1 Bộ giáo dục đào tạo Tr-ờng Đại học vinh Nguyễn Thị Hằng Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất từ dây chân chim nói (Desmos cochinchinensis var fulvescens Ban) ë Hµ TÜnh Ln Văn thạc sĩ hoá học Vinh - 2009 Mở đầu Lý chọn đề tài Việt Nam nằm vùng trung tâm Đông Nam hàng năm có l-ợng m-a nhiệt độ trung bình t-ơng đối cao Víi khÝ hËu nhiƯt ®íi giã mïa nãng, Èm ®· cho rừng Việt Nam hệ thực vật đa dạng phong phú Theo số liệu thống kê gần hệ thực vật Việt Nam có 10.000 loài [7], có khoảng 3.200 loài đ-ợc sử dụng y học dân tộc 600 loài cho tinh dầu [4] Đây nguồn tài nguyên thiên nhiên quý báu đất n-ớc có tác dụng lớn ®èi víi ®êi sèng vµ søc kháe cđa ng-êi Từ tr-ớc đến giới hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học đóng vai trò quan trọng đời sống ng-ời Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học đựơc dùng làm nguyên liệu cho công nghiệp d-ợc phẩm làm thuốc chữa bệnh, công nghiệp thực phẩm, hương liệu mỹ phẩm Thảo d-ợc nguồn nguyên liệu trực tiếp chất dẫn đ-ờng để tìm kiếm loại biệt d-ợc Theo số liệu thống kê cho thấy có khoảng 60% loại thuốc đ-ợc l-u hành giai đoạn thử nghiệm có nguồn gốc từ hợp chÊt thiªn nhiªn [5] Hä Na (Annonaceae) hä lín Mộc lan (Magnoliales) Chi đin hình họ ny l Annona Một số loi đ-ợc trồng lm cảnh, đặc biệt l Polythia longifoliapendula (lá bó sát thân) Các loi thân gỗ dùng lm củi Một số loi có qủa lớn, nhiều thịt ăn đ-ợc bao gåm c¸c lồi cđa chi Annona (na, na Nam Mỹ, mÃng cầu xiêm) hay chi Asimina (đu đủ Mỹ) chi Rollinia Bên cạnh đó, số loi nh- Hong lan (Cananga odorata) chứa tinh dầu thơm v đ-ợc sử dụng sản xuất n-ớc hoa hay đồ gia vị Vỏ cây, v rễ số loi đ-ợc sử dụng y học dân gian chữa bƯnh nhiƠm trïng, bƯnh ho, bƯnh gan, bƯnh vµng da gan, bệnh tiêu chảy Các nghiên cứu d-ợc lý đà tìm thấy khả kháng nấm, kháng khuẩn v đặc biệt l khả sử dụng hóa học trị liệu số thnh phần hóa học v vỏ Mặc dù họ Na (Annonaceae) có giá trị kinh tế cao nh- có hoạt tính sinh học quý đ-ợc sử dụng rộng rÃi dân gian, song việc nghiên cứu thành phần hoá học ch-a đ-ợc tiến hành nhiều Việt Nam Chính chọn đề tài: Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất từ dây chân chim núi (Desmos cochinchinensis var fulvescens Ban) Hà Tĩnh từ góp phần xác định thành phần hoá học hợp chất tìm nguồn nguyên liệu cho ngành hoá d-ợc Nhiệm vụ nghiên cứu Trong luận văn này, có nhiệm vụ: - Chiết chọn lọc với dung môi thích hợp để thu đ-ợc hỗn hợp hợp chất từ dây chân chim núi (Desmos cochinchinensis var fulvescens Ban) - Phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ dây chân chim núi Đối t-ợng nghiên cứu Đối t-ợng nghiên cứu dịch chiết dây chân chim nói (Desmos cochinchinensis var fulvescens Ban) thuéc hä Na (Annonaceae) ë ViƯt Nam Ch-¬ng Tỉng quan 1.1 Hä Na (Annonaceae) 1.1.1.Thùc vËt häc Hä Na (Annonaceae) đ-ợc gọi l họ MÃng cầu, l họ thực vật có hoa bao gồm loại thân gỗ, bụi hay dây leo Đây l họ lớn Mộc lan (Magnoliales), với khoảng 2.300 đến 2.500 loi 120-130 chi Chi điển hình họ ny l Annona (na, mÃng cầu xiêm) Họ ny sinh tr-ëng chđ u ë vïng nhiƯt ®íi, cËn nhiƯt ®íi chØ cã mét Ýt loài sinh sèng ë vïng ôn đới (Asimini ) Theo Leboeuf cộng có kho¶ng 900 lồi ë Trung Nam Mü, 450 lồi Châu Phi Madagascar, 950 loài Châu Australia [2] Các loi thuộc họ Na (Annonaceae) có đơn, mọc so le (mọc cách), có cuống v mép nhẵn Lá mọc thnh hai hng dọc theo thân Vết sẹo nơi đính th-ờng nhìn thấy rõ mạch dẫn Cnh th-ờng dạng ziczăc Chúng bẹ Hoa đối xứng xuyên tâm (hoa đều) v th-ờng l l-ỡng tính phần lớn loi hoa nối với gốc hoa Hoa có cánh có mu nâu hay vng, nhiều nhị hoa mọc thnh hình xoắn ốc Hoa có nhiều nhụy hoa, nhụy có bầu nhụy dạng ngăn chứa hay nhiều tiểu noÃn Có hoa mọc trực tiếp cnh lớn thân Qủa l nang, bế qủa hay đa qđa ë ViƯt Nam, theo Ngun TiÕn B©n [1, 2] đà xác định họ Na có 26 chi, 201 loi 1.1.2 Thnh phần hoá học [17] Trong thập kỉ tr-ớc đây, 18 loài họ Na (Chi Annona (8 loµi): Annona cherimola, A glabra, A montana, A muricata, A reticulata, A squamosa, A artemoya (A cherimola x squamosa), A purpurea; chi Artabotrys (2 loµi): Artabotrys hexaptalus, A uncinatus; chi Cananga (1 loµi): Cananga odorata; chi Fissistigma (2 loµi): Fissistigma glaucescens, F oldhamii; chi Goniothalamus (1 loµi): Goniothalamus amuyon; chi Polyalthia (2 loµi): Polyalthia longifolia, P longifolia “Pendula”; chi Rollinia (1 loµi): Rollinia mucosa vµ chi Uvaria (1 loµi): Uvariarufa) đà đ-ợc nghiên cứu kĩ l-ỡng Các nhà khoa học đà xác định cấu tạo hoá học thử tác dụng sinh học chúng (về tim mạch, độc tính hoạt tính d-ợc lý khác) Một số hợp chất có tiềm ứng dụng lớn để sản xuất thuốc chữa bệnh Mặc dù họ Na (Annonaceae) đà đ-ợc khảo sát lần Stehous năm 1855, nh-ng thập kỉ tr-ớc đ-ợc tiến hành nghiên cứu, đến năm 1970, họ Na (Annonaceae) bắt đầu đ-ợc nghiên cứu kỹ Trong đó, phần lớn đề tài nghiên cứu alkaloit nh-ng họ Na (Annonaceae) chứa l-ợng lớn non- alkaloidal (không phải alkaloit) có nhiều hoạt tính kháng tế bào ung th- chữa bệnh tim mạch quan trọng Các chất alkaloit họ Na (Annonaceae) bao gồm kauran, lignan, acetogenin, steroit hợp chất thơm 1.1.2.1 Các hợp chất diterpenoit kauran Bộ khung hợp chất diterpenoit kauran gồm 20 cacbon Một số hợp chất đ-ợc tách gồm 19 cacbon đ-ợc gọi tên nor-kauran diterpenoit Trong nghiên cứu Wu cộng đà tách đ-ợc 37 hợp chÊt kauran tõ hä kh¸c bao gåm: A cherimola, A glabra, A squamosa vµ R mucosa vµ chất số chúng chất phát Cấu trúc tìm thấy hợp chất đ-ợc nêu bảng Bảng 1.1: Các hợp chất diterpenoit kauran TT Hỵp chÊt R1 R2 R3 C=C COOH C=C CH2OH A squamosa H COOH A cherimola axit ent-kaur-16-en-19-oic A squamosa Loµi ent-kaur-16-en-19-ol A glabra axit 17-acetoxy-16α-hydro3 kauran-19-oic CH2OAc A cherimola axit 17-hydroxy-16α-hydro4 ent-kauran-19-oic CH2OH H COOH A cherimola axit 16α,17-dihydroxy-entkauran-19-oic A squamosa CH2OH OH COOH A glabra A squamosa 16α-hydro-ent-kauran-17-ol6 19-al CH2OH H CHO A glabra axit 16α-hydroxy-ent-kauran7 19-oic axit 16α–methoxy-ent-kauran- A cherimola CH3 OH COOH A squamosa CH3 OCH3 COOH A glabra kauran-17-oat COOCH3 H CHO A glabra 10 annoglabasin C * COOCH3 OAc COOH A glabra 11 annoglabasin D * COOCH3 OAc CHO A glabra 12 annoglabasin F * COOCH3 OAc OH A glabra COOCH3 H COOCH3 A glabra 19-oic methyl-16α-hydro-19-al-ent- este 16α-hydro-ent-kauran13 17,19-dimethyl A cherimola axit 16α-hydro-19-acetoxy14 ent-kauran-17-oic COOH H CH2OAc A glabra R mucosa axit 16α-hydro-ent-kauran-1715 COOH H CH3 A glabra COOH H CHO A glabra COOH H CH2OH A glabra COOH H COOH R mucosa COOH H OH A glabra H CH2OH COOH H CH2OAc COOH H COOH CH3 A glabra H COOH CHO A squamosa H CH2OH CHO A cherimola H COOH OH A squamosa Oac COOCH3 CHO A glabra Oac CH2OAc COOH A glabra hydroxy-ent-kauran-19-oic OCH3 CH2OH COOH R mucosa ent-kauran-16β,17,19-triol OH CH2OH CH2OH A squamosa oic axit 16α-hydro-19-al-ent- 17 18 kauran-17-oic annoglabasin E * axit 16α-hydro-ent-kauran- 19 17,19-dioic axit 16α-hydro-19-nor-ent- 20 kauran-4α-ol-17-oic A cherimola axit 17-hydroxy-16β-hydro21 ent-kauran-19-oic A squamosa axit 17-acetoxy-16β-hydro22 kauran-19-oic A squamosa axit 16β-hydro-ent-kauran-1723 oic axit 19-formyl-ent-kauran-17- 24 oic 16β-hydro-ent-kauran-17-ol- 25 19-al axit 4α-hydroxy-19-nor-ent- 26 kauran-17-oic methyl-16β-acetoxy-19-al-ent- 27 kauran-17-oat axit 16β,17-diacetoxy-ent- 28 kauran-19-oic axit 16β–methoxy-17- 29 30 axit 16β,17-dihydroxy-ent31 kauran-19-oic OH CH2OH COOH A squamosa OH CH2OH COOCH3 A squamosa OH CH2OH CHO A squamosa OH CH2OAc COOH A glabra OH CH2OAc CHO A glabra OH CH2OAc CH2OAc A cherimola OH CH2OH OH A squamosa methyl-16β,17-dihydroxy-ent32 kauran-19-oat 16β,17-dihydroxy-ent-kauran- 33 19-al axit 16β-hydroxy-17-acetoxy- 34 ent-kauran-19-oic 16β-hydroxy-17-acetoxy-ent- 35 kauran-19-al * 16β-hydroxy-17,19-diacetoxy- 36 ent-kauran 19-nor-ent-kauran-4α,16β,17- 37 triol * * ChÊt míi 12 13 11 20 16 R1 CH2OH 14 10 R2 15 18 R3 CH2OH 19 16, ent-kaur-15-en-17,19-diol A glabra 1.1.2.2 Các hợp chất lignan Có chất lignan (38-47) họ Na (Annonaceae) đ-ợc Yang cộng sự; Wu cộng công bố Các lignan đ-ợc tìm thấy loài A montana, A cherimola vµ R mucosa gåm: (+)-Syringaresinol (38), (+)-epi-syringaresinol (39), (+)- diasyringaresinol (40) liriodendrin (41) thu đ-ợc từ loài A cherimola, (-)syringaresinol (42) đ-ợc tách từ loài A montana yangambin (43), magnolin (44), eudesmin (45), membrin (46) đ-ợc tách tõ R mucosa Trong sè chóng, 38, 39, 40 vµ 42 chất đồng phân lập thể 39, 40 chất 6' O H CH3O 2'' 3'' RO 5'' 2' 3' OMe OH O OMe OMe H 1'' 4'' 1' OMe 5' OR 4' H H O CH3O O 6'' HO OMe OMe 38, R=H 39 42, R=Glc OMe OMe OH OH O O OMe OMe H H H CH3O CH3O O O HO H HO 40 OMe OMe 41 R1 OMe O R2 H R3 H O CH3O 43, R1=R2=R3=OCH3 44, R1=H, R2=R3=OCH3 45, R1=R3=H, R2=OCH3 46, R1=R2=R3=H OMe 1.1.2.3 Các hợp chất acetogenin Một dÃy hợp chất acetogenin (47-103) đà đ-ợc tách từ chi họ Na (Annonaceae) Annona Rollinia, có 24 chất Phần lớn acetogenin gồm hai vòng tetrahydrofuran, , -unsaturated--lacton 10 epoxit mạch với nhóm chức nh- OH, =O, C=C diol kề mạch dài threo erythro trans threo trans Me (CH2)9 O (CH2)4 O OH Me OH OH OH 48 (CH2)5 O O threo erythro trans threo trans (CH2)5 O Me (CH2)10 O OH Me OH R1 O O 49, R1=H 54, R1=OH