BÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANGBÀI 2 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANG
Bài 2: Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang TS Dương Hồng Quân Trung tâm Xét nghiệm, Trường Đại học Y tế cơng cộng TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Chuẩn đầu học Sau học xong, sinh viên có khả năng: Diễn giải tầm quan trọng ý nghĩa kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang xét nghiệm mơ bệnh học Phân tích ưu/nhược điểm phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang Liệt kê vấn đề cần lưu ý thực kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang cách khắc phục Thực thao tác kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Quy trình xét nghiệm mô bệnh học Lấy mẫu bệnh phẩm, cắt lọc Cố định Chuyển Vùi bệnh Cắt, dán bệnh phẩm mô phẩm mảnh Nhuộm TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Phân tích/trả kết quả, lưu trữ Analysis based on Ag-Ab interaction ◼ ◼ ◼ Western blotting / immunoblotting ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) Immunohistokimia / immunositokimia Immunofluorescence / IF (microscopic) ◼ Flowcytometry analysis (specific-cell counting) ◼ Ag-Ab recognition fluorophore METHODS WB ELISA IHC/ICC IF / Flowcyto STEPS complex; long cycle simple; short cycle complex; long cycle simple; short cycle SENSITIVITY high; specificity simple but with high false-positive lower than that of WB higher than that of IHC > WB CROSS RX yes and easy to distinguish yes yes and hard to distinguish yes Positioning / Number of target cells glass slide / cell suspension / tissue sectioning DATA qualitative quanitative positioning SAMPLE MW Separatedproteins/ Membrane Homogenate / enzyme panel Sectiioning tissue / glass slide DYE RESULTS Chemical light, chromogen ic product chromogenic product , fluorecescent Cromogenic Fluorescent Bright Field microscopy fluorescence microscopy / flowcytometer OBSERAVTION TOOLS imaging Elisa reader ELISA WB IHC/ICC WB only ELISA IF Flowcytometry Immunofluorescent Staining Immunofluorescent staining makes use of antibodies to locate and identify patterns of protein expression in cells Primary antibody binds to antigen Antibody-antigen complex is bound by a secondary antibody conjugated to a fluorochrome Upon absorption of high energy light, the fluorochrome emits light at its own characteristic wavelength (fluorescence) and thus allows detection of antigen-antibody complexes Suitable for: frozen, non-fixed tissues and ethanol fixed tissues paraformaldehyde-fixed or methanol/acetone-fixed cells Basic Staining Technique Cell Preparation Culture cells on a glass coverslip in a 24-well plate Cells may be transfected directly on the coverslip Fix cells using paraformaldehyde or methanol/acetone and then wash them times in PBS Cell Permeabilization Incubate fixed cells in 1% Triton X-100 in PBS+0.02%BSA for minutes at room temperature Wash the cells times with PBS Immunofluorescent Cell Staining Incubate cells with a blocking solution to minimize non-specific staining Incubate cells with a polyconal or monoclonal antibody specific for the protein of interest Incubate cells with a secondary antibody directed against the primary antibody The secondary antibody must be conjugated to a fluorochrome ANTIGEN PRIMARY ANTIBODY SECONDARY ANTIBODY FLUOROCHROME Why is Confocal Microscopy Better? Three-Dimensional Reconstruction of Specimen 3D shadow projection Tight junctions (red) Cytoskeletal structures (green) Prof Wunderli-Allenpach ETH, Zurich Animated 3-Dimensional Reconstruction Laser Scanning Microscopy LSM510 3D for LSM www.Zeiss.com Animated 3-Dimensional Reconstruction Mitosis www.Zeiss.com Why is Confocal Microscopy Better? Improved Resolution Rat Cerebellum Astrocytes (green) Mn dismutase (red) Jorg Lindeman University of Magdeburg Applications Colocalization Live Cell Imaging FRAP/FLIP GFP-Fusion FRET Colocalization of Proteins Colocalization of up to different proteins Colocalization does not mean interaction Decreased cross talk with multitracking feature Colocalization of insulin and calcitonin receptor-like receptor Insulin-Cy5 Glucagon-Rhodamine CRLR-FITC Colocalization p53 a-tubulin Proteins may colocalize but not necessarily interact Confocal Microscopy is a powerful tool for studying signaling mechanisms Tóm lược ý TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Câu hỏi lượng giá Câu 1: Phản ứng miễn dịch huỳnh quang A Là kỹ thuật miễn dịch kháng thể đánh dấu thuốc nhuộm huỳnh quang B Có loại bao gồm kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang trực tiếp kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp C Đọc kết cách soi kính hiển vi huỳnh quang D A, B C TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Câu hỏi lượng giá Câu 2: Kỹ thuật có ý nghĩa chẩn đoán phân biệt u lành-u ác A Miễn dịch huỳnh quang B H.E C Hóa mơ miễn dịch D Giemsa TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Xin chân thành cảm ơn! TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Tài liệu phải học Bộ Y Tế Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành giải phẫu bệnh, tế bào học (5199/QĐ-BYT ngày 25/12/2013) NXB Y học, 2016 (Trang 349-352) TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP ... trọng ý nghĩa kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang xét nghiệm mơ bệnh học Phân tích ưu/nhược điểm phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang Liệt kê vấn đề cần lưu ý thực kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang cách... kê vấn đề cần lưu ý thực kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang cách khắc phục Thực thao tác kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Quy trình xét nghiệm... of ds-DNA Other Probes 4’,6-diamidino -2- phenylindole (DAPI) MitoTracker-Orange CMTMRos TRAP1 Mouse Monoclonal + Goat anti-Mouse-FITC Felts et al., JBC, 20 00 microtubules Anti-tubulin MoAb Goat