Bước đầu nghiên cứu vi khuẩn hiếu khí trong bùn đáy ao nuôi tôm tại xã hưng hoà tp vinh nghệ an

Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng Tr-ờng đại học vinh Khoa sinh học - - Lê thị h-ơng B-ớc đầu nghiên cứu vi khuẩn hiếu khí bùn đáy ao nuôi tôm xà h-ng hòa thành phố vinh - Nghệ An Khoá luận tốt nghiệp đại học Ngành khoa học sinh học Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng Vinh, 2009 Lời cảm ơn Trong trình thực đề tài, em đà nhận đ-ợc góp ý, động viên giúp đỡ thầy cô giáo, bạn sinh viên hộ gia đình xà H-ng Hoà (Thành phố Vinh Nghệ An) Em xin chân thành cảm ơn Ban chủ nhiệm khoa Sinh học; thầy cô giáo, cán Khoa nói chung Tổ môn Di truyền - Vi sinh - Ph-ơng pháp giảng dạy nói riêng đà tạo điều kiện tốt sở vật chất tinh thần để em hoàn thành đề tài Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo h-ớng dẫn Thạc sĩ Nguyễn Lê Vĩnh đà quan tâm, giúp đỡ h-ớng dẫn tận tình để em nâng cao kiến thức, ph-ơng pháp nghiên cứu khoa học thực đề tài Qua đây, em xin chân thành cảm ơn hộ nuôi tôm xà H-ng Hòa cung cấp thông tin kinh nghiệm sản xuất cần thiết phục vụ cho đề tài Xin cảm ơn tới quan tâm, giúp đỡ, động viên tất bạn bè suốt thời gian qua TP Vinh, tháng năm 2009 Sinh viên Lê Thị H-ơng Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng mục lục Trang Mở đầu Ch-ơng I TổNG QUAN TàI LIệU 1.1 Tỉng quan vỊ khu hƯ vi khuẩn môi tr-ờng n-ớc ao hồ nuôi trång thđy s¶n 1.2 T×nh hình ô nhiễm môi tr-ờng thủy sản khả xư lý b»ng biƯn ph¸p vi sinh vËt 1.2.1 Tình hình ô nhiễm môi tr-ờng thđy s¶n 1.2.2 Khả xử lý biện pháp VSV 1.3 Vi khuÈn gây bệnh động vật thủy sản khả kiĨm so¸t ngn bƯnh b»ng vi sinh vËt 10 1.3.1 Vi khuẩn gây bệnh động vật thủy sản 10 1.3.2 Khả kiĨm so¸t ngn bƯnh b»ng biƯn ph¸p VSV 12 Ch-ơng II ĐốI TƯợNG Và PHƯƠNG PHáP NGHIÊN CứU 14 2.1 Đối t-ợng nghiên cứu 14 2.2 Địa điểm ph-ơng pháp thu mẫu 14 2.2.1 Địa ®iĨm nghiªn cøu 14 2.2.2.Thêi gian nghiªn cøu 14 2.3 Ph-ơng pháp lựa chọn địa điểm thu mẫu 15 2.4 Các ph-ơng pháp nghiªn cøu 15 2.4.1 Ph-ơng pháp pha loÃng mẫu theo dÃy thập phân 11 2.4.2.Ph-ơng pháp MPN (Most Probable Number) 15 2.4.3 Ph-ơng pháp cấy ria ống thạch nghiêng hộp trải 16 2.4.4 Ph-ơng pháp phân lập mô tả đặc điểm khuẩn lạc vi khuẩn 16 2.4.5 Ph-ơng pháp thử hoạt độ Amilaza Proteaza 17 2.4.6 Ph-ơng pháp ®Õm khuÈn l¹c (CFU) 18 2.4.7 M«i tr-êng nu«i cÊy vi khuÈn 19 Kho¸ luËn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng 2.4.8 Ph-ơng pháp xử lý số liệu 19 Ch-ơng III KếT QUả NGHIÊN CứU Và THảo luận 20 3.1 Một số đặc điểm ao nuôi tôm xà H-ng Hòa (Thành phố Vinh Nghệ An) 20 3.2 Kết định l-ợng vi khuẩn hiÕu khÝ tæng sè 21 3.2.1 Kết đợt I (ngày 12/11/2008) 21 3.2.2 KÕt qu¶ đợt II (ngày 15/12/2008) 22 3.2.3 Kết đợt III (ngày 9/02/2008) 23 3.2.4 Đánh giá biến động số l-ợng vi khuẩn bùn đáy ao qua đợt nghiên cứu 25 3.3 Thành phần số l-ợng vi khuẩn đ-ợc phân lập từ ao nghiên cứu đợt (ngµy 15/12/2008) 27 3.4 Kết xác định hoạt độ enzim amylaza proteaza số chủng vi khuẩn đ-ợc ph©n lËp 30 3.4.1 Kết xác định hoạt ®é amylaza 30 