XÁC ĐỊNH sự LIÊN QUAN của đa HÌNH GEN LRP5 với TÌNH TRẠNG LOÃNG XƯƠNG ở PHỤ nữ mãn KINH

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI PHAN THỊ QUỲNH ANH XÁC ĐỊNH SỰ LIÊN QUAN CỦA ĐA HÌNH GEN LRP5 VỚI TÌNH TRẠNG LOÃNG XƯƠNG Ở PHỤ NỮ MÃN KINH ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI PHAN THỊ QUỲNH ANH XÁC ĐỊNH SỰ LIÊN QUAN CỦA ĐA HÌNH GEN LRP5 VỚI TÌNH TRẠNG LOÃNG XƯƠNG Ở PHỤ NỮ MÃN KINH Chuyên ngành : Nội khoa Mã số : 60720140 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS.BS Trần Thị Tô Châu HÀ NỘI - 2015 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT MĐX Mật độ xương CXĐ Cổ xương đùi CSTL Cột sống thắt lưng DNA Deoxyribonucleic acid DXA Dual energy X-ray Absorptiometry BMI Body Mass Index (chỉ số khối thể) SNP Single Nucleotid Polymorphism (Đa hình đơn Nucleotid) LX Loãng xương PCR Polymerase Chain Reaction (phản ứng chuỗi trùng hợp) RFLP-PCR Restriction Fragment Length Polymorphism (Đa hình chiều dài đoạn cắt giới hạn) LRP5 Low-density lipoprotein Receptor-related Protein TGMK Thời gian mãn kinh MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Tổng quan bệnh loãng xương 1.1.1 Định nghĩa loãng xương 1.1.2 Đặc điểm dịch tễ loãng xương 1.1.3 Chẩn đoán loãng xương 1.1.4 Phân loại loãng xương [14][16] 1.1.5 Nguyên nhân gây loãng xương phụ nữ mãn kinh .7 1.1.6 Mối liên quan gen loãng xương 1.2 Tổng quan mãn kinh .10 1.2.1 Định nghĩa mãn kinh 10 1.2.2 Phân loại mãn kinh 10 1.2.3 Ảnh hưởng mãn kinh đến loãng xương 10 1.3 Tổng quan nghiên cứu gen LRP5 11 1.3.1 Cấu trúc gen LRP5 11 1.3.2 Vai trò gen LRP5 loãng xương gãy xương 11 1.4 Các nghiên cứu nước liên quan gen LRP5 đến MĐX 13 1.4.1 Các nghiên cứu nước liên quan gen LRP5 đến MĐX 13 1.4.2 Các nghiên cứu nước liên quan gen LRP5 đến MĐX 14 1.5 Một số kỹ thuật sinh học phân tử ứng dụng phát đột biến gen 14 1.5.1 Kỹ thuật PCR 15 1.5.2 Kỹ thuật RFLP-PCR 16 1.5.3 Kỹ thuật giải trình tự gen trực tiếp .17 Chương 18 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .18 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn nhóm bệnh 18 2.1.2 Tiêu chuẩn lựa chọn nhóm chứng .18 2.1.3 Tiêu chuẩn loại trừ .18 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu .19 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Qui trình tuyển chọn đối tượng nghiên cứu lấy máu 19 2.4 Thiết kế nghiên cứu 20 2.5 Sơ đồ qui trình nghiên cứu 21 2.6 Kỹ thuật phân tích mẫu nghiên cứu 21 2.7 Phương pháp phân tích thống kê 21 2.8 Vấn đề đạo đức đề tài 22 Chương 23 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 23 3.1 Kết tách chiết DNA .23 3.2 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu 23 3.3 Kết xác định kiểu gen 24 3.4 So sánh tần suất kiểu gen LRP5 SNP rs3736228 với MĐX nhóm nghiên cứu 25 CHƯƠNG 27 DỰ KIẾN BÀN LUẬN 27 DỰ KIẾN KẾT LUẬN 28 DỰ KIẾN KIẾN NGHỊ .28 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Tiêu chuẩn chẩn đoán loãng xương theo WHO [28] Bảng 1.2 Mật độ xương đỉnh trung bình (g/cm2) quần thể phụ nữ Việt Nam đo máy Hologic [4] Bảng 3.