threo threo threo trans trans (CH2)5 O Me OH (CH2)10 O Me OH 50 O O erythro threo trans threo trans (CH2)5 O Me (CH2)8 O OH Me OH 51 O O 49 B¶ng 4.3: Sè liƯu phỉ C-NMR cđa hỵp chÊt 158 13 Cacbon DEPT Độ dịch chuyển hoá học (ppm) Thực nghiêm Tài liÖu [15] C 78,6 80,0 CH2 42,5 43,9 C 197,2 197,0 C 149,0 148,3 C 127,4 127,8 C 156,5 156,2 CH 91,7 91,9 C 155,1 155,1 10 C 102,5 103,4 1’ C 138,7 138,8 2’,6’ CH 126,6 126,5 3’,4’, 5’ CH 128,5 129,3 11 OCH3 56,1 56,1 Nh- vËy c¸c sè liƯu phỉ UV, ESI-MS, 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC so s¸nh víi tµi liƯu [15], cho thÊy cÊu tróc cđa chÊt 158 5,6-dihydroxy-7methoxy-dihydroflavone Hợp chất lần tìm thấy loài Desmos chinensis [15] 3' 4' 2' CH3O O 1' 5' 6' HO 10 OH O (158) 5,6-dihydroxy-7-methoxy-dihydroflavone 50 Hình 4.26:Phổ tử ngoại (UV) hợp chất 158 Hình 4.27: Phổ khối l-ợng (ESI-MS) negative hợp chất 158 51 Hình 4.28: Phổ 1H-NMR hợp chất 158 Hình 4.29: Phổ 1H-NMR hợp chất 158 52 Hình 4.30: Phổ 13C-NMR hợp chất 158 Hình 4.31: Phổ 13C-NMR hợp chất 158 53 Hình 4.32: Phổ DEPT hợp chất 158 Hình 4.33: Phổ DEPT hợp chất 158 54 Hình 4.34: Phổ HMBC hợp chất 158 55 Hình 4.35: Phổ HMBC hợp chất 158 (phổdÃn) 56 Hình 4.36: Phổ HMBC hợp chất 158 (phổ dÃn) 57 Hình 4.37: Phổ HSQC hợp chất 158 58 Hình 4.38: Phổ HSQC hợp chất 158 (phổ dÃn) 59 Kết luận Nghiên cứu thành phần hoá học dây chân chim núi (Desmos cochinchinensis var fulvescens Ban) Việt Nam đà thu đ-ợc số kết nh- sau: - Bằng ph-ơng pháp ngâm chiết với dung môi chọn lọc cất thu hồi dung môi đà thu đ-ợc cao t-ơng øng lµ cao etylaxetat (47g), cao butanol (60g), pha n-íc - Phân lập hợp chất từ cao butanol ph-ơng pháp sắc ký kết tinh phân đoạn thu đ-ợc chất 156, 157 158 - Đà tiến hành sử dụng ph-ơng pháp phổ đại: phổ tử ngoại (UV), phổ khối l-ợng phun mù (ESI-MS), phổ cộng h-ởng từ hạt nhân 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC COSY để xác định cấu trúc hợp chất tách đ-ợc Các kết phổ đà cho phép khẳng định chÊt 156 lµ 5-hydroxy-3,7-dimethoxyflavone, 157 lµ izalpinin vµ 158 lµ 5,6-dihydroxy-7-methoxy-dihydroflavone Các hợp chất lần phân lập từ 60 Danh mục công trình Trần Đình Thắng, Nguyễn Thị Hằng (2009), Các hợp chất flavonoit tõ c©y d©y ch©n chim nói (Desmos cochinchinensis var fulvescens Ban), Tạp chí Khoa học Công nghệ (nhận đăng) 61 Tài liệu tham khảo Tiếng Việt Nguyễn Tiến Bân (Chủ biên) (2003), Danh lục loài thực vật Việt Nam, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Ngun TiÕn B©n (2000), Hä Na (Annonaceae), Thùc vËt chí Việt Nam, Flora of Vietnam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Vũ Văn Chuyên, Lê Trần Chấn, Trần Hợp (1987), Địa lý họ Việt Nam, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Th-ợng Dong ng-ời khác (2006), Nghiên cứu thuốc từ thảo d-ợc, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Trần Đình Đại (1998), Khái quát hệ thực vật Việt Nam Hội thảo Việt-Đức Hoá học hợp chất thiên nhiên, Hà Nội, 16-18 April, tr 17-27 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Ph-ơng pháp nghiên cứu hoá học thuốc, Nhà