dài 174 kb hướng từ đầu tận tới gen PML; gắn chất phát huỳnh quang màu đỏ (A) Đoạn dò vùng 17q21.1-q21.2 gồm đoạn dài 167kb hướng từ tâm tới gen RARA, phủ gen CASC3 đoạn dài 164kb phủ vùng đầu tận gen RARA, gen TOP2A IGFBP4; gắn chất phát huỳnh quang màu xanh (B) Hình Cấu trúc đoạn dò PML/RARA Hình Cấu trúc tổ hợp gen PML/RARA tương ứng với vùng điểm gãy gen PML nối với exon gen RARA (A) Kết RT-PCR phát tổ hợp gen PML/RARA với kích thước băng tương ứng (B) kít Invitrap Spin Universal RNA Mini kit Kỹ thuật RT-PCR (Stratec) từ 1x107 tế bào Sử dụng Thu nhận tế bào có nhân từ 18 mL máu PrimeScript™ RT Master Mix (Takara, Nhật) ngoại vi mL tủy xương chống chuyển RNA thành cDNA kiểm tra chất đông EDTA dung dịch Red blood cell lượng cDNA sử dụng gen ABL Phản ứng PCR lysis buffer 1X Sau đó, ly trích RNA 312 Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6* 2019 phát tổ hợp gen PML/RARA sử dụng 0,5 UI Gotaq Polymera (Promega) Chương trình luân nhiệt thực máy 2720 thermal cycler (ABI) Sau đó, sản phẩm điện di gel agarose quan sát kết hệ thống Gel Doc EQ (Biorad) Kết dương tính tổ hợp gen PML/RARA với kiểu bcr1 bcr3 có kích thước băng tương ứng 688 bp 289 bp Điểm gãy exon thay đổi nên kiểu bcr2 có kích thước băng thay đổi băng bcr1 bcr3 (Hình 2) KẾT QUẢ Từ tháng 02/2012 đến tháng 02/2018 có 130 BN chẩn đốn AML-M3, đề nghị xét nghiệm tìm chuyển vị t(15;17) và/hoặc tổ hợp gen PML/RARA Trong 130 BN, có BN khảo sát kỹ thuật FISH, 19 BN khảo sát kỹ thuật RT-PCR 103 BN khảo sát đồng thời kỹ thuật FISH RT-PCR Kết 111 BN có làm kỹ thuật FISH ghi nhận 106 BN xuất chuyển vị t(15;17), chiếm 95,50% Phân tích tổ hợp gen PML/RARA kỹ thuật RT-PCR ghi nhận 119/122 BN có biểu PML/RARA, chiếm 97,54% Trong 103 BN khảo sát bất thường NST 15 17 đồng thời kỹ thuật FISH RT-PCR, kết ghi nhận 98 BN có đồng thời chuyển vị t(15;17) biểu tổ hợp gen PML/RARA, chiếm tỷ lệ 95,15% Trong đó, BN có biểu PML/RARA kiểu bcr3 kỹ thuật RT-PCR không phát chuyển vị t(15;17) kỹ thuật FISH; BN xác định có chuyển vị t(15;17) kỹ thuật FISH RT-PCR không phát tổ hợp gen PML/RARA BN phát bất thường NST 17 kỹ thuật FISH RT-PCR cho kết âm tính tổ hợp gen PML/RARA (Bảng 1) Kết bất thường NST 15 17 nhận diện dựa vào tín hiệu tế bào: màu đỏ NST 15q24, màu xanh NST 17q21 màu vàng cho thấy có tổ hợp NST 15 17 (Hình 3) Nghiên cứu Y học Bảng 1: Kết xác định chuyển vị t(15;17) biểu tổ hợp gen PML/RARA kỹ thuật FISH RT-PCR 130 BN chẩn đốn AML-M3 BN có BN khơng có t(15;17)t(15;17)- Tổng số BN Kỹ thuật xác định PML/RARA PML/RARA (%) (%) (%) FISH 106 (95.50%) (4.50%) 111 (100%) RT-PCR 119 (97.54%) (2.46%) 122 (100%) FISH RT-PCR 98 (95.15%) (4.85%)* 103 (100%) *: Trong BN trên, có BN dương tính PML/RARA kiểu bcr3 khảo