Cố định tế bào nấm men saccharomyces cerevisiae có hoạt tính invertase trên phức chất mang bacterial cellulose alginate và ứng dụng

Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA  BÙI THỊ THANH HƯƠNG CỐ ĐỊNH TẾ BÀO NẤM MEN SACCHAROMYCES CEREVISIAE CĨ HOẠT TÍNH INVERTASE TRÊN PHỨC CHẤT MANG BACTERIAL CELLULOSE – ALGINATE VÀ ỨNG DỤNG Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học LUẬN VĂN THẠC SĨ Hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN THÚY HƯƠNG TP HỒ CHÍ MINH, tháng 01 năm 2010 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học: Tiến sĩ Nguyễn Thúy Hương Cán chấm nhận xét 1: Cán chấm nhận xét 2: Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày 15 tháng 01 năm 2010 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá luận văn Bộ môn quản lý chuyên ngành sau Đại học luận văn sửa chữa (nếu có) Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Bộ môn quản lý chuyên ngành ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHIÃ VIỆT NAM Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc -oOo Tp HCM, ngày 05 tháng 01 năm 2010 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ / Nữ  Họ tên học viên: Bùi Thị Thanh Hương Giới tính : Nam Ngày, tháng, năm sinh : Nơi sinh : Buôn Ma thuột 13/05/1985 Chuyên ngành : Cơng nghệ Sinh học Khố (Năm trúng tuyển) : 2008 1- TÊN ĐỀ TÀI: Cố định tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae có hoạt tính invertase phức chất mang Bacterial cellulose-alginate ứng dụng 2- NHIỆM VỤ LUẬN VĂN: - Tuyển chọn chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae có hoạt tính invertase cao - Cố định chủng nấm men có hoạt tính invertase phức chất mang Bacterial cellulose-alginate - Khảo sát chế phẩm nấm men cố định thủy phân dung dịch sucrose nước mía 3- NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : 15/06/2008 4- NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ : 30/12/2008 5- HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Ghi đầy đủ học hàm, học vị ): Tiến sĩ Nguyễn Thúy Hương Nội dung đề cương Luận văn thạc sĩ Hội Đồng Chuyên Ngành thông qua CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN (Họ tên chữ ký) QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH (Họ tên chữ ký) i LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc niềm vinh hạnh lớn lao học tập kiến thức kinh nghiệm quý báu Thầy Cô môn Công nghệ Sinh học, Thầy Cô giảng dạy cao học ngành Công nghệ Sinh học, trường Đại học Bách khoa Tp Hồ Chí Minh Thầy Cơ hết lịng giảng dạy, truyền đạt tri thức cho chúng em, hỗ trợ tạo điều kiện tốt để chúng em hoàn thành luận văn Và từ sâu thẳm lòng, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến giáo kính u em, Cơ Nguyễn Thúy Hương Những lời dạy, lời động viên, chia sẻ Cô điểm tựa cho em vững bước đường phía trước; bóng dáng tất tả, lo lắng cho “học trị nhỏ” Cơ hình ảnh khắc ghi trái tim em, dạy cho em biết sống yêu thương, nhân với người…“Dẫu đếm hết trời đêm nay, đếm hết mùa thu rơi, ngàn năm, em đếm hết công ơn người thầy …” Hương xin cảm ơn đến tất bạn bè, người thân động viên, chia sẻ với Hương thời gian qua Cảm ơn Uyên người bạn đồng hành Hương Và đặc biệt, chị cảm ơn em SH05, cảm ơn “cư dân” phịng thí nghiện 108 B2, cảm ơn bé Thảo, bé Hiền em giúp chị nhiều trình thực đề tài Và cuối cùng, xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến ba mẹ gia đình thân yêu Ba mẹ lặng thầm theo bước chân đi, hi sinh tất ước mơ, khát vọng Ba mẹ mãi nơi bình n cõi lịng con! Bùi Thị Thanh Hương ii TÓM TẮT LUẬN VĂN TÓM TẮT: Nghiên cứu khảo sát khả tái sử dụng chế phẩm tế bào nấm men có hoạt tính invertase cố định phức chất mang Bacterial cellulose-alginate thủy phân sucrose ứng dụng thủy phân vào loại thực phẩm đồ uống có diện sucrose nước mía Đầu tiên, chúng tơi tiến hành tuyển chọn chủng nấm men S cerevisiae có hoạt tính invertase cao, sau cố định chủng nấm men phức chất mang BC-alginate ứng dụng thủy phân sucrose Một số kết thu sau: chủng BK1 có hoạt tính invertase cao 750UI/ g sinh khối ướt; sử dụng dung dịch sodium alginate 2,0% w/v, CaCl2 2,0% w/v, mật độ tế bào đưa vào 109TB /ml, chế độ lắc 200 vòng/phút thời gian lắc 30 phút, nhiệt độ ủ 30oC, thời gian ủ ngày để cố định tế bào lên phức chất mang Điều kiện thủy phân tốt chế phẩm nấm men cố định nhiệt độ 55oC, pH 5,0, thời gian thủy phân giờ, hiệu suất trung bình thủy phân dung dịch sucrose tinh khiết sucrose nước mía 14 lần tái sử dụng 80% SUMMARY: Research surveyed re-used possibility of immobilized yeast in Bacterial cellulose-alginate complexes carrier in sucrose hydrolysis and application in food-beverages presence of sucrose as sugarcane juice Firstly, we conducted selection strain S cerevisiae invertase active high, then immobilized this yeast in complexes carrier, finally application hydrolysis of sucrose Some results were as follows: strain BK1 active invertase highest 750UI/g wet biomass; immobilization use of sodium alginate 2.0% w/v, CaCl2 2,0% w/v, density cells into 109cells/ml, shake 200 rpm in 30 min, incubation times days at 30oC The optimal condition of immobilized yeast: temperature 55oC, pH 5.0, for hours; average performance hydrolysis of pure sucrose solution and sucrose sugarcane juice 14 times use over 80% iii MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan nấm men Saccharomyces cerevisiae 1.1.1 Hình thái cấu tạo tế bào nấm men 1.1.2 Quá trình dinh dưỡng tế bào nấm men 1.1.3 Quá trình sinh trưởng phát triển tế bào nấm men 1.1.4 Ảnh hưởng yếu tố bên đến hoạt động nấm men 1.2 Tổng quan enzyme invertase 10 1.2.1 Đặc điểm tính chất enzyme invertase 10 1.2.2 Nguyên lý điều hòa sinh tổng hợp invertase 11 1.2.3 Cơ chế xúc tác invertase 12 1.2.4 Các ứng dụng enzyme invertase 12 1.3 Tổng quan cố định tế bào vi sinh vật 13 1.3.1 Đặc điểm tính chất tế bào cố định 13 1.3.2 So sánh việc sử dụng enzyme tế bào cố định enzyme tự 14 1.3.3 Các phương pháp cố định tế bào 15 1.3.4 Chất mang cố định tế bào sử dụng nghiên cứu 18 1.4 Tổng quan mía 25 1.4.1 Giới thiệu mía 26 1.4.2 Qui trình sản xuất nước mía 28 1.5 Một số nghiên cứu nước hướng đề tài 30 1.5.1 Các nghiên cứu enzyme invertase 30 1.5.2 Các nghiên cứu cố định nấm men S cerevisiae ứng dụng 31 1.5.3 Các nghiên cứu sử dụng invertase cố định nấm men cố định có hoạt tính invertase thủy phân dung dịch sucrose 32 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 35 2.1 Vật liệu 35 2.2 Phương pháp 36 iv 2.2.1 Tuyển chọn chủng nấm men S cerevisiae có hoạt tính invertase cao 37 2.2.2 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất thủy phân dung dịch sucrose tế bào tự phân 43 2.2.3 Phương pháp cố định nấm men lên phức chất mang BC-alginate 45 2.2.4 Khảo sát khả tái sử dụng chế phẩm nấm men cố định tự phân thủy phân dung dịch sucrose 49 2.2.5 Ứng dụng chế phẩm nấm men cố định có hoạt tính invertase thủy phân sucrose qui trình sản xuất nước mía đóng hộp 51 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 56 3.1 Tