Tách chiết, tinh sạch và xác định glucan từ tế bào nấm men sacharomyces cerevisiae

Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TRỊNH THỤY HOÀNG LAN TÁCH CHIẾT, TINH SẠCH VÀ XÁC ĐỊNH GLUCAN TỪ TẾ BÀO NẤM MEN SACCHAROMYCES CEREVISIAE Chuyên ngành: Công nghệ sinh học LUẬN VĂN THẠC SĨ Tp Hồ Chí Minh, tháng 12 năm 2009 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học : TS Hoàng Quốc Khánh (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Cán chấm nhận xét : (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Cán chấm nhận xét : (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Luận văn thạc sĩ bảo vệ HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA, ngày tháng năm TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP – TỰ DO – HẠNH PHÚC Tp HCM, ngày tháng năm NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Phái: Nữ Ngày, tháng, năm sinh: 24/04/1984 Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Nơi sinh: TP.HCM MSHV: 03107115 I- TÊN ĐỀ TÀI : Tách chiết, tinh xác định glucan từ tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae II- NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG :  Đưa phương pháp đơn giản để xác định, định lượng glucan từ thành tế bào nấm men  Xây dựng quy trình tách chiết, tinh thành phần glucan từ nấm men Saccharomyces cerevisiae  Xác định hàm lượng thành phần sinh hóa có mẫu sản phẩm  Khảo sát khả tăng cường kích thích miễn dịch chuột III- NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : Tháng 02/2009 IV- NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: Tháng 12/2009 V- CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Ghi rõ học hàm, học vị, họ, tên): TS Hoàng Quốc Khánh Nội dung đề cương luận văn thạc sĩ Hội đồng chuyên ngành thông qua CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN TRƯỞNG KHOA QL NGÀNH (Họ tên chữ ký) (Họ tên chữ ký) QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH (Họ tên chữ ký) LỜI CẢM ƠN Sau thời gian học tập nghiên cứu, cuối tơi hồn thành luận nghiên cứu Đây thời điểm tốt để tơi bày tỏ lịng biết ơn đến người thân giúp đỡ động viên suốt trình thực luận Trước tiên xin chân thành gởi lời cảm ơn sâu sắc đến Thầy, người hướng dẫn khoa học, định hướng nghiên cứu cho suốt thời gian thực luận văn này, TS Hoàng Quốc Khánh Cảm ơn thầy cho tơi kiến thức để tơi đến với khoa học thật Xin chân thành cảm ơn chị Bích Hạnh, chị Mỹ Hằng, em Tố Hồng, em Lê Thủy bạn đồng nghiệp Trung tâm Y Tế Dự Phòng Quận Tp HCM tận tình giúp đỡ, động viên tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình thực luận văn Con xin gửi lời cảm ơn đến Ba, anh Thanh giúp đỡ dạy cho học sống, tình người Con xin cảm ơn gia đình, nơi có ba mẹ, chị em gái thông cảm chia sẻ với khó khăn thời gian làm đề tài Xin cảm ơn người bạn thân yêu, người yêu mến, chia sẻ với sống ngày Luận văn quà mà dành tặng cho tất người thân u tơi, với tất lịng mình! Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 25 tháng 12 năm 2009 Trịnh Thụy Hồng Lan Trang i TĨM TẮT Đề tài tập trung nghiên cứu, xây dựng quy trình tách chiết, tinh xác định hàm lượng beta-glucan tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae Đồng thời, thử nghiệm chuột với hàm lượng khác để thấy ảnh hưởng beta-glucan đến hệ thống miễn dịch chuột Trong trình tách chiết, dung dịch kiềm, acid sử dụng để phân cắt hòa tan thành phần tế bào lipid, protein, chitin … nhằm tinh sản phẩm beta-glucan thu nhận Trong quy trình, thiết bị đồng hóa tế bào French Press sử