Xây dựng một số chỉ tiêu chất lượng và đánh giá ảnh hưởng đến thời gian pt và aptt của quá trình đông máu in vitro của cao khô nhọ nồi

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI LÊ THỊ LINH XÂY DỰNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƢỢNG VÀ ĐÁNH GIÁ ẢNH HƢỞNG ĐẾN THỜI GIAN PT VÀ APTT CỦA Q TRÌNH ĐƠNG MÁU IN-VITRO CỦA CAO KHƠ NHỌ NỒI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SỸ HÀ NỘI - 2020 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI LÊ THỊ LINH Mã sinh viên: 1501267 XÂY DỰNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƢỢNG VÀ ĐÁNH GIÁ ẢNH HƢỞNG ĐẾN THỜI GIAN PT VÀ APTT CỦA QUÁ TRÌNH ĐƠNG MÁU IN-VITRO CỦA CAO KHƠ NHỌ NỒI KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SỸ Người hướng dẫn: TS Nguyễn Quỳnh Chi PGS.TS Nguyễn Thùy Dƣơng Nơi thực hiện: Bộ môn Dƣợc liệu Bộ môn Dƣợc lực HÀ NỘI - 2020 HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực khóa luận tốt nghiệp, nhận hướng dẫn, quan tâm từ thầy cơ, gia đình bạn bè Đầu tiên, với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn tới TS Nguyễn Quỳnh Chi quan tâm, động viên, bảo tận tình, truyền đạt cho tơi nhiều kiến thức niềm đam mê nghiên cứu Cô lắng nghe, giải đáp thắc mắc tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành khóa luận Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Phạm Tuấn Anh, người thầy dìu dắt từ ngày đầu nghiên cứu khoa học môn Niềm đam mê nghiên cứu cách làm việc khoa học thầy gương cho học tập Tôi cảm ơn tới PGS TS Nguyễn Thùy Dương, đưa lời khuyên q báu hỗ trợ tơi hồn thành khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tồn thể thầy cơ, anh chị kỹ thuật viên Bộ mơn Dược liệu nói riêng Trường Đại học Dược Hà Nội nói chung ln giúp đỡ, động viên tơi suốt q trình nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn thân thương đến anh chị, bạn bè đồng hành suốt khoảng thời gian học tập trường, ln giúp đỡ chia sẻ khó khăn, tạo nên kỷ niệm thật đẹp Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn niềm yêu thương tới gia đình tơi, người ln chỗ dựa tinh thần vững chắc, giúp vượt qua khó khăn học tập sống Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2020 Sinh viên Lê Thị Linh MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ CÁI VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Cỏ nhọ nồi (Eclipta prostrata L.) 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Đặc điểm phân bố 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Công dụng tác dụng dược lý 1.1.6 Tiêu chuẩn dược liệu Cỏ nhọ nồi 1.2 Quá trình cầm máu tác dụng cầm máu Cỏ nhọ nồi 1.2.1 Các giai đoạn trình cầm máu 1.2.2 Vài nét trình đông máu 10 1.2.3 Một số nghiên cứu tác dụng đông máu in-vitro dược liệu 10 1.2.4 Tác dụng cầm máu Cỏ nhọ nồi 11 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Nguyên liệu đối tượng nghiên cứu 13 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 13 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 13 2.1.3 Các trang thiết bị nghiên cứu 13 2.2 Nội dung nghiên cứu 14 2.2.1 Xây dựng số tiêu chất lượng cho cao khô Cỏ nhọ nồi 14 2.2.2 Đánh giá tác dụng cao khô Cỏ nhọ nồi trình đơng máu in-vitro 15 2.3 Phương pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Xây dựng số tiêu chất lượng cho cao khô Cỏ nhọ nồi 15 2.3.2 Đánh giá tác dụng cao khô Cỏ nhọ nồi q trình đơng máu in-vitro 