Khảo sát một số đa hình gen mã hóa enzym chuyển hóa homocstein ở phụ nữ có tiền sử sẩy thai

BỌ Y TẺ BỌ GIÁO DỤC VẢ DÀO TẠO TRƯỞNG DẠI HỌC Y HÀ NỘI NGVYÈN MINH TLÁN KHAO SÁT MỘT SỔ ĐA HÌNH GEN MÃ HĨA EN7.YM CHUYẾN HĨA HOMOCYSTEIN Ờ PHỤ NỦ CÓ TIÉN SỨ SẢY THAI Ngành tạo : Bác $ỷ Y kliou Mãũgành : 52720101 KHỎA LVẠN TÓT NGHI Ẹp BÁC SỲ Y KHOA KHÓA 2015-2021 iVgtnri hưởng dấn khoa họcĩ TS.BS Vũ ThịHuyvD H A NỌl-2021 «s> ■> LỜI CẢM ƠN Trước het em xin bây to lõng kinh trọng đồi với nhả khoa học màu mực cổ GS Tỏn Thắt Tùng, nguôi thây lởn cùa Y học nước nha Nhùng lòi dạy cua thầy Dứng khoa học mà nôi cỏ thổ thành cõng hốc khơng nghiên cứu, quan trọng la xây dựng cho ban thân người nghiên cứu thải độ klKKS học, mội phương pháp khoa học" "Dưởng váo khoa hoe cua tôi'* đà truyền cam hứng tạo động lực cho em dấn thân váo đường khoa học hành trinh khoa học sai nảy vỏi lòng biểt ơn sâu sac em xin chân thành cam on TS BS Vô TI1| Huy ền, giang viên Bộ mòn Y Sinh học - Di truyciL dà chi bao tận tinh va hướng dàn sâu sát đè em hoan luận vãn Chinh nho bãi giang dâu tièn cua cị Sixìỉx học tế bao lúc em vừa bước chân vào tniớng Dại hục Y Hà Nội đà gợi mở vá truyền cam hừng cho em tiếp ĩục tim 101 khám phá nhiêu nửa linh vực Y sinh học • Di truyền Em xin chân thành cam ơn PGS TS Nguyên Thi Trang, giang viên cao cáp Bõ mon Y Sinh học - Di tniyền, người tháy đà diu dấỉ em vừa tập bước chân vào đường khoa học giúp đờ em hoàn luận vãn Những lời dạy cua eõ vỉ phương pháp khoa học mục đích nghiên cứu hướng tới nhìmg vấn dể cỏ ỷ nghía gản vơi cộng dóng hay dơn giãn chi lã VC lẻ sổng sẻ lã hãnh trang quý' báu cho dời lảm thầy thuốc, lảm nha khoa học cua em sau Em xin chán tlxuứi cam ơn Ban giám hiệu I*hòng Dào t?o Dại bọc Phong Cõng tac chinh trị & Học sinh Sinh viên trường Dại hục Y Ha Nội Bộ môn Y sinh bợc - Di truyền khoa, môn em tưng dược theo học dà tao mụi điều kiện cho em suốt trinh học tỳp hoàn thành luân vân Em xin chân thảnh câm ơn CẮC thầy cỏ cãc anh chi BSNT vã anh chi KTV ương Bộ môn Y Sinh hục - Di truyền đà lao mụi diều kiộn thuận lựi nhiẽt linh giúp đỡ em hoàn tliãnh luận vàn Em xin chân thánh cam ơn út ca cãc bệnh nhãn tham gia nghiên CÍIU Họ động lực thúc em khơng ngừng học tập nghiên cứu Cuối em xin bày to lõng biết ưn đến bố mẹ chị gái va bạn bẽ đà luón bẽn cạnh động vién, chia se dề em hoàn thảnh Tốt việc học táp vả nghiên cưu khoa học "Từ ương lùng mơ mộng ta sè gianh liú thơi giam chùng ta nhùng người lam cõng tác khoa học nhùng chàng trai đọp dền đánh thức nang công chúa bừng tinh đậy sau giấc ngũ tràm năm đảng." cô GS T6n Tỉua Từng Hà Nội ngày 15 lining 05 nâm 2021 Nguyền