Xác định đặc điểm lâm sàng và di truyền học phân tử trong bạch cầu cấp dòng tủy (BCCDT) ở trẻ em có đa bội thể nhiểm sắc thể 8 (trisomy 8).
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG VÀ DI TRUYỀN HỌC PHÂN TỬ TRONG BẠCH CẦU CẤP DỊNG TỦY CĨ ĐA BỘI THỂ NHIỂM SẮC THỂ Ở TRẺ EM Đỗ Hoàng Cúc*, Nguyễn Minh Tuấn** TÓM TẮT Mục tiêu: Xác định đặc điểm lâm sàng di truyền học phân tử bạch cầu cấp dòng tủy (BCCDT) trẻ em có đa bội thể nhiểm sắc thể (trisomy 8) Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu hồi cứu, mô tả hàng loạt ca Kết quả: 180 bệnh nhân từ (0 đến 16 tuổi) chuẩn đốn bạch cầu cấp dòng tủy (BCCDT) từ tháng 1/2005 đến tháng 5/2012 Xét nghiệm di truyền học bao gồm nhiễm sắc thể đồ, kỹ thuật lai chỗ phát huỳnh quang thực tất bệnh nhân thu 19/180 (10,6%) bệnh nhi BCCDT có tam bội nhiễm sắc thể Các bệnh nhi có đặc điểm sau: tuổi trung bình mắc bệnh 7,6 ± 3,2 tuổi; tỉ lệ nam/nữ 1/0,9 Thường gặp triệu chứng lâm sàng sốt, thiếu máu, xuất huyết gan lách to BCCDT có +8 gặp nhiều thể bệnh M5 gần 1/3 trường hợp (31,6%), M2 chiếm 1/5 trường hợp (21,1%) Về đặc điểm di truyền học phân tử, ½ trường hợp (52,6%) có bất thường nhiễm sắc thể khác trisomy 8, đó, complex karyotype (là bất thường ≥ NST khác quần thể tế bào khảo sát) chiếm 15,8% Tất 19 bệnh nhân thực xét nghiệm đa hình đơn nucleotide ghi nhận thêm đột biến đoạn nhỏ 11 trường hợp (57,9%) trường hợp (21,1%) có bất thường nội nhiễm sắc thể “loss of heterozygosity” (hoặc homozygous, hmz) Kết giải trình tự gen hệ (next generation sequencing) vùng gen exome (whole exome sequencing) cho thấy tất trường hợp có đột biến sau: ASXL1, CEBPA, IDH2, KIT, KRAS, RUNX1,TET2, TP53, DNMT3A, IDH1, NPM1, FLT3 NRAS; đó, 14/19 ca (73,7%) tìm thấy ≥ đột biến kể Kết luận: Bạch cầu cấp dòng tủy với trisomy trẻ em chiếm khoảng 10%, thường gặp thể M5 M2 Bệnh thường kết hợp với nhiều bất thường NST đột biến gen khác ảnh hưởng đến tiên lượng bệnh nên cần thực phương pháp di truyền học sinh học phân tử để xác định xác tiên lượng bệnh Từ khóa: Bạch cầu cấp dòng tủy trẻ em, nhiễm sắc thể đồ, kỹ thuật lai chỗ phát huỳnh quang, đa hình đơn nucleotide, giải trình tự gen hệ vùng gen exome ABSTRACT CLINICAL, CYTOGENETIC AND MOLECULAR GENETIC CHARACTERISTICS OF PEDIATRIC ACUTE MYELOID LEUKEMIA WITH TRISOMY Do Hoang Cuc, Nguyen Minh Tuan * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 22 - No 5- 2018: 96 – 104 Objectives: To determine the clinical, cytogenetic and molecular genetic characteristics in pediatric acute myeloid leukemia (AML) with trisomy Methods: Retrospective descriptive study Results: 180 patients (0 to 16 years) were diagnosed with AML from January 2005 to May 2012 Cytogenetic testing including karyotype, fluorescence in situ hybridization was performed in all patients receiving * Đại học Y khoa Phạm Ngọc Thạch Tác giả liên lạc: ThS.BS.Đỗ Hoàng Cúc 96 ĐT: 0918684042 ** Bệnh viện Nhi Đồng 1-TPHCM Email: dohoangcuc@yahoo.com Chuyên Đề Nhi Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học 19/180 (10.6%) pediatric AMLs with trisomy These pediatric AMLs have the following characteristics: mean age at diagnosis was 7.6 ± 3.2 years; the ratio of male/female was 1/0.9 The most common clinical symptoms were fever, anemia, hemorrhage, and hepato/splenomegaly The most common type of AML with +8 was M5 in nearly 1/3 of cases (31.6%), followed by M2 accounted for 1/5 of cases (21.1%) In terms of molecular genetics, more than half (52.6%) had at least one chromosomal abnormality other than trisomy 8; in which complex karyotype (≥3 chromosome aberrations in the same clone) accounted for 15.8% All 19 of these patients received a single nucleotide polymorphism (SNP) array, in which, 11 cases (57.9%) were detected other microdeletions and cases (21.1%) had chromosome "loss of heterozygosis" (or homozygous, hmz) The results of the whole exome sequencing showed that all cases have at least one of the following mutations: ASXL1, CEBPA, IDH2, KIT, KRAS, RUNX1, TET2, TP53, DNMT3A, IDH1, NPM1, FLT3, and NRAS; Of these, 14/19 cases (73.7%) with ≥ coexisting mutations in the list above Conclusions: The frequency of trisomy in pediatric AML in this study was approximately 10%, the higher frequency of FAB M5 and M2 have been found It is often associated with a variety of chromosomal abnormalities and genetic mutations that affect the prognosis of the disease Therefore, cytogenetic and molecular genetics methods should be explored in AML with +8 to accurately determine disease prognosis Keywords: pediatric acute myeloid leukemia, chromosomes, fluorescence in situ hybridization, single nucleotide polymorphism array, whole exome sequencing học phân tử góp phần vào định điều trị ĐẶTVẤNĐỀ tiên lượng cần thiết Bạch cầu cấp dòng tủy (BCCDT) tăng sinh Mục tiêu nghiên cứu bất thường vô hạn tế bào non ác tính Mục tiêu tổng qt đầu dòng thuộc hệ tạo máu dòng tủy Ở trẻ em, Khảo sát đặc điểm lâm sàng, cận lâm BCCDT chiếm 15-20% tổng số bệnh lý máu sàng di truyền học phân tử bạch cầu (5,24) ác tính Đa bội thể nhiểm sắc thể số (trisomy cấp dòng tủy (BCCDT) trẻ em có đa bội thể 8, +8) bất thường số lượng nhiễm sắc thể nhiểm sắc thể (trisomy 8) từ tháng 1/2005 đến (NST) thường gặp BCCDT(32,35) tháng 5/2012 chiếm khoảng 10% đến 23%(3,9,21) tổng số Mục tiêu cụ thể bệnh nhân BCCDT Trong đó, có gần 1/3 Xác định tỉ lệ đặc điểm lâm sàng, cận lâm trường hợp có +8 bất thường NST sàng phân loại thể bệnh bệnh nhi (trisomy alone)(21,37) Diễn tiến tiên lượng chẩn đốn bạch cầu cấp dòng tủy có BCCDT với +8 trẻ em chưa rõ ràng phụ trisomy thuộc vào bất thường NST/đột biến kèm Xác định tỉ lệ đặc điểm di truyền học theo(17,34), số nghiên cứu ghi nhận tiên phân tử bệnh nhi bạch cầu cấp dòng có lượng xấu(8,10), đa số nghiên cứu trisomy 8, với phương pháp sử dụng bao khác chứng minh BCCDT có +8 tiên gồm: nhiễm sắc thể đồ, kỹ thuật lai chỗ phát lượng trung bình(4,11,14) Ngồi ra, số giả huỳnh quang, đa hình đơn nucleotide, giải trình thuyết cho +8 xem không đủ để tự gen hệ vùng gen exome gây BCCDT cần kết hợp với yếu tố di ĐỐITƯỢNG–PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU truyền học phận tử bất thường khác(29) Vì vậy, Thiết kế nghiên cứu việc khảo sát rõ đặc điểm bệnh nhi BCCDT có +8 kết hợp chẩn đoán tryền Chuyên Đề Nhi Khoa Phương pháp nghiên cứu mô tả hàng loạt ca 97 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Đối tượng nghiên cứu KẾT QUẢ Tất bệnh nhi ≤ 16 tuổi chẩn đoán bạch cầu cấp dòng tủy có trisomy Đặc điểm lâm sàng bệnh nhi BCCDT có +8 Sơ lược kỹ thuật di truyền học phân tử sử dụng nghiên cứu Nhiễm sắc thể đồ (karyotype) Để xác định đánh giá kích thước, hình dạng số lượng nhiễm sắc thể tế bào, kết khảo sát 20 tế bào thời kỳ phân bào Kỹ thuật lai chỗ phát huỳnh quang (fluorescence in situ hybridization, FISH) Khảo sát bất thường di truyền tế bào không phân bào, cách thực mạch đơi DNA tế bào đoạn dò tách nhiệt độ lai hóa với nhau; sau rửa đoạn dò thừa/lai hóa khơng đặc hiệu; nhuộm nhân DAPI khảo sát kính hiển vi huỳnh quang với bước sóng phù hợp 200 tế bào Đa hình đơn nucleotide (single nucleotide polymorphism array, SNP-array) Khảo sát toàn NST, kỹ thuật dựa vào DNA microarray (850K, Affmetrix), đoạn DNA cắt nhỏ cho lai với đoạn dò thư viện DNA xếp theo matrix Giải trình tự gen hệ vùng gen exome (whole exome sequencing, WES) Xác định trình tự nucleotide phân tử DNA, giải mã vùng gen