dụng với mục đích so sánh sản phẩm hai quy trình tách chiết có khơng có xử lý nguồn nguyên liệu nấm men trước áp dụng quy trình Phương pháp đếm bạch cầu sử dụng để khảo sát ảnh hưởng chất kích thích hệ thống miễn dịch beta-glucan đối tượng chuột khoảng thời gian ngày với hàm lượng beta-glucan khác Kết so sánh mẫu sản phẩm hai quy trình tách chiết tinh có khơng có q trình xử lí tế bào nấm men : - Mẫu sản phẩm nguyên liệu có xử lí tế bào nấm men thiết bị đồng hóa, thu hàm lượng glucan nhiều so với mẫu sản phẩm quy trình cịn lại - Các tiêu sinh hóa hàm lượng cacbonhydrate, protein, tro, lipid cho thấy mức độ tinh hai mẫu sản phẩm Thử nghiệm ảnh hưởng beta-glucan hệ thống miễn dịch chuột thu kết có dao động số lượng bạch cầu chuột vào ngày thứ với hàm lượng 6mg/ngày HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang ii ABSTRACT The thesis focuses on researching into the process of extracting, purifying and quantifying beta-glucan from baker’s yeast Saccharomyces cerevisiae At the same time, we performed study the effect of different quantity of beta-glucan on immune system on mice During extracting, alkali and acid are used to hydrolyse and solubilize lipid, the cellular proteins, chitin … to purify the production of beta-glucan from yeast cell walls The high pressure homogenizer French Press was used and then the chemical composition was compared between the homonized and non-homogenized products Surveying the effect immunotheraphy glucan on mice after experiment in days with different quantity, the white blood cells were counted The comparative results of two sample products from extraction and purification procedures with or without processing yeast cells are :  Quality of beta-glucan in products by using the high pressure homogenizer French Press was higher than that which did not used  Analysis of chemical quantities such as cacbonhydrate, protein, lipid and ash was shown the purify of products After investigated days the effect beta-glucan on mice, the white blood cells on the sixth day was higher than other the others HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang iii MỤC LỤC PHẦN : MỞ ĐẦU PHẦN : TỔNG QUAN 2.1 SƠ LƯỢC ĐẶC ĐIỂM CHUNG CỦA TẾ BÀO NẤM MEN 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Hình thái 2.1.3 Cấu trúc tế bào nấm men 2.2 KHÁI QUÁT VỀ BETA-GLUCAN 10 2.3 KHÁI QUÁT CÁC PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT, TINH SẠCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN TẾ BÀO NẤM MEN 12 2.3.1 Phương pháp tách chiết 12 2.3.1.1 Tự phân 12 2.3.1.2 Xử lý enzyme 14 2.3.2 Phương pháp tinh 17 2.3.3 Phương pháp xác định thành tế bào nấm men 17 2.4 TỔNG QUAN VỀ CHẤT KÍCH THÍCH MIỄN DỊCH VÀ CƠ CHẾ TÁC ĐỘNG CỦA  -GLUCAN 18 2.4.1 Khái niệm chất kích thích miễn dịch 18 2.4.2 Nguồn gốc chất kích thích miễn dịch 19 2.4.3 Lợi ích dùng chất kích thích miễn dịch 20 HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang iv PHẦN : NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 3.1 VẬT LIỆU – THIẾT BỊ - HÓA CHẤT 22 3.1.1.Vật liệu 22 3.1.2.Các thiết bị 22 3.1.3 Hóa chất 23 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 3.2.1 Phương pháp tách chiết tinh beta-glucan 24 3.2.2 Phương pháp xác định khối lượng chất khô 28 3.2.3 Phương pháp định lượng đướng khử 3,5-Dinitrosalycylic acid 28 3.2.4 Xác định hàm lượng glycogen 31 3.2.5 Xác định hàm lượng glucan 31 3.2.6 Phương pháp xác định nitơ tổng số - Phương pháp Kjeldahl 32 3.2.7 Phương pháp xác định hàm lượng