Xây dựng và thẩm định phương pháp lc ms ms định lượng đồng thời clopidogrel, aspirin và chất chuyển hoá acid salicylic trong huyết tương người

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG VĂN ĐỨC XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI CLOPIDOGREL, ASPIRIN VÀ CHẤT CHUYỂN HÓA ACID SALICYLIC TRONG HUYẾT TƯƠNG NGƯỜI LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG VĂN ĐỨC XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI CLOPIDOGREL, ASPIRIN VÀ CHẤT CHUYỂN HÓA ACID SALICYLIC TRONG HUYẾT TƯƠNG NGƯỜI LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC KIỂM NGHIỆM THUỐC - ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 Người hướng dẫn khoa học: TS Tạ Mạnh Hùng HÀ NỘI 2021 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Tạ Mạnh Hùng – Cục quản lý Dược -Bộ Y tế, người thầy tận tình hướng dẫn quan tâm giúp đỡ tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy cơng tác Bộ mơn Hóa Phân tích - độc chất dạy giúp đỡ thời gian học tập trường Tôi xin cảm ơn Ban giám đốc - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn tới đồng nghiệp Trung tâm đánh giá Tương đương sinh học - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương động viên, giúp đỡ chia sẻ với q trình thực luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè giúp đỡ động viên để tơi có đủ nghị lực, tâm hồn thành luận văn Một lần nữa, xin chân thành cảm ơn hỗ trợ, động viên, khích lệ Quý Thầy, Cơ, Cơ quan, Bạn bè Gia đình giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Hà nội, ngày 31 tháng 03 năm 2021 Học viên: Hoàng Văn Đức MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CLOPIDOGREL, ASPIRIN VÀ ACID SALICYLIC 1.1.1 Công thức cấu tạo tính chất lý hóa 1.1.1.1 Clopidogrel 1.1.1.2 Aspirin 1.1.1.3 Acid salicylic 1.1.2 Các đặc tính dược lý, dược động học clopidogrel, aspirin chất chuyển hóa acid salicylic 1.1.1.1 Dược lực học 1.1.1.2 Dược động học 1.1.3 Một số phương pháp định lượng clopidogrel, aspirin chất chuyển hóa acid salicylic dịch sinh học 1.1.4 Đặc điểm yếu tố ảnh hưởng đến nồng độ clopidogrel, aspirin acid salicylic mẫu huyết tương 1.2 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH THUỐC TRONG DỊCH SINH HỌC 1.2.1 Kỹ thuật xử lý mẫu 10 1.2.2 Phân tích thuốc dịch sinh học phương pháp sắc ký lỏng khối phổ hai lần (LC-MS/MS) với nguồn ion hóa kiểu phun điện tử (ESI) 11 1.2.2.1 Thiết bị sắc ký lỏng 12 1.2.2.2 Nguồn ion hóa kiểu phun sương điện tử (ESI – Electron spray ionization) 12 1.2.2.3 Bộ phận phân tích khối tứ cực chập ba 13 1.2.2.4 Bộ phận phát (detector) 14 1.2.3 Thẩm định phương pháp phân tích dịch sinh học 14 1.2.3.1 Độ chọn lọc 14 1.2.3.2 Giới hạn định lượng 14 1.2.3.3 Đường chuẩn khoảng tuyến tính 15 1.2.3.4 Độ đúng, độ xác ngày khác ngày 15 1.2.3.5 Ảnh hưởng mẫu 15 1.2.3.6 Độ thu hồi hoạt chất chuẩn nội 16 1.2.3.7 Đánh giá khả nhiễm chéo 16 1.2.3.8 Nghiên cứu độ ổn định hoạt chất dịch sinh học 16 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 18 2.1.1 Chất chuẩn, dung mơi, hóa chất 18 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ phân tích 18 2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 19 2.2.1 Mẫu huyết tương 19 2.2.2 Thuốc nghiên cứu (trong đánh giá tương đương sinh học) 19 2.3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.3.1 Xây dựng phương pháp phân tích 19 2.3.1.1 Xác định điều kiện khối phổ phân tích CPD, APR, SA 19 2.3.1.2 Khảo sát điều kiện sắc ký 20 2.3.1.3 Khảo sát qui trình xử lý mẫu huyết tương 20 2.3.1.4 Khảo sát lựa chọn chuẩn nội: 21 2.3.2 Thẩm định phương pháp phân tích 21 2.3.3 Xác định nồng độ CPD, APR, SA mẫu huyết tương người tình nguyện sử dụng chế phẩm kết hợp Clopidogrel/Aspirin 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 26 3.1 XÂY DỰNG VÀ TỐI ƯU PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 26 3.1.1 Xây dựng điều kiện khối phổ định lượng CPD, APR, SA 26 3.1.1.1 Điều kiện khối phổ phụ thuộc chất phân tích 26 3.1.1.2 Điều kiện khối phổ không phụ thuộc chất phân tích 33 3.1.2 Khảo sát điều kiện sắc ký 33 3.1.3 Xác định quy trình xử lý mẫu huyết tương 36 3.1.4 Khảo sát lựa chọn chuẩn nội 39 3.1.5 Kết xây dựng phương pháp LC-MS/MS định lượng CPD, APR SA huyết tương 40 3.2 KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 43 3.2.1 Sự