Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu kiểm tra chất lượng một số thông số hóa sinh cơ bản

L^AX'V- ĐỊ VĂN LƯƠNG NGHIÊN CỨU QƯY TRÌN H SẢN XƯÁT MẢU NGOẠI KIÊM TRA CHÁT LƯỢNG MỘT SĨ THỊNG SỎ HÓA SINH Ngành đào tạo : Xét nghiệm V hực Mà ngành : D720332 KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP cữ NHÂN Y KHOA KHÓA 2017-2021 Người hướng dần khoa học: q T11S Phạm Thị Hương Trang HÁ NỘI-2021 LÒ1 CAM ON TM/ V*: Với tinh câm chân thành, xin bây tơ lịng biết ơn tởi Ths Pham Th| I lương Trang, người dà trục tiếp hường dàn giúp dừ dộng viên vả chi bão tận tinh cho từ bước dằu trinh nghiên cửu hồn thành khóa luận Tỏi xin gưi lời cam ơn tới: Các thầy hội địng bao vệ khóa luặn tồt nghiêp cua tịi thầy dà dành thời gian dọc cho ý kiến gỏp ỷ quỹ giá giúp tói cỏ thêm kiến thức, kinh nghiệm trinh nghiên cứu trinh học tập lảm việc sau Cãc anh chị Khoa xét nghiệm- Bệnh viện Đại học Y Trung tâm kiêm chuân chắt lượng xét nghiệm dà giúp đờ tịi có dược điều kiện sơ vặt chất quã trinh thục nghiên cứu Phông Dào lạo Dại học Trường Dại học Y Hà Nội vã Khoa Kỳ thuật Y hộc dã tạo điều kiện thuận lởi cho tỏi trinh học táp hoãn khỏa luộn Xin bây to lòng kinh yêu sâu sấc den gia dinh, nhùng người thân vả bạn bè dà bên hổ trợ dộng viên tỏi học tập tốt hồn thành khóa luận tốt nghiệp Hà Nội ngày 24 thảng nàm 2021 Sinh viên Dỗ Vân Lương TM/ V*: LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan lả nhùng công trinh n^iiẽn cữu cùa chinh thực hướng dàn khoa học cùa Ths Phạm Thị Hương Trang Các số liệu, kết q nêu luận vân hỗn tốn trung thực khách quan Neu sai tỏi xin chịu hoàn toàn trách nhiẻm Tác giá luận vàn Đỗ Vàn Lương MỤC LỤC ĐẠT VÁN ĐÈ CHƯƠNG I: TỚNG QUAN TÀI LIỆU I I Đám bão chắt lượng xét nghiệm phòng xẽt nghiệm y học 1.2 Ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm 1.2.1 Khải niệm VC ngoại kiềm .4 1.2.2 Các phương pháp ngoại kiêm .4 1.2.3 Giá trị chương trỉnh ngoại kicm 1.3 San xuắt mầu ngoại kicm Quy trinh san xuất mẫu huyết tương ngoại kiêm tra dạng đông khô 1.4.1 Quy trinh dõng khô .7 4.2 Quy trinh chuân bị huyết tương kiếm tra dạng dịng khơ 1.5 Đánh giá độ ổn định dồng cùa mầu 10 1.6 Nguyên lý xét nghiệm cua chi số nghiên cửu 11 1.6.1 Glucose .12 1.6.2 AST 12 6.3 ALT .13 1.6.4 Creatinin 14 1.6.5 Urea 14 1.6.6 Cholesterol 15 1.6.7 Triglycerid 15 1.6.8 Acid Uric .16 1.6.9 Độ on dịnh cua mảu huyết tương điều kiện 17 CHƯƠNG 2: ĐÔI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cút 18 2.1 Đồi tưọng nghiên cữu 18 2.1 Tiêu chuân lụa chọn 1S 2.1.2 Tiêu chuằn loại trừ 18 2.2 Thời gian vâđịadicm nghiên cứu .18 2.3 Phương pháp nghiên cửu IS Dụng cụ trang thiết bị vã hỏa chất 1S 2.4.1 Dụng cụ 18 2.4.2 Trang thiết bị 19 2.4.3 Hóa chầt 19 2.5 Sơ đồ nghiên cứu 20 2.6 Quỵ trinh nghiên cữu 21 2.7 Thu thộp xứ lý số liệu 23 CHƯƠNG 3: KÉT QUÁ NGHIÊN cƯu 25 3.1 Kốt tụo ntửc nồng độ .25 3.2 Kiếm tra phân phổi màu .26 3.3 Độ đồng nhắt cua cảc mầu kiêm tra ngoại kiêm tra chất lưựng trước đơng khó 28 3.4 Dặc điẻm cua màu dông khô .35 3.5 Độ dồng nhắt cua cãc màu kiêm tra ngoại kiêm tra chất lượng sau dông khô 37 3.6 Độ ơn dịnh cua mẫu ngoại kiềm ưa chất lưọng 45 3.6.1 AST .45 3.6.2 ALT .46 3.6.3 Cholesterol 47 6.4 Urea 4S 3.6.5 Creatinin .49 3.6.6 Triglycerid 50 3.6.7 Glucose 51 3.6.8 Acid Uric 52 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 53 4.1 Quy trình sân xuất mẫu huyết tương ngoại kiếm dạng dõng khò xét nghiệm sinh hõa 53 4.2 Đánh giá chất lưựng màu san xuất 56 4.2.1 Độ ôn định cua nồng dộ AST .57 TM/ V*: • -U 4.2.2 Độ ổn định cùa nồng độ ALT .58 4.2.3 Độ ổn định cua Cholesterol 5S 4.2.4 Độ ồn định cua Urea 58 4.2.5 Độ ốn định cua Creatinin 59 4.2.6 Độ ôn định cũa Triglycerid 59 4.2.7 Độ ồn định cua Glucose .59 4.2.8 Độ ổn định cua Acid Uric 60 KÉT LUẶN KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHÁO TM/ DANH MỤC CÁC CHÌ' VIÉT TÁT PXN : Phòng xét nghiệm EQA : External Quality Assessment ISO : International Organization for Standardization CL SI : Clinical and Laboratory Standards Institute HTTDL : Huyct tương tươi dõng lạnh NAD’ : Coenzym Nicotinamid Adenin Dinucleotid NADH Hụp chất dạng khứ cùa NAD" AST Aspartate Aminotransferase ALT Alanine Aminotransferase ATP Adenozin Triphotphat ADP : Adenosine Diphosphate CLIA : Clinical Laboratoiy Improvement Amendments Lỏ : Lõ mẫu đũng khô mức nồng độ bính thường Lỏ : Lỏ mẫu dõng khơ mức nồng dộ cao TM/ V*: DANH MỤC CÁC B ANG Báng 2.1 TEa(%) cùa thõng số thục theo CLIA 2017 24 Bang 3.1 Kẻt múc nồng bính thưởng 25 Báng 3.2 Kết quà ntức nống độ cao 26 Bang 3.3 Kct phân phổi mẫu cua lò I 26 Bang 3.4 Kcl qua phân phổi màu cua lõ 27 Bang 3.5 Kct qua nồng độ AST(U/L) thư nghiệm dãnh giã độ dồng nhắt trước dõng khô cùa lõ I vã lõ 28 Báng 3.6 Kct qua nồng độ ALT(U’L) thứ nghiệm đánh giá dộ đồng trước dõng khô cùa lô vã lõ 29 Bang 3.7 Kết qua nông độ Cholesterol! mmol L) thư nghiêm dành giã độ dồng trước dông khô cùa lõ I lõ .30 Báng 3.8 Ket quã nồng độ Urea(mmol/L.) thư nghiệm đánh giâ độ dồng trước đông khô cùa lô I vả lô 31 Bang 3.9 Kct qua nồng độ Creatinin(jimol/L) thứ nghiêm đánh giá dụ đồng trước đông khô cùa lô I lô .32 Bang 3.10 Kct nồng độ Triglyccrid(mmokL) thứ nghiệm đảnh giá độ dồng nhắt trước dõng khò cùa lõ I vã lò 33 Bang 3.11 kết qua nồng dộ Glucose!mmol/L) thư nghiệm dành giá dộ đồng nhắt trước đông khô cùa lô I vã lô .34 Bang 3.12 Kot qua nồng độ Acid Uricípmol/L) tlur nghiệm đãnlì giá độ dồng nhắt trước dòng khò cùa lõ I vả lõ .35 Bang 3.13 Dô âm tôn dư cùa sô mẫu sau dông khô 37 Báng 3.14 Kết qua nồng độ AST(Ư/L) thứ nghiộnt đánh giã độ dồng sau dơng khị cùa lõ lị 37 Bang 3.15 Kốt qua nống độ ALT(U/L) thư nghiệm đảnh giã dộ dỗng sau dịng khơ cũa ló I vả lị 38 Bang 3.16 Kết nồng độ CholcsteroKmmol L) thử nghiệm đánh giá độ đồng nhắt sau dóng khơ cùa lỏ lô 39 Báng 3.17 Ket qua nồng dụ Urea(mmol/L) thu nghiệm dành giá dộ đồng nhấl sau dõng khơ cùa lõ I lị 40 Bang 3.18 Kết qua nồng dộ Crcatinin(|imol/L) thử nghiệm đánh giã độ dồng nhắt sau dơng khơ cua lị lõ 41 Bang 3.19 Kct qua nồng dộ Triglyccndímmol L) thư nghiệm dành giá dộ dồng sau dơng khó cua lị I lơ 42 Bang 3.20 Ket qua nồng độ Glucosc(mmol/L) thư nghiệm đánh giá dộ đồng sau dông khô cua lõ I vả lõ 43 Bang 3.21 Kct qua nồng dộ Acid Uriel fimol/I.) thư nghiệm dánh giã dộ dồng sau dông khô cùa lô I lô 43 Bang 3.22 Kct qua AST(U/L) thứ nghiệm dánh giá dộ ốn dinh dãi hạn cũa lò 45 Bang 3.23 Kết qua AST(U/L) thư nghiệm dành giá độ ồn định dài hạn cùa lò 45 Bang 3.24 Kci qua ALT(U/L) thư nghiệm đánh giá dộ ổn định dài hạn cứa lô 46 Bang 3.25 Kết qua ALTIU/L) thư nghiệm đảnh giá dộ ổn định dãi hạn cùa lô .46 Bang 3.26 Kct qua Cholc$tcrol(mmol/L) thư nghiệm dãnh giã dộ ồn định dài hạn cùa lô 47 Bang 3.27 Kct Cholesterol! mmol/L) thư nghiêm đánh giá độ ôn định dài hụn cùa lô 47 Báng 3.28 Kết qua Urea(mmol'L) thử nghiộm đánh giá độ ôn định dài hạn cùa lỏ I 48 Bang 3.29 Kết qua Ureaímmol I.) thư nghiệm dánh giã dộ ôn định dãi hạn cùa lõ 48 Bang 3.30 Kct qua Crcatinin(pmoL'L) thử nghiệm đánh giá độ ổn định dãi hạn cùa lò 49 Báng 3.31 Kct qua Crcatinin(pmol I.) thư nghiệm đánh giá độ ồn định dãi hạn cua lô 49 Bang 3.32 Kết quã Triglycerid(mmol/L) thư nghiệm đánh giá độ ôn định dài hạn cùa lô 50 Bâng 3.33 Kct qua Triglyceride mmol/L) thư nghiệm đanh giá độ ổn định dài hạn cùa lô 50 Bang 3.34 Kct qua Glucosc(mmol/L) thư nghiệm đánh giã độ ôn định dài hựncúalỏl 51 Bang 3.35 Kct qua Glucoscímmol I.) thư nghiệm đảnh giá dộ ồn định dãi hạn cùa lò 51 Bang 3.36 Kct Acid Uricípmol L) thư nghiệm đánh giá độ ổn định dãi hạn lò 52 Bang 3.37 Kct Acid Unc(pmol'L) thư nghiệm đảnh giã độ ón định dài hụn cùa lơ 52 DANH MỤC CÁC BIẼl DÒ, HĨNH ẢNH Hình 3.1.1 linh