lipid – Phương pháp Soxhlet 34 3.2.8 Phương pháp xác định hàm lượng tro 35 3.2.9 Phương pháp bố trí thí nghiệm thu nhận mẫu ni thí nghiệm 37 3.2.10 Phương pháp xác định số lượng bạch cầu 40 3.2.11 Phương pháp xử lý số liệu toán thống kê 41 PHẦN : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 4.1 ĐIỀU CHẾ β-GLUCAN 42 4.1.1 Sản phẩm beta-glucan 43 4.1.2 Về hiệu suất điều chế 45 4.2 ĐỊNH LƯỢNG ĐƯỜNG KHỬ BẰNG 3,5-DINITROSALYCYLIC ACID 47 HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang v 4.3 HÀM LƯỢNG BETA – GLUCAN 49 4.3.1 Hàm lượng glycogen 49 4.3.2 Hàm lượng beta-glucan 49 4.4 HÀM LƯỢNG PROTEIN 51 4.5 HÀM LƯỢNG LIPID 53 4.6 HÀM LƯỢNG TRO 55 4.7 KẾT QUẢ THEO DÕI THÍ NGHIỆM 57 4.7.1 Quan sát hình thái tế bào bạch cầu 57 4.7.2 Số lượng tế bào bạch cầu thử nghiệm beta-glucan chuột 58 PHẦN : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 61 5.1 KẾT LUẬN 61 5.2 ĐỀ NGHỊ 61 HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 : Thành phần thành tế bào nấm men Bảng 2.2 : Chức sinh lý thành tế bào nấm men Bàng 2.3 : Các loại  - glucan 10 Bảng 3.1 : Hàm lượng beta-glucan cung cấp cho chuột 38 Bảng 4.1 : Nhận xét mặt cảm quan sản phẩm 45 Bảng 4.2 : Hiệu suất điều chế sản phẩm 45 Bảng 4.3 : Hàm lượng cacbonhydrate 47 Bảng 4.4 : Hàm lượng glycogen 49 Bảng 4.5 : Hàm lượng beta-glucan 50 Bảng 4.6 : Hàm lượng nitơ tổng 51 Bảng 4.7 : Hàm lượng lipid thô 53 Bảng 4.8 : Hàm lượng tro 55 Bảng 4.9 : Số lượng bạch cầu thử nghiệm beta-glucan chuột 58 HVTH : TRỊNH THỤY HỒNG LAN Luận văn cao học Trang 58 Hình 4.5 : Tế bào bạch cầu quan sát kính hiển vi 4.7.2 Số lượng tế bào bạch cầu thử nghiệm beta-glucan chuột Chuột sau chia lô nuôi ổn định, tiến hành thử nghiệm chế phẩm betaglucan ngày với hàm lượng khác (0mg, 2mg, 4mg, 6mg, 8mg) Bảng 4.9 : Số lượng bạch cầu thử nghiệm beta-glucan chuột Số ngày nuôi ngày Hàm lượng beta-glucan ngày ngày Số lượng tế bào bạch cầu (/mm3) cho chuột (mg) Lô A (0mg) 3121 3034 3100 3242 3279 Lô B (2mg) 3125 3059 3075 3142 3225 Lô C (4mg) 3225 2942 3142 3117 3292 Lô D (6mg) 3284 3342 3825 4275 3942 Lô E (8mg) 3125 3233 3467 3584 3509 HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 59 Đồ thị 4.6 : Đồ thị biến thiên hàm lượng bạch cầu theo thời gian Nhận xét Qua đồ thị trên, hàm lượng bạch cầu chuột nuôi thử nghiệm ngày khơng có dùng chế phẩm beta-glucan (Lơ A (0 mg), lơ đối chứng ) có sử dụng chế phẩm (Lô B, lô C, lô D, lô E với hàm lượng chế phẩm khác nhau) nhận thấy Lô D (lô sử dụng chế phẩm beta-glucan hàm lượng mg) vào ngày thứ sáu số lượng tế bào bạch cầu (4275 tế bào/mm3) tăng cao so với ngày lại ngày thứ (3284 tế bào/mm3), ngày thứ hai (3342 tế bào/mm3), ngày thứ tư (3925 tế bào/mm3) ngày thứ tám (3942 tế bào/mm3) Ở ngày thứ số lượng bạch cầu (3284 tế bào/mm3), có thay đổi lượng bạch cầu vào ngày thứ hai (3342 tế bào/mm3), số lượng tăng cao vào ngày thứ tư (3925 tế bào/mm3) tăng cao vào ngày thứ sáu (4275 tế bào/mm3), lượng bạch cầu giảm vào ngày thứ tám (3942 tế bào/mm3) so với ngày trước đó, cao so với ngày thứ HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 60 Ở lô khác lô E (hàm lượng beta-glucan sử dụng cho chuột 8mg) số lượng bạch cầu tăng cao vào ngày thứ sáu (3584 tế bào/mm3) số lượng bạch cầu thấp vào thứ (3125 tế bào/mm3) Trong ngày thử nghiệm, số lượng bạch cầu có tăng vào ngày thứ hai (3233 tế bào/mm3), tăng thêm vào ngày thứ tư (3467 tế bào/mm3), tăng cao vào ngày thứ sáu (3584 tế bào/mm3) lượng bạch cầu giảm vào ngày thứ tám (3509 tế bào/mm3) cao so với