3.4.2 Kết xác định hoạt độ proteaza 31 3.5 Kết nghiên cứu khả sinh tr-ởng hai chủng C11A1 TB4 32 Kết luận đề nghị 35 KÕt luËn 35 đề NGHị 35 Tài liệu tham khảo 36 Phô lôc 39 Kho¸ ln tèt nghiƯp Cư nhân Sinh học Lê Thị H-ơng Mở đầu Trong khoảng 10 năm trở lại đây, nghề nuôi tôm Việt Nam đà phát triển mạnh mẽ Tính đến cuối năm 2001, diện tích nuôi tôm th-ơng phẩm n-ớc ta đà đạt 230.000 ha, suất bình quân 4,7 tấn/ha, cá biệt có mô hình đạt - 11 tấn/ Theo báo cáo Bộ Thủy sản, tính đến tháng 6/2005, diện tích nuôi tôm n-ớc lợ đạt 542.900 ha, tăng 11,2% so với kỳ năm 2004, sản l-ợng nuôi đạt 562.800 Đối với việc nuôi tôm thâm canh cao sản, hai yếu tố quan trọng định suất tôm tôm giống bệnh môi tr-ờng ao nuôi Hiện nay, việc làm trì ao nuôi nhiều bất cập, khiến cho ng-ời nuôi tôm gặp nhiều rủi ro Tình hình đặt cho nhà khoa học sản xuất nhiều vấn đề cần giải quyết, có việc xử lý bùn đáy ao, đặc biệt ao, đầm nuôi thả tôm mật độ cao Mỗi năm, đáy ao nuôi tôm thâm canh hình thành lớp bùn dày 10 - 15 cm, t-ơng đ-ơng 30 - 50 chất khô giàu hữu cơ/ha Bùn có thành phần chủ yếu chất hữu cơ, sinh khối vi sinh vật xác động vật, thực vật thủy sinh Khi phân hủy tự nhiên làm suy giảm l-ợng ôxy hòa tan sinh chất độc hại tôm nh- NH3, H2S, CH4 Chất l-ợng đáy ao nuôi tôm có ảnh h-ởng lớn đến chất l-ợng n-ớc ao nuôi tôm nh- oxy hoà tan, độ n-ớc, phát triển tảo, tạo khí độc, phát triển loại vi khuẩn gây bệnh Sau vụ nuôi tôm, ng-ời dân th-ờng thực tiến hành xử lý đáy ao nhiều biện pháp khác nh- nạo vét, phơi khô, xử lý chế phẩm vi sinh chế phẩm hoá học Mục đích biện pháp làm giảm chất độc hại bùn đáy ao, giảm loài vi sinh vật gây bệnh; đặc biệt kích thích phát triển loài vi sinh vật hiếu khí có khả phân giải chất Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng hữu có bùn đáy ao, cách để xư lý m«i tr-êng nhê vi khn hiÕu khÝ ViƯc nghiên cứu khu hệ vi khuẩn bùn đáy ao nuôi tôm đà đ-ợc tiến hành nhiều nơi Tuy nhiên, nghiên cứu chủ yếu tập trung vào thời gian nuôi tôm, thời gian ao không nuôi tôm ch-a đ-ợc nghiên cứu nhiều Hơn nữa, ao đầm nuôi tôm xà H-ng Hòa (Thành phố Vinh - Nghệ An) ao đầm có thời gian nuôi ch-a lâu, khoảng năm trở lại đây, nghiên cứu vấn đề hầu nh- ch-a đ-ợc thực Với lý khuôn khổ khóa luận tốt nghiệp, lựa chọn đề tài: Bước đầu nghiên cứu vi khuẩn hiếu khí bùn đáy ao nuôi tôm xà H-ng Hòa (Thành phố Vinh - Nghệ An) Mục tiêu đề tài là: - Xác định mật độ vi khuẩn hiếu khí bùn đáy thời gian không nuôi tôm số ao nuôi - Nghiên cứu số đặc ®iĨm sinh häc cđa mét sè chđng vi khn ph©n lập đ-ợc - Qua hoạt động này, rèn luyện ph-ơng pháp, kỹ nghiên cứu khoa học, đánh giá sinh tr-ởng - phát triển khả øng dơng cđa c¸c chđng vi khn hiÕu khÝ bùn đáy ao nuôi tôm việc cải thiện môi tr-ờng nuôi tôm Nhiệm vụ đề tài là: - Tìm hiểu tình hình sản xuất đặc điểm số ao nuôi tôm xà H-ng Hoµ (Thµnh Vinh – NghƯ An) - TiÕn hµnh đợt thu mẫu bố trí thí nghiệm để ®iỊu tra vỊ vi khn hiÕu khÝ tỉng sè bùn đáy số ao thời gian ao không nuôi tôm - Phân lập, mô tả bảo quản chủng vi khuẩn hiếu khí từ mẫu bùn