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu có TGMK ≤ năm 23 Bảng 3.2 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu có TGMK từ -10 năm 23 Bảng 3.3 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu có TGMK >10 năm .23 Bảng 3.5 Đặc điểm MĐX đối tượng nghiên cứu có TGMK 5-10 năm 23 Bảng 3.6 Đặc điểm MĐX đối tượng nghiên cứu có TGMK >10 năm .24 Bảng 3.7 Phân bố kiểu gen tần số alen gen LRP5 SNP rs3736228 nhóm loãng xương nhóm chứng có TGMK ≤ năm .24 Bảng 3.8 Phân bố kiểu gen tần số alen gen LRP5 SNP rs3736228 nhóm loãng xương nhóm chứng có TGMK từ 5-10 năm 24 Bảng 3.9 Phân bố kiểu gen tần số alen gen LRP5 SNP rs3736228 nhóm loãng xương nhóm chứng có TGMK >10 năm 25 Bảng 3.10 Tần suất kiểu gen LRP5 SNP rs3736228 với MĐX CXĐ(g/cm2) nhóm nghiên cứu có TGMK ≤ năm 25 Bảng 3.11 Tần suất kiểu gen LRP5 SNP rs3736228 với MĐX CXĐ (g/cm2) nhóm nghiên cứu có TGMK từ -10 năm 25 Bảng 3.12 Tần suất kiểu gen LRP5 SNP rs3736228 với MĐX CXĐ (g/cm2) nhóm nghiên cứu có TGMK > 10 năm 26 Bảng 3.13 Tần suất kiểu gen LRP5 SNP rs3736228 với MĐX CSTL (g/cm2) nhóm nghiên cứu có TGMK ≤ năm 26 Bảng 3.14 Tần suất kiểu gen LRP5 SNP rs3736228 với MĐX CSTL((g/cm2) nhóm nghiên cứu có TGMK từ -10 năm 26 ĐẶT VẤN ĐỀ Loãng xương bệnh lý xương đặc trưng giảm khối lượng xương hư tổn cấu trúc xương dẫn đến tăng nguy gãy xương Theo số liệu Tổ chức chống loãng xương Quốc tế (IOF), giới phụ nữ có người bị loãng xương, nam giới tỉ lệ 1/5 Tại Mỹ có khoảng 1.5 triệu ca gãy xương năm gánh nặng kinh tế khổng lồ hệ thống chăm sóc sức khỏe với chi phí 17 tỉ đô la năm dự báo tăng 50% vào năm 2025 [1] Riêng Việt Nam, theo số liệu khảo sát bước đầu Viện Dinh Dưỡng, bệnh loãng xương ảnh hưởng tới 1/3 phụ nữ 1/8 đàn ông 50 tuổi Phụ nữ mãn kinh đối tượng nguy cao bị loãng xương thiếu hụt oestrogen Đây hormon sinh dục nữ có vai trò quan trọng việc trì khối lượng xương Phụ nữ mãn kinh suốt đời lại có nguy gãy xương loãng xương 10% cao tương đương với tỉ lệ mắc bệnh ung thư vú [2] Tại Việt Nam, qua nghiên cứu Hồ Phạm Thục Lan, phụ nữ mãn kinh thành phố Hồ Chí Minh có tỉ lệ loãng xương CXĐ 28,6 [3], miền Bắc theo tác giả Nguyễn Thị Thanh Hương tỉ lệ loãng xương CXĐ cột sống thắt lưng 23,1% 49,5%[4].Tỉ lệ loãng xương phụ nữ Việt Nam cao tương đương với phụ nữ da trắng Úc (21%) [5], Mỹ (20%) [6] cao nhiều phụ nữ Đông Á: Trung Quốc (10%) [7], Nhật Bản (17%) [8], Hàn Quốc (10%) [9] Nghiên cứu cặp sinh đôi gia đình phả hệ cho thấy 5085% biến đổi MĐX gen qui định[10] Gãy xương loãng xương di truyền theo chế mà phần độc lập với MĐX[11] Hiện giới xác định 56 locus có liên quan đến MĐX với mức ý nghĩa (p10 năm MĐX (g/cm2) CXĐ CSTL Nhóm LX Nhóm chứng p 3.3 Kết xác định kiểu gen Bảng 3.7 Phân bố kiểu gen tần số alen gen LRP5 SNP rs3736228 nhóm loãng xương nhóm chứng có TGMK ≤ năm Nhóm Nhóm LX Nhóm chứng Phân bố p CC CT TT C T Kiểu gen Alen P Bảng 3.8 Phân bố kiểu gen tần số alen gen LRP5 SNP rs3736228 nhóm loãng xương nhóm chứng có TGMK từ 5-10 năm Nhóm Phân bố CC Kiểu gen CT TT C Alen T P Nhóm LX Nhóm chứng p 25 Bảng 3.9 Phân bố kiểu gen tần số alen gen LRP5 SNP rs3736228 nhóm loãng xương nhóm chứng có TGMK >10 năm Nhóm Phân bố Nhóm LX Nhóm chứng p CC CT Kiểu gen TT C Alen T p 3.4 So sánh tần suất kiểu gen LRP5 SNP rs3736228 với MĐX nhóm nghiên cứu Bảng 3.10 Tần suất kiểu gen LRP5 