phù hợp hệ thống LC-MS/MS 43 3.2.2 Độ đặc hiệu – chọn lọc phương pháp 44 3.2.3 Xác định giới hạn định lượng (LLOQ) 48 3.2.4 Xây dựng đường chuẩn khoảng tuyến tính 51 3.2.5 Độ đúng, độ xác phương pháp 53 3.2.5.1 Độ đúng, độ xác ngày khác ngày 53 3.2.5.2 Độ đúng, độ xác pha lỗng mẫu 55 3.2.6 Ảnh hưởng mẫu 55 3.2.7 Xác định tỷ lệ thu hồi chất phân tích chuẩn nội 56 3.2.8 Độ nhiễm chéo 58 3.2.9 Nghiên cứu độ ổn định 60 3.3 KẾT QUẢ ĐỊNH LƯỢNG CPD, APR, SA TRONG MẪU HUYẾT TƯƠNG NTN 66 CHƯƠNG BÀN LUẬN 70 4.1 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI CPD, APR SA TRONG HUYẾT TƯƠNG NGƯỜI 70 4.1.1 Điều kiện phổ khối MS/MS cho CPD, APR SA 70 4.1.2 Điều kiện sắc ký 71 4.1.3 Kỹ thuật xử lý mẫu 71 4.1.4 Thẩm định phương pháp phân tích 72 KẾT LUẬN 75 KIẾN NGHỊ 77 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AN : Chất phân tích (Analyte) APR AUC : Aspirin : Diện tích đường cong (Area under the curve) CCA Cmax CPD : Acid clopidogrel carboxylic : Nồng độ cực đại : Clopidogrel CTPT : Công thức phân tử CV : Hệ số biến thiên (Coefficient of Variation) DC : Mẫu pha loãng : Dược động học DĐH EMA ESI FRM GLM HPLC : Cơ quan quản lý Dược Châu Âu (European Medicines Agency) : Ion hóa kiểu phun điện tử (Electrospray ionization) : Furosemid : Glimepirid HQC : Sắc ký lỏng cao áp (High performance liquid chromatography) : Mẫu kiểm tra nồng độ cao (High quality control) HT : Huyết tương HTT : Huyết tương trắng IS : Chuẩn nội (Internal standard) LC-MS : Sắc ký lỏng khối phổ (Liquid chromatography – Mass spectrometry) LC-MS/MS : Sắc ký lỏng khối phổ hai lần (Liquid chromatography – tandem mass spectrometry) : Giới hạn định lượng (Lower limit of quantitation) LLOQ LQC m/z : Mẫu kiểm tra nồng độ thấp (Low quality control) : Khối lượng/điện tích MeCN : Acetonitril MF : Hệ số mẫu (Matrix factor) MQC : Mẫu kiểm tra nồng độ (Medium quality control) NTN : Người tình nguyện RSD SA : Độ lệch chuẩn tương đối (Relative standard deviation) SKD : Acid salicylic : Sinh khả dụng SKĐ : Sắc ký đồ SPE : Chiết pha rắn (Solid phase extraction) SQC : Mẫu kiểm tra bổ sung (Supplement quality control) STT TB : Số thứ tự TĐSH : Trung bình : Tương đương sinh học TLTK : Tài liệu tham khảo Tmax : Thời gian đạt nồng độ cực đại : Giới hạn định lượng (Upper limit of quantitation) ULOQ US-FDA : Cơ quan quản lý thuốc thực phẩm Mỹ (United States – Food and Drug Administration) : Thể tích/thể tích v/v DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Bảng 1.1- Một số phương pháp LC-MS/MS định lượng đồng thời CPD, APR, SA huyết tương Bảng 2.1 - Cách chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc dung môi 22 Bảng 2.2 - Cách chuẩn bị mẫu chuẩn huyết tương 23 Bảng 2.3 - Cách chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc kiểm tra dung môi 23 Bảng 2.4 - Cách chuẩn bị mẫu kiểm tra huyết tương 24 Bảng 2.5 - Cách chuẩn bị mẫu pha loãng huyết tương 24 Bảng 3.1 - Điều kiện khối phổ định lượng CPD, APR, SA IS 42 Bảng 3.2 - Sự phù hợp hệ thống LC-MS/MS CPD 44 Bảng 3.3 - Sự phù hợp hệ thống LC-MS/MS APR SA 44 Bảng 3.4 - Ảnh hưởng mẫu trắng, mẫu trắng thêm CCA thời điểm trùng thời gian lưu CPD IS 45 Bảng 3.5 - Ảnh hưởng mẫu trắng thời điểm trùng thời gian lưu APR, SA IS 45 Bảng 3.6 - Đáp ứng pic mẫu LLOQ Zero 49 Bảng 3.7 - Độ – độ xác mẫu LLOQ 50 Bảng 3.8 - Kết khảo sát mẫu thuộc đường chuẩn CPD 51 Bảng 3.9 - Kết khảo sát mẫu thuộc đường chuẩn APR 52 Bảng 3.10 - Kết khảo sát mẫu thuộc đường chuẩn SA 52 Bảng 3.11 - Kết thẩm định độ đúng, độ lặp lại ngày khác ngày -CPD 53 Bảng 3.12 - Kết thẩm định độ đúng, độ lặp lại ngày khác ngày –APR 54 Bảng 3.13 - Kết thẩm định độ đúng, độ lặp lại ngày khác ngày –SA 54 Bảng 3.14 - Độ đúng, độ xác khác pha lỗng mẫu 55 Bảng 3.15 - Kết đánh giá ảnh hưởng mẫu CPD 56 Bảng 3.16 - Kết đánh giá ảnh hưởng mẫu APR SA 56 Bảng 3.17 - Kết xác định tỷ lệ thu hồi CPD, APR, SA 57 Bảng 3.18 - Kết xác định tỷ lệ thu hồi IS 58 Bảng 3.19 - Kết đánh giá độ nhiễm chéo CPD chuẩn nội 59 Bảng 3.20 - Kết đánh giá độ nhiễm chéo APR, SA chuẩn nội 59 Bảng 3.21 - Kết độ ổn định dung dịch chuẩn gốc 60 Bảng 3.22 - Kết độ ổn định dung dịch IS làm việc nhiệt độ phòng 60 Bảng 3.23 - Kết độ ổn định mẫu HT nhiệt độ phòng 61 Bảng 3.24 - Kết độ ổn định mẫu huyết tương sau chu kỳ đông – rã đông 62 Bảng 3.25 - Kết độ ổn định dài ngày mẫu huyết tương 63 Bảng 3.26 - Kết độ ổn định mẫu sau xử lý nhiệt độ phòng 63 Bảng 3.27 - Kết độ ổn định mẫu sau xử lý autosampler 65 Bảng 3.28 - Nồng độ CPD, APR, SA huyết tương người tình nguyện C03 66 Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\VAL05122020.qld Page 58 of 75 Name: M-RE1 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 05-Dec-2020 Time: 19:28:13 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 2:B,4 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 8.197e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.829e+005 % 2.00 % 3.00 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 Aspirin 100 1.04 1.234e+005 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 9.640e+005 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.804e+005 % 3.00 % 1.00 % 1.04 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.63 50172 10241 4.899 3947.7 2 Glimepirid 491 > 126 2.18 10241 3 Aspirin 179 > 137 1.04 7223 26239 4 Salicylic acid 137 > 93 1.33 80458 26239 5 Furosemid 329 > 205 1.11 26239 10241.065 1.1 0.275 1516.2 3.066 2043.9 26239.260 1.1 %Dev 12.5 11.2 Name: M-RE2 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 05-Dec-2020 Time: 19:33:28 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 2:B,5 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 7.557e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.802e+005 % 2.00 % 3.00 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 Aspirin 100 1.04 1.163e+005 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 9.693e+005 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.769e+005 % 3.00 % 1.00 % 1.04 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.63 46516 10037 4.635 3734.3 2 Glimepirid 491 > 126 2.18 10037 3 Aspirin 179 > 137 1.04 6809 26296 4 Salicylic acid 137 > 93 1.32 82256 26296 5 Furosemid 329 > 205 1.10 26296 10036.878 1.1 0.259 1426.3 3.128 2085.5 26296.061 1.1 %Dev 10.3 11.5 Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\VAL05122020.qld Page 59 of 75 Name: M-RE3 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 05-Dec-2020 Time: 19:38:42 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 2:B,6 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 7.597e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.778e+005 % 2.00 % 3.00 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 Aspirin 100 1.04 1.226e+005 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 9.766e+005 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.875e+005 % 3.00 % 1.00 % 1.04 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.63 46956 9869 4.758 3833.8 2 Glimepirid 491 > 126 2.18 9869 3 Aspirin 179 > 137 1.04 7045 26683 4 Salicylic acid 137 > 93 1.33 81267 26683 5 Furosemid 329 > 205 1.11 26683 9869.111 1.1 0.264 1454.2 3.046 2030.0 26683.248 1.1 %Dev 8.4 13.1 Name: M-RE4 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 05-Dec-2020 Time: 19:43:49 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 2:B,7 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 8.608e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.809e+005 % 2.00 % 3.00 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 Aspirin 100 1.04 1.230e+005 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 9.632e+005 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.860e+005 % 3.00 % 1.00 % 1.04 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.63 52075 10084 5.164 4161.3 2 Glimepirid 491 > 126 2.18 10084 3 Aspirin 179 > 137 1.04 7104 26463 4 Salicylic acid 137 > 93 1.32 80365 26463 5 Furosemid 329 > 205 1.10 26463 10084.100 1.1 0.268 1478.5 3.037 2024.1 26463.426 1.1 %Dev 10.8 12.2 Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\VAL05122020.qld Page 60 of 75 Name: M-RE5 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 05-Dec-2020 Time: 19:48:57 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 2:B,8 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 7.851e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.767e+005 % 2.00 % 3.00 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 Aspirin 100 1.248e+005 1.03 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 9.717e+005 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.819e+005 % 3.00 % 1.00 % 1.04 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.63 48234 9803 4.920 3964.8 2 Glimepirid 491 > 126 2.18 9803 3 Aspirin 179 > 137 1.03 7186 26183 4 Salicylic acid 137 > 93 1.32 80432 26183 5 Furosemid 329 > 205 1.10 26183 9802.930 1.1 0.274 1511.5 3.072 2047.7 26182.951 1.1 %Dev 7.7 11.0 Name: M-RE6 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 05-Dec-2020 Time: 19:54:03 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 2:C,1 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 8.075e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.799e+005 % 2.00 % 3.00 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 Aspirin 100 1.196e+005 1.03 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 9.377e+005 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.768e+005 % 3.00 % 1.00 % 1.04 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.63 48765 10028 4.863 3918.5 2 Glimepirid 491 > 126 2.18 10028 3 Aspirin 179 > 137 1.03 6902 25795 4 Salicylic acid 137 > 93 1.32 78322 25795 5 Furosemid 329 > 205 1.10 25795 10027.972 1.1 0.268 1473.7 3.036 2023.8 25794.789 1.1 %Dev 10.2 9.4 Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\VAL05122020.qld Page 61 of 75 Name: H-RE1 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 05-Dec-2020 Time: 19:59:10 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 2:C,2 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 1.719e+006 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.811e+005 % 2.00 % 3.00 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 Aspirin 100 2.325e+005 1.03 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 1.665e+006 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.874e+005 % 3.00 % 1.00 % 1.04 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.63 103245 9987 10.338 8332.7 2 Glimepirid 491 > 126 2.18 9987 3 Aspirin 179 > 137 1.03 13640 26645 4 Salicylic acid 137 > 93 1.32 142215 26645 5 Furosemid 329 > 205 1.10 26645 9987.181 1.1 0.512 2816.8 5.337 3571.8 26644.994 1.1 %Dev 9.7 13.0 Name: H-RE2 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 05-Dec-2020 Time: 20:04:17 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 2:C,3 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 1.664e+006 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.853e+005 % 2.00 % 3.00 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 Aspirin 100 2.365e+005 1.03 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 1.728e+006 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.920e+005 % 3.00 % 1.00 % 1.03 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.63 101499 10327 9.828 7922.1 2 Glimepirid 491 > 126 2.18 10327 3 Aspirin 179 > 137 1.03 13908 26893 4 Salicylic acid 137 > 93 1.32 146411 26893 5 Furosemid 329 > 205 1.10 26893 10327.035 1.1 0.517 2845.6 5.444 3643.7 26892.754 1.1 %Dev 13.5 14.0 Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\VAL05122020.qld Page 62 of 75 Name: H-RE3 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 05-Dec-2020 Time: 20:09:23 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 2:C,4 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 1.624e+006 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.586e+005 % 2.00 % 3.00 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 Aspirin 100 2.333e+005 1.03 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 1.595e+006 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.705e+005 % 3.00 % 1.00 % 1.03 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.63 99025 8835 11.208 9034.7 2 Glimepirid 491 > 126 2.18 8835 3 Aspirin 179 > 137 1.03 13565 25391 4 Salicylic acid 137 > 93 1.32 133338 25391 5 Furosemid 329 > 205 1.10 25391 8834.906 1.0 0.534 2939.5 5.251 3513.9 25391.406 1.1 %Dev -2.9 7.6 Name: H-RE4 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 05-Dec-2020 Time: 20:14:31 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 2:C,5 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 1.751e+006 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.842e+005 % 2.00 % 3.00 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 Aspirin 100 2.401e+005 1.03 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 1.629e+006 