đáy ao thu thập đ-ợc Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng - Nghiên cứu hoạt tính enzim amylaza proteaza chủng đ-ợc phân lập - Nghiên cứu khả sinh tr-ởng cđa mét sè chđng vi khn cã ho¹t tÝnh enzim amylaza proteaza mạnh Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng Ch-ơng I TổNG QUAN TµI LIƯU 1.1 Tỉng quan vỊ khu hƯ vi khn môi tr-ờng n-ớc ao hồ nuôi trồng thủy sản Vi sinh vật (VSV) có mặt khắp nơi nguồn n-ớc Sự phân bố chúng hoàn toàn không đồng mà khác tùy thuộc đặc tr-ng loại môi tr-ờng [1] Số l-ợng, thành phần VSV n-ớc phụ thuộc nhiều vào yếu tố môi tr-ờng nh-: ánh sáng, nhiệt độ, pH, hàm lượng chất hữu Thành phần VSV n-íc gåm cã vi khuÈn, nÊm mèc, nÊm men, xạ khuẩn, virut, vi tảo Trong đó, vi khuẩn chiếm tØ lƯ lµ cao nhÊt [10] Vi khn n-íc chủ yếu loài dị d-ỡng hoại sinh Những loài có khả phân hủy chất hữu cơ, sử dụng chuyển hóa chất độc m«i tr-êng n-íc nh- NH3, H2S, CH4… Vi khn lu«n giữ vai trò quan trọng thành phần, số l-ợng nh- ảnh h-ởng tích cực tiêu cực đến hệ sinh thái n-ớc [12] ao, hồ đầm nuôi trồng thủy sản, hàm l-ợng chất dinh d-ỡng muối khoáng cao nên số l-ợng loài thành phần VSV phong phú, đa dạng, tập trung nhiều loại Vai trò chúng hệ sinh thái n-ớc có khác [14] Ngoài sinh vật tự d-ỡng có nhiều nhóm VSV dị d-ỡng có khả phân hủy chất hữu cơ, tầng n-ớc khác Các ao hồ đầm nuôi trồng thủy sản chịu tác động mạnh mẽ ng-ời Đặc biệt, việc cung cấp nguồn dinh d-ỡng làm thức ăn vật nuôi thủy sản Các thức ăn thừa chất thải vật nuôi th-ờng làm cho n-ớc giầu chất hữu gây t-ợng phú dưỡng Đây môi tr-ờng thuận lợi cho phát triển VSV ao hồ Sự gia tăng số l-ợng VSV n-ớc giúp cho trình chuyển hóa vật chất nhanh hơn, tăng c-ờng trình tự làm n-ớc Bên cạnh đó, VSV gây Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng ô nhiễm ao hồ nuôi trồng thủy sản VSV gây bệnh, suy giảm oxi hòa tan, thay đổi pH, thay đổi nồng độ ion nước[12] 1.2 Tình hình ô nhiễm môi tr-ờng thủy sản khả xử lý biện pháp vi sinh vật 1.2.1 Tình hình ô nhiễm môi tr-ờng thủy sản Không ch ti Vit Nam m c nhiều nước khu vực Đ«ng Nam Á Philippin, i Loan, Thái Lan, Indonesia hot ng nuôi trång thủy sản, nu«i t«m đ· tạo chuyển đổi hiệu đem lại nhiều li ích thit thc cho nông dân Hin nay, 80% sn lng tôm th gii l t ngun tôm nuôi công nghip vi ging tôm nh t«m só, t«m thẻ, t«m thẻ đỏ đu«i Số liệu thng kê cho bit tng s lng tri nuôi tôm th gii l khong 380 000 tri nuôi, chim khoảng 1,25 triệu ha, với sản lượng hàng năm từ 50 tới 10 000 kg/ha Hoạt động nu«i t«m bao gm nuôi qun canh, bán thâm canh v thâm canh Vic tng trng nhanh chóng hot ng nuôi tôm hai thp niên gn ây mang li mt s m rng din tích nuôi tôm ton cu, nhng làm thay đổi nhanh chãng c«ng nghệ nu«i trồng thy sn Nhng công ngh k thut tiên tin xut hin rõ nét hot ng nuôi ging, xây dng công thc cho thc n, v k thut cho ăn Tuy nhiªn, vấn đề đ· xuất l bùng phát bnh dch nhiều loại VSV kh¸c nh­ virut, vi khuÈn, nÊm… xuống cấp ca môi trng, trit phá rng ngp mn, thiu hụt tri nuôi tôm ging có cht lng Ngoi ra, vic thay i môi trng t nhiên ven bin