ngày thứ Cịn lơ cịn lại lơ A, lơ B, lơ C có thay đổi lượng bạch cầu chuột ngày thay đổi không đáng kể so với ngày thứ so với ngày lô D, lơ E Hàm lượng beta-glucan có tác dụng làm tăng sức đề kháng dùng thử nghiệm chuột, biểu thông qua tăng số lượng bạch cầu, lô D lô E Trong cà lô, lô D đường biểu diễn biến thiên số lượng bạch cầu rõ so với đường biến thiên lô E Tuy nhiên, qua số liệu đường biến thiên lơ D E số lượng bạch cầu tăng vào ngày thứ tư, ngày thứ sáu ngày thứ tám Và hai đường biểu diễn vào ngày thứ tám giảm so với ngày trước cịn cao so với ngày thứ Điều cho thấy, chất hoạt hóa beta-glucan làm tăng sức đề kháng có tác dụng thời gian có hạn, khơng phải tác dụng lâu dài Kết xác định sơ lượng tế bào bạch cầu thay đổi thử nghiệm chế phẩm beta-glucan, cho thấy hoạt tính chế phẩm có ảnh hưởng đến hệ miễn dịch chuột Đây bước đầu để thấy tầm quan trọng beta-glucan đối tượng động vật Qua cần xác định rõ khả ảnh hưởng chế phẩn số bệnh cụ thể để thấy hiệu sử dụng chế phẩm hướng tới mục đích áp dụng vào thực tế để sản xuất quy mô công nghiệp HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 61 PHẦN : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu ban đầu trình bày, đến kết luận sau :  Đưa phương pháp đơn giản để xác định, định lượng beta-glucan từ thành tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae  Xây dựng quy trình tách chiết, tinh thành phần glucan từ nấm men dung dịch NaOH 1M 85 0C dung dịch CH3COOH 0.5M 750C  Xác định hàm lượng số thành phần sinh hóa có mẫu sản phẩm : hàm lượng cacbonhydrate, hàm lượng glucan, hàm luợng protein, hàm lượng lipid, hàm lượng tro  Khảo sát khả tăng cường kích thích miễn dịch chuột khoảng thời gian ngày, với lượng bạch cầu thu nhận cao vào ngày thứ sáu dùng chế phẩm hàm lượng 6mg/ngày 5.2 ĐỀ NGHỊ Do giới hạn đề tài, thu số kết khảo sát ban đầu Do đó, chúng tơi có số đề nghị sau :  Cần khảo sát số tiêu sinh hóa sản phẩm thu phương pháp xác định đại hơn, xác  Hồn chỉnh quy trình thu nhận beta-glucan với độ tinh cao  Nghiên cứu xây dựng quy trình tách chiết dịng nấm men khác nhằm thu nhận lượng beta-glucan cao HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 62  Khảo sát thêm số tiêu khác lượng bạch cầu : xác định rõ ảnh hưởng beta-glucan đến loại tế bào bạch cầu, …  Kéo dài thời gian nuôi thử nghiệm tiến hành gây bệnh chuột để thấy rõ ảnh hưởng beta-glucan đến hệ thống miễn dịch chuột HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt : Lâm Thị Kim Châu, Văn Đức Chín, Ngơ Đại Nghiệp, Thực tập lớn sinh hóa, NXB Đại học Quốc gia Tp.HCM, 2004 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty, Vi sinh vật học, NXB Giáo dục, Hà Nội, 1998 Vũ Văn Độ, Nghiên cứu phương pháp làm ổn định chất lượng cám gạo enzyme – vi sinh vật, Luận văn thạc sĩ, khoa sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Tp.HCM, 1999 Phạm Thị Ánh Hồng, Kỹ Thuật sinh hóa, NXB Đại học Quốc gia Tp.HCM, 2003 Hoàng Quốc Khánh, Phan Thị Thúy Phượng, Khảo sát phương pháp thủy phân tế bào nấm men phân tích thành phần cacbohydrate protein, Luận văn khoa học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Tp.HCM, 2005 Nguyễn Hồng Lộc, Nhập mơn công nghệ sinh học, NXB Đại học Huế, 2006 Nguyễn Đức Lượng, Công nghệ sinh học tập 1, Cơ sở vi sinh vật công nghiệp, NXB Đại học Quốc Gia Tp.HCM, 1996 Nguyễn Đức Lượng, Cao Cường, Thí nghiệm cơng nghệ sinh học tập 1, Thí nghiệm hóa sinh học, NXB Đại học Quốc Gia Tp.HCM, 2003 Nguyễn Đức Lượng, Phan Thị Huyền, Nguyễn Ánh Tuyết, Thí nghiệm cơng