Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu này được thực hiện nhằm mục đích tìm ra phương pháp hiệu quả để thu nhận chế phẩm protease từ tụy tạng lợn và ứng dụng vào việc làm mềm thịt. Kết quả cho thấy phương pháp chiết enzyme bằng nước cất rồi kết tủa protein enzyme bằng ethanol 96% đã cho hiệu quả thu nhận chế phẩm enzyme cao. Chế phẩm này có mặt các enzyme trypsin, chymotrypsin, pepsin và có khả năng làm mềm thịt ở hàm lượng 0,5% và có tỷ lệ mất nước trong chế biến không đáng kể.
Khả làm mềm thịt chế phẩm protease thu nhận từ tụy tạng lợn Chu Thị Nga1, Nguyễn Minh Trí2 11Trường THPT Nguyễn Bỉnh Khiêm, Gia Lai, Việt Nam 2Trường Đại học Khoa học, Đại học Huế, Thừa Thiên Huế, Việt Nam (Ngày đến tòa soạn: 05/08/2021; Ngày chấp nhận đăng: 20/09/2021) Tóm tắt Tụy tạng lợn quan tham gia vào q trình tiêu hóa nguồn phụ phẩm từ sở giết mổ gia súc tận dụng để thu nhận chế enzyme protease Ở Việt Nam, enzyme protease ứng dụng nhiều lĩnh vực khác phải nhập từ nước với giá thành tương đối cao Nghiên cứu thực nhằm mục đích tìm phương pháp hiệu để thu nhận chế phẩm protease từ tụy tạng lợn ứng dụng vào việc làm mềm thịt Kết cho thấy phương pháp chiết enzyme nước cất kết tủa protein enzyme ethanol 96% cho hiệu thu nhận chế phẩm enzyme cao Chế phẩm có mặt enzyme trypsin, chymotrypsin, pepsin có khả làm mềm thịt hàm lượng 0,5% có tỷ lệ nước chế biến khơng đáng kể Từ khóa: Tụy tạng lợn, trypsin, chymotrypsin, làm mềm thịt ĐẶT VẤN ĐỀ Có nhiều nghiên cứu việc làm mềm thịt làm cho thịt ngon Về mặt hóa học, sử dụng CaCl2, muối, phosphates enzyme để làm giảm lượng mô liên kết Các phương pháp vật lý thử nghiệm làm mềm thịt xử lý áp lực, kích thích điện [1] Việc sử dụng protease chế biến làm mềm thịt ứng dụng có tính truyền thống, người dân nước ta từ lâu biết dùng dứa để bổ sung vào q trình chế biến thịt bị, nấu chân giò với đu đủ xanh… mà thực chất sử dụng enzyme papain, bromelain Trong chế biến thủy sản, protease bổ sung để tăng lượng nước mắm nhờ thủy phân protein thành acid amin làm tăng hiệu suất thu hồi đạm nước mắm [2] Enzyme protease thu nhận từ nguồn động vật, thực vật vi sinh vật có nguồn gốc tự nhiên không độc với người nên ngày sử dụng rộng rãi Hiện sở giết mổ gia súc, gia cầm nước ta thải hàng ngày lượng lớn phế phẩm cần xử lý chế biến tiếp để tránh ô nhiễm môi trường Phụ phẩm lợn, đặc biệt tụy tạng quan quan trọng chứa nhiều enzyme tiêu hóa tinh bột protein người ta sử dụng làm thức ăn cho gia súc, gia cầm [3] Trong nội dung nghiên cứu này, tụy tạng lợn dùng để trích ly enzyme protease tạo nguồn chế phẩm enzyme nhằm ứng dụng vào việc làm mềm thịt trình chế biến thay cho việc sử dụng phụ gia làm mềm thịt có nguồn gốc hóa học II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu nghiên cứu Nguyên liệu dùng thí nghiệm tụy tạng lợn lấy từ sở giết mổ gia súc thành Điện thoại: 0914031085 Email: trihatrangthi@gmail.com Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - Tập 4, Số 3, 2021 234 Khả làm mềm thịt chế phẩm protease phố Huế, bảo quản nước đá để giữ hoạt tính enzyme đưa phịng thí nghiệm để tiến hành bước Thịt bò loại dai (là phần thịt nạc vai bò) sau giết mổ Phương pháp nghiên cứu 2.1 Phương pháp thu enzyme protease từ tụy tạng lợn Phương pháp 1: Tụy tạng lợn sau loại bỏ tạp chất nghiền với nước cất (4°C) theo tỉ lệ 1: (w/v), hỗn hợp lọc để thu dịch