Nghiên cứu điều chế cao đặc giàu sophoricosid từ phương thuốc hoè giác và xây dựng một số chỉ tiêu chất lượng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI VŨ THỊ HIỀN NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO ĐẶC GIÀU SOPHORICOSID TỪ PHƢƠNG THUỐC HÒE GIÁC VÀ XÂY DỰNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƢỢNG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI, 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI VŨ THỊ HIỀN NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO ĐẶC GIÀU SOPHORICOSID TỪ PHƢƠNG THUỐC HÒE GIÁC VÀ XÂY DỰNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƢỢNG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LIỆU- DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Bùi Hồng Cƣờng HÀ NỘI- 2021 LỜI CẢM ƠN Với lịng biết ơn sâu sắc, tơi xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới: Đầu tiên xin cảm ơn Ban giám hiệu, phòng Sau đại học, tồn thể thầy tận tình dạy bảo suốt tháng, năm học Trường Đặc biệt xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS.TS Bùi Hồng Cƣờng, người thầy tận tụy, luôn bảo hướng dẫn, định hướng, tạo điều kiện tốt cho học tập, nghiên cứu suốt thời gian thực đề tài, hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn tồn thể thầy cô, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dược học cổ truyền trường Đại học Dược Hà Nội, giúp đỡ tạo điều kiện giúp hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn TS Nguyễn Trần Linh giúp đỡ việc sử dụng phần mềm SAS JMP Pro 15, kiến thức tối ưu hóa cách sử dụng mang nơ ron nhân tạo Cuối tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè tồn thể đồng nghiệp ln ng hộ, động viên, giúp đỡ tơi trong suốt q trình thực luận văn Do kiến thức thân giới hạn, nên luận văn không tránh khỏi hạn chế thiếu sót Tơi mong nhận góp ý, chỉnh sửa c a quý thầy cô, bạn bè Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 12 tháng 04 năm 2021 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh trĩ 1.1.1 Bệnh trĩ theo y học đại 1.1.2 Bệnh trĩ theo y học cổ truyền 1.2 Phƣơng thuốc Hòe giác 1.2.1 Công thức 1.2.2 Công năng, ch trị: 1.2.3 Giải thích phương thuốc 1.2.4 Định tính, định lượng 1.3 Thông tin vị thuốc 1.3.1 Hòe giác 1.3.2 Địa du .7 1.3.3 Hoàng cầm 1.3.4 Chỉ xác 11 1.3.5 Đương quy .14 1.3.6 Phòng phong 15 1.4 Phƣơng pháp điều chế cao thuốc 17 1.4.1 Định nghĩa cao thuốc .17 1.4.2 Đặc điểm cao thuốc 17 1.4.3 Yêu cầu chất lượng cao thuốc 18 1.4.4 Phương pháp điều chế cao 18 1.5 Cơ sở lựa chọn vị thuốc phƣơng thuốc Hòe giác để bào chế cao đặc 19 1.6 Thiết kế thí nghiệm tối ưu hóa thí nghiệm dựa mạng neuron nhân tạo 19 1.6.1 Cấu trúc mạng nơ-ron nhân tạo .20 1.6.2 Trình tự tiến hành thiết kế thí nghiệm tối ưu hóa .20 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Đối tƣợng, phƣơng tiện nghiên cứu: 22 