SNP rs3736228 với MĐX CXĐ(g/cm2) nhóm nghiên cứu có TGMK ≤ năm MĐX CXĐ(g/cm2) Nhóm loãng xương Kiểu gen Nhóm chứng p CC CT TT P Bảng 3.11 Tần suất kiểu gen LRP5 SNP rs3736228 với MĐX CXĐ (g/cm2) nhóm nghiên cứu có TGMK từ -10 năm MĐX CXĐ(g/cm2) Kiểu gen CC Nhóm loãng xương Nhóm chứng p 26 MĐX CXĐ(g/cm2) Kiểu gen CT TT P Nhóm loãng xương Nhóm chứng p Bảng 3.12 Tần suất kiểu gen LRP5 SNP rs3736228 với MĐX CXĐ (g/cm2) nhóm nghiên cứu có TGMK > 10 năm MĐX CXĐ (g/cm2) Kiểu gen Nhóm loãng xương Nhóm chứng p CC CT TT P Bảng 3.13 Tần suất kiểu gen LRP5 SNP rs3736228 với MĐX CSTL (g/cm2) nhóm nghiên cứu có TGMK ≤ năm MĐX CSTL(g/cm2) Nhóm loãng xương Kiểu gen Nhóm chứng p CC CT TT P Bảng 3.14 Tần suất kiểu gen LRP5 SNP rs3736228 với MĐX CSTL((g/cm2) nhóm nghiên cứu có TGMK từ -10 năm MĐX CSTL(g/cm2) Kiểu gen CC CT TT P Nhóm loãng xương Nhóm chứng p 27 Bảng 3.15 Tần suất kiểu gen LRP5 SNP rs3736228 với MĐX CSTL(g/cm2) nhóm nghiên cứu có TGMK > 10 năm MĐX CSTL(g/cm2) Nhóm loãng xương Kiểu gen Nhóm chứng p CC CT TT P CHƯƠNG DỰ KIẾN BÀN LUẬN Bàn luận phương pháp xác định kiểu gen gen LRP5 SNP rs3736228 kĩ thuật RFLP-PCR Bàn luận đặc điểm đối tượng nghiên cứu 28 DỰ KIẾN KẾT LUẬN DỰ KIẾN KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO Burge R, et al.Incidence and economic burden of osteoporosis-related fractures in the United States, 2005-2025.J Bone Miner Res 2007; 22:465-75 [PubMed: 17144789] Nguyen N.D.,et al (2007) Residual lifetime risk of fractures in women and men J Bone Miner Res, 22(6),781-8 Ho Pham L.T.,et al(2011) Reference ranges for bone mineral density and prevalence of osteoporosis in Vietnamese men and women BMC musculoskelet Disord, 12, 182 Nguyen H.T., et al (2009) Peak bone mineral density in Vietnamese women Arch Osteoporos, 4(1-2),9-15 Pasco J.A., et al (2000) Calcium intakes among Australian women :Geelong Osteoporosis Study Aust N Z J Med 30(1),21-7 Looker A.C., et al (1997).Prevalence of low femoral bone density in older U.S adults from NHANES III J Bone Miner Res 12(11), 1761-8 McNutt, L.A.,et al (2003) Estimating the relative risk in cohort studies and clinical trials of common outcomes Am J Epidemiol 157(10),940-3 Kaneki M., et al (2001) Japanese fermented soybean food as the major determinant of the large geographic difference in circulating levels of vitamin K2: possible implications for hip fracture risk Nutrition 17(4), 315-21 Yang SO,et al (2006) Normative study on bone mineral density in a Korean women using DXA Abstract US084 10 Peacock M, Turner CH, Econs MJ, Foroud T Genetics of osteoporosis Endocr Rev 2002; 23:303-26 [PubMed: 12050122] 11.Ralston SH, Uitterlinden AG Genetics of osteoporosis Endocr Rev 2010; 31:629-62 [PubMed: 20431112] 12 Sassi et al BMC Musculoskeletal Disorders 2014, 15:144 http://www.biomedcentral.com/1471-2474/15/144 13 Guang- Yue Xu, Yong Qiu, and Hai-Jun Mao Common Polymorphism in the LRP5 Gene May Increase the Risk of Bone Fracture and Osteoporosis Volume 2014 (2014), Article ID 290531, 13 pages http://dx.doi.org/10.1155/2014/290531 14 Nguyễn Thị Ngọc Lan, Loãng xương nguyên phát, Bệnh học xương khớp nội khoa, NXB Giáo dục Việt Nam, 