chiết enzyme bảo quản 4°C để xác định hàm lượng protein enzyme hoạt độ enzyme [4] Phương pháp 2: Dịch chiết enzyme nước cất (sản phẩm từ phương pháp 1) kết tủa dung dịch (NH4)2SO4 bão hòa theo tỉ lệ dịch chiết (NH4)2SO4 (1: 2, v/v) Phần kết tủa sau ly tâm 4°C với tốc độ 10.000 rpm 15 phút thẩm tích túi cellulose liền mạch (seamless cellulose tubing) 36/32 Sau thẩm tích, mẫu bảo quản 4°C [4] Phần kết tủa hòa tan mL nước cất để xác định hàm lượng protein enzyme hoạt độ enzyme Phương pháp 3: Dịch chiết enzyme nước cất (sản phẩm từ phương pháp 1) kết tủa với ethanol 96% theo tỉ lệ dịch chiết ethanol (1: 4, v/v) Sau đó, hỗn hợp ly tâm với tốc độ 10.000 rpm 15 phút nhiệt độ 4°C, thu phần tủa bảo quản 4°C [4] Phần tủa hòa tan mL nước cất để xác định hàm lượng protein hoạt độ enzyme 2.2 Phương pháp phân tích Đánh giá khả phân giải protein phương pháp thu nhận enzyme phương pháp khuyếch tán thạch đĩa Enzyme có khả phân giải proetin cao kích thước vịng phân giải lớn [5] Xác định hàm lượng protein enzyme phương pháp Bradford [6] xác định hoạt độ protease theo phương pháp Amano [7] Xác định thành phần enzyme chế phẩm phương pháp điện di SDS-PAGE theo Andrew [8] Phân tích kết điện di để xác định trọng lượng phân tử protein emzyme dựa thang chuẩn protein Prestained Protein Ladder, 10 - 180 kDa, hãng Thermo Scientific Phương pháp nghiên cứu làm mềm thịt enzyme: chế phẩm protesae thu nhận từ phương pháp hòa tan nước cất với nồng độ từ 0,1 - 0,5% Thịt bị loại dai cắt lát với kích thước: dày 1,0 cm, dài 4,0 cm, rộng 3,5 cm, ướp với dung dịch chế phẩm enzyme nồng độ pha sẵn thời gian 10 phút [9] Sau đánh giá độ dai độ nước chế biến thịt theo phương pháp sau: Độ dai thịt bò xác định theo phương pháp Wanner máy đo độ dai WDS-1 với tốc độ lưỡi dao 300 mm/phút Đo độ dai 05 vị trí khác mẫu thịt trước luộc, sau luộc lặp lại 03 lần Độ nước chế biến xác định theo Honikel: cân mẫu thịt, cho vào túi PE chịu nhiệt luộc thiết bị Water bath (WNB10) nhiệt độ 95°C phút, sau làm mát vịi nước Lấy thịt khỏi túi, làm khô giấy thấm cân khối lượng mẫu Tỷ lệ nước chế biến tính theo 235 Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - Tập 4, Số 3, 2021 Chu Thị Nga, Nguyễn Minh Trí cơng thức sau: Tỷ lệ nước chế biến (%) = M1 - M2 M1 Trong đó: M1: khối lượng thịt trước luộc M1: khối lượng thịt sau luộc 2.3 Phương pháp xử lý số liệu Các thí nghiệm lặp lại 03 lần, số liệu xử lý theo phương pháp thống kê, so sánh giá trị trung bình theo phân tích Anova với mức ý nghĩa α = 0,05 chương trình Microsoft Excel [10] III KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Hiệu phương pháp thu nhận enzyme protease từ tụy tạng lợn Sau trích ly enzyme từ tụy tạng lợn nước cất, kết tủa dung dịch (NH4)2SO4 50% bão hòa kết tủa ethanol 96% Tiến hành xác định hàm lượng protein enzyme đánh giá hoạt tính protease chế phẩm thu được, kết thể Hình Hình Hoạt tính protease dịch chiết chế phẩm từ tụy tạng lợn a) Hoạt tính protease dịch chiết tụy tạng lợn theo phương pháp 1; (b) Hoạt tính protease chế phẩm theo phương pháp 2; (c) Hoạt tính protease chế phẩm theo phương pháp Kết cho thấy: hoạt tính enzyme protease cao thu phương pháp với hoạt độ 46,63 U/mL ứng với hàm lượng protein enzyme 48,6 mg/mL, phương pháp 42,77 U/mL với hàm lượng protein enzyme 43,5 mg/mLvà phương pháp 35,26 U/mL với hàm lượng protein enzyme 34,8 