anh niầu kiềm tra chất lượng dạng dỏng khơ đà dược nấp kín sau lầy ta từ máy dõng khô 36 Hình 3.2 Hình anh mầu kiêm tra chất lượng lõ dạng đông khô trước sau hoàn nguyên 36 3.6.7 Glucost Bàng 3.34 Ket Glucose(mmol/L) tliư nghiệm dành giá dô ồn dịnh dài hạn cua lô ỉ *i=12.3 Bâng 3.35 Ket Glucose(mmol/L) thư nghiệm đánh giá dộ ổn dịnh dài hạn cua lô TM/ zfci GẠ: • -U 3.6.8 Acid Uric Báng 3.36 Ket qua Acid Urìc(fimol/L) thừ nghiệm dánh giá dộ ồn định dài hạn cua lô ỉ Thởi n Vo Ỹ'i |Vi - Vol Ban dâu 20 293.3 thảng 291,5 1,8 tháng 288.25 5.05 tháng 287,5 5Ị8 diêm 0.3ơp % thay dỏi so t với ban dằu 14.958 Đánh giá kct qua 0,61 MỈU ôn định 1.72 Mẫu ôn dịnh 1.98 Mầu ổn dịnh *i=12 Bưng 3.37 KỈ’t Acid UricỊpntol/Lị thứ nghiệm dứnh giá độ ôn dinh dài hạn cua ló Thời điềm n Võ ỸI |fi - roi Ban dầu 20 297.5 tháng 291.75 5.75 thảng 296.25 125 tháng 291.25 625 0.3op % thay đôi so t với ban dầu 15,172 Đánh giã kết quã 1,93 Mầu ôn định 0.42 Mau ôn định 2,1 Mau ôn dinh *1-1,23 Nhận xét: - Nồng độ Acid Uric mẫu huyết tương sau dỏng khỏ cùa lỏ I ồn định lại tất ca thời điổm đánh giả Như nồng độ Acid Uric mầu huyết tương sau dòng khò ồn định thảng - Nồng độ Acid Uric mầu huyết tương sau dông khỏ cùa lô ôn dịnh tấl cá thời diêm đảnh giá Như nồng dộ Acid Uric màu huyết tương sau dóng khị ơn định lì tháng CHƯƠNG BÀN LUẬN TM/ GẠ: • -U Thực trạng nay, cãc màu ngoại kiểm hầu hét mua tir nước Giá thảnh san phàm cao; việc trao đôi thõng tin trinh thực ngoại kiếm cịn nhiêu khó khản, đồng thời chưa loại trữ ánh hướng tử điều kiện báo quan vận chuyển mầu vật liệu ngoại kiếm Do việc tự nghiên cửu sàn xuất mầu kiểm soát chắt lượng, dó có mẫu ngoụi kiểm, khơng giam câc hạn chế mã côn nâng cao nâng lực tự nghiên cữu tự chu cõng nghệ san xuất màu ngoại kiêm đãp ững nhu cầu hộ thống quán lỷ chất lượng Việt Nam 4.1 Quy trình san xuất mẫu huyềt tương ngoại kiểm (lạng (lông khô xẻt nghiệm sinh hóa San plìám ngun liệu dầu ban dầu de sân xuắt mẫu ngoại kiêm nhóm nghiên cữu sư dụng trực tiếp tữ mầu huyết lương tươi dõng lạnh thảnh phâm dà dược diều chề lừ máu tồn phần với chất bao quan thích hợp sán xuẩt tụi Trung tàm Truyền máu bệnh viện Việt Đức Các lò huyết tương trước sư dụng dưực dành giá chất lượng sơ ban dằu dam báo khơng bị vón cục khơng xuất vãn dục bắt thưởng côn hạn sứ dụng De kiêm soát hiệu qua chất lượng xét nghiệm, dặc tính cua mầu ngoại kiềm phai cỏ kha nâng mõ phong mẫu bệnh phàm xét nghiệm, lý tương mầu phai chất nen vã thịng số nồng dộ tương tự mầu bệnh nhân.22 Do nhóm nghiên cứu lựa chọn cãc che phàm IITTĐL thành phẩm, dà