2012 15 Nguyen HTT, von Schoultz B, Pham DMT, Nguyen DB, Le QH, Nguyen DV, Hirschberg AL, Nguyen TV Peak bone mineral density in Vietnamese women Osteoporosis Int 2008; inpress 16 Nguyễn Văn Tuấn (2008), Loãng xương Tập san thông tin y học, số tháng 17 Smith R, W.P., (2005) Clinical and biochemical disorders of the skeleton Osteoporosis, In 123, 45-50 18 E Hernlund & A Svedbom & M Ivergård & J Compston & C Cooper & J Stenmark & E V McCloskey & B Jönsson Osteoporosis in the European Union: medical management, epidemiology and economic burden A report prepared in collaboration with the International Osteoporosis Foundation (IOF) and the European Federation of Pharmaceutical Industry Associations (EFPIA) 19 Young-Kyun Lee, Byung-Ho Yoon, Kyung-Hoi Koo (2013) Epidemiology of Osteoporosis and Osteoporotic fractures in South 20 Cosman, F., et al (2014).Clinician’s Guide to Prevention and Treatment of Osteoporosis Osteoporos Int 15, 15 21 Gullberg, O.Johnell, and J.A Kanis, (1997) World-wide projections for hip fracture Osteoporos Int 7(5), 407-13 22 B Haussler, H Gothe, G Gaeske, L Pientka, D.Felsenberg, (2007) Epidemiology, treatment and costs of osteoporosis in Germany—the BoneEVA Study 23 Vedi, S., et al (1999) Bone remodeling and structure in postmenopausal women treated with long-term, high-dose estrogen therapy Osteoporos Int 10(1),52-8 24 Hồ Phạm Thục Lan, Nguyễn Văn Tuấn, (2011), Sinh lý học loãng xương Thời y học tháng 07-số 62, 2011 25 Huong, N.T.T.,Osteoporosis a major health problem in Viet Nam, in Thesis for doctoral degree (Ph.D) 2012, Karolinska Institutet: Stockholm 26 Ho-Pham L T, et al., Reference ranges for vertebral heights and prevalence of asymptomatic (undiagnosed) vertebral fracture in Vietnamese men and women Arch Osteoporos, 2012 7(1-2): p 257-66 27 John A Kanis, MD, Diagnosis of osteoporosis and assessment of fracture risk Volume 359, Issue 9321, june 2002, Pages 1929-1936 28 Kanis, J.A., Melton, L.J., Christiansen, C., Johnston, C.C and Khaltaev, N.: The diagnosis of osteoporosis J Bone Miner Res 9:1137-1141, 1994 29 Frost HM., (1963) Bone Remodelling Dynamics Springfield IL:Charles C.Thomas 30 Seeman E , Delmas PD 2006 Bone quality—the material and structural basis of bone strength and fragility N Engl J Med 354:2250– 2261 CrossRef, Medline 31 Kuiper, G.G., G.J van den Bemd, and J.P van Leeuwen (1999) Etrogen receptor and the SERM concept J Endocrinol Invest 22(8), 594-603 32 Oursler MJ(1998) Estrogen regulation of gene expression in osteoblasts and osteoclasts Crit Rev Eukaryotic Gene Expression 8:125-140 33 Majeska RJ, Ryaby JT, Einhorn TA (1994) Direct modulation of osteoblastic activity with estrogen J Bone Joint Surg 76:713-721 34 Zang XY, Tan YB, Pang ZL, Zhang WZ, Zhao J (1994) effect of parathyroid hormone and estradiol on proliferation and function of human osteoblasts from fetal long bone: an invitro study, Chin Med J 107:600-603’ 35 Ettinger B, Black DM, Mitlak BH, Knickerbocker RK, Nickelsen T, Genant HK, Christiansen C, Delmas PD, Xanchetta JR, Stakkestad J, Gluer CC, Krueger K, Cohen FJ, Eckert S, Ensrud KE,Avioli LV,Lips P, Cummings SR (1999) Reduction