Mình Tuấn -w ã* M ôG L1 CAM DOAN Ti la Nguyen Minh Tuan sinh viên khỏa 2015 2021 chuyên ngành Bảc sỳ đa khoa Trưởng Đại học Y Hà Nội xin cam đoan: Dây luận vin hãn thân tói tiực tiềp thực hướng dẫn cua TS BS Vù Thị Huyền, giăng viên Y Sinh hực - D1 truyền Tnrờng Đai học Y Hả Nội Cong trmh kỉìõng trung lúp với bẩt ký nghiên cửu khac đà dược cong bó tai Việt Nam Các sồ liệu thõng tin nghiên cữu hoan toàn chinh xác trưng thực vã khách quan ílà xác nhận vã chắp nhộn cua cư sơ nơi nghiên củu cho phép lẩy số liệu Tỏi xin hoàn toàn chịu tĩãch nhiệm truác pháp luật VC nhủng cam kct náy Há Nội ngày lí tháng Oi nàm 2021 Xíc nhận giang viên h trứng (lãn Người Viet cam đoan TS BS VũTli|Hu?rn Nguyền Alinh Tuấn TWM*M«K> ■> *4: MỤC LỤC LỊI cam an Lùi cam dam Mục lục Cbữvỉết fat Danil mục bang Danh mục biêu (lổ Danh mục hình võ sơ dả ĐẠT VÁN DẺ _ CHƯƠNG I: TÒNG QUAN TÀI LIỆU— _ 1.1 Tinh hình sây thai •• •• 1.1.1 Dinh nghía sấy thai, sẩy lliai liên tiếp _ 1.12 Tình hình sã)’ thai trẽn the giói 1.13 Tinh hình sây thai tai Việt Nam - 1.2 Homocystein - _ 1.3 Tống quan gcn liên quan đến chun hóa homocyste n 1.3.1 MTHFR !•■••• •• ••••a MB II 11 « 1.32 \ĨĨR •• •• 15 1.33 WTRR 1.4 Các phưưng pháp xác đinh đa hình gen 17 1.4.1 Giai trinh tự gen 17 1.42 RFLP-PCR 18 1.43 ARMS-PCR ã ãããããããã ã ããããã at ã ãããããôãããã •• IS 1.44 Real-time PCR 19 CHƯƠNG 2: DÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGIIIÈN cứu 21 2.1 DÓ1 ttrựng nghiên cứu 21 2 Dịa diêm nghiên cứu « 22 2.3 Phương pháp nghicn CÍIU « 2.3.1 Thiết kề nghiên cím •• •• 22 22 2.32 Cỡmãu IIIIMlMMIMlKIMMIiUllllUllllllllilllllliMHUMI MM« iiểli 141» li 4i ill( tHil H Quy trinh nghiên cứu ■■•••••Ma •*•••■•••••(• *4: DANH MỤC CHƠVIỂT TÁT 5MTHF -met hyl tetra hydrofolate ACMG American College of Medical Genetics and Genomics ARMS Amplification Refractory Mutation System CBS Cystathionine- |3-sy nthase dNTP Dcoxynucleoside triphosphate DNA Deoxyribonucleic aad MDR Multifactor Dimensionality Reduction Các nucleotide A T G c MTHFR M ethylenetet rahydrofol ate reductase MTR Methionin synthase MTRR Methionin synthase reductase Nhicni sảclhể NST NTD Neural tube defect Dị tật ồng thán kinh PCR Polymerase Cham Reaction Phan ủng khuếch đại gen RFLP Restriction Fragment Length Polymorphisms RPL Recurrent Pregnancy Loss SAM S-adenosylmethioni n WHO World Health Organization Sây thai, thai lưu lái diên Tô chúc Y tc the giới ĐANH NI Ục bàng Bang 1.1 Tv lệ sây thai cãc trường hợp mang thai V muốn năm 1995 2008 Bang 12 Các yếu tồ anh hương đen nóng độ hotnocy stein huyết tuông Bang 1.3 Ho?t độ enzym MTHFR tương ứng với đa hình gcn A1298Cvà C6’”TT Bang 