nghệ sinh học tập 2, Thí nghiệm vi sinh vật học, NXB Đại học Quốc gia Tp.HCM, 2006 10 Lương Đức Phẩm, Nấm men công nghiệp, NXB Khoa học Kỹ thuật, NXB Khoa hoc kỹ thuật Hà Nội, 2005 11 Nguyễn Thị Thu Vân, Phân tích định lượng, NXB Đại học Quốc gia, 2004 HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 64 Tiếng Anh : 12 David J Manners, Alan J Masson & James C Patterson, The stucture of a  (13)-D-glucan from yeast cell walls, Biochem J 135, 10-30 (1973) 13 Hubson et al, 2001, Yeast Debris Products, U.S Patent 6,274,370 14 Kado et al, 2000, Process for producing yeast extract U.S Patent 6,051,212 15 Jean Marie F, A simple method for quantitative determination of polysaccharides in fungal cell walls, 2006 16 J Richard Dickinson, Michael Schweizer, The metabolism and molecular physiology of Saccharomyces cerevisiae, 2004 17 Lowry VK, Farnell MB, Ferro PJ, Swaggarty CL, Bahl A, Kogut MH, 2005, Purified  -glucan as an abiotic feed additive up-regulates the innate immune response in immature chickens agaisnt Salmonella enterica serovar Enteritidies International Journal of Food Microbiology, 98, 309 – 318 18 Magnelli, P., Cipollo, J.F & Abeijon, A refined method for the determination of Saccharomyces cerevisiae cell wall composition and beta-1,6-glucan fine structure, Anal Biochem 301,136-150 (2002) 19 Onishi, J et al Discovery of novel antifungal (1,3)-beta-D-glucan synthase inhibitors Antimicrob Agents Chemother.44, 368-377 (2000) 20 Peter N Lipke and Rafael Ovalle, 1998, Cell wall architecture in yeast : New structure and new challenges Journal of Bacteriology, vol.180, No.15, p 3735 – 3740 21 Preetee P.Aklujkar et al, A Simplified method for the isolation and estimation of cell wall bound glycogen in Saccharomces cerevisiae, Vol 114, No 3, 2008 HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 65 22 Preparation of spent brewer’s yeast  -glucans for potential applications in the food industry, International Journal of Food Science and Technology 2004, 39, 21-29 23 Raa, J., 1996, The use of immune-stimulants in fish and shellfish feeds, University of Tromso, Norway 24 Reimund S., 2003, A new non-degrading isolation process for 1,3-D-glucan of high purity from baker’s yeast Saccharomyces cerevisiae 25 Saowanee Thammakiti et al, Preparation of spent brewer’s yeast  -glucans for potential applications in the food industry, International Journal of Food Science and Technology 2004, 39, 21-29 26 Sugimoto et al, 1976, Process for Autolysis of yeast, U.S Patent 3,961,080 27 Thanardkit P, Khunrae P, Suphantharika M and Verduyn C, 2002, Glucan from spent brewer’s yeast: preparation, analysis and use as a potential immunostimuant in shirmp feed World Journal of Microbiology & Biotechnology, 18, 527-539 28 Walker GM, 1998, Yeast physiology and Biotechnology, Wiley, Chichester HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 66 PHẦN : PHỤ LỤC Phụ lục bảng Các số liệu tính tốn dựa trình ứng dụng Microsoft Office Excel Bảng : Hàm lượng cacbonhydrate mẫu Mẫu Mẫu Hàm lượng OD cacbonhydrate Mẫu Hàm lượng OD (mg/g) cacbonhydrate Hàm lượng OD (mg/g) cacbonhydrate (mg/g) 0.703 2.52 1.024 3.64 1.001 3.56 0.617 2.22 1.171 4.15 0.591 2.13 0.634 2.28 0.826 2.95 0.989 3.52 HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 67 Bảng : Hàm lượng glycogen mẫu Mẫu Mẫu Hàm lượng OD glycogen Mẫu Hàm lượng OD glycogen (mg/g) Hàm lượng OD glycogen (mg/g) (mg/g) 0.519 1.88 0.637 2.29 0.743 2.66 0.468 1.7 0.364 1.34 0.818 2.92 