of vertebral fracture risk in postmenopausal women with osteoporosis treated with raloxifene: results from a 3-year randomized clinical trial JAMA 36 Ishibe M, Nojima T, Ishibashi T, Koda T, Kaneda K, Rosier RN, Puzas JE(1995) 17β-Estradiol increases the receptor number and modulates the action of 1,25-dihydroxyvitaminD3 in human osteosarcoma-derived osteoblast-like cells Calcif Tissue int 57:430-435 37 Slootweg MC, Swolin D, Netelenbos JC, Isaksson OGP, Ohlsson CJ (1997) Estrogen enhances growth hormone receptor expression and growth hormone action in rat osteosarcoma cells and human osteoblastlike cells J Endocrinol 155:159-164 38 Ernst M, Heath JK, Rodan GA (1989) Estradiol effects on proliferation, messenger ribonucleic acid for collagen and insulin-like growth factor-I and parathyroid hormone-stimulated adenylate cyclase activity in osteoblastic cells from calvariae and long bones Endocrinology 125:825-833 39 NAMS, Management of Osteoporosis in Postmenopausal Women: 2010 Position Statement of The North American Menopause Society, 2010;17(1):25-54 40 Looker AC, Wahner HW, Dunn WL, et al Updated data on proximal femur bone mineral levels of US adults Osteoporos Int 1998;8:486-489 41 Johnell O, Kanis J Epidemiology of osteoporotic fractures Osteoporos Int 2005;16(suppl 2):S3–S7 42 Melton LJ III, Chrischilles EA, Cooper C, Lane AW, Riggs BL How many women have osteoporosis? J Bone Miner Res 1992;7:1005–1010 43 Monique Bethel, MD, osteoporosis treatment and management, Feb 26, 2015, Medscape 44 Estrada, Karol, Unnur Styrkarsdottir, Evangelos Evangelou, Yi-Hsiang Hsu, Emma L Duncan, Evangelia E Ntzani, Ling Oei, et al 2012 Genome-wide meta-analysis identifies 56 bone mineral density loci and reveals 14 loci associated with risk of fracture Nature Genetics 44(5): 491-501 45 Cheung CL, Huang QY, Chan V, Kung AW Association of low-density lipoprotein receptor-related protein (LRP5) promoter SNP with peak bone mineral density in Chinese women PMID: 18073493 [PubMed] 46 Y Gong, M Vikkula, L Boon, J Liu, P Beighton, R Ramesar, L Peltonen, H Somer, T Hirose, B Dallapiccola, et al Osteoporosispseudoglioma syndrome, a disorder affecting skeletal strength and vision, is assigned to chromosome region 11q12–13 Am J Hum Genet., 59 (1996), pp 146–151 47 Miao Xuan, Yonglan, Wenxing Wang, Jun Yang, Ying Li and Xiuzhen Zhang Association of LRP5 gene polymorphism with type diabetes mellitus and osteoporosis in postmenopausal women, Int J Clin Med 2014; 7(1): 247-254 48 Gong Y,et al LDL receptor-related protein (LRP5) affects bone accrual and eye develop Cell2001; 107:513-23 49 Little RD, et al A mutation in the LDL receptor-related protein genee results in the autosomal dominant high-bone-mass trait Am J Hum Geneet 2001;70:11-9 50 Nguồn:atlasgeneticsoncology.org/Genes/LRP5ID44282ch11.q13.html 51 Nguồn :Genetics home reference.ghr.nhm.nih.gov/gene/LRP5 52 Bianchine JW, Briard-Guillemot ML, Maroteaux P, Frezal J, Harrison HE 1972 Generalized osteoporosis with bilateral pseudoglioma-an autosomal recessive disoder of connective tissue: Report of three families-review of the literature Am J Hum Genet 