đưực sàng lọc cãc yếu tổ nguy lây nhiêm dám bao tihh chat ban ban dâu vê mặt cam quan Bước tiếp theo, cần thực phân lích xác định nồng dộ cùa thơng số can phán lích cỏ sẫn mảu HTTĐL vã lữ tính tốn diều chinh nồng độ cho thông số cách phũ hợp Một irong irở ngại cua việc tạo nòng dợ khác dó túi IITTD1 ban dầu bao quán với dường Dextrose dó tạo nên nong dộ Glucose ban dâu khả cao Dê lãm giam nong độ glucose mẫu huyết tương chúng tòi tiến thư nghiệm dũng hồng cẩu lãm giam lượng glucose?'' Ket qua thu nồng độ glucose giam xuống xuất hiện lưựng vỏ hồng cằu dần dền thay dôi màu sấc cũa huyết tương vả lãm thay dõi kết qua cùa thơng số khác Như chúng tịi dinh giữ mức nống độ glucose cao dế san xuắt mẫu nên dàn đến khó khàn việc pha chế đê tạo mức nồng độ bao phu dược diêm định lâm sàng Các thõng sỗ trẽn suốt trinh thực được liến hãnh hộ thống Abbott Alinity c vả Rochc Cobas 8000 (hai module c7O2 c502) dược đật trực tiếp lại Khoa TM/ Cạ: xét nghiệm - Bệnh viện Dại học Y Hà Nội Hiện thiết bị đà thục xác nhận phương pháp thực nghiêm ngặt quy trinh dam bao kiêm soát chắt lượng xét nghiệm Khoa Xẽt nghiêm Bệnh viện Đại hục Y Hả Nội đà dánh giá công nhận tiêu chuãn ISO 15189:2012 lả chuẩn ISO cho phông xét nghiệm y học Khi thực xét nghiệm, nhóm nghiên cứu tuân thú dú quy trinh kiêm soãt chắt lưựng lại Khoa xét nghiêm Do sứ dụng riêng KIT hỏa chắt cua nhóm, nên trinh thực nhóm tiến hành theo dịi chặt chê việc phân tích có nhùng thõng số cỏ thay đỗi lơ hóa chất, thục dũng theo quy trinh khuyến cáo lần suất calibration vã thực nội kiểm với mục đích đám báo hệ thống thiết bị trẽn hoạt dộng bính thường, tránh cãc VCU tố nhiều hệ thống Mau huyết tương sau dược diều che dược trộn sè dược chia vào lụ chữa mẫu với the tích mL/lọ mức nồng độ thấp thê tích mL/lọ mức nồng độ cao bang pipet tự động thè tích 1000 ụL Pipet 1000 ,uL tụi Trung lâm Kiêm chuãn chắt lưựng xét nghiệm y hục dà dược thực hiệu chuẩn nồng độ lOOOuL vã dược dán tem kiêm định bin Viện Tiêu chuân chát lượng Việt Nam Các dụng cụ lường khác bao gồm càn điện lư hiệu chinh đật cố định Việc sử dụng pipcl đà dược hiệu chuẩn giúp lẩy thê lích xác lọ mẫu tránh sai số việc câc lọ mẫu có thê lích khơng bang Tồn quy trinh thực phân phơi mẫu dẽu dược thực giâm sát kem theo đánh giá sau phân phối dê dam bao tính chinh xác tồi da phân phổi mầu Dê đan) bao kct phân phối mầu giửa lọ lủ đồng chúng tòi tiến hành chọn ngầu nhicn 10 mầu/lô đê càn trước vả sau phân phối, mỏi lằn cân lien hãnh lặp lại tối thiêu lẩn Kcl qua thu dược cho thấy khói lượng mầu lợ dồng du