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu: 22 2.1.2 Thiết bị, máy móc: 22 2.1.3 Hóa chất, chất chuẩn: 23 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu .23 2.2.1 Nghiên cứu điều chế cao đặc hỗn hợp dược liệu c a phương thuốc: .23 2.2.2 Khảo sát số tiêu chất lượng cao đặc 25 2.3 Xử lí số liệu 31 CHƢƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 32 3.1 Nghiên cứu bào chế cao đặc 32 3.1.1 Kết khảo sát thông số điều chế cao 32 3.1.2 Thiết kế thí nghiệm 33 3.1.3.Tối ưu hóa quy trình chiết xuất 34 3.1.4 Xác định giá trị tối ưu c a biến độc lập kiểm chứng mơ hình .36 3.2 Định tính vị thuốc cao đặc SKLM: 39 3.2.1 Định tính Hịe giác SKLM .39 3.2.2 Định tính Địa du SKLM 41 3.2.3 Định tính Hồng cầm SKLM 43 3.2.4 Định tính Chỉ xác SKLM .45 3.3 Kết xây dựng thẩm định phƣơng pháp định lƣợng sophoricosid cao đặc phƣơng thuốc 47 3.3.1 Chuẩn bị dung dịch thử, dung dịch chuẩn: 47 3.3.2 Thẩm định phương pháp định lượng: 47 3.3.3 Định lượng sophoricosid mẫu cao đặc 53 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 54 4.1 Về lựa chọn điều chế cao đặc hỗn hợp vị thuốc phƣơng thuốc Hòe giác 54 4.2 Về thiết kế thí nghiệm tối ƣu hóa quy trình chiết xuất cao đặc hỗn hợp dƣợc liệu phƣơng thuốc Hòe giác 54 4.4 Về định lƣợng sophoricosid cao đặc phƣơng pháp HPLC .58 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Một số ký hiệu viết tắt ANN Artificial Neural Network CX Chỉ xác DĐVN Dược điển Việt Nam DĐTQ Dược điển Trung Quốc DL/DM Dược liệu/ Dung môi ĐD Địa du HPLC High Performance Liquid Chromatography HG Hịe giác HC Hồng cầm IL Interleukin NF –ʁB Nuclear Factor- kappa B NO Nitric oxide PGE2 Prostaglandin E2 SKLM Sắc ký lớp mỏng TNF Tumor necrosis factor SOP Sophoricosid chuẩn P- HG Placebo hòe giác P- CX Placebo xác P- Đ D Placebo địa du P- HC Placebo- Hồng cầm DANH MỤC HÌNH Hình 1.1.Sơ đồ cấu trúc điển hình c a ANN .20 Hình 1.2.Sơ đồ bước tối ưu hóa quy trình chiết xuất mạng nơ-ron nhân tạo 21 Hình 3.1 Sơ đồ mạng neuron nhân tạo .35 Hình Đồ thị biểu diễn biến thiên c a biến phụ thuộc theo biến độc lập giá trị c a hàm hy vọng 36 Hình 3 Khơng gian thiết kế theo Nồng độ ethanol Thời gian chiết .37 Hình 3.4.Sắc ký đồ định tính Hịe giác cao đặc bước sóng 254nm .40 Hình 3.5 Sắc ký đồ định tính Địa du sau phun thuốc thử màu 42 Hình 3.6 Sắc ký đồ định tính Hồng cầm bước sóng 254 nm 44 Hình 3.7.Sắc ký đồ định tính Chỉ xác cao đặc bước sóng 366 nm .46 Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu nghiên cứu 47 Hình 3.9 Phổ c a mẫu thử mẫu chuẩn SOP .48 Hình 3.10 Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ diện tích pic c a SOP .50 Hình 11 Sắc ký đồ c a dung dịch LOD (A) LOD (B) 53 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Công thức bào chế mẫu cao đặc Placebo 22 Bảng 2.2: Hàm ẩm vị thuốc 24 Bảng 3.1 Khoảng biến thiên c a biến độc lập 32 Bảng Yêu cầu c a biến phụ thuộc 