ó làm xuất lo ngại liªn quan tới chất lng nc v t, s cân bng môi trng Phn ln sn phm d tha nuôi tôm -ợc tích t di đáy ao ây l ngun gây nguy hại cho t«m cho hoạt động nu«i t«m Lp bùn áy ao ny rt c, thiu ôxy v chứa nhiều chất độc amoni, nitrit, hydrogen sulfit Chất lượng nước chất lượng đ¸y ao t¸c động trực tiếp tới t«m Con t«m lu«n bị căng thẳng, thể qua việc kÐm ăn, mức tăng Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-¬ng trưởng giảm dễ bị mắc bệnh Phần lớn, bnh ca tôm u có ngun gc t môi trng m chúng sinh sng Môi trng bên ngoi trại nu«i t«m, chất thải dơ bẩn thường kh«ng quản lý tốt làm ảnh hưởng tới hệ sinh thái ven bin iu ny không ch tác ng lên môi trng t m lên giá tr ti nguyên ven bin, bao gm c tri nuôi tôm Vic tái s dng ao b ô nhim hay đống m«i trường xung quanh tạo điều kiện lm cho ngun nc ô nhim v tác ng lên hot ng ven bin Cách ây nhiu nm ngi ta à thy rng vic nuôi tôm thâm canh thiu khoa học kh«ng bền vững Việc t«m chết hàng lot bnh nguyên tn công l nh hng ca iu kin sinh thái xu gây Trong nuôi trng thy sn, thc n không n ht, phân v chuyển hãa dinh dưỡng nguồn gốc chủ yếu « nhiễm nước nu«i thủy sản Người ta quan sát thy rng, h thng thâm canh tôm th× cã 15 - 20% thức ăn dïng vo phát trin mô ng vt, có ti 15% tng lượng thức ăn hao hụt kh«ng ăn hết thất tho¸t, cã 40 - 45% sử dng trình chuyn hóa bình thng, trì lột vỏ Lượng chất thải sinh cã liªn quan với c«ng nghệ sản xuất thức ăn hệ thng nuôi tôm Nit v photpho l nhng nguyên t chủ yếu chất thải bắt nguồn từ thức ăn Vic cho thc n nhiu, nc không n nh, thức ăn dễ tan, thức ăn khã hấp thu khả tr× nitơ yếu tố liªn quan với nước thải cã chứa nhiều nitơ photpho Thức ăn thừa, chiếm tỷ lệ lớn (30 40%) « nhiễm nitơ Người ta ước lượng rằng, cã khoảng 63 - 78% nitơ 76 - 80% photpho cho tôm n b tht thoát vo môi trng Các nguồn kh¸c chất thải hữu mảnh vụn thực vật phï du tảo dạng sợi (lab-lab) chất lắng đọng chất hữu hoà tan/huyền phï nước lấy vào mang theo Chất thải nuôi thy sn có cha mt d lng c¸c chất kh¸ng sinh, dược phẩm, thuốc trị liệu kÝch thÝch tố Kho¸ ln tèt nghiƯp Cư nhân Sinh học Lê Thị H-ơng 3.3 Thành phần số l-ợng vi khuẩn đ-ợc phân lập từ ao nghiên cứu đợt (ngày 15/12/2008) Từ mẫu đợt nuôi đĩa petri chứa môi tr-ờng MPA Tất loài khuẩn lạc VK mọc lên mà phân biệt đ-ợc mắt th-ờng đ-ợc tách sang đĩa cấy ria, sau chuyển sang bảo quản ống thạch nghiêng Những khuẩn lạc có đặc điểm giống chọn hai khuẩn lạc điển hình để phân lập tiếp Bảng 3.5 Mô tả đặc điểm chủng vi khuẩn phân lập đ-ợc từ mẫu đợt II STT Tên chủng Nguồn phân lập Đặc điểm khuẩn lạc C1A1 Ao Màu trắng sữa, mép xù xì, màu trắng đục, lồi C2A2 Ao Đ-ờng kính gần 1mm, màu trắng đục, trơn bóng C3A2 Ao Đ-ờng kính gần 2,5mm, khuẩn lạc to, màu vàng chanh, trơn bóng, mép trơn C4A2 Ao Đ-ờng kính khoảng 2mm, tròn, mặt xù xì, màu trắng sữa C5A3 Ao Màu vàng chanh, lồi giữa, mép trơn, bề mặt trơn bóng, Khuẩn lạc to, đ-ờng kính khoảng 3mm C6A3 Ao Có màu hồng nhạt, viền trơn, bóng, lồi giữa, khuẩn lạc to, đ-ờng kính khoảng 3,5mm C7A3 Ao Có màu trắng, bẹt, trơn, bóng, đ-ờng