Đánh giá khả năng bắt aflatoxin G1 của cột ái lực miễn dịch do Viện Pasteur Tp.HCM sản xuất
Trang 1Huỳnhquangdướitia UV
Bước sóng huỳnh quang khi kích thíchbằng tia 365 nm
AFL B2a C17H14O7 320 240 XanhlamAFL M1 C17H12O7 328 299 Xanh
AFL G1 C17H12O7 328 259
AFL G2 C17H14O7 330 240
AFL G2a C17H14O8 346 190 Xanhlục
Phụ lục 1: Các đặc tính lí hóa của AFT.
Phụ lục 2: Bảng xếp loại các độc chất dựa vào liều LD50 trên động vật (Lu, 1996)
Trang 2Cực độc (Super toxic) 5 mg/kgRất độc (Extremely toxic) 5 -50 mg/kgĐộc tính cao (Highly toxic) 50 – 500 mg/kgĐộc tính khá cao (Moderately toxic) 0.5 – 5 g/kgĐộc tính nhẹ (Slightly toxic) 5 – 15 g/kgKhông độc (Practically nontoxic) > 15 g/kg
2 Tinh chế IgG
14 ngày sau lần tiêm thứ 5, lấy toàn bộ máu từ động mạch đùi Ly tâm thu huyếtthanh và tách bỏ hồng cầu, sau pha loãng huyết thanh gấp đôi bằng nước muối sinhlí Tủa IgG bằng (NH4)2SO4 45% bão hòa Tiếp theo cho huyết thanh phản ứng vớiBSA để loại các thành phần IgG kháng BSA.
3 Tạo cộng hợp sepharose – IgG kháng AFB1
IgG thu được sau khi tinh chế được gắn đồng trị lên sepharose đã được hoạthóa bởi CNBr theo quy trình của nhà sản xuất Amersham – Biotech Quá trình gắnđược thực hiện ở một trong hai chế độ: (1) 22oC – 25oC trong 2 giờ hoặc (2) 4oCtrong 24 giờ Trong thời gian tạo cộng hợp, hỗn hợp được trộn liên tục bằng máy lắcnhẹ Khi cộng hợp kết thúc, cần kiểm tra lại IgG còn dư trong hỗn dịch để đánh giáhiệu suất gắn Hiệu suất gắn càng cao thì chất lượng cột càng cao.
Cộng hợp sepharose – IgG là gel có độ thấm cao khi cho chất lỏng chảy qua.Sau khi xử lí để loại bỏ các IgG còn bám cơ học trong gel, gel được đóng vào cộtnhựa kích thước 0.4 cm x 10 cm với lượng 0.1 ml – 0.15 ml/cột Cột được bảo quản
Trang 3ở nhiệt độ 4oC – 8oC Giá ái lực miễn dịch giữ hoạt tính ổn định ít nhất 1 năm(Nguyễn Lê Trang, 2003)
Phụ lục 4: Máy quang phổ (U – 3310 Spectrophotometer – Hitachi)
Máy đo huỳnh quang (Vicam – Series – 4 Fluorometer, USA).