33 Bảng 3.3 Thiết kế thí nghiệm kết biến phụ thuộc .33 Bảng 3.4 Kết đánh giá mạng neuron nhân tạo 35 Bảng 3.5 Giá trị c a hàm hy vọng tuyến tính theo biến phụ thuộc 37 Bảng 3.6 Giá trị dự đoán kết thực nghiệm kiểm chứng (n = 3) 38 Bảng 3.7 Kết SKLM định tính Hịe giác bước sóng 254 nm 40 Bảng 3.8 Kết SKLM Địa du sau phun thuốc thử màu .42 Bảng 3.9 Kết định tính Hồng cầm bước sóng 254nm 44 Bảng 3.10 Kết định tính Chỉ xác bước sóng 366 nm 46 Bảng 3.11 Kết độ thích hợp hệ thống 49 Bảng 3.12 Kết khảo sát khoảng tuyến tính định lượng SOP .50 Bảng 3.13 Độ lặp lại độ xác trung gian .51 Bảng 3.14 Kết độ c a phương pháp 52 ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh trĩ bệnh thường hay gặp nam nữ, lứa tuổi ch yếu trung niên Tại Mỹ, theo thống kê năm có thêm khoảng 10 triệu mắc trĩ người có địa vị kinh tế xã hội cao thường có tỷ lệ mắc cao nhóm cịn lại [29] Ở Vương quốc Anh, bệnh trĩ báo cáo ảnh hưởng đến 13% -36% dân số nói chung [36] Ở Việt Nam bệnh trĩ có tỷ lệ mắc bệnh cao từ 3035% dân số, đứng hàng thứ cấu bệnh hậu môn trực tràng.Bệnh trĩ bệnh biết từ sớm y học cổ truyền, Y văn cổ có câu ―thập nhân cửu trĩ‖ tức 10 người có người mắc trĩ để nói đến tính phổ biển c a bệnh mà y học quan tâm nghiên cứu điều trị [3] Hiện nay, phương pháp điều trị nội khoa-bảo tồn với việc sử dụng phương thuốc y học cổ truyền đem lại hiệu tốt việc điều trị bệnh [3], [2] Phương thuốc Hòe giác ghi Dược điển Trung Quốc gồm vị thuốc: Hòe giác, Địa du, Hồng cầm, Chỉ xác, Đương quy Phịng phong có công tràng, trừ phong, lương huyết, huyết [8], [19], ch trị huyết nhiệt có biểu đại tiện huyết, trĩ sưng đau [19], đại tiện huyết rượu (tửu độc) [8] Trong phương thuốc Hòe giác đóng vai trị qn, định tác dụng c a phương thuốc, sophoricosid thành phần có tác dụng chống viêm, cầm máu, giảm đau [3], [18] Với mong muốn phát huy tính ưu việt c a thuốc cổ truyền, tiện lợi cho người bệnh, việc nghiên cứu điều chế phương thuốc thành dạng bào chế đại, cao đặc dạng bán thành phẩm trung gian để tiếp tục chuyển sang dạng bào chế khác viên nang, thuốc cốm, viên nén… việc chiết xuất thu hàm lượng hiệu suất sophoricosid tối ưu đóng vai trị quan trọng định chất lượng c a cao đặc phương thuốc Hòe giác, đồng thời việc xây dựng số tiêu chất lượng khác c a cao đặc phương thuốc cần thiết Bên cạnh đó, số tài liệu công bố tiêu chuẩn phương thuốc cho số dạng chế phẩm viên hoàn [18], [41] chưa có nghiên cứu cơng bố cho dạng cao đặc phương thuốc cao đặc hỗn hợp dược liệu c a phương thuốc gồm vị thuốc Hịe giác, Địa du, Hồng cầm, Chỉ xác tối ưu hàm lượng hiệu suất chiết sophoricosid Từ lý trên, đề tài: ―Nghiên cứu điều chế cao đặc giàu sophoricosid từ phƣơng thuốc Hòe giác xây dựng số tiêu chất lƣợng” đề xuất nghiên cứu với mục tiêu: Điều chế cao đặc theo hướng tối ưu hàm lượng hiệu suất chiết sophoricosid từ phương thuốc Hòe giác Xây