0.473 1.72 0.660 2.37 0.608 2.19 Bảng : Hàm lượng protein mẫu Mẫu VHCl 0.25N (ml) Mẫu %Nitơ tổng VHCl 0.25N (ml) Mẫu %Nitơ tổng VHCl 0.25N %Nitơ (ml) tổng 38.3 5.36 6.64 0.93 7.36 1.03 38.7 5.42 6.36 0.89 7.50 1.05 37.6 5.27 6.93 0.97 7.86 1.10 HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 68 Bảng : Lượng tề bào bạch cầu lần thử nghiệm Số ngày nuôi Hàm lượng beta-glucan cho chuột (mg) ngày Lô A A1 3025 3050 2950 3150 3170 (0mg) A2 3000 2750 3200 2900 3050 Lô B B1 3100 2850 3300 2950 3550 (2mg) B2 3100 3000 2950 3050 2900 Lô C C1 3300 3050 3200 3250 3500 (4mg) C2 2850 2750 3100 2950 3150 Lô D D1 3300 3550 3250 3850 3750 (6mg) D2 3400 3300 4050 4700 3850 Lô E E1 3250 3100 3500 3450 3400 (8mg) E2 3050 3450 3550 3400 3450 Bảng : Lượng tề bào bạch cầu lần thử nghiệm Số ngày nuôi ngày Lô A A1 3150 3200 3100 3300 3450 (0mg) A2 3250 3100 3500 3450 3400 Lô B B1 3000 3050 2950 3100 3450 Hàm lượng (2mg) B2 3250 2900 3050 3200 2800 beta-glucan Lô C C1 3000 2850 3050 2700 3200 cho chuột (4mg) C2 3050 2800 2950 3050 3250 (mg) Lô D D1 3400 3350 4400 4600 3650 (6mg) D2 3050 3100 3900 4450 4250 Lô E E1 2950 3200 3350 3600 3450 (8mg) E2 3100 3200 3600 3950 3400 HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 69 Bảng : Lượng tề bào bạch cầu lần thử nghiệm Số ngày nuôi ngày Lô A A1 3050 2950 2900 3200 3400 (0mg) A2 3250 3150 3000 3450 3200 Lô B B1 3100 3300 3000 3200 3300 Hàm lượng (2mg) B2 3200 3250 3200 3350 3350 beta-glucan Lô C C1 3150 3050 3250 3350 3300 cho chuột (4mg) C2 3200 3150 3300 3400 3350 (mg) Lô D D1 3250 3350 3750 4050 3900 (6mg) D2 3300 3400 3600 4600 4250 Lô E E1 3250 3400 3350 3650 3700 (8mg) E2 3150 3050 3450 3450 7650 HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 70 Phụ lục hình Hình : Nguyên liệu nấm men bánh mì Hình : Tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae chưa xử lí thiết bị đồng hóa French Press HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 71 Hình : Tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae Khi xử lí thiết bị đồng hóa French Press Hình : Chế phẩm beta-glucan dạng lỏng (trước sấy khô) HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học Trang 72 LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên : TRỊNH THỤY HỒNG LAN Ngày, tháng, năm sinh : 24 /04/1984 Nơi sinh : Tp Hồ Chí Minh Địa liên lạc : 24/15 Đường số 9, P 9, Q Gò Vấp, Tp HCM QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO Từ 2002 – 2006 : học tập trường Đại học Mở Tp.HCM, tốt nghiệp chuyên ngành Công Nghệ Sinh Học Từ 2007 đến : học cao học trường Đại học Bách Khoa Tp.HCM, chun ngành Cơng Nghệ Sinh Học Q TRÌNH CƠNG TÁC Từ 2008 đến nay, công tác khoa Xét Nghiệm, thuộc Trung Tâm Y Tế Dự Phòng Quận Tp HCM, chức vụ Nhân viên Xét nghiệm HVTH : TRỊNH THỤY HOÀNG LAN Luận văn cao học ... TÀI : Tách chiết, tinh xác định glucan từ tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae II- NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG :  Đưa phương pháp đơn giản để xác định, định lượng glucan từ thành tế bào nấm men ... trí glucan vách tế bào 2.3 KHÁI QUÁT CÁC PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT, TINH SẠCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN TẾ BÀO NẤM MEN 2.3.1 Phương pháp tách chiết Có hai phương pháp để thủy phân thành tế bào nấm men. .. vách tế bào, bao gồm nhiều kim loại nặng Nhận biết tế bào – tế bào - Nhận biết vị trí pheromone độc tố giết nằm vách tế bào Dính chặt tế bào với tế bào - Sự dính kết giới tính nấm men – nấm men,