2.1 Trinh tự mồi cãc đa hình gcn XĨTHER XÍTR vả XÍĨRR 25 Bang 22 Chu trinh luân nhĩột cùa phan ímg real-time PCR 25 Bang 3.1 Độ tinh D\'A sử dụng kit DNA - Express .29 Bang 32 Ty lộ da hình gen XITHFR Bang 33 Tần sỗ da binh gen MỈHFR C677T vã A129SC 31 Bang 3.4 Tỏ hợp cảc tương tác gen có giã tri nhắt cãc locus cua đa 33 hình gen Báng 4.1 31 So sánh tỷ lé kicu gen MTHFR C677T vả A1298C vởi nghiên cửu 0.55 vã cảng gần thi cảng it xay lương “overfilling** hay kết qua thu dược cớ ý nghía Nỉhự vậy, từ tẩt ca kh-1 lương lác gcn chúng lũi thu tò hựp gen co giá tri kiêu tó hop MTHFR (A1298C) \ỈĨR (A2756G) vốỉ độ tái lụp 10/10 dụ chinh xác cán bảng lý thuyết thục nghiêm bàng 0.75 (>0,55) Tiếp theo tỏ hụp WTW7? (C677T) 'ả MTHFR (A1298C) vã MTR (A2756O) \ỈTRR (A66G) củng cớ độ tai lập 1010 nhung cớ độ chinh xac cân báng ly thuyết va thực nghiộm thấp 0.675 (>0.551 41 Trèn sỡ cua mò hinh xảy dựng bẳng phần mềm MDR chúng tỏi tiến hành pliáti tích gom nhõm (clustering) tồ hợp gen vố xây dưng ban dồ (Dendrogram) Mị hình cho thầy tố hợp MTHFR (A1298C) vá MTRR (A66G) biêu tương lác bố trợ với mức dộ tương tác cao nhất; tô hợp giừa MTHFR (A1298C) vả XĨĨRR (A66G) với MTHFR (C677T) -\ÍTR (A27SỘG) thê hiên mức dợ tương tảc trung hỉnh; tố hợp MTHFR (C677T) va SÍTR (A2756G) biêu hiên thiếu không tưimg lỗc Như vậyT cỏ thê tháy rang ũ' hợp ,\ĨTHFR (C€77T) \ỈTR (A2756G) đă lãm giám mức độ tương tác cua tô hợp -\ỈTHFR (A1298C) va XĨỈRR (A66G) chung tương tác với hay tô họp tương (ác với theo kiều (ưong tác át chế Điều het sức cỏ ý nghía dơi với nhà di truyền làm sàng bác san khoa việc phiên giãi kết qua nhùng bệnh nhản xét nghiộm đa hình cua gen Nghiên cứu cua chúng tịi góp phần dưa gia Ihuycl ràng nhùng cá thê mang phối bợp nhùng kiêu gcn da hình liên thi nguy sây thai tai diẻn lùng lên đảng ké đảc biột lã tỏ hợp \ÍTHFR (AI298C) MTRR (A66G) Một SỚ hạn che nghiên cứu cua chúng tịi có the kê den dó cỏ mẫu nghiên cứu chưa đủ lởn nghiên cini chưa loại trừ dược nhùng trường hợp lương lác gcn vả môi trướng Nghiên cưu dà bước đẩu chi tương tác gen-gen cua da hmh gen MTHFR yỉIR \ĨĨRR có the làm tâng nguy co gãy sây thai tải dicn Diêu có thẻ giai thích đa hình gen \ỈĨHFR MTR MĨRR dàn dền lãng homơcystcin máu linh trạng huyết khui; trung điểu tóýn di truyền, tụo huyềt khối làm thay dổi lính dong giừa tttub phàn huy fibrin va qua timh lunh iìbnn dần đển hạn chề xam nhập cua nguyên bao nuói lãm hạn chẽ nguyên bao nuoi gãy sây thai trơng tháng dáu cua tliai ky thai khoug thê pbãỉ then 42 viộc dự đoản thai không phãt triến sỗ bước tiến giúp câc nhà lâm sàng xây dưng vả thực lũéti kíp thời biện pliáp dê ngân