dựng số tiêu định tính, định lượng cao đặc phương thuốc Hòe giác Phụ lục 3: Kết khối lƣợng cao đặc, hàm ẩm, hàm lƣợng hiệu suất chiết SOP 24 mẫu cao đặc Biến độc lập Khối Hàm Biến phụ thuộc Thí lƣợng ẩm X4 X1 X3 X2 (%) nghiệm cao (%) Y1 (%) Y2 (%) (lần) (ml/g) (phút) (g) 70 180 9,63 13.39 4,22 63,07 50 180 10,51 15.59 3,68 61,19 70 120 14,64 15.31 3,88 87,50 12 90 60 12,66 15.25 4,32 84,53 90 180 8,85 20.33 4,83 66,12 70 120 14,04 17.74 4,01 81,93 70 120 12,7 22.72 4,25 81,01 12 50 120 14,04 14.14 3,58 70,87 90 180 10,12 24.79 4,38 69,53 10 7,12 50 60 13,22 13.66 3,79 68,84 11 12 90 60 8,83 17.1 4,69 65,26 12 12 50 60 12,03 13.43 3,76 68,48 13 12 90 120 9,87 20 4,57 71,21 14 12 68,6 180 12,86 20.6 4,30 80,69 15 50 180 15,96 12.44 3,84 88,89 16 12 90 180 12,44 20 3,92 78,02 17 12 50 180 15,86 20 3,36 77,92 18 12 50 60 15,0 11.66 3,93 86,10 19 90 60 5,42 13.93 4,89 42,70 20 90 60 10,01 15.77 4,73 74,38 21 50 60 9,99 19.01 3,83 58,76 22 50 120 6.03 19.25 3,27 29,05 23 65,6 60 6.47 13.59 4,24 43,27 24 90 180 6.05 16.5 4,81 44,37 Thí nghiệm X1 (ml/g) Phụ lục 4: Kết kiểm chứng mơ hình (n=3) Khối Hàm Biến phụ thuộc Biến độc lập lƣợng ẩm X4 Y1 (%) cao (g) (%) X3 (lần) X2 (%) (phút) Hàm Trung Hiệu SD lượng bình suất M1 70 120 12,37 17,67 4,23 M2 70 120 12,4 14,3 4,13 70 120 12,41 14,71 3.99 Trung bình SD 78,63 1,48 78,70 80,07 4,12 M3 Y2 (%) 0,12 77,11 Phụ lục 5: Phiếu kiểm nghiệm dƣợc liệu nguyên liệu Phụ lục 5.1 Phiếu kiểm nghiệm dƣợc liệu Hòe giác Phụ lục 5.2 Phiếu kiểm nghiệm dƣợc liệu Chỉ xác Phụ lục 5.3 Phiếu kiểm nghiệm dƣợc liệu Hoàng cầm Phụ lục 6: Phiếu kiểm nghiệm Dƣợc liệu chuẩn- chất chuẩn Phụ lục 6.1 Phiếu kiểm nghiệm chất chuẩn Sophoricosid Phụ lục 6.2 Thông tin Dƣợc liệu chuẩn Hịe giác Phụ lục 6.3 Thơng tin Dƣợc liệu chuẩn Chỉ xác Phụ lục 6.4 Phiếu kiểm nghiệm Dƣợc liệu chuẩn Hồng cầm Phụ lục 6.5 Thơng tin Dƣợc liệu chuẩn Địa du Phụ lục 7: Sắc ký đồ mẫu kiểm chứng quy trình Phụ lục 7.1 Sắc ký đồ cao đặc hỗn hợp dƣợc liệu (mẫu kiểm chứng quy trình) bƣớc sóng 260nm Phụ lục 7.2 Sắc ký đồ cao đặc hỗn hợp dƣợc liệu (mẫu kiểm chứng quy trình) bƣớc sóng 260nm Phụ lục 7.3 Sắc ký đồ cao đặc hỗn hợp dƣợc liệu (mẫu kiểm chứng quy trình) bƣớc sóng 260nm ... số tiêu chất lƣợng” đề xuất nghiên cứu với mục tiêu: Điều chế cao đặc theo hướng tối ưu hàm lượng hiệu suất chiết sophoricosid từ phương thuốc Hòe giác Xây dựng số tiêu định tính, định lượng cao. .. vị thuốc Hịe giác, Địa du, Hồng cầm, Chỉ xác tối ưu hàm lượng hiệu suất chiết sophoricosid Từ lý trên, đề tài: ? ?Nghiên cứu điều chế cao đặc giàu sophoricosid từ phƣơng thuốc Hòe giác xây dựng số. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI VŨ THỊ HIỀN NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO ĐẶC GIÀU SOPHORICOSID TỪ PHƢƠNG THUỐC HÒE GIÁC VÀ XÂY DỰNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƢỢNG LUẬN VĂN