diều kiện đe tiền hành dỏng khô- Tuy nhiên phương pháp chia thũ công bang pipet chi áp dụng với cở mầu nhỏ, muốn sản xuất với sỗ lượng mẫu lớn thí cần thực bang pipet tự động hỗn tồn, cảc hệ thống tay robot Quy trinh dõng khô nhõm nghiên cứu thực vã diều chinh theo cãc nghiên cứu dơng khị dà dược tiến hành trước dó cua Nguyên Thị Thủy cộng (2016) tiến hãnh thực đánh giã độ ổn định mầu đông khô sư dụng kiêm tra chất lượng xét nghiệm định lượng HBV-DNA 24 Việc theo dòi hiệu suất cùa trinh dõng khô lõ màu huyết tương ngoại kiêm quan trụng Độ ầm tồn dư cua mầu dịng khơ phán ảnh hiệu suất dõng khơ dổi với cãc mầu I lơ có thực dồng dều Sau hoãn thành trỉnh dịng khơ: nhóm nghiên TM/ V*: cứu tiến hành chọn ngẫu nhiên màu dé tiến hành dộ âm tồn dư Ket nghiên cứu thu dược {bang lỉ) cho thầy độ ẩm tồn dư mầu dộ ấm tốn dư < 4%( thoa tiêu chuẩn cua mẫu sau dõng khô) Như cãc mẫu ló sán su.1t dụt hiệu suất dõng khô dồng Kct qua cùa mầu sau dông khô tơi xốp, đỏng bánh đều, không bị nát dam bao diều kiện ban dầu tính chất vật lý cám quan ban dằu Nhõm nghiên cửu dà thực quy trinh san xuất cách het sức cân thận vã tuân thu nhừng nguyên tầc an toàn sinh học dê mẫu trảnh nhiêm trùng Quá trinh dõng khó lọ huyết tương thực theo đủng quy trinh dà chuãn hóa vã điêu chinh trước đõ vữi hỗ trự từ cãc nhãn viên kỳ thuật nhiêu kinh nghiệm Các san phàm ci có mơ ta hồn tồn giơng với san phàm huyẽl tirơng tươi dõng khô nghiên cứu khác trước đỏ 24 Kct quã phân ánh quy trình san xuất cua dạt yêu cầu lô mầu huyết lương dõng khơ hồn tồn sần sàng cho bước dánh giá dộ dồng sau dõng khị vã độ ơn đinh TM/ Cạ: 51 4.2 Đảnh giá chất lượng mẫu sán xuất Đàm bão kết qua xét nghiệm chinh xác việc kiêm tra chất lượng xét nghiệm trưỏc thực tiến hãnh đo thông số lả yếu tố rầt quan trọng không thê thiểu :: Khi hệ thống đánh giá ổn định, khỏng có xuất hiộn cãc yếu tố nguy lồi thê theo quy trinh thực kiêm soát chẳt lượng Khoa xét nghiệm - Bệnh viện Dại học Y Hà Nội nhóm nghiên cứu mói thực chạy đảnh giá thòng số xét nghiệm màu San xuất • Bàn luận nồng độ cua mầu huyết tương ngoại kiêm tra chất lượng Trong điều kiện thực ban đầu anh hướng cua nồng độ glucose HTTĐL chất báo quan Do đõ việc tụo nên mức nồng độ khác đỏi hói tinh toán chật chẽ Việc tụo lỏ mẫu múc nống độ "cao" "bính thường" ••thấp” dụa theo giã trị tham chiêu cua thõng số dưực áp dụng Khoa xét nghiêm - Bộnh viện đại học Y Hà Nội khỏ khán việc diều chế màu Do dó dựa vào cùa nồng độ ban dầu mầu huyết lương, nhóm nghiên cứu bước đầu tạo vói sỗ nồng dộ khác biệt tạo nên lò giá trị "cao”(ò