sát kỹ thuật RT-PCR kỹ thuật FISH khơng phát chuyển vị t(15;17); BN có chuyển vị t(15;17) kỹ thuật FISH RT-PCR không phát tổ hợp gen PML/RARA BN cho kết âm tính với PML/RARA RT-PCR FISH phát có bất thường NST 17 Trong 106 BN có chuyển vị t(15;17) 86 BN (81,13%) có chuyển vị chuẩn với kiểu tín hiệu quan sát gồm tín hiệu NST 15, tín hiệu NST 17 tín hiệu tổ hợp; 20 BN (18,87%) có chuyển vị khơng chuẩn, gồm kiểu tín hiệu bất thường mơ tả (Hình 4) Các kiểu bất thường đa dạng với nhiều tín hiệu thiếu tín hiệu NST 15, 17 tổ hợp NST 15 NST 17 Trong 20 BN có tín hiệu FISH dương khơng chuẩn, kiểu tín hiệu quần thể (QT): 1Đ-1X-2V 1Đ-1X-3V chiếm tỉ lệ cao (25%); kiểu tín hiệu 1Đ-1X-3V, 2Đ-1X-1V, 2Đ-2X-1V 1Đ2X-1V chiếm tỉ lệ thấp hơn, 20%, 15%, 15% 10%; tỉ lệ kiểu tín hiệu 2QT: 2Đ-2X1V 2Đ-5X-1V, 2QT: 1Đ-1X-2V 2Đ-2X-4V, 2Đ-3X-1V thấp nhất, chiếm 5% Tổ hợp gen PML/RARA nhận diện điện di sản phẩm RT-PCR so sánh với chứng dương (Hình 5) Kiểu bcr1 có sản phẩm điện di kích thước 688 bp, bcr3 có kích thước 289 bp, bcr2 có kích thước thay đổi nằm bcr1 bcr3 Trong 122 BN khảo sát kỹ thuật RT-PCR, 119 BN biểu tổ hợp gen PML/RARA có kết Hình Trong đó, 17 BN biểu kiểu bcr2 (14%), 41 BN biểu kiểu bcr3 (34%), 53 BN biểu kiểu bcr1 bcr2 (45%), BN biểu kiểu bcr1 bcr3 Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học 313 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 (1%), BN biểu kiểu bcr2 bcr3 (3%) BN biểu kiểu bcr1, bcr2 bcr3 (3%) Hình Kết khảo sát chuyển vị t(15;17) kỹ thuật FISH BN AML-M3 (A) BN APL-002 khơng có chuyển vị t(15;17) với kết cho tín hiệu bình thường gồm tín hiệu màu đỏ NST 15q24 tín hiệu màu xanh NST 17q21 (B) BN APL-008 có chuyển vị t(15;17) với dòng tế bào bất thường; dòng tế bào có chuyển vị t(15;17) chuẩn với tín hiệu màu đỏ NST 15q24, tín hiệu màu xanh NST 17q21 tín hiệu màu vàng tổ hợp NST 15 NST 17; dòng tế bào có chuyển vị t(15;17) khơng chuẩn với tín hiệu màu đỏ NST 15q24, tín hiệu màu xanh NST 17q21 tín hiệu màu vàng tổ hợp NST 15 NST 17 Hình Tỉ lệ kiểu tín hiệu dương khơng chuẩn chuyển vị t(15;17) kỹ thuật FISH Đỏ: tín hiệu NST 15q22, Xanh: tín hiệu NST 17q21.1, Vafng: tín hiệu tổ hợp t(15;17), QT: quần thể Hình Tổ hợp gen PML/RARA phát kỹ thuật RT-PCR 1: Bệnh nhân khảo sát gen ABL, 2: Bệnh nhân khảo sát PML/RARA (P: Chứng dương, N: Chứng âm, M: Thang chuẩn 100bp) A: Không phát tổ hợp gen PML/RARA B: Phát tổ hợp gen PML/RARA kiểu bcr1 bcr2 C: Phát tổ hợp gen PML/RARA kiểu bcr3 314 Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6* 2019 Hình Kết RT-PCR 119 BN biểu tổ hợp gen PML/RARA BÀN LUẬN Kết khảo sát từ tháng 02/2012 đến tháng 02/2018 cho thấy tỷ lệ phát chuyển vị t(15;17) kỹ thuật FISH 95,50%, gần tương đương với tỷ lệ phát tổ hợp