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.857e+005 % 3.00 % 1.00 % 1.03 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.63 105934 10143 10.444 8418.2 2 Glimepirid 491 > 126 2.18 10143 3 Aspirin 179 > 137 1.03 13925 26573 4 Salicylic acid 137 > 93 1.32 137329 26573 5 Furosemid 329 > 205 1.10 26573 10143.280 1.1 0.524 2883.4 5.168 3457.9 26573.238 1.1 %Dev 11.4 12.7 Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\VAL05122020.qld Page 63 of 75 Name: H-RE5 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 05-Dec-2020 Time: 20:19:38 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 2:C,6 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 1.619e+006 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.642e+005 % 2.00 % 3.00 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 Aspirin 100 2.329e+005 1.03 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 1.597e+006 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.765e+005 % 3.00 % 1.00 % 1.03 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.63 98661 9119 10.819 8720.7 2 Glimepirid 491 > 126 2.18 9119 3 Aspirin 179 > 137 1.03 13484 25887 4 Salicylic acid 137 > 93 1.32 134799 25887 5 Furosemid 329 > 205 1.10 25887 9119.239 1.0 0.521 2866.0 5.207 3484.2 25887.346 1.1 %Dev 0.2 9.8 Name: H-RE6 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Validation\2020\CPD-APR-SA\VAL05122020.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 05-Dec-2020 Time: 20:24:46 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 2:C,7 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 1.693e+006 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.518e+005 % 2.00 % 3.00 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 Aspirin 100 2.283e+005 1.03 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 1.599e+006 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.846e+005 % 3.00 % 1.00 % 1.03 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.63 102442 8523 12.019 9688.3 2 Glimepirid 491 > 126 2.18 8523 3 Aspirin 179 > 137 1.03 13327 26328 4 Salicylic acid 137 > 93 1.32 134518 26328 5 Furosemid 329 > 205 1.10 26328 8523.274 0.9 0.506 2785.3 5.109 3418.4 26327.990 1.1 %Dev -6.4 11.6 PHỤ LỤC SẮC KÝ ĐỒ MỘT SỐ MẪU NTN Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\C03 loai S2.qld Page 18 of 44 Name: C03-LQC1 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 11:49:03 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:A,2 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 4.508e+003 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.593e+006 % 2.00 % 3.13 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 100 1.877e+003 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 8.688e+004 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.299e+005 % % % 1.00 3.48 2.00 3.00 3.00 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc %Dev 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 282 100789 0.003 28.5 -6.9 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 100789 100788.516 1.0 -3.4 3 Aspirin 179 > 137 1.00 117 24457 0.005 29.7 -1.3 4 Salicylic acid 137 > 93 1.29 6530 24457 0.267 220.4 3.5 5 Furosemid 329 > 205 1.06 24457 24456.506 1.0 -4.6 Name: C03-1-0 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 11:54:10 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:A,3 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 1.90 100 6.006e+002 % 2.00 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.735e+006 % 2.60 2.87 3.46 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 0.00 100 1.058e+002 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 9.514e+003 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.292e+005 % % 1.08 3.00 2.00 3.00 1.00 RT % 0.83 1.62 1.00 # Name Trace 1 Clopidogrel 322 > 212 Area IS Area 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 108209 3 Aspirin 179 > 137 1.02 24125 4 Salicylic acid 137 > 93 1.29 714 24125 5 Furosemid 329 > 205 1.07 24125 1.00 Response Conc %Dev 108208.906 1.0 3.7 0.000 1.2 0.030 6.0 24124.678 0.9 108209 -5.9 Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\C03 loai S2.qld Page 19 of 44 Name: C03-1-0,25 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 11:59:19 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:A,4 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 1.567e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.714e+006 % 2.00 % 2.00 3.