KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANG

Bài 2: Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Chuẩn đầu học Sau học xong, sinh viên có khả năng: Diễn giải tầm quan trọng ý nghĩa kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang xét nghiệm mô bệnh học Phân tích ưu/nhược điểm phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang Liệt kê vấn đề cần lưu ý thực kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang cách khắc phục Thực thao tác kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Quy trình xét nghiệm mơ bệnh học Lấy mẫu bệnh phẩm, cắt lọc Cắt, dán mảnh Nhuộm TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Phân tích/trả kết quả, lưu trữ Miễn dịch huỳnh quang • Nguyên tắc chung: • Tương tự HMMD: Mơ bệnh học + Miễn dịch học • Khác HMMD: chất đánh dấu kháng thể gắn chất nhuộm huỳnh quang (phát quang ánh sáng cực tím) TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Các kỹ thuật • MDHQ trực tiếp phát kháng nguyên • MDHQ gián tiếp phát kháng nguyên • KT kháng bổ thể huỳnh quang phát kháng nguyên • MDHQ gián tiếp phát kháng thể • KT ức chế huỳnh quang phát kháng thể • KT kháng bổ thể huỳnh quang phát kháng thể TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP MDHQ trực tiếp phát KN • Nguyên tắc chung • Nguyên tắc riêng: muốn phát kháng nguyên cần kháng thể huỳnh quang tương ứng TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHAÄP MDHQ trực tiếp phát KN Chuẩn bị Người thực • bác sĩ giải phẫu bệnh – tế bào học • kỹ thuật viên giải phẫu bệnh – tế bào học TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP MDHQ trực tiếp phát KN Phương tiện, hóa chất • Tủ ấm 37oC • Máy cắt lạnh • Cồn-ete tỷ lệ 1/1 • Phiến kính • Bơm Canada/keo/paraffin • Lá kính • Nước • KHVHQ • Kính, găng tay, trang, áo • Giá đựng tiêu nằm ngang chồng • Cốc đong (50, 100, 500, 1000ml) • DD đệm phosphate pH7,2 • Ống hút • DD glycerin đệm phosphate 1% • Kẹp khơng mấu,TRƯỜNG kéo KT huỳnh quang ĐẠI HỌC Y TẾ•CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP MDHQ trực tiếp phát KN Các bước tiến hành • Cắt lạnh bệnh phẩm tươi (dày μm) • Pha KT (1/80) • Nhỏ KT lên mảnh cắt (30’, ẩm, kín, 37oC) • Đổ KT thừa, tráng dd đệm • Ngâm dd đệm (30’, lần) • Để nước nhiệt độ thường • Khi tiêu ẩm, nhỏ dd glycerin đệm phosphate 1% • Gắn kính TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP MDHQ gián tiếp phát KN • Nguyên tắc chung • Nguyên tắc riêng: cần số kháng thể huỳnh quang đặc hiệu để phát tất kháng nguyên khác Do cường độ huỳnh quang đặc hiệu thường lớn nên phát phần tử kháng ngun nhỏ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP MDHQ gián tiếp phát KN Chuẩn bị Người thực • bác sĩ giải phẫu bệnh – tế bào học • kỹ thuật viên giải phẫu bệnh – tế bào học TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP MDHQ gián tiếp phát KN • Tủ ấm 37oC Phương tiện, hóa chất • Cồn-ete tỷ lệ 1/1 • Máy cắt lạnh • Bơm Canada/keo/paraffin • Phiến kính • Nước • Lá kính • Kính, găng tay, trang, áo • KHVHQ chồng • Giá đựng tiêu nằm ngang • DD đệm phosphate pH7,2 • Cốc đong (50, 100, 500, 1000ml) • DD glycerin đệm phosphate 1% • Ống hút • Kháng thể • Kẹp khơng mấu,TRƯỜNG kéo KhángCỘNG kháng thể huỳnh quang ĐẠI HỌC Y TẾ•CÔNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP MDHQ gián tiếp phát KN Các bước tiến hành • Cắt lạnh bệnh phẩm tươi (dày μm) • Pha kháng thể (1/80) • Nhỏ KT lên mảnh cắt (30’, ẩm, kín, 37oC) • Đổ KT thừa, tráng dd đệm • Ngâm dd đệm (30’, lần) • Để nước nhiệt độ thường • Khi tiêu cịn ẩm, nhỏ kháng kháng thể huỳnh quang (30’, ẩm, kín, 37oC) • Đổ KKT thừa, tráng dd đệm • Ngâm dd đệm (10’, lần) • Để nước nhiệt độ thường • Khi tiêu cịn ẩm, nhỏ dd glycerin đệm phosphate 1% • Gắn kính TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP MDHQ phát KN Kết • Dương tính: màu xanh TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Confocal Microscopy Core Inverted Scope Upright Scope Xin chân thành cảm ơn! TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Tài liệu phải học Bộ Y Tế Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành giải phẫu bệnh, tế bào học (5199/QĐ-BYT ngày 25/12/2013) NXB Y học, 2016 (Trang 349-352) TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHAÄP ... trọng ý nghĩa kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang xét nghiệm mơ bệnh học Phân tích ưu/nhược điểm phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang Liệt kê vấn đề cần lưu ý thực kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang cách... kết quả, lưu trữ Miễn dịch huỳnh quang • Nguyên tắc chung: • Tương tự HMMD: Mô bệnh học + Miễn dịch học • Khác HMMD: chất đánh dấu kháng thể gắn chất nhuộm huỳnh quang (phát quang ánh sáng cực... kê vấn đề cần lưu ý thực kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang cách khắc phục Thực thao tác kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Quy trình xét nghiệm