exome (gen dịch mã hay gen biểu hiện) Kỹ thuật sử dụng máy giải trình tự gen Illumina MiSeq Chất lượng độ tin cậy đươc kiểm tra lại Illumina Analysis Viewer (Illumina, Hayward, USA) Số liệu thu phân tích chương trình NextGENe software V2.4.2 (Next generation sequencing software for biologists) Những đột biến (potential mutations) tìm dựa vào phân tích chương trình Illumina VariantStudio™ 3.0 tiêu chuẩn Hiệp hội Hoa kì gen, sinh học phân tử bệnh học 98 Bênh nhi chẩn đoán BCCDT (theo tiêu chuẩn WHO(2)) Karyotype thực 100% bệnh nhân thu 19/180 (10,6%) bệnh nhi BCCDT có +8 Các đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng phân loại thể bệnh 19 bệnh nhi trình bày bảng Bảng Đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng phân loại BCCDT có +8 (n=19) Số bệnh Tỉ lệ (%) nhân Đặc điểm Tuổi trung bình ± Độ lệch chuẩn Tuổi trung vị Tuổi 0-6 tuổi Nhóm >6-10 tuổi tuổi >10 tuổi Giới Nam/Nữ Sốt Thiếu máu Lâm sàng Xuất huyết Gan /hoặc lách to Cận lâm sàng < 50 Bạch cầu 50 đến 100 (x10 /µL) >100 10 100 Hiện diện Tế bào non máu ngoại vi Không diện % tế bào blast Trung bình ± Độ lệch tủy chuẩn Phân loại (FAB) 7,6 ± 3,2 (5 – 10) 42,1 36.8 21,1 10/9 52,6/47,3 47,3 13 68,4 11 57,9 10 52,6 14 10 12 73,7 15,8 10,5 52,6 31,6 15,8 21,1 63,2 15,8 47,4 10 52,6 57,5 ± 20,5 M0 5,3 M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 1 10,5 21,1 5,3 15,8 31,6 5,3 5,3 Tuổi trung bình lúc chẩn đoán BCCDT 7,6 ± 3,2 tuổi, nhóm tuổi chiếm tỉ lệ cao Chuyên Đề Nhi Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 nhỏ tuổi Tỉ lệ nam/nữ gần Về đặc điểm lâm sàng, khoảng 1/2 trường hợp có sốt, thiếu máu, xuất huyết, gan/lách to Ghi nhận gần 3/4 trường hợp (73,7%) có bạch cầu nhỏ 50 000/àL lỳc chn oỏn, hn ẵ trng hp (52,6%) cú Hb < g/dL, hầu hết trường hợp có giảm tiểu cầu (84,2%) Phân loại thể bệnh theo hình thái học, dựa theo nhóm nghiên cứu hợp tác Pháp-Mỹ-Anh (French-American-British, FAB), BCCDT có +8 nghiên cứu gặp thể bệnh M5 nhiều 6/19 trường hợp (31,6%), M2 với 4/19 trường hợp (21,1%) M4 3/19 trường hợp (15,8%) Ngoài ra, ghi nhận có 5,3% trường hợp M0, M1, M3, M6, M7 Đặc điểm chẩn đoán di truyền học phân tử Karyotype thực bệnh phẩm máu tủy tất trường hợp, phân loại 19 trường hợp có +8 +8 phát karyotype xác định lại kỹ thuật FISH (tỉ lệ dương tính > 30%) SNP-array tiến hành trường hợp BCCDT có +8 (bảng 2) Tỉ lệ quần thể tế bào mang trisomy thực karyotype tương đồng với tỉ lệ +8 phát FISH Theo karyotype, ghi nhận trung bình 81,3 ± 15% quần thể khảo sát có +8, theo FISH ghi nhận trung bình 82,6 ± 17,1% tế bào khảo sát có +8 Có 9/19 (47,4%) trường hợp có bất thường NST +8 (trisomy alone) (trường hợp - 9, bảng 2), 10/19 (52,6%) +8 kèm theo bất thường NST khác là: del5q, del17p, Nghiên cứu Y học inv(16), + 6, + 13, + 14, + 19, + 22, t (6; 9), t (9; 11), t (10; 11), t (15; 17), t (8; 21), t (11; 17) Trong có trường hợp complex karyotype (là bất thường ≥ NST khác quần thể tế bào khảo sát) (trường hợp 11, 15, 19, bảng 2) Kết SNA-array phát thêm 4/19 trường hợp (ca 7, 8, 13, 17, bảng 2) có bất thường nội NST loss of heterogenous (homozygous, hmz) Đồng thời ghi nhận thêm 13/19 ca (68,4%) có thêm đột biến đoạn không phát karyotype bao gồm: del2q (ca 17), del3q (ca 13), del5q (ca 6), del7q (ca 7,12), del9q (ca 1,14,18), biallelic del13q (ca 16), del15q (ca 5), del17p (ca 3,9), delXq (ca 10) Đặc điểm đột biến gen BCCDT +8 19 trường hợp BCCDT có +8 đươc thực WES, biến thể chép (transcript variant), kiểu đột biến (mutation type), thay đổi acid amine (AA change) tiên đoán khả gây bệnh đột biến (clinical significance) trình bày bảng Nghiên cứu ghi nhận đa số trường hợp có đột biến khác Các đột biến tìm thấy đa số missense 100% transcript variant tiên đoán gây bệnh (pathogenic) Tỉ lệ đột biến ghi nhận gen bao gồm ASXL1, CEBPA, IDH2, KIT, KRAS, RUNX1,TET2, WT1 TP53 10,5%, DNMT3A, IDH1 NPM1 chiếm tỉ lệ 15,8%, FLT3 21,1% đột biến chiếm tỉ lệ cao NRAS 26,3% Bảng Đặc điểm nhiễm sắc thể đồ, kỹ thuật lai chỗ phát huỳnh quang đa hình đơn nucleotide bệnh nhi BCCDT có +8 (n=19) Ca Karyotype 47, XY, +8[19] /46, XY [1] 47, XX, +8[20] 47, XY, +8[20] 47, XY, +8[13]/46, XY [7] 47, XX, +8[18]/46, XX [2] 47, XX, +8[15]/46, XX [5] 47, XY, +8[11]/46, XY [9] Chuyên Đề Nhi Khoa FISH (%) SNP-array 93 Arr (8) x3, 9q31.1(101,882,274-103,394,717)x1, (XY)x1 98.5 Arr (8)x3, 19p13.2(6,896,483-7,105,136)x 3, (X)x2 97 Arr (8)x3, 17p13.1(7,128,825-8,208,155)x1, (XY)x1 70 Arr (8)x3, (XY)x1 84 Arr (8)x3, 15q15.1(40,162,766-42,550,445)x1, (X)x2 81 Arr (8)x3, 5q31.2q31.3 (141,213,723-144,327,586)x1, (X)x2 Arr (8)x3, 12q13.11(42,304,125-48,713,787)x2 hmz, 62 7q22.1(101,627,204-104,036,866)x1, (XY)x1 99 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Ca Karyotype FISH (%) 47, XX, +8[12]/46, XX [8] 52 47, XY, +8[19]/46, XY [1] 93 10 47, XX, +8[15]/48, XY, +8, +14[5] 88 11 47, XX, +8[11]/46, XX, +8, +22, t(6;9) (p23; q34) [9] 93 12 47, XY, +8, t (9;11) (p22; q23) [20] 98 13 47, XX, +8, t (9;11) (p22; q23) [16]/46, XX, del (17) (p12p13) [4] 87 14 47, XY, +8[11]/46, XY, t (8;21) (q22; q22) [9] 49 15 16 48, XY, +8, +19, t (11;17) (q23; q25) [18]/46, XY, del (17) (p12p13) [2] 47, XX, +8, t (15;17) (q22; q12) [14]/47, XX, +6 [6] 86 81 17 47, XY, +8, inv(16) (p13q22)[20] 93 18 47, XX, +8[11]/46, XX, +13, t (10;11) (p12; q23) [9] 62 19 47, XY, +8, +22, del (5) (q12q34), der(17)t(11;17)(q12;q21)[17]/46,XY[3] 78 SNP-array Arr (8)x3, 13q12.11q34(20,587,851-115,103,529)x2 hmz, (X)x2 Arr (8)x3, 17p13.3 p11.2(12,344-21,452,282)x1, (XY) x1 Arr (8,14)x3, Xq22.3q28(108,515,336-155,254,881)x1, (Y)x1 Arr (8,22) x3,6p23p25.2(2,668,844-13,877,986)x1, 9q31.2q34.11(107,039,664-128,663,838)x1, (X)x2 Arr (8)x3, 7q21.3q22.1(94,860,650-99,591,233)x1, 9p22.3p21.1(14,985,416-.28,648,588)x1, 11q22.3q24.3(109,518,176-128,268,369)x1, (XY)x1 Arr (8)x3, 9p24.1p21.1(7,712,400-30,421,130)x1, 17p13.1p11.2(8,404,538-16,546,431)x1, 3p24.1p13(8,404,538-16,546,431)x2 hmz, (X)x2 Arr (8)x3, 8q22.2q24.22(8,404,538-16,546,431)x1, 21q21.3q22.3(30,133,097-42,289,479)x1, 9q21.13(72,873,469-75,252,127)x1, (XY)x1 Arr (8,19)x3, 17p13.1p12(17,584,963-30,392,555)x1, 11q21q22.3(95,668,601-114,418,794)x1, (XY)x2 Arr (8,6)x3, 13q14.2q14.3 (50,605,679-51,457,809)x0, 15q22.2q25.2(59,000,531-81400000)x1, (X)x2 Arr (8)x3, 2q21.1q23.3(131,603,226-151,087,000)x1, 14q11.2q32.33(22,416,910-107,287,663)x2 hmz, (XY)x1 Arr (8,13)x3, 10p12.1p11.22(28,948,379-32,687,497)x1, 9p22.2p21.1(17,442,000-31,745,845)x1, (X)x2 Arr (8,22) x3, 5q11.2q14.1(62,687,431-81,124,909)x1, 11q12.3q14.1(62,687,431-81,124,909) x1, 17pq11.1q21.2 (62,687,431-81,124,909) x1, (XY)x1 hmz: homozygous Bảng Các đột biến tìm thấy BCCDT +8 tiên lượng gây bệnh Ca 11 13 7 11 10 12 15 14 19 100 Gen NRAS NRAS NRAS NRAS NRAS DNMT3A DNMT3A DNMT3A DNMT3A IDH1 IDH1 IDH1 KIT KIT TET2 TET2 NPM1 NPM1 WT1 WT1 WT1 KRAS KRAS Transcript variant Mutation type c.183A>T Missense c.182A>G Missense c.181C>A Missense c.38G>A Missense c.35G>A Missense c.2645G>A Missense c.2645G>C Missense c.2546C>T Missense c.939G>A Nonsense c.395G>A Missense c.394C>T Missense c.394C>A Missense c.1655T>C Missense c.1854G>A Missense c.1955delC Deletion-Frameshift c.1924C>T Missense c.863_864insTAGG Insertion-Framshift c.869_873GGAGG>GTTTTTCAA Frameshift c.1395C>A Missense c.1385G>C Missense c.1384C>T Missense c.436G>A Missense c.35G>T Missense AA change p.Q61H p.Q61R p.Q61K p.G13D p.G12D p.R882H p.R882P p.P849L p.W313* p.R132H p.R132C p.R132S p.M552T p.M618I p.Q654fs*46 p.Q642* p.W288fs*12 p.W290fs*10 p.H465Q p.R462P p.R462W p.A146T p.G12V Clinical significance Pathogenic Pathogenic Pathogenic Pathogenic Pathogenic Pathogenic Pathogenic Pathogenic Pathogenic Pathogenic Pathogenic Pathogenic Pathogenic Pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic Chuyên Đề Nhi Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Ca 18 10 13 12 11 14 19 16 18 Gen FLT3_TKD FLT3_TKD FLT3_TKD FLT3_ITD IDH2 IDH2 TP53 TP53 CEBPA CEBPA ASXL1 ASXL1 RUNX1 RUNX1 Transcript variant c.2523C>A c.2522A>C c.2504A>T N/A c.515G>A c.419G>A c.818G>A c.800G>C c.962A>G c.899G>T c.1888_1910del23 c.2077C>T c.485G>A c.496C>G Nghiên cứu Y học Mutation type Missense Missense Missense AA change p.N841K p.N841T p.D835V N/A Missense Missense Missense Missense Missense Missense Deletion - Frameshift Nonsense Missense Missense p.R172K p.R140Q p.R273H p.R267P p.N321S p.R300L p.E635fs*15 p.R693* p.R162K p.R166G Clinical significance pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic pathogenic Neuroblastoma RAS viral (v-ras) oncogene homolog (NRAS), 1p13.2; DNA (cytosine-5)-methyltransferase alpha (DNMT3A), 2p23.3; Isocitrate dehydrogenase (NADP+), soluble (IDH1), 2q33.3; V-kit Hardy-Zuckerman feline sarcoma viral oncogene homolog (KIT), 4q12; Tet methylcytosine dioxygenase (TET2), 4q24; Nucleophosmin (NPM1), 5q35.1; Wilms tumor (WT1), 11p13; V-Ki-ras2 Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog (KRAS), 12p12.1; Fms related tyrosine kinase (FLT3), tyrosine kinase domain (FLT3-TKD), FLT3 Internal Tandem Duplication (FLT3-ITD), 13q12.2; Isocitrate dehydrogenase (NADP+), mitochondrial (IDH2), 15q26.1; Tumor protein p53 (TP53), 17p13.1; CCAAT/enhancer binding protein (C/EBP) alfa (CEBPA), 19q13; Additional sex combs like (ASXL1), 20q11.21; Runt-related transcription factor (RUNX1), 21q22.12 Missense: đột biến sai nghĩa, Nonsense: đột biến vô nghĩa Pathogenic: gây bệnh, Frameshift: đột biến lệch khung đọc, Insertion: đột biến gây chèn đoạn; FLT3-ITD: đột biến nhân đoạn nội Các transcript variant tìm thấy bảng kiểm tra lại giải trình tự gen Sanger BÀN LUẬN Nghiên cứu BCCDT có +8 chúng tơi có tuổi trung bình lúc chẩn đốn 7,6 tuổi, tương tự với kết nghiên cứu tác giả Laursen (6,7 tuổi nhóm BCCDT có +8) cao so với nhóm BCCDT khơng có +8 (4,7 tuổi)(21) Tác giả Krance(19) ghi nhận bệnh nhi BCCDT chung có tuổi trung bình 4,9 tuổi Điều đưa đến giả thuyết BCCDT có +8 phát trễ so với nhóm chung BCCDT Chúng ghi nhận thể M5 31,6% gặp nhiều nhất, M2 với 21,1% Tỉ lệ phù hợp với y văn(21,39) 36% M5, 14% M2 BCCDT trẻ em có +8 So sánh kết với BCCDT chung M5 dao động từ 12% đến 26% M2 từ 27% đến 34%(20,38) Đồng thời, thể bệnh M5, M2 có mối liên quan có ý nghĩa thống kê với BCCDT +8 trẻ em so với BCCDT trẻ em khơng có +8(21) Ngồi ra, tất thể bệnh từ M0 đến M7 Chuyên Đề Nhi Khoa tìm thấy nhóm BCCDT +8 nghiên cứu chúng tơi, thấy +8 đa dạng kiểu gen kiểu hình đưa đến diễn tiến tiên lượng bệnh khác Hiện nay, vai trò chẩn đốn di truyền học phân tử vơ quan trọng BCCDT(26,33) Karyotype xét nghiệm đầu tay chẩn đoán di truyền học BCCDT Theo y văn, tần suất bất thường nhiễm sắc thể đồ gặp 55 – 78% người lớn(7) 77 – 85% trẻ em(9,33) Trong nghiên cứu BCCDT trẻ em, +8 chiếm 14%(21) với 21,4% +8 alone lại +8 kết hợp với bất thường khác; tác giả(17) báo cáo nhóm BCCDT người lớn 30,1% +8 alone Kết thấp so với kết ghi nhận 47,4% + alone dựa vào karyotype Điều giải thích thật tỉ lệ + alone thấp nghiên cứu chiếm 15,6% (3/19) dựa thêm vào kỹ thuật SNP-array 101 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Ngoài ra, ghi nhận khoảng 1/7 trường hợp BCCDT + có complex karyotype, điều giải thích bất ổn định gen (genomic instability) dễ xảy có + Tỉ lệ thấp so với(17,25) BCCDT + người lớn, 1/5 trường hợp có bất ổn định gen FISH kỹ thuật dùng centromere probes để xác định lại đa bội thể NST số tế trạng thái bình thường khơng cần kích thích phân bào, nên khơng tốn thời gian nuôi cấy - ngày so với karyotype(16) FISH khảo sát 200 tế bào karyotype dựa 20 quần thể NST tế bào Các đặc điểm giúp giải thích tỉ lệ trisomy có khác phương pháp Ngoài ra, FISH khảo sát định vị đoạn dò đặc hiệu đưa vào, khơng khảo sát toàn NST karyotype(27) Hiện nay, SNP-array phương pháp khơng khảo sát tồn NST mà giúp phát trường hợp “loss of heterozygosity” (LOH) karyotype bình thường(30) Trong nghiên cứu ghi nhận đươc 4/19 trường hợp có “loss of heterozygosity”, yếu tố liên quan có ý nghĩa thống kê với tiên lượng xấu BCCDT trường hợp 13qLOH(15) Tác giả Vaniawala (2017)(37) chứng minh có khác biệt có ý nghĩa tiên lượng bệnh nhân BCCDT có bất thường NST +8 +8 kết hợp với di truyền phân tử thuận lợi khác Đồng thời nghiên cứu này(37) ghi nhận chuyển vị NST thường gặp BCCDT + t (8;21) 1,9% t (15;17) 8,3%; nghiên cứu ghi nhận 5,3% cho chuyển vị NST nêu Sự khác biệt do quần thể bệnh nhân nghiên cứu khác cỡ mẫu nhỏ Giới hạn karyotype không khảo sát bất thường NST nhỏ đến 10 Mb(31), trường hợp đột biến đoạn nhỏ (microdeletion), SNP-array với độ phân giải cao phát ra(22,36) Điều nhằm giải thích kết nghiên cứu chúng tơi phát thêm 68,4% trường hợp có microdeletion SNP- 102 array Trường hợp số bảng karyotype có +8 SNP-array phát thêm đột biến đoạn 5q31 nhỏ, theo y văn, BCCDT kết hợp với del5q có tiên lượng xấu(26) Bệnh sinh BCCDT theo nhiều giả thuyết cho xảy cần có loại đột biến (“two hits”)(18,13), thứ đột biến bất thường khả tăng sinh tế bào chết tế bào bất thường lộ trình tín hiệu tế bào (cellular signaling pathway) (như FLT3, KIT, NRAS, KRAS…)(12) hay đột biến gen ức chế sinh u (tumor suppressor) TP53 hay WT1; thứ hai đột biến bất thường nhân tố phiên mã (transcription factor) gây ngăn cản tế bào trưởng thành (gồm CEBPA, NPM1, RUNX1…) Những năm gần nghiên cứu ghi nhận chế bệnh sinh có tham gia đột biến điều chỉnh gen di truyền biểu sinh (epigentic) TET2, IDH1, IDH2 DNMT3A(28) Đột biến FLT3 ghi nhận BCCDT trẻ em FLT3 thụ thể tyrosine kinase tìm thấy chủ yếu tế bào blast dòng tuỷ chiếm tỉ lệ 16,5% có tiên lượng xấu trẻ em AML(23) Trong trường hợp số (xem bảng 2, bảng 3) bệnh nhi +8 normal karyotype, tìm thấy đột biến gen FLT3 (c.2504A>T) đồng nghĩa với tiên lượng xấu(1) Nghiên cứu(37,38) tìm thấy đột biến NMP1 gặp nhiều 27% tường hợp khơng kèm đột biến FLT3-ITD DNMT3A có diễn tiến bệnh tiên lượng thuận lợi Do đó, ca số nghiên cứu (xem bảng 2, bảng 3) ngồi +8, có normal karyotype đột biến NMP1 không đột biến FLT3-ITD DNMT3A có tiên lượng tốt Nghiên cứu(6) tìm thấy tỉ lệ đột biến gen bao gồm ASXL1, CEBPA, IDH2, KIT, KRAS, RUNX1, TET2, WT1 TP53 dao động từ 10% đến 15%, phù hợp với kết tìm thấy So sánh với nghiên cứu(5) với tỉ lệ đột biến WT1 người lớn 10% BCCDT trẻ em 13%, tương tương với ghi nhận Đồng thời, tỉ Chuyên Đề Nhi Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 lệ đột biến NRAS BCCDT người lớn 10% BCCDT trẻ em 20%, phù hợp với kết nghiên cứu chiếm tỉ lệ cao 26,3% KẾT LUẬN BCCDT +8 trẻ em gặp nhiều thể bệnh M5, phân có bất thường NST khác kèm, đột biến (NPM1, FTL3 NRAS) gặp nhiều Tóm lại, BCCDT +8 bệnh cảnh ác tính đa dạng bệnh sinh, có phạm vi thay đổi di truyền học phân tử lớn nên cần phải phân loại nhóm nhỏ theo đặc điểm bất thường NST/gen kèm theo nhằm đưa xác tiên lượng bệnh TÀI LIỆU THAM KHẢO Al-Issa K and Nazha A, (2016), Molecular landscape in acute myeloid leukemia: where we stand