21 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23 3.1 Xây dựng số tiêu chất lượng cao khô Cỏ nhọ nồi 23 3.1.1 Đánh giá sơ nguồn nguyên liệu đầu vào 23 3.1.2 Điều chế cao khô Cỏ nhọ nồi 24 3.1.3 Xây dựng số tiêu chất lượng cao khô Cỏ nhọ nồi 24 3.2 Đánh giá tác dụng cao khô Cỏ nhọ nồi q trình đơng máu in-vitro 30 3.3 Bàn luận 32 3.3.1 Về xây dựng tiêu chất lượng cao khô Cỏ nhọ nồi 32 3.3.2 Về tác dụng đông máu in-vitro cao khô Cỏ nhọ nồi 34 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 4.1 Kết luận 36 4.2 Kiến nghị 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ CÁI VIẾT TẮT DĐVN V Dược điển Việt Nam V DL Dược liệu EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol GC-MS Gas chromatography – mass spectrometry HPTLC High perfomance thin layer chromatography MeOH Methanol MIC Nồng độ ức chế tối thiểu Rf Retention factor SKLM Sắc ký lớp mỏng TLTK Tài liệu tham khảo DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Tiêu chuẩn dược liệu Cỏ nhọ nồi số Dược điển Bảng 2.1: Các mẫu dược liệu Cỏ nhọ nồi Bảng 2.2: Phản ứng định tính nhóm chất cao khơ Cỏ nhọ nồi Bảng 2.3: Thiết kế thí nghiệm thời gian đơng máu APTT Bảng 2.3: Thiết kế thí nghiệm thời gian đông máu PT Bảng 3.1: Kết định tính mẫu dược liệu theo DĐVN V Bảng 3.2: Kết hàm lượng cao khô mẫu dược liệu Bảng 3.3: Kết xác định hàm ẩm mẫu cao Bảng 3.4: Kết xác định pH mẫu cao Bảng 3.5: Kết định tính nhóm chất có mẫu cao phản ứng hóa học Bảng 3.6: Kết khảo sát độ tuyến tính xây dựng đường chuẩn Bảng 3.7: Kết thẩm định độ lặp phương pháp chiết xuất wedelolacton cao khô cỏ nhọ nồi Bảng 3.8: Kết khả sát tính thích hợp hệ thống phân tích Bảng 3.9: Kết định lượng wedelolacton có mẫu cao khô cỏ nhọ nồi Bảng 3.10: Khảo sát tác dụng cao khô Cỏ nhọ nồi thời gian APTT Bảng 3.11: Khảo sát tác dụng cao khô Cỏ nhọ nồi thời gian PT DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1: Sắc ký đồ mẫu dược liệu quan sát bước sóng 366 nm Hình 3.2: Hình ảnh sắc ký đồ cao khơ Cỏ nhọ nồi quan sát bước sóng (a) UV 254 nm, (b) 366 nm Hình 3.3: Đường chuẩn phương trình hồi quy tuyến tính định lượng wedelolacton cao khô Cỏ nhọ nồi ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện không Việt Nam mà giới, việc sử dụng sản phẩm làm từ dược liệu người dân gia tăng với xu hướng "Trở thiên nhiên" Theo tổ chức y tế giới (WHO), khoảng 80 % dân số giới sử dụng thuốc có nguồn gốc tự nhiên chăm sóc sức khoẻ ban đầu [66], [72] Cỏ nhọ nồi (Eclipta prostrata L.) thuộc họ Cúc (Asteraceae) biết đến loại dược liệu với nhiều công dụng quý Trong dân gian nước sắc Cỏ nhọ nồi để chữa bệnh chảy máu ngoài, phối hợp với số loại dược liệu khác ngó sen, trắc bá, bách hợp,… để cầm máu Một thuốc cầm máu gồm Cỏ nhọ nồi cóc kèn nghiên cứu dược lý áp dụng lâm sàng [1] Bên cạnh đó, Cỏ nhọ nồi cịn có mặt số thuốc để điều trị sốt xuất huyết, viêm gan virus, sỏi tiết niệu [1] Liên quan đến tác dụng cầm máu, có số nghiên cứu in-vivo thực hiện, nhiên, ảnh hưởng cao khô Cỏ nhọ nồi yếu tố đông máu chưa đánh giá cách đầy đủ Hiện có tiêu chuẩn dược liệu Cỏ nhọ nồi dược điển Việt Nam, dược điển Trung Quốc dược điển châu Âu Tuy nhiên, chưa có tiêu chuẩn cho cao khô Cỏ nhọ nồi, sản phẩm trung gian để sản xuất chế phẩm từ Cỏ nhọ nồi để phát triển thuốc có thành phần Cỏ nhọ nồi với dạng bào chế đại Để góp phần đảm bảo chất lượng chế phẩm từ Cỏ nhọ nồi, đồng thời đánh giá ảnh hưởng cao khô Cỏ nhọ nồi yếu tố đơng máu nhằm tìm hiểu sâu chế cầm máu Nhọ nồi, đề tài “ Xây dựng số tiêu chất lƣợng đánh giá ảnh hƣởng đến thời gian PT APTT q trình đơng máu in-vitro cao khơ Nhọ nồi” thực với hai mục tiêu sau đây: Xây dựng số tiêu chất lượng cao khô Cỏ nhọ nồi Đánh giá sơ tác dụng cao khô Cỏ nhọ nồi thời gian PT APTT q trình đơng máu in-vitro CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Cỏ nhọ nồi (Eclipta prostrata L.) 1.1.1 Vị trí phân loại Cây Cỏ nhọ nồi hay gọi Cỏ mực, hạn liên thảo có tên khoa học Eclipta prostrata L thuộc họ Cúc (Asteraceae) Theo hệ thống phân loại Takhtajan năm 2009 [53], vị trí phân loại Cỏ nhọ nồi tóm tắt sau: Giới: Thực vật (Plantae) Lớp: Ngọc Lan (Magnolipsida) Phân lớp: Cúc (Asteridae) Bộ: Cúc (Asterales) Họ: Cúc (Asteraceae) Chi: Eclipta 1.1.2 Đặc điểm thực vật Cây thảo, mọc đứng, bò vươn thẳng, cao 30 – 40 cm, có Thân trịn, có lơng cứng áp sát, màu lục đỏ tía Mủ đen ngồi khơng khí Lá mọc đối, hình mác, dài – cm, rộng 0,5 – 1,5 cm, gốc thn, đầu nhọn, mép khía nhỏ, hai mặt có lơng nháp, cuống ngắn Cây đa dạng Thân thắt lại mấu phình dóng Lá có to bản, hình bầu dục hình trứng Mùa hoa tháng – Cụm hoa mọc thân kẽ thành đầu, cuống dài – cm, có lơng thơ áp sát; đầu có đường kính 0,8 – 1,2 cm; bắc thn nhọn, có lơng; hoa màu trắng, hoa ngồi, hình lưỡi, xếp thành hàng, hoa lưỡng tính hình ống, mào lơng giảm thành vảy nhỏ ngắn, tràng hoa có lưỡi nguyên xẻ răng, tràng hoa lưỡng tính có thùy hình trái xoan nhị Quả bế, dài mm, rộng 1,5 mm, có cạnh, dẹt, đầu bẹt, có sừng nhỏ [1], [2] 1.1.3 Đặc điểm phân bố Chi Eclipta L Việt Nam có lồi Eclipta prostrata L (Syn Eclipta alba (L.) Hassk.) Cỏ nhọ nồi (E prostrata L.) nước ta phổ biến, phân bố rộng khắp tỉnh vùng đồng bằng, trung du miền núi, đến độ cao 1500 m (ở tỉnh phía Nam), như: Yên Bái, Hà Giang (Vị Xuyên), Tuyên Quang, Lạng Sơn (Chi Lăng), Bắc Giang (Hiệp 2.1: Sắc ký đồ mẫu NA01 2.1: Sắc ký đồ mẫu NA02 2.1: Sắc ký đồ mẫu NA03 2.1: Sắc ký đồ mẫu NA04 2.1: Sắc ký đồ mẫu NA05 2.1: Sắc ký đồ mẫu NA06 Hình ảnh sắc ký đồ mẫu dung dịch khảo sát tính thích hợp hệ thống 3.1: Sắc ký đồ dung dịch chuẩn 0,05 mg/ml lần tiêm thứ 3.2: Sắc ký đồ dung dịch chuẩn 0,05 mg/ml lần tiêm thứ 3.1: Sắc ký đồ dung dịch chuẩn 0,05 mg/ml lần tiêm thứ 3.1: Sắc ký đồ dung dịch chuẩn 0,05 mg/ml lần tiêm thứ 3.1: Sắc ký đồ dung dịch chuẩn 0,05 mg/ml lần tiêm thứ 3.1: Sắc ký đồ dung dịch chuẩn 0,05 mg/ml lần tiêm thứ Hình ảnh sắc ký đồ mẫu dung dịch cao khô nhọ nồi 4.1: Sắc ký đồ mẫu cao khô Nam Định 4.2: Sắc ký đồ mẫu cao khô Nghệ An 4.3: Sắc ký đồ mẫu cao khơ Thái Bình 4.4: Sắc ký đồ mẫu cao khô Thái Nguyên 4.5: Sắc ký đồ mẫu cao khô Điện Biên 4.6: Sắc ký đồ mẫu cao khô Điện Biên ... đơng máu in- vitro cao khơ Nhọ nồi? ?? thực với hai mục tiêu sau đây: Xây dựng số tiêu chất lượng cao khô Cỏ nhọ nồi Đánh giá sơ tác dụng cao khô Cỏ nhọ nồi thời gian PT APTT q trình đơng máu in- vitro. .. nhọ nồi, đồng thời đánh giá ảnh hưởng cao khô Cỏ nhọ nồi yếu tố đơng máu nhằm tìm hiểu sâu chế cầm máu Nhọ nồi, đề tài “ Xây dựng số tiêu chất lƣợng đánh giá ảnh hƣởng đến thời gian PT APTT trình. .. “ Xây dựng số tiêu chất lượng đánh giá tác dụng đông máu in- vitro cao khô Cỏ nhọ nồi? ??, thu số kết sau:  Về xây dựng số tiêu chất lƣợng cho cao khô Cỏ nhọ nồi: Đã điều chế mẫu cao khô Cỏ nhọ nồi