kính khoảng 2mm C8A3 Ao Nhỏ li ti, đ-ờng kính khoảng -1,5mm, lồi giữa, trơn bóng, có màu trắng sữa viền ngoµi C9A1 Ao Cã mµu tr»ng, låi ë giữa, mép xù xì, đ-ờng kính khoảng 2,5mm 10 C10A1 Ao Có màu vàng, mép xù xì, bẹt, khuẩn lạc to, đ-ờng kính khoảng 3,5mm 11 C11A1 Ao Mọc thành đám, có màu tráng đục, bẹt, đ-ờng kính khoảng 0,5-2mm 12 C12A3 Ao Có màu trắng, bẹt, khuẩn lạc nhỏ, đ-ờng kính khoảng 2,5mm 27 Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng STT Tên chủng Nguồn phân lập 13 C13A2 Ao Có màu vàng chanh, lồi giữa, mép trơn 14 C14A1 Ao Có màu trắng, tròn, mép trơn, bẹt, chất tiết màu vàng chanh đậm, khuẩn lạc to, đ-ờng kính khoảng 2,5mm 15 C15A1 Ao Có màu trắng, xù xì, bẹt, mép trơn, chất tiết màu nâu nhạt 16 C16A2 Ao Có mầu hồng nhạt, lồi giữa, mép xù xì, chất tiết màu gạch non 17 C17A2 Ao Có hình nếp, lồi giữa, màu vàng nhạt, mép tròn, chất tiết màu vàng chanh 18 C18A2 Ao Khuẩn lạc to, đ-ờng kính khoảng 2,5 -3,5mm Mép trơn bóng, chất tiết màu vàng nhạt, đặc dạng mỡ 19 C19A3 Ao Màu trắng sữa, bề mặt xù xì, bẹt, mép gấp nếp, chất tiết màu vàng nhạt 20 TB1 Ao Khuẩn lạc bẹt, nhân màu trắng sữa, đ-ờng kính khoảng mm, mép trắng sẫm 21 TB2 Ao Khuẩn lạc mỏng, bề mặt xù xì, lấm màu trắng phau 22 TB3 Ao Có màu trắng sẫm, sau ngày đ-ờng kính mm, không nhìn thấy nhân khẩn lạc, phát triển mạnh 23 TB4 Ao Sau 48h nhìn thấy khuẩn lạc, sau ngày đ-ờng kính kuẩn lạc 0,5mm, phát triển lồi cao, bề mặt trơn bóng, màu trắng (sáng TB3) 24 C20A1 Ao Xù xì, màu trắng sữa, bề mặt khô 25 C21A3 Ao Có dạng phân nhánh, bẹt, mầu giống màu môi tr-ờng 26 C22A3 Ao Tròn, lồi, trơn bóng, màu trắng 27 C23A2 Ao Xù xì, trơn bóng, màu vàng kem 28 C24A2 Ao Xù xì, dạng phân nhánh, trắng đục 29 C25A2 Ao Tròn, mép trơn, màu trắng sữa, bề mặt khô, có hạt tr¾ng xen kÏ 30 C26A3 Ao Nhá li ti, mép trơn, trắng đục, bề mặt khô Đặc điểm khuẩn lạc 28 Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng STT Tên chủng Nguồn phân lập 31 C27A2 Ao Trơn bóng, trắng đục, bề mặt khô, mép có viền c-a 32 C28A2 Ao Có dạng rễ, mọc thành đám, chất tiết màu vàng chanh, tạo váng 33 N1C1 Ao Khuẩn lạc tròn, mầu vàng chanh, mép xù xì, bẹt 34 C1P1 Ao Khuẩn lạc tròn, bóng, trơn, mầu đục 35 C2P2 Ao Khuẩn lạc tròn, mầu trắng sữa, sau thời gian chuyển sang mầu đục mầu nâu nhạt 36 C3P3 Ao Khuẩn lạc có viền trơn, lồi giữa, mầu trắng ngà 37 C4P4 Ao Khuẩn lạc sấn sùi, mầu trắng 38 C5P5 Ao Khuẩn lạc trơn, nhỏ, có mầu vàng Đặc điểm khuẩn lạc Dựa vào bảng mô tả khuẩn lạc ta thấy: số l-ợng vi khuẩn gặp nhiều Ao thứ (20 chñng), chiÕm 52,65%, Ao thø (9 chñng), chiÕm 23,65%, Ao thứ (9 chủng) chiếm 23,65% Điều sát với thực tế, nh- kết định l-ợng vi khuẩn trên: Ao số l-ợng vi khuẩn nhiều so với Ao Ao 3, đợt số l-ợng vi khuẩn Ao cao hẳn Ao Ao (gấp 7,3 lần so với Ao gấp 5,9 lần so với Ao 3) Đặc biệt, Ao ao có thời gian nuôi lâu (5 vụ) giai đoạn Ao có cày xới bùn, Ao Ao ch-a cày xới 29 Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng 3.4 Kết xác định hoạt độ enzim amylaza proteaza số chủng vi khuẩn đ-ợc phân lập Từ chủng