xuất Y học, Hà Nội Phạm Hoàng Hộ (1992), Cây cỏ Việt Nam, Montreal Trần Văn Sung (2002) Phổ cộng h-ởng từ hạt nhân hoá hữu Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng, Trần Thị Mỹ Linh, Phạm Hùng Việt (1985), Các ph-ơng pháp sắc ký, Nhà xuất Khoa học vµ Kü thuËt, Hµ Néi TiÕng Anh 10 Ahammadsahib K I., Hollingworth R M., McGovren J P., Hui Y H., McLaughlin, J L Mode of Action of Bullatacin: A Potent Antitumor and Pesticidal Annonaceous Acetogenin Life Sci 1993, 53, 1113-1120 11 Dictionary of Natural product on CD-Rom, Chapman and Hall-CRC (2005) 62 12 Gales L and Damas A M (2005), Xanthones–A Structural Perspective Current Medicinal Chemistry, 2, 2499-2515 13 Kanokmedhakul S., Kanokmedhakul K., Kantikeaw I., Phonkerd N (2006), 2-substituted furans from the roots of Polyalthia evecta J Nat Prod 69(1) 68-72 14 Kanokmedhakul S., Kanokmedhakul K., Ohtani I.I., Isobe M (1998), A diynoic acid from Polyalthia evecta, Phytochemistry, 47 (1) 131-133 15 Kiem P V., Minh C V., Huong H T., Lee J J., Lee I S and Kim Y H (2005), Phenolic constituents with inhibitory activity against NFAT transcription from Desmos chinensis, Arch Pharm Res., 28 (12) 13451349 16 Kuo H Y., Yeh M H (1997), Chemical constituents of heartwood of Bauhinia purpurea, J Chin Chem Soc., 44, 379-383 17 Kuo R.Y., Chang F C and Wu Y.C (2002), Chemical Constituents and Their Pharmacological Activities from Formosan Annonaceous Plants, The Chinese Pharmaceutical Journal, 54, 155-173 18 Pinto M.M.M., Sousa M.E and Nascimento M.S.J (2005), Xanthone Derivatives: New Insights in Biological Activities, Current Medicinal Chemistry, 2, 2517-2538 19 Riscoe M., Kelly J X and Winter R (2005), Xanthones as Antimalarial Agents: Discovery, Mode of Action, and Optimization, Current Medicinal Chemistry, 2, 2539-2549 20 Silva A.M.S and Pinto D.C.G.A (2005), Structure Elucidation of Xanthone Derivatives: Studies of Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy, Current Medicinal Chemistry, 2, 2481-2497 21 Sorachai S (2003), Chemical Constituents from the Twigs of Mangifera odorata and antioxidation properties, Thesis of Organic Chemistry, Songkla University, Thailand 22 Vieira L.M.M and Kijjoa A (2005), Naturally-Occurring Xanthones: Recent Developments, Current Medicinal Chemistry, 2, 2413-2446 23 Yu D Y (1999), Recent works on anti-tumor constituent from 63 Annonaceae plants in China, Pure Appl Chem., Vol 71, No 6, pp 1119-1122 ... hợp hợp chất từ dây chân chim nói (Desmos cochinchinensis var fulvescens Ban) - Ph©n lËp xác định cấu trúc hợp chất từ dây chân chim núi Đối t-ợng nghiên cứu Đối t-ợng nghiên cứu dịch chiết dây. .. nghiên cứu thành phần hoá học ch-a đ-ợc tiến hành nhiều Việt Nam Chính chọn đề tài: Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất từ dây chân chim nói (Desmos cochinchinensis var fulvescens Ban) ë Hµ... 42, 57g Từ cao n-butanol ph-ơng pháp sắc ký cột silicagel đà phân lập đ-ợc hợp chất 156, 157 v 158, xác định cấu trúc hợp chất ph-ơng pháp phổ 4.2 Xác định cấu trúc hợp chất 156 Chất 156 chất rắn