Đánh giá một số yếu tố ảnh hưởng dến chất lượng DNA tách chiết từ mẫu máu thấm khô

TKf V*: -u LỊÌ CẢM ƠN Em xin gửi lời cám ơn đến ThS Nguyễn Thị Phương Thúy, giáng viên trực tiếp hướng dần em hong quã trình thực khóa luận tốt nghiệp Nhừ có nhùng chi dạy nhùng kinh nghiệm quý báu cua cô dà giúp em khơng chi hồn thành dược khóa luận mà quan trọng trau dồi thêm nhiều kiến thức, nhùng học đê vừng vàng lum trơ thành nhân xét nghiệm thực thụ Em xin trân thành câm ơn TS Tạ Văn Thạo - Giám đốc Trung tàm xét nghiệm CHEMED1C dà tạo diều kiện dè em thực đề tải cua Cam ơn ThS Bùi Thị Bão CN Bùi Thị Thu anh chị cua Trung tám xét nghiệm CHEMED1C quan tâm giúp dờ chia se với em nhiệt tinh de em cỏ thê hoãn thiện kỳ nâng thực hãnh, tảc phong mơi trường thực tế phịng xẽt nghiệm Em xin giri lời cam ơn tói cảc thầy cỏ klioa Kỳ thuật Y học, Ban lành dạo trường Đại học Y Hã Nội đà chi bao tận tinh, tạo diều kiện tốt cho chúng em suốt trinh học tập, rèn luyện Cam ơn bạn lớp Y4K khóa 115 dà ln bẽn cạnh củng em học tập, phấn dấu chia se khó khản cua thời sinh viên Và lum het cam ơn bố mẹ em trai dã tạo diều kiện dê em dưực học tập mái trường Đại học Y Há Nội dirực gặp gờ bạn bẽ thầy cò Gia dính, bạn bè ln dộng lực lớn lao nhát dê em cị gang hồn thành chương trinh học tập cua minh Em xin chán thành cám cm! TYơ Nội lltứng năm 2021 Sinh viên Nguyễn Lê Hiệp CỌNG HÒA XÀ HỌI CHỦ NGHĨA \1ỆT NAM Độc lập Tự - Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Kính gứỉ: Phòng Quán lý tạo Đại học - Trường Đại học Y Hà Nội Hội dồng chấm khóa luận tốt nghiệp Tôi xin cam đoan đe lãi độc lập cũa liêng Các sổ liệu sứ dụng phân tích để tài có nguồn gốc rõ ràng, cóng bố theo dũng quy định tịi tự tim hiêu phân tích cách trung thực, khách quan Các kết qua chưa công bồ nghiên cứu khác Hà Nội thảng nỡm 202ỉ Người viết khóa luận Nguyễn Lê Hiệp MỤC LỤC Danh mục chữ viết tảt Danh mục bang Danh mục hình ành TÀI LIỆU THAM KHAO PHỤ LỰC TM/ V*: DANH AIỤC CÁC CHŨM ÉT TẤT DNA Deoxyribonucleic acid RNA Ribonucleic acid OD Optical Density (độ hầp thụ quang) PCR Polymerase Chain Reaction (phân ừng khuếch đụi chuồi dNTP triphosphate ddXTP Acylcamitine translocase Kilo base CACT Base pair Kb Bp niA RT Mill ampe polymerase) Deoxyribonucleotide Dideoxyribonucleotide triphosphate Room temperature (nhiệt độ phòng) Carnitine - DANH MỤC BÁNG TM/ V*: DANH AIỤC HÌNH ẢNH DẠT VÁN DÈ Xét nghiệm sinh học phân tứ (molecular diagnosis) thuật ngừ dũng đẽ nói xét nghiệm nhầm pliáx chi thị sinh học mức độ phàn tir đoạn acid nucleic, gen hoàn chinh hay chí gen cua vi sinh vật Các kỳ thuật giai trinh tự gen (sequencing), khuếch đại gcn (PCR), lai tách dòng gcn nhùng kỳ thuật sinh học phàn tư tàn tiền sư dụng phơ bicn rộng rãi chân đốn điểu trị y học ngày Mầu bệnh phâm cho xét nghiệm sinh học phàn tư thường lã vật liệu di truyền DNA, RNA dược tãch chiết từ tể bão cỏ nhân cua ngưởi/vi sinh vật cần phàn tích Chất lượng cua DNA RNA cỏ thê anh hương tới kct qua cùa xét nghiệm sứ dụng chúng lảm nguyên liệu phân tích [1] Hiện lảm sảng, việc lấy máu gót chân tre sơ sinh đe tiến hành xét nghiệm chân đoán bệnh lý bẩm sinh phổ biến Với mầu máu gót chân trê sơ sinh hay côn gọi mâu thấm khỏ xẽt nghiệm chân dỗn bệnh lý bẩm sinh khơng chi dừng mức dinh lượng cãc chất chuyên hõa mã dược phân tích mức độ phân tư bàng xẽt nghiệm sinh học phân tứ PCR giãi trinh tự gen cõ giả trị chẩn đoán dặc lũệu cao Mặc dù mầu mâu gỏt chân vốn di' khuyến cão sư dụng cho càc xét nghiệm định lượng chất chun hóa khơng phai lã loại mảu bệnh phằm lý tướng để tãch chiết DNA RNA cho xẽt ngliiộm sinh học phản tủ vỉ thuận tiện việc thu thập nén loại mầu bệnh phẩm vần dược sư dụng phổ biến cảc phòng xét nghiệm sinh học phân tứ [2] [3] Trên giới dà có số nghiên cứu khao sát diều kiện bao quan mầu máu thầm khơ dùng dè tách DNA Điền hình cỏ thề kê đến nghiên cữu so sảnh chất lượng DNA giừa mầu mãu thẩm khô vã mầu màu dạng đung dịch cua tác giã Eun Hye Choi vả cộng năm 2014 Trong nghiên cửu nảy tãc giá cộng dà cho tay thấy tiềm lớn mầu máu thắm khơ có the thu dược nồng độ dộ tinh DNA cao dù dã trài qua thời gian bao quán tháng -S0°C với lã mức độ ổn định cùa nồng độ DNA thu từ mảu máu thấm khỏ so với mầu máu tồn phần dạng lóng bao quân diều kiện nhiệt dộ lả 11% [4] Ớ Việt Nam chưa có nhiêu nghiên cứu kháo sát điều kiện báo quan mẫu tể bào dùng dê tách chiết DNA cho xét nghiệm sinh hục phân tư đặc biệt mầu máu gót chân (máu thấm khơ) tre sơ sinh [5] Do dó chúng lơi tiến hành nghiên cứu “Đánh giá sổ yếu tổ ảnh hướng đến chất lưọng DNA tách chiết từ mẫu máu thẩm khô” nhầm mục tiêu: / Đảnh giả anh hướng cua thời gian bao quan đến chat lượng DNA mẫu máu thắm khô Dành cùa nhiệt độ bao quan đền chất lượng DNA trẽngiá mẫuánh máuhiring thầm khỏ Chương 1: TÓNG QUAN TÀI LIỆU ỉ.1 Acid deoxyribonocelỉc (DNA) 1.1 ỉ Cầu tạo hóa học cùa DNA Nucleotid nhùng hợp chẩt sinh học tham gia vào nhiều trinh chuyên hõa cùa tế bào dặc biệt quan trụng phai kê đến nucleotid chinh thành phần cấu tạo nên acid nucleoic Chúng este phosphate cua đường pentose (CỊHỊỘOẠ base nitơ liên kết vói Cj cùa đường Deoxyribonucleotid có DNA 2’-deoxy-D-ribose Gổc phosphate cỏ thê gân vị tri Cj- c5 cùa nguyên tư đường đê tạo nên U-nucleotid 5’-nucleotid Phức họp trẽn khơng có gốc phosphate gọi lã nucleosid [1] Adenine Thymine Hĩnh 1.1 Cấu trúc hỏa học DNA (Nguồn: hỉtp:/A\w.vjsonline.org/news/l 506311559/ Cấu trúc hỏa học cua acid nucleic dược Phoebus Levine vã Alexander Todd dưa nâm dầu cua năm 50 cùa the ký XX Dó lã nhùng chuồi polymer thảng (phố biến) cua nucỉeotiđ nói với bang cầu nỗi phosphate vị trí TM/ V*: 3’ 5’ cua hai phàn tử đường liên tiếp Cảc gỗc phosphate cùa chuồi polynucleotide nhỏm phosphodiester gốc acid, chinh vi mà pH si 1111 lý acid nucleic lã nhùng chuỗi anion Phân tư DNA chuồi xoắn kép có lượng cân bang gổc adenine thymin guanine cytosine Cũng có DNA cua sổ loại virus có cấu trúc xoắn đơn, nhiên phân tir DNA xám nhập vào ưong tế bào nhân lẽn sè lụi hình thành chuồi xoấn kép [1] 1.12 Cấu trúc không gian cùa DNA Năm 1953 James Watson Francis Crick đà phát minh cấu trúc xoăn kép cua DNA nhờ dó khai sinh ngành Sinh h