thu đ-ợc đợt II tiến hành nghiên cứu hoạt độ amylaza proteaza số chủng Đây chủng gặp nhiều mẫu, đồng thời chủng khả sinh tr-ởng mạnh Chúng tiến hành nuôi môi tr-ờng MPA lỏng, pH = 7,0 ®iỊu kiƯn nhiƯt ®é lµ 300C, S = 1g, VSV = 1mg, kết thu đ-ợc nh- sau: 3.4.1 Kết xác định hoạt độ amylaza Bảng 3.6: Kết nghiên cứu hoạt độ amylaza Hoạt độ amylaza TT Các chñng C4A2 40,7 C5A1 50,8 TB3 33,9 TB4 58,3 C12A3 45,7 TB1 C20A1 52,5 C9A3 38,9 C11A1 57,3 10 TB2 52,5 11 C1A1 11,8 12 C17A2 32,2 13 C10A1 50,8 14 C4A1 47,4 (%) 52,5 30 Kho¸ ln tèt nghiƯp Cư nhân Sinh học Lê Thị H-ơng Nhìn chung, tất chủng có hoạt độ amylaza, có chủng có hoạt độ amylaza cao nh-: TB4, C11A1, TB1, C20A1 , TB2, C5A1, C10A1 Đây chủng có hoạt độ amylaza 50% 3.4.2 Kết xác định hoạt độ proteaza Bảng 3.7: Kết nghiên cứu hoạt độ proteaza (đơn vị %) Hoạt độ TT Tên chñng C4A2 23,5 C5A1 22,8 TB3 18,5 TB4 59,6 C12A3 24,5 TB1 21,0 C20A1 22,6 C9A3 20,6 C11A1 24,3 10 TB2 20,7 11 C1A1 32,8 12 C17A2 26,5 13 C10A1 26,6 14 C4A1 21,7 proteaza(%) Nhìn chung, tất chủng có hoạt độ proteaza, chủng có hoạt độ proteaza cao nh-: TB4, C1A1, C10A1, C17A2, C12A3, C11A1 31 Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hot amylaza Lê Thị H-ơng Hot proteaza Hot độ 60 50 40 30 20 10 C4 A2 C5A1 TB3 TB4 C12 A3 TB1 C2 A1 C9 A3 C11A1 TB2 C1A1 C17A2 C10 A1 C4 A1 Tên chủng Biểu đồ 3.2 Kết nghiên cứu hoạt độ amylaza v proteaza Nh- vậy, tất chủng có hoạt độ amylaza proteaza, nh-ng hoạt độ amylaza chủng cao hơn, nên môi tr-ờng không bị ô nhiễm nhiều Mặt khác, thời gian nuôi tôm ch-a lâu nên ch-a tích tụ nhiều chất độc hại, số l-ợng vi khuẩn hiếu khí theo số liệu điều tra t-ơng đối nhiều, mà lại có hoạt độ amylaza proteaza cao Đây điều kiện tốt để phát triển nghề nuôi tôm 3.5 Nghiên cứu khả sinh tr-ëng cđa hai chđng lùa chän C11A1 vµ TB4 Tõ kết đà nghiên cứu tiến hành nghiên cứu khả sinh tr-ởng theo Blachmem (1981) cđa chđng C11A1 vµ TB4 Chđng C11A1 chủng có hoạt độ amylaza cao, ổn định so với chủng khác, chủng TB4 chủng có hoạt độ proteaza cao Kết thu đ-ợc nh- sau: Bảng3.8: Sự sinh tr-ởng hai chủng C11A1 TB4 điều kiện pH = Tên chủng Số l-ợng tế bào (CFU/ml) Vp (%) Ban đầu (Wo) Sau 48h (Wt) C11A1 174 000 900 000 19,43% TB4 149 000 540 000 19,44% 32 Kho¸ luËn tèt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng Từ bảng 3.8 ta thÊy: sau 48h, ë ®iỊu kiƯn pH = 5, tốc độ sinh tr-ởng chủng C11A1 TB4, gần nh- tuơng đ-ơng Số l-ợng khuẩn lạc tăng lên nhiều sau 48h Bảng 3.9: Sự sinh tr-ởng hai chủng C11A1 TB4 điều kiện pH =7 Tên chủng Số l-ợng tế bào (CFU/ml) Vp (%) Ban đầu (Wo) Sau 48h (Wt) C11A1 188 000 320 000 23,62% TB4 166 000 910 000 21,88% Từ bảng 3.9 ta thấy: sau 48h, điều kiƯn pH = 7, tèc ®é sinh tr-ëng cđa chủng C11A1 mạnh TB4 Số l-ợng khuẩn lạc tăng lên nhiều sau 48h Bảng 3.10: Tốc độ sinh tr-ởng hai chủng C11A1 TB4 điều kiện pH =9 Tên chủng Số l-ợng tế bào (CFU/ml) Vp (%) Ban đầu (Wo) Sau 48h (Wt) C11A1 169 000 760 000 19,61% TB4 115 000 0400000 16,75% Từ bảng 3.9 ta thấy: sau 48h, điều kiện pH = 7, tèc ®é sinh tr-ëng cđa chđng C11A1 mạnh TB4 Số l-ợng khuẩn lạc tăng lên rÊt nhiỊu sau 48h 33 Kho¸ ln tèt nghiƯp Cư nhân Sinh học Lê Thị H-ơng Bảng 3.11 Tốc độ sinh tr-ởng hai chủng C11A1 TB4 điều kiÖn pH = 5, pH = 7, pH =9 pH điều kiện pH Tên chủng pH = pH = pH = C11A1 19,43% 23,62% 19,61% TB4 19,44% 21,88% 16,75% Kết bảng đ-ợc thể hiƯn qua biĨu ®å: Vp 25.00% 23.62% 21.88% 19.43% 19.44% 19.61% 16.75% 20.00% 15.00% 10.00% C11A1 TB4 5.00% 0.00% pH = pH = pH = pH BiÓu ®å 3.3 Tèc ®é sinh tr-ëng cña hai chñng C11A1 TB4 điều kiện pH = 5, pH = 7, pH =9 Nhìn vào bảng số liệu biểu đồ trên, ta thấy rõ là: Khả sinh tr-ởng C11A1 mạnh so với TB4 Nh-ng hai chủng phát triển mạnh pH = Điều với thực tế, ®iỊu kiƯn pH trung tÝnh (pH = 7) vi khn sinh tr-ởng mạnh Đây điều kiên pH môi tr-ờng ao nuôi tôm Nh- vậy, nuôi tôm cần phải luôn trì ổn định môi tr-ờng pH, tạo điều kiện cho vi khn hiỊu khÝ ph¸t triĨn VỊ thêi gian phát triển: Sau 48h số l-ợng vi khuẩn tăng lên nhiều, tăng lên gấp hàng triệu lần Chứng tỏ nhiều thời gian số l-ợng vi khuẩn tăng lên Tuy nhiên, điều kiện tự nhiên vi khuẩn luôn tăng nh- điều kiện thí nghiêm mà phụ thuộc vào nhiêu yếu tố khác: nh- điều kiện pH, nhiệt độ, môi tr-ờng sống 34 Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng Kết luận đề nghị Kết luận Qua kết nghiên cứu chúng t«i rót mét sè kÕt ln sau: Trong đợt nghiên cứu, mật độ vi khuẩn hiếu khí bùn đáy ao nuôi tôm khác điểm thu mẫu: thay đổi từ 150 đến 1600 (MPN/100ml) Đợt I, từ 230 đến 2400 (MPN/100ml) Đợt II; từ 2900 đến 11000 (MPN/10ml) Đợt III Dựa vào giá trị trung bình, mật ®é vi khn bïn ®¸y cđa Ao cã phần cao so với Ao Ao Nguyên nhân Ao đà có thời gian nuôi lâu (6 năm) lớp bùn đen bề mặt dày nhờ tích tụ chất trình nuôi Sau tháng bùn đáy ao đ-ợc phơi khô (từ 12/11/2008 - Đợt I đến 9/02/2009 - Đợt I), mật độ vi khuẩn trung bình bùn đáy ao đà tăng lên đáng: tăng 9,2 lần Ao 1, tăng 16,6 lần Ao tăng 31,3 lần Ao Nguyên nhân bùn đáy ao sau khô thời tiết ấm áp hơn, tạo điều kiện thuận lợi cho vi khn hiÕu khÝ ph¸t triĨn Tõ c¸c mẫu thu bùn Đợt II, 38 chủng vi khuẩn đà đ-ợc phân lập đ-ợc bảo quản tốt phòng thí nghiệm Kết cho thấy, thành phần vi khuẩn Ao (gặp 20 chủng) đa dạng Ao (gặp chủng) Ao (gặp chủng) Trong số chủng thu đ-ợc, hầu hết có hoạt tính amilaza proteaza Các chủng có hoạt độ amylaza cao là: TB4, C11A1, TB1, C20A1 , TB2, C5A1, C10A1 (đây chủng có hoạt độ amylaza 50%), chủng có hoạt độ proteaza cao là: TB4, C1A1, C10A1, C17A2, C12A3 Đặc biệt, chủng TB4 vừa có hoạt độ amylaza cao, vừa có hoạt độ proteaza cao Qua nghiên cứu khả sinh tr-ởng chủng C11A1 TB4 , điều kiện pH = 5, pH = 7, pH = 9, chñng C 11A1 cã tốc độ sinh tr-ởng mạnh chủng TB4 chủng có khả phát triển tốt nồng độ pH = 35 Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng đề NGHị Do thời gian nghiên cứu hạn chế, tiến hành đ-ợc số nghiên cứu vào thời gian ao không nuôi tôm Đề tài cần đ-ợc tiếp tục mở rộng vào thời kì nuôi tôm để có đ-ợc thông tin đầy đủ sù biÕn ®éng cđa vi khn tỉng sè mét năm tiếp tục nghiên cứu đầy đủ chủng vi khuẩn đà đ-ợc phân lập để