in 2016 Cancer Biology & Medicine, 13(4): p 474-482 Arber, D.A., et al., (2016), The 2016 revision to the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia Blood, 127(20): p 2391-405 Becker H et al (2010), Sole Trisomy In Patients (pts) with De Novo Acute Myeloid Leukemia (AML) Is Associated with Age-Independent Poor Outcome That Is Modified by Molecular Markers and with Unique Gene- and Microrna (miR)-Signatures: a Cancer and Leukemia Group B (CALGB) Study Blood, 116(21): p 577-577 Betts DR et al (2007), The prognostic significance of cytogenetic aberrations in childhood acute myeloid leukaemia A study of the Swiss Paediatric Oncology Group (SPOG) Eur J Haematol, 78(6): p 468-76 Creutzig, U et al (2012), Diagnosis and management of acute myeloid leukemia in children and adolescents: recommendations from an international expert panel Blood, 120(16): p 3187-205 Döhner H et al (2016), Diagnosis and management of AML in adults: 2017 ELN recommendations from an international expert panel ww.bloodjournal.org/content/early/2016/11/28/blood2016-08-733196 Dohner H et al (2017), Diagnosis and management of AML in adults: 2017 ELN recommendations from an international expert panel Blood, 129(4): p 424-447 Elliott MA et al (2002) The prognostic significance of trisomy in patients with acute myeloid leukemia Leuk Lymphoma, 43(3): p 583-6 Erik F et al (2003) Cytogenetic abnormalities in childhood acute myeloid leukaemia: a Nordic series comprising all children enrolled in the NOPHO‐93‐AML trial between 1993 and 2001 British Journal of Haematology, 121(4): p 566-577 10 Farag SS et al (2002) Isolated trisomy of chromosomes 8, 11, 13 and 21 is an adverse prognostic factor in adults with de novo acute myeloid leukemia: results from Cancer and Leukemia Group B 8461 Int J Oncol, 21(5): p 1041-51 Chuyên Đề Nhi Khoa Nghiên cứu Y học 11 Forestier E et al (2003) Cytogenetic abnormalities in childhood acute myeloid leukaemia: a Nordic series comprising all children enrolled in the NOPHO-93-AML trial between 1993 and 2001 Br J Haematol, 121(4): p 566-77 12 Frohling S et al (2005) Genetics of myeloid malignancies: pathogenetic and clinical implications J Clin Oncol, 23(26): p 6285-95 13 Gou H et al (2016) The prevalence and clinical profiles of FLT3ITD, FLT3-TKD, NPM1, C-KIT, DNMT3A, and CEBPA mutations in a cohort of patients with de novo acute myeloid leukemia from southwest China Tumour Biol, 37(6): p 7357-70 14 Grimwade D et al (2010) Refinement of cytogenetic classification in acute myeloid leukemia: determination of prognostic significance of rare recurring chromosomal abnormalities among 5876 younger adult patients treated in the United Kingdom Medical Research Council trials Blood, 116(3): p 354-65 15 Gronseth CM et al (2015) Prognostic significance of acquired copy-neutral loss of heterozygosity in acute myeloid leukemia Cancer, 121(17): p 2900-8 16 Hammer RD et al (2016) Is It Time for a New Gold Standard? FISH vs Cytogenetics in AML Diagnosis Am J Clin Pathol, 145(3): p 430-2 17 Jaff N et al (2007) Trisomy as sole anomaly or with other clonal aberrations in acute myeloid leukemia: impact on clinical presentation and outcome Leuk Res, 31(1): p 67-73 18 Kelly LM and Gilliland DG (2002) Genetics of myeloid leukemias Annu Rev Genomics Hum Genet, 3: p 179-98 19 Krance RA et al (2001) Experience with 2-chlorodeoxyadenosine in previously untreated children with newly diagnosed acute myeloid leukemia and myelodysplastic diseases J Clin Oncol, 19(11): p 2804-11 20 Kumar CC (2011) Genetic Abnormalities and Challenges in the Treatment of Acute Myeloid Leukemia Genes & Cancer, 2(2): p 95-107 21 Laursen AC et al (2016), Trisomy