gen PML/RARA kỹ thuật RT-PCR 97,54% Trong 130 BN khảo sát kỹ thuật FISH và/hoặc RT-PCR có 128 BN phát t(15;17) và/hoặc PML/RARA (chiếm 98,46%) cho thấy chuyển vị t(15;17) tổ hợp gen PML/RARA dấu ấn đặc trưng giúp chẩn đoán AML-M3 Tỉ lệ phù hợp với báo cáo giới(5,7) Trong 119 BN phát có tổ hợp gen PML/RARA, kiểu bcr1 chiếm tỉ lệ cao xuất kèm theo kiểu tổ hợp khác; kiểu bcr3 bcr2 vừa xuất đơn độc kèm với kiểu tổ hợp khác Sự xuất kiểu tổ hợp gen PML/RARA khác phù hợp với tính đa dòng ung thư nói chung bệnh bạch cầu cấp dòng tủy nói riêng(6,9) Trong 130 BN khảo sát, BN có kết FISH âm tính kỹ thuật RT-PCR phát tổ hợp gen PML/RARA BN dương tính kiểu bcr3 Trường hợp FISH âm RT-PCR dương báo nghiên cứu trước thay đoạn dò có kích thước nhỏ phát chuyển vị Nghiên cứu Y học t(15;17)(3) Để kiểm chứng lại kết FISH, chúng tơi tiến hành lai hóa lại mẫu BN đoạn dò có kích thước nhỏ phát có chuyển vị t(15;17) không chuẩn dạng gặp Dựa kết đó, chúng tơi cho trường hợp âm tính giả lai hóa với đoạn dò có kích thước lớn Ở trường hợp này, đoạn nhỏ gen RARA chèn vào gen PML NST 15, tạo tổ hợp gen PML/RARA Nhưng chuyển đoạn nhỏ gen RARA nên tín hiệu dương gen RARA bị lấn át tín hiệu dương gen PML sử dụng đoạn dò có kích thước lớn, khoảng 180 kb 335 kb hai bên gen PML NST 15 khoảng 700 kb NST 17 phủ tất điểm gãy gen RARA Trong đó, đoạn dò thiết kế gồm có đoạn dò có kích thước 151 kb 174 kb trải dài hai bên gen PML đoạn dò có kích thước 167 kb 164 kb bên gen RARA Do đó, phân tích kết FISH phát thấy có tín hiệu nhỏ gen RARA nằm vị trí tín hiệu gen PML Ngược lại, BN khác cho kết FISH thấy có chuyển vị t(15;17)(q24;q21) lại âm tính tổ hợp gen PML/RARA kiểm tra kỹ thuật RT-PCR Có thể kết RT-PCR âm tính giả vị trí điểm gãy gen PML vị trí khác, khơng phải vị trí thường gặp bcr1, bcr2 bcr3 khảo sát Một số điểm gãy khác gặp ghi nhận loại bỏ exon hay chèn thêm đoạn exon 7a(5) Hai BN khảo sát cho thấy âm tính với tổ hợp gen PML/RARA không phát chuyển vị t(15;17)(q24;q21) lại có tín hiệu nhiễm sắc thể 17q21, trisomy NST 17 chuyển vị NST 17 với NST khác Các tổ hợp gen khác RARA ghi nhận chiếm khoảng 2% như: ZBTB16-RARA với chuyển vị t(11;17)(q23;q21), NPM1-RARA với chuyển vị t(5;17)(q35;q21) hay STAT5BRARA với chuyển vị t(17;17)(q21;2q21.2) với bệnh cảnh lâm sàng tế bào học phù Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học 315 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 hợp với BN AML-M3(9) Ở trường hợp này, FISH RT-PCR khảo sát bất thường NST 15 17 âm tính, ghi nhận tín hiệu xanh NST 17 KẾT LUẬN Kết nghiên cứu cho thấy kiểu tổ hợp gen PML/RARA khác có tần suất xuất khác kết hợp kỹ thuật FISH RTPCR giúp khảo sát xác bất thường NST 15 17, tránh bỏ sót trường hợp chuyển vị