ứng dụng vào thực tiễn 36 Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng Tài liệu tham khảo Nguyễn Liêu Ba cộng - 2003 Đặc điểm sinh học số chủng Bacillus Lactobacillus có khả ứng dụng để xử lý môi tr-ờng nuôi tôm cá Hội nghị cônbg nghệ sinh häc toµn quèc NXB Khoa häc vµ kÜ thuËt, trang 388 - 391 Bé N«ng nghiƯp - 1979 Giáo trình vi sinh vật trồng trọt NXB Nông nghiệp Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đăng Đức - 1975 Một số ph-ơng pháp nhiên cứu Vi sinh vật học - tËp NXB Khoa häc vµ kÜ thuËt Hµ néi Nguyễn Lân Dũng, Bùi Xuân Đồng, Lê Đình L-ơng - 1982 Vi NÊm NXB Khoa häc kÜ thuËt Hµ nội Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty - 2000 Vi sinh vËt häc NXB Gi¸o dơc Êgôrôv N.X (hiệu đính) - 1976 Thực tập Vi sinh vật học NXB MIR Matxcova (bản dịch PGS - Nguyễn Lân Dũng - 1983 NXB Đại học trung học chuyên nghiêp Hà nội) Nguyễn Thành Đạt, Mai ThÞ H»ng - 2001 Sinh häc Vi sinh vËt NXB Giáo dục Nguyễn Văn Mùi -2002 Xác định hoạt độ Enzim NXB Khoa học - kĩ thuật Hà nội L-ơng Đức Phẩm - 2000 Vi sinh vật vệ sinh an toàn thực phẩm NXB Nông nghiệp Hà Nội 10 L-ơng Đức Phẩm - 2001 Công nghệ xử lý n-ớc thải biện pháp sinh học NXB Gi¸o dơc 11 Ngun VÜnh Ph-íc - 1978, Vi sinh vËt häc thó y - tËp NXB Khoa häc - kĩ thuật Hà Nội 37 Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng 12 Nguyễn Vĩnh Ph-íc - 1978 Vi sinh vËt häc thó y - tập NXB Đại học THCN Hà nội 13 Bùi Quang Tề - 1998, Giáo trình bệnh động vật thủy sản NXB Nông nghiệp Hà nội 14 Vũ Trung Tạng 2001 Cơ sở sinh thái học NXB giáo dục 15 Nguyễn D-ơng Tuệ - 2003 Thực tập lớn Vi sinh vật học Đại học Vinh 16 Trần Linh Ph-ớc - 2002 Ph-ơng pháp phân tích Vi sinh vật n-ớc, thực phẩm mĩ phẩm NXB Giáo dục 17 Trần Cẩm Vân - 2002 Giáo trình Vi sinh vật học môi tr-ờng NXB Đại học Quốc gia Hà nội 38 Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng Phụ lục Một số hình ảnh trình thực đề tài Hình 1: Khuẩn lạc chủng TB4 mọc môi tr-ờng MPA, pH = Hình 2: Khuẩn lạc chủng C11A1 mọc môi tr-êng MPA, pH = 39 Kho¸ ln tèt nghiƯp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng Hình 3: Các chủng C8A2, C4A2, C3A2, C16A2, C17A2, C2A2 phát triển đĩa petri chứa môi tr-ờng MPA Hình 4: Các chủng C8A3, C5A3, C12A3, C19A3 phát triển đĩa petri chứa môi tr-ờng MPA 40 Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Lê Thị H-ơng Hình 5: Các chủng C15A1, C14A1, C11A1, C1A1 phát triển đĩa petri chứa môi tr-êng MPA 41 ... chủng vi khuẩn hiếu khí bùn đáy ao nuôi tôm vi? ??c cải thiện môi tr-ờng nuôi tôm Nhiệm vụ đề tài là: - Tìm hiểu tình hình sản xuất đặc điểm số ao nuôi tôm xà H-ng Hoà (Thành phố Vinh Nghệ An) -... ĐốI TƯợNG Và PHƯƠNG PHáP NGHIÊN CứU 2.1 Đối t-ợng nghiên cứu Đối t-ợng nghiên cứu đề tài chủng vi khuẩn hiếu khí có bùn đáy số ao nuôi tôm xà H-ng Hòa (TP Vinh - Nghệ An) 2.2 Địa điểm ph-ơng pháp... tập trung vào thời gian nuôi tôm, thời gian ao không nuôi tôm ch-a đ-ợc nghiên cứu nhiều Hơn nữa, ao đầm nuôi tôm xà H-ng Hòa (Thành phố Vinh - Nghệ An) ao đầm có thời gian nuôi ch-a lâu, khoảng