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 100 8.749e+004 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 6.351e+005 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.227e+005 % % 3.00 1.00 % 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 10626 107713 0.099 1122.3 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 107713 3 Aspirin 179 > 137 1.00 5426 23740 4 Salicylic acid 137 > 93 1.29 47884 23740 5 Furosemid 329 > 205 1.06 23740 107712.836 1.0 0.229 1359.4 2.017 1800.8 23740.021 0.9 %Dev 3.2 -7.4 Name: C03-1-0,5 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 12:04:26 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:A,5 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 3.609e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.528e+006 % % Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 100 8.877e+004 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 1.354e+006 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 2.962e+005 % % % 1.00 2.00 3.00 2.00 3.00 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 24710 96335 0.256 2923.6 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 96335 3 Aspirin 179 > 137 1.00 5659 21690 4 Salicylic acid 137 > 93 1.29 103661 21690 5 Furosemid 329 > 205 1.07 21690 96334.969 0.9 0.261 1551.6 4.779 4295.2 21689.934 0.8 %Dev -7.7 -15.4 Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\C03 loai S2.qld Page 24 of 44 Name: C03-1-4 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 12:51:16 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:B,6 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 2.234e+004 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.688e+006 % 2.00 % 2.00 3.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 100 2.694e+002 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 1.088e+006 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.241e+005 % % 0.00 0.54 3.00 % 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 1525 106495 0.014 160.0 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 106495 106495.031 1.0 3 Aspirin 179 > 137 1.00 10 23875 0.000 3.6 4 Salicylic acid 137 > 93 1.28 83508 23875 3.498 3138.0 5 Furosemid 329 > 205 1.07 23875 23874.895 0.9 %Dev 2.0 -6.8 Name: C03-1-5 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 12:56:24 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:B,7 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 1.838e+004 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.776e+006 % 2.00 % 3.00 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 0.00 100 6.697e+001 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 7.925e+005 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.706e+005 % 3.00 % 0.91 1.28 1.54 1.00 % 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 1262 112695 0.011 124.3 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 112695 112694.742 1.1 3 Aspirin 179 > 137 0.98 27365 0.000 1.2 4 Salicylic acid 137 > 93 1.28 60527 27365 2.212 1976.7 5 Furosemid 329 > 205 1.07 27365 27364.900 1.1 %Dev 8.0 6.8 Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\C03 loai S2.qld Page 25 of 44 Name: C03-MQC1 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 13:01:39 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:B,8 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 5.400e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.893e+006 % % 2.00 2.00 3.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 100 7.017e+004 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 5.855e+005 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 4.140e+005 % % 3.00 1.00 % 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc %Dev 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 37416 119600 0.313 3566.6 -12.6 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 119600 119599.875 1.1 14.6 3 Aspirin 179 > 137 1.00 4417 30939 0.143 849.5 -15.2 4 Salicylic acid 137 > 93 1.28 43969 30939 1.421 1262.7 -11.0 5 Furosemid 329 > 205 1.06 30939 30938.635 1.2 20.7 Name: C03-1-6 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 