t(15;17) không chuẩn gặp Từ đó, giúp bác sĩ đưa định điều trị xác kịp thời, góp phần giảm tỷ lệ tử vong đông máu nội mạch lan tỏa (DIC) tạo sở theo dõi MRD hiệu quả, nâng cao tỷ lệ lui bệnh hoàn toàn cho BN TÀI LIỆU THAM KHẢO Bennett JM, Catovsky D, Daniel MT, et al (1976) Proposals for the classification of the acute leukaemias French-AmericanBritish (FAB) co-operative group Br J Haematol, 33(4):451-8 Borrow J, Goddard AD, Gibbons B, et al (1992) Diagnosis of acute promyelocytic leukaemia by RT-PCR: detection of PMLRARA and RARA-PML fusion transcripts Br J Haematol, 82(3):529-40 316 10 Campbell LJ, Oei P, et al (2013) FISH Detection of PML-RARA Fusion in ins(15;17) Acute Promyelocytic Leukaemia Depends on Probe Size Biomed Res Int, 2013: 164501 Cull EH, Altman JK (2014) Contemporary treatment of APL Curr Hematol Malig Rep, 9(2):193-201 De Braekeleer E, Douet-Guilbert N, De Braekeleer M (2014) RARA fusion genes in acute promyelocytic leukemia: a review Expert Rev Hematol, 7(3):347-57 Douer D, Santillana S, Ramezani L, et al (2003) Acute promyelocytic leukaemia in patients originating in Latin America is associated with an increased frequency of the bcr1 subtype of the PML/RARα fusion gene British Journal of Haematology, 122:563–57 Grignani F, Fagioli M, Alcalay M, et al (1994) Acute promyelocytic leukemia: from genetics to treatment Blood, 83(1):10-25 Lo-Coco F, et al (2016) Current management of newly diagnosed acute promyelocytic leukemia Annals of Oncology, 27(8): 1474-1481 Van Dongen JJ, Macintyre EA, Gabert JA, et al (1999) Standardized RT-PCR analysis of fusion gene transcripts from chromosome aberrations in acute leukemia for detection of minimal residual disease Report of the BIOMED-1 Concerted Action: investigation of minimal residual disease in acute leukemia Leukemia, 13(12):1901-28 Zelent A, Guidez F, Melnick A, et al (2001) Translocations of the RARα gene in acute promyelocytic leukemia Oncogene, 20:7186–203 Ngày nhận báo: 02/08/2019 Ngày phản biện nhận xét báo: 06/09/2019 Ngày báo đăng: 15/10/2019 Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học ... STAT5BRARA với chuyển vị t(17;17)(q21;2q21.2) với bệnh cảnh lâm sàng tế bào học phù Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học 315 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019... the disease Keywords: acute promyelocytic leukemia, FISH, RT-PCR, t(15;17), PML/RARA nhanh tổ hợp gen PML/RARA kỹ thuật ĐẶT VẤN ĐỀ PCR phiên mã ngược (RT-PCR: Reverse Bạch cầu cấp tiền tủy bào. .. FISH RT-PCR để khảo sát đặc Các điểm gãy NST 17 nằm intron điểm di truyền chuyển vị t(15;17)(q24;q21) gen RARA Trong đó, gen PML NST tổ hợp gen PML/RARA BN chẩn 15 có vùng điểm gãy: Vùng thứ vùng