mg/mL Phương pháp có thực kết tủa protein nên lượng protein enzyme thu mẫu nhiều, hàm lượng protein enzyme hịa tan cao phương pháp (không qua giai đoạn kết tủa protein nên lẫn nhiều tạp chất) Ở mẫu thu nhận protein enzyme sử dụng ethanol 96% khả loại bỏ màng hydrate hóa phân tử protein mạnh so với muối (NH4)2SO4 nên cho kết tủa protein nhiều khơng qua giai đoạn thẩm tích loại muối nên hàm lượng protein hịa tan cao Tóm lại, phương pháp thu nhận protease từ tụy tạng lợn nước cất có sử dụng kết tủa protein muối (NH4)2SO4 kết tủa ethanol cho hiệu tốt so với dịch chiết nước cất Hàm lượng protein thu hoạt tính enzyme protease hai phương pháp cao so với phương pháp chiết nước cất Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - Tập 4, Số 3, 2021 236 Xây dựng aptasensor điện hóa sử dụng aptamer Kết phân tích điện di SDS-PAGE Qua kết đánh giá hoạt tính protease từ tụy tạng lợn, bước đầu cho thấy hỗn hợp trích ly từ tuyến tụy có diện enzyme protease Để xác định xác thành phần enzyme protease hỗn hợp thu được, chúng tơi tiến hành phân tích điện di SDS-PAGE, kết thể Hình Hình Kết phân tích thành phần protein enzyme điện di SDS-PAGE Kết phân tích điện di đồ cho thấy: chế phẩm enzyme trích từ phương pháp có diện vạch tương ứng với trọng lượng phân tử khoảng 23 kDa, 30 kDa 35 kDa Theo Nguyễn Đức Lượng (2004) enzyme chymotrypsin trypsin có trọng lượng phân tử tương ứng 22,5 kDa 23 kDa [4] Bên cạnh đó, nhiều tác giả cho tuyến tụy lợn chứa nhiều enzyme amylase, trypsin, chymotrypsin, pepsin, lipase rennin [11] Điều chứng tỏ hỗn hợp enzyme trích từ tụy tạng lợn 03 phương pháp khác có diện enzyme pepsin, chymotrypsin trypsin Kết phù hợp với Nguyễn Minh Chơn điện di protein enzyme tụy tạng gà có chymotrypsin trypsin [12] Từ kết đánh giá hoạt động phân tích thành phần protein enzyme chế phẩm phương pháp thu nhận, nhận thấy: chế phẩm protease thu nhận cách kết tủa dịch chiết tụy tạng lợn với ethanol có hàm lượng protein hoạt động phân giải protein cao nhất, từ chúng tơi chọn chế phẩm để khảo sát trình làm mềm thịt Khả làm giảm độ dai thịt bò chế phẩm protease Độ dai thịt loạt yếu tố bao gồm số lượng mô liên kết bắp, chất béo bắp chiều dài sarcomere Như vậy, thịt không đạt yêu cầu người tiêu dùng thịt cứng Độ dai thể qua lực cắt thịt, tiêu người tiêu dùng quan tâm Trong thực nghiệm này, thịt bò loại dai (phần thịt nạc vai) sau giết mổ ướp với chế phẩm protesae thu nhận phương pháp sử dụng ethanol với nồng độ từ 0,1 - 0,5% thời gian 10 phút Sau đó, dùng dụng cụ hình trụ rỗng có đường kính cm lấy mẫu cách xoay dụng cụ hình trụ theo chiều kim đồng hồ song song với sợi mẫu thịt Các mẫu thịt hình trụ sau cắt vng góc với sợi máy cắt WDS-1, vận tốc lưỡi dao 300 mm/phút Tiến hành phân tích độ dai mẫu thịt chịu tác động chế phẩm enzyme trước luộc 237 Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - Tập 4, Số 3, 2021 Chu Thị Nga, Nguyễn Minh Trí sau xử lý nhiệt (với nhiệt độ 95°C) Kết phân tích máy đo độ dai thể Bảng Hình Ảnh hưởng chế phẩm protease thu từ tụy tạng lợn đến độ dai thịt bị Độ dai thịt Mẫu (N) Thí nghiệm Trước xử lý nhiệt Hàm lượng chế phẩm protease (%) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 25,38 22,83 20,69 19,85 17,91 36,83 33,38 26,73 Đối chứng Thí nghiệm Sau xử lý nhiệt 44,60 42,05 Đối chứng 38,69 46,33 Ghi chú: (a) Khác biệt có ý nghĩa thống kê (p