13:06:47 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:C,1 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 1.421e+004 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.647e+006 % % Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 100 7.198e+001 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 5.540e+005 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.302e+005 % % 1.90 2.00 % 1.79 3.00 2.00 3.00 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 980 103634 0.009 104.5 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 103634 103633.805 1.0 3 Aspirin 179 > 137 0.99 24357 0.000 1.7 4 Salicylic acid 137 > 93 1.28 41718 24357 1.713 1526.1 5 Furosemid 329 > 205 1.07 24357 24356.502 1.0 %Dev -0.7 -5.0 Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\C03 loai S2.qld Page 34 of 44 Name: C03-LQC2 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 14:34:53 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:E,2 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 4.729e+003 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.508e+006 % % 2.88 2.00 Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 100 1.602e+003 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 8.145e+004 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 2.981e+005 % % 0.00 3.41 2.00 3.00 1.00 3.00 % 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 303 95021 0.003 32.9 %Dev 7.6 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 95021 95021.305 0.9 -8.9 3 Aspirin 179 > 137 1.00 102 21926 0.005 28.7 -4.5 4 Salicylic acid 137 > 93 1.28 5981 21926 0.273 225.6 6.0 5 Furosemid 329 > 205 1.06 21926 21926.463 0.9 -14.4 Name: C03-2-0 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 14:40:01 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:E,3 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 9.226e+002 1.90 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.712e+006 % % Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 0.00 100 6.716e+001 F2:MRM of channels,ES137 > 93 0.83 100 3.789e+003 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.246e+005 % % 3.48 0.32 2.00 3.00 2.00 3.00 % 0.37 0.93 1.76 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 63 107608 0.001 3.3 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 107608 107607.859 1.0 3 Aspirin 179 > 137 1.08 24121 0.000 1.2 4 Salicylic acid 137 > 93 1.29 268 24121 5 Furosemid 329 > 205 1.06 24121 %Dev 3.1 0.011 24121.041 0.9 -5.9 Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\C03 loai S2.qld Page 35 of 44 Name: C03-2-0,25 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 14:45:16 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:E,4 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 1.998e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.446e+006 % % Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 100 4.654e+004 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 5.268e+005 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 2.671e+005 % % % 1.00 2.00 2.00 3.00 3.00 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 13945 90884 0.153 1747.5 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 90884 3 Aspirin 179 > 137 1.00 2944 19962 4 Salicylic acid 137 > 93 1.28 39716 19962 5 Furosemid 329 > 205 1.06 19962 90884.352 0.9 0.147 877.7 1.990 1776.0 19962.209 0.8 %Dev -12.9 -22.1 Name: C03-2-0,5 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 14:50:24 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:E,5 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 3.894e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.619e+006 % % Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 100 4.693e+004 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 9.303e+005 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.191e+005 % % % 1.00 2.00 3.00 2.00 3.00 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 27017 102064 0.265 3017.3 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 102064 3 Aspirin 179 > 137 1.00 2957 23770 4 Salicylic acid 137 > 93 1.28 70819 23770 5 Furosemid 329 > 205 1.06 23770 102064.047 1.0 0.124 740.5 2.979 2669.7 23770.391 0.9 %Dev -2.2 -7.2 Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\C03 