ngừa câc biển chưng thai kỳ phụ nừ độ mòi sinh đe gõp pbẩn thuc hiên mục tiêu châm sóc sức khoe sinh san cho người phụ nừ -w •* CN «G 43 KÉT LUẬN Ty lộ sổ đa hình gen MTHFR MTR vả MTRR mà hóa eazym chusvn hóa hoiuocysteiu (rong nhỏm dơi lưọng Dglúcũ cứu: - Tỵ lệ kiêu gen CT TT cua đa hình MTHFR C677T lã 38% 3% - Ty lẽ kiêu gen AC vã cc cùa da hình MTHFR AI 298C 38% vả 7% - Ty lệ di hợp tư kép đa hình U77/ER C677T va A1298C la 12% - Ty lộ kiêu gcn AG vã GG cua đa hình MTRR A66G lã 32% 8% - Ty lệ kiều gen AG vá GG cùa đa hình MTR A2756G 21% vả 1% Mồi liên quan giừa số da hình gen MTHFR \ỈFR \fTRR mi hóa enzym chuyên hóa homỡcystein sây thai tái diên: - Kiều tố hựp MTHFR (A1298C) MTR (A2“56G) với độ tái lập lã 10/10 độ chinh xác càn bâng lý thuyết vã thực nghxỳm bang 0.75 Kiêu tơ hợp \ÍTỈỈFR (C677T) vi MTHFR (AI298C) va MỈR (A2756G) vả XĨTRR (A66G) cỏ độ tải lập (V1O, độ chinh xác càn bàng lý t huy Ct thực nghiện lã 0.675 - Tô hợp MTHFR (A 1298C) vả \ÍTRR (ỔG) biêu hiên lương lâc hơ trự với múc độ tương tác cao; tó hợp giửa MIHFR (A1298C) vã y/ĨRR (A66G) vói \ĨỈHFR (C677T) SĨĨR (A2756G) the mức độ lương lác trung binh; tò hợp MTHFR (C677T) va MTR (A2756G) biêu thiếu hoộc khơng tương lác TWM*M«K> ■> *4: TẢI LlẸl THAM KHAO Lok IH Neugebauer R Psychological morbidity following miscarriage Best Practice Research Clinical Obstetrics A Gynaecology 2007121(2 ):229-247 doi:10.l0l6/j.bpobgyn.2006.l 1.007 Tòng cục Thống kẻ KÁ ộuư Chu yểuỉ Đỉềti Tra Biến Dõng Dán Sơ vờ Kề Hoạch Hóa Gia Dĩnh Thìn Dỉèm J/4/2015 NXB Ihõng kẽ 20 ló Bị Y tế Bào Cảữ Hộ Sình l'iỳỉ Nam 20 ìố Kif Y tế: 2017 Tịng cục Thưng ke Dự Bao Dán số Wft Nam 20ỉ4 • 2049 NXB Thõng tấn; 2016 Zegers-Hochschild F Adamson GD Dyer s, et aỉ The International Glossary on Infertility and Fertility Care 2017 Hum Reprod 2017:3 2(9): 1786-1 so doi: 10.1093/humrep.dex2 34 BỘYtể I lương dàn chân dơân vádiềutn cãcbÃứisanphụkhoa.2015.1r6-9 Golan A Langer R Bukovsky I Caspi E Congenital anomalies of the mQlldian system Fen it Steril 1989:51(5):747-755 doi; 10.1016/sOO 15- 0282(16)60660-x First-Trimester Abortion McGraw-Hill Medical Williams Gynecology 3e Accessed October AccessObGyn 31 2020 hnps:/.’obgyn.mhmedical.com’conTent.aspx?bookid=l 758§ionid= 11 s 167822 Institute G Sharing Responsibility Women Society and Abortion World Wide :59 10 Singh s Wulf D Hussain R Bankole A Sedgh G Abortion Worldwide; A Decade of Uneven Progress :68 11 Slama R Werwatz A Bourou o Ducot B Spira A Hardie w Does male age afTect the risk of spontaneous abortion? An approach using semiparametric regression .4 m J Epidemiol 2003:157(9):815-824 doi.10.1093/aje/kwg056 