Slide sinh lý động kháng thể đơn dòng

(SINH LÝ MIỄN DỊCH ỨNG DỤNG) IX (Monoclonal Antibody_MAb) CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt Là kháng thể kháng kháng nguyên đƣợc tạo từ MỘT dòng tế bào (lymphocyt B) điều kiện in-vitro Là kháng thể với đặc hiệu cho vị trí epitope kháng nguyên (theo Milstein) CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt monoclonal Antibodies_mAb Cấu trúc hóa học Ig đƣợc định từ tế bào ban đầu CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt MỤC ĐÍCH TẠO RA MỘT DÒNG TẾ BÀO LAI BẤT TỬ (HYBRIDOMA) (Immortalised cell line - Biological immortality) - Có khả ổn định, tồn lâu dài - Có khả nhân sinh khối cao - Có khả sản xuất protein CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt + Chọn hai tế bào soma khác loài + Có dung hợp màng hai tế bào + Có hợp nội bào + Có xếp lại số lƣợng NST + Không diễn tái tổ hợp gen + Tế bào lai phát triển thể khảm (mosaic) CÓ NHIỀU KỸ THUẬT KHÁC NHAU ĐỂ TẠO TẾ BÀO LAI CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt Fully fused Unfused Hemifused CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt C0124 Tạo tế bào lai (Hybridoma) CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt VÀI ỨNG DỤNG CỦA CN LAI TẾ BÀO Lập đồ gen Nghiên cứu kỹ thuật gen Nghiên cứu tiến hóa gen Tìm hiểu apoptosis, điều hồ gen Tạo thể khảm mang đặc tính xa Sản xuất protein (ví dụ MAb) … CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt G Kohler & C Milstein, Nobel 1984 Thành công với chuột 1986, KTĐD đƣợc thƣơng mại hóa Châu Âu có tên Muromomab CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt FUSION Mouse cell Human cell (Chimeric) Hybrid cell (Immortalised cell line) CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt Antigen PRINCIPLE Cells Fuse into a Hybridoma Cancerous plasma cell Antibodyproducing plasma cell Monoclonial Antibodies (IgG) CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt SẢN PHẨM Lớp: Thơng thƣờng IgG Loại: Có ba dạng (từ kỹ thuật khác nhau) Mouse mAb CuuDuongThanCong.com Chimeric mAb Humanized mAb https://fb.com/tailieudientucntt CÁC BƢỚC CƠ BẢN Chọn kháng nguyên (Ag) Chọn động vật gây nhiễm Gây đáp ứng miễn dịch Thu lympho B động vật Chọn tế bào lai ngƣời Lai (dung hợp) hai tế bào Sàng lọc thu tb lai, tạo dòng Kiểm tra, thu nhận, tinh Ig CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt Adjuvant Immune response Immunogenic B Mouse (BALB/c) B B Mutations (HGPRT gene) B Selective B Myeloma (Human/ Animal) HAT & PEG Cells fusion Cell Culture CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt ĐẶC ĐIỂM CỦA MÔI TRƢỜNG LAI TẾ BÀO SOMA KHÁC LOÀI H: Hypoxanthine A: Aminopterin T: Thymidine PEG PolyEthylene Glycol (Hoà màng sinh chất) PEG -Đẩy nƣớc -Rối loạn điện tích bề mặt màng -Cung cấp Ca2+ CuuDuongThanCong.com HAT (Ức chế tổng hợp nhân purine) Khơng có nucleotide Con đƣờng de novo (bị ức chế mt HAT) Con đƣờng dự trữ (sử dụng enzyme HGPRT) https://fb.com/tailieudientucntt IMMORTALIZED CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt Các dòng hybridoma thƣơng phẩm cty Biotech CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt CẢM ƠN CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt ...Là kháng thể kháng kháng nguyên đƣợc tạo từ MỘT dòng tế bào (lymphocyt B) điều kiện in-vitro Là kháng thể với đặc hiệu cho vị trí epitope kháng nguyên (theo Milstein)... CƠ BẢN Chọn kháng nguyên (Ag) Chọn động vật gây nhiễm Gây đáp ứng miễn dịch Thu lympho B động vật Chọn tế bào lai ngƣời Lai (dung hợp) hai tế bào Sàng lọc thu tb lai, tạo dòng Kiểm tra,... https://fb.com/tailieudientucntt MỤC ĐÍCH TẠO RA MỘT DÒNG TẾ BÀO LAI BẤT TỬ (HYBRIDOMA) (Immortalised cell line - Biological immortality) - Có khả ổn định, tồn lâu dài - Có khả nhân sinh khối cao - Có khả sản xuất