loai S2.qld Page 36 of 44 Name: C03-2-0,75 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 14:55:39 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:E,6 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 3.423e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.452e+006 % % Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 100 3.708e+004 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 1.018e+006 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 2.965e+005 % % % 1.00 2.00 2.00 3.00 3.00 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 23708 91943 0.258 2939.1 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 91943 3 Aspirin 179 > 137 1.00 2277 21905 4 Salicylic acid 137 > 93 1.28 77870 21905 5 Furosemid 329 > 205 1.06 21905 91943.172 0.9 0.104 618.9 3.555 3189.6 21904.713 0.9 %Dev -11.9 -14.5 Name: C03-2-1 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 15:00:46 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:E,7 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 2.811e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.741e+006 % % Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 100 2.946e+004 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 1.169e+006 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.494e+005 % % % 1.00 2.00 3.00 2.00 3.00 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 19571 109684 0.178 2032.8 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 109684 3 Aspirin 179 > 137 1.00 1912 26140 4 Salicylic acid 137 > 93 1.28 89046 26140 5 Furosemid 329 > 205 1.06 26140 109683.500 1.1 0.073 435.8 3.406 3055.5 26140.465 1.0 %Dev 5.1 2.0 Quantify Sample Report MassLynx V4.2 SCN985 BE center-NIDQC Dataset: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\C03 loai S2.qld Page 37 of 44 Name: C03-2-1,25 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 15:05:54 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:E,8 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 3.273e+005 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.701e+006 % % Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 100 4.565e+004 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 1.407e+006 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.385e+005 % % % 1.00 2.00 2.00 3.00 3.00 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 22873 107646 0.212 2421.3 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 107646 3 Aspirin 179 > 137 1.00 2896 24956 4 Salicylic acid 137 > 93 1.28 108542 24956 5 Furosemid 329 > 205 1.06 24956 107645.906 1.0 0.116 690.8 4.349 3907.0 24955.912 1.0 %Dev 3.2 -2.6 Name: C03-SQC2 MS Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA.EXP Inlet Method Name: D:\LCMS53.06\Analysis\2021\CPD+APR+SA\50BE 04\21012021-C03.PRO\ACQUDB\CPD-APR-SA_gra Date: 21-Jan-2021 Time: 15:11:09 Instrument: XEVO-TQD#QCB0140 Vial: 1:F,1 User: LCMS5306\tdsh-53.06-duc Clopidogrel Glimepirid F1:MRM of channels,ES+ 322 > 212 100 6.532e+004 F1:MRM of channels,ES+ 491 > 126 100 1.597e+006 % % Aspirin Salicylic acid Furosemid F2:MRM of channels,ES179 > 137 100 8.691e+003 F2:MRM of channels,ES137 > 93 100 3.455e+005 F2:MRM of channels,ES329 > 205 100 3.241e+005 % % % 1.00 2.00 3.00 2.00 3.00 1.00 1.00 1.00 # Name Trace RT Area IS Area Response Conc 1 Clopidogrel 322 > 212 2.60 4592 100786 0.046 516.5 %Dev 1.2 2 Glimepirid 491 > 126 2.14 100786 100786.266 1.0 -3.4 3 Aspirin 179 > 137 1.00 513 24009 0.021 128.1 2.4 4 Salicylic acid 137 > 93 1.28 26138 24009 1.089 962.4 8.5 5 Furosemid 329 > 205 1.06 24009 24008.621 0.9 -6.3 ... APR SA 3.1.5 Kết xây dựng phương pháp LC- MS/ MS định lượng CPD, APR SA huyết tương Từ kết thực nghiệm nêu, xây dựng phương pháp LCMS /MS định lượng đồng thời CPD, APR SA huyết tương người sau: Quy... hóa acid salicylic huyết tương sắc ký lỏng khối phổ (LC- MS/ MS) Thẩm định phương pháp định lượng đồng thời clopidogrel, aspirin chất chuyển hóa acid salicylic huyết tương sắc ký lỏng khối phổ (LC- MS/ MS)... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG VĂN ĐỨC XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP LC- MS/ MS ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI CLOPIDOGREL, ASPIRIN VÀ CHẤT CHUYỂN HÓA ACID SALICYLIC TRONG HUYẾT