12 Arck PC Rticke M Rose M et al Early risk factors for miscarriage: a prospective cohort study hl pregnant women Reprod Biomed Online 2008; 17( 1): 101 -113 dor: 10.1016 si 472-6483( 10)603 00-8 13 Byrne J Periconceptional folic add presents miscarriage in Irish families with neural tube defects, lr J Med sei 2011:180(l):59-62 doj: 10.1007/$ 11845-010-0629-5 14 Mukherjee s Vele2 Eduards DR Baữd DD, Savitz DA Hartmann KE Risk of miscarriage among blade women and white women in a U.S Prospective Cohort Study Jm J Epidemiol 2013.177(11): 1271-1278doi:10.1093/aje/kws393 15 Rossen LM Ahrens KA Branum AM Trends in Risk of Pregnancy Loss Among US Women 1990 2011 Paeđưnr Penna Epidemiol 201832(1): 19-29 doi: 10.111 l/ppe 12417 16 Hu X, Miao M Bai Y, Cheng N, Ren X Reproductive Factors and Risk of Spontaneous Abortion in the Jinchang Cohort, Pt J Environ Rei Public Health 2018; 15(11) doi: 10.3390'ijeiphl 5112444 17 Lee w Jung sw Lim Y-M Lee K-J Lee J-H Spontaneous and repeat spontaneous abortion risk in relation to occupational characteristics among working Korean women: a cross-sectional analysis of nationally representative data from Korea BMC Public Health 2019;19(l):1339 doi; 10.1186/S12889-O19-7728-7 18 Vù Thị Lan Dicu Ira tilth hình sinh đc kc hoach hóa gia đính cua phự nừ 15 - 49 mối lại huyên Đóng Anh - Hà Nộỉ Lu (in vân tắ nghièp Bàc sỷ >' khau Trường Dụi học ỉ'Há -Vô/ 2000 19 Đau Quang Vinh Kha nàng anh liuong cua nùi Iiuưng (đất Iiuóc) súc khoe bệnh tật cua phu nừ tuõi sinh đc xà Nam Sưn - Sóc Son - Ha Nội Luân ván Thạc sỳ Yhọc Trưởng Dại hục Y Ha NỘI 2000 20 Ngun Thi Bích Thin- Nghiên cứu tinh hình cung cắp vả sir dụng dịch vụ chim sóc súc khoe phụ nừ (15 • 49 ti) xà huyện Hoa Lư linh Ninh Bình Luận ván Thực ĩỹ Y học Trường Dợi học Y Hà Nội 2001 21 Trần Thi Trung Chiền Ta Biền Nạo HÙI Thai Trung tâm nghiên cửu lư liệu thông tin tư liệu dãn số; 2002 22 Nguyen Nam Thăng Tinh hình sây thai, thai chết lưu số xà cua Thãi Bính vã đặc điểm nhiêm sắc the cua số cặp vợ chống sầy thai, Chet lưu Luân ván Thưc $ỳ Ỵhọc, Trường Dợi học Y Hơ Nội 2004 23 Trinh Vin Bao Nghiên Cứu Mờ Hình Tư Di ĩinyi-n Cho Các Gia Dinh Chiu Anh Hướng Cua Chat Độc Hõa Hục Trong Chiền Tranh Bao cảo lổng ket dề tài khoa hục rông nghê cấp Nhà nước, Bộ Tài nguyên - MỜI trường; 2006 24 Graner s Klingberg-Allvin M, Phuc HD Krantz G Mogren I The panorama and outcomes of pregnancies within a well-defined population in rural Vietnam 1999-2004 ĨIIỈ J Behav Med 2009;16(3):269-277 doi: 10.1007/sl 2529-008-9026-0 25 Truong Quang Đụt Trân Dưc Phân Ngõ Vân Toàn Ty lẽ sây thai sò yếu tồ liên quan đèn sây thaỉ