in pediatric acute myeloid leukemia: A NOPHO-AML study Genes Chromosomes Cancer, 55(9): p 719-26 22 Maciejewski JP and Mufti GJ (2008), Whole genome scanning as a cytogenetic tool in hematologic malignancies Blood, 112(4): p 965-74 23 Meshinchi S et al (2006) Clinical implications of FLT3 mutations in pediatric AML Blood, 108(12): p 3654-3661 24 Metayer C et al (2013) The Childhood Leukemia International Consortium Cancer Epidemiol, 37(3): p 336-47 25 Mrózek K (2008) Cytogenetic, molecular genetic, and clinical characteristics of acute myeloid leukemia with a complex karyotype in Seminars in oncology Elsevier 35(4): 365-77 26 Mrozek K., Heerema NA and Bloomfield CD (2004) Cytogenetics in acute leukemia Blood Rev, 18(2): p 115-36 27 Najfeld V (2003) Diagnostic application of FISH to hematological malignancies Cancer Invest, 21(5): p 807-14 28 Naoe T and Kiyoi H (2013) Gene mutations of acute myeloid leukemia in the genome era Int J Hematol, 97(2): p 165-74 29 Paulsson K et al (2003) Trisomy as the sole chromosomal aberration in myelocytic malignancies: a multicolor and locusspecific fluorescence in situ hybridization study Cancer Genet Cytogenet, 140(1): p 66-9 30 Pinheiro RF et al (2008) Association of loss of heterozygosity with cytogenetic abnormalities in acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome Braz J Med Biol Res, 41(7): p 610-4 103 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 31 Reddy UM et al (2012) Karyotype versus Microarray Testing for Genetic Abnormalities after Stillbirth The New England journal of medicine, 367(23): p 2185-2193 32 Sandahl JD et al (2014) Ploidy and clinical characteristics of childhood acute myeloid leukemia: A NOPHO-AML study Genes Chromosomes Cancer, 53(8): p 667-75 33 Schoch C and Haferlach T (2002) Cytogenetics in acute myeloid leukemia Current Oncology Reports, 4(5): p 390-397 34 Schoch C et al (2006) Impact of trisomy on expression of genes located on chromosome in different AML subgroups Genes Chromosomes Cancer, 45(12): p 1164-8 35 Shi L et al (2017) Current views of chromosomal abnormalities in pediatric acute myeloid leukemia (AML) European review for medical and pharmacological sciences, 21(4 Suppl): p 25-30 36 Simons A et al (2012) Genome-wide arrays in routine diagnostics of hematological malignancies Hum Mutat, 33(6): p 941-8 104 37 Vaniawala SN et al (2017) The possible significance of trisomy in acute myeloid leukemia International Journal of Research in Medical Sciences, 5(6): p 2652-2656 38 Walter RB et al (2013) Significance of FAB subclassification of “acute myeloid leukemia, NOS” in the 2008 WHO classification: analysis of 5848 newly diagnosed patients Blood, 121(13): p 2424-2431 39 Wolman SR et al (2002) Impact of trisomy (+8) on clinical presentation, treatment response, and survival in acute myeloid leukemia: a Southwest Oncology Group study Blood, 100(1): p 29-35 Ngày nhận báo: 14/06/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 14/07/2018 Ngày báo đăng: 30/08/2018 Chuyên Đề Nhi Khoa ... đầu dòng thuộc hệ tạo máu dòng tủy Ở trẻ em, Khảo sát đặc điểm lâm sàng, cận lâm BCCDT chiếm 15-20% tổng số bệnh lý máu sàng di truyền học phân tử bạch cầu (5,24) ác tính Đa bội thể nhiểm sắc thể. .. bệnh nhi ≤ 16 tuổi chẩn đốn bạch cầu cấp dòng tủy có trisomy Đặc điểm lâm sàng bệnh nhi BCCDT có +8 Sơ lược kỹ thuật di truyền học phân tử sử dụng nghiên cứu Nhiễm sắc thể đồ (karyotype) Để xác... có +8 Các đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng phân loại thể bệnh 19 bệnh nhi trình bày bảng Bảng Đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng phân loại BCCDT có +8 (n=19) Số bệnh Tỉ lệ (%) nhân Đặc điểm Tuổi