24:34A 53 Boyden LM, Mao J, Belsky J, Mitzner L, Farhi A, Mitnick MA, Wu D, Insogna K, Lifton RP 2002 High bone density due to a mutation in LDLreceptor-related protein N Engl J Med 346:1513–1521 54 Little RD, Carulli JP, Del Mastro RG, Dupuis J, cộng (2002) A mutation in the LDL receptor-related protein gene results in the autosomal dominant high-bone-mass trait Am J Hum Genet 70:11–19 55 Kato M, Patel MS, Levasseur R, Lobov I, cộng (2002) Cbfa1independent decrease in osteoblast proliferation, osteopenia, and persistent embryonic eye vascularization in mice deficient in Lrp5, a Wnt coreceptor J Cell Biol 157:303–314 56 Babij P, Zhao W, Small C, Kharode Y cộng (2003) High bone mass in mice expressing a mutant LRP5 gene J Bone Miner Res 18:960–974 57 P.W.Lu, C.T.Cowel, S.A Lloyd-Jones, J.N Briody, R Howman-Giles Volumetric bone mineral density in normal subjects, aged 5-27 years J.Clin Endocrinol Metab., 81(1996), pp 1586-1590 58 B L Riggs, L.J Melton Involutional osteoporosis N.Engl J Med., 314 (1986), pp 1676-1686 59 E Seeman, C.Tsalamandris, C Formica, J.L Hopper, J Mckay Reduced femoral neck bone density in the daughters of women with hip fractures: the role of low peak bone density in the pathogenesis of osteoporosis J Bone Miner Res., (1994), pp 739-743 60 Yaoqin Gong, Roger B Slee, Naomi Fukai, Georges Rawadi, Sergio Roman-Roman, Anthony M Reginato, Hongwei Wang LDL ReceptorRelated Protein (LRP5) Affects Bone Accrual and Eye Development Volume 107, Issue 4, 16 November2001, Pages513-523 61 Liesbeth Van Wesenbeeck, Erna Cleiren, Jeppe Gram, Rodney K.Beals, Olivier Besnichou, Domenico Scopelliti, Lyndon Key Six Novel Missense Mutations in the LDL Receptor-Related Protein (LRP5) Gene in Different Conditions with an Increased Bone Density Am J Hum Genet 2003 Mar; 72(3): 763-771 PMICD: PMC1180253 62 Yayoi Funakoshi, Hisamitsu Omori, Hironori Yada, Takahiko Katoh A1330V polymorphism of the low-density lipoprotein receptor-related protein gene and bone mineral density in Japanese male wokers Environ Health Prev Med 2011 Mar 11;16(2):106-12 63 Jian-min Liu, Min-jia Zhang , Lin Zhao, Bin Cui, Zhi-bin Li, Hongyan Zhao, Li-hao Sun, Bei Tao,Min Li, and Guang Ning Analysis of Recently Identified Osteoporosis Susceptibility Genes in Han Chinese Women JCEM, Vol 95,No9 64 Y.-P.Zang, F.-Y Deng, Y.Chen, Y.-F.Pei, Y Fang, Y.-F Guo, X Guo, X.-G Liu, Q.Zhou Replication study of candidate genes/loci associated with osteoporosis based on genome-wide screening PMCID: PMC2917903 65 JB Richard, F Rivadeneira, M Inouye, TM Pastinen, N Soranzo, SG Wilson, T Andrew, M Falchi, R Gwilliam, KR Ahmadi, AM Valdes, P Arp, P Whittaker, DJ Verlaan, M Jhamai, V Kumanduri, M Moorhouse, JB van Meurs Bone mineral density, osteoporosis, and osteoporotic fractures: a genome-wide association study Lancet 2008 May 3; 371(9623): 1505-1512 66 Twells, R C J., Metzker, M, L., Brown, S D., Cox, R., Garey, C., Hammond, H., Hey, P.J., Levy, E., Nakagawa, Y., Philips, M S., Todd, J A., Hess, J F The sequence and gene characterization of a 400-kb candidate region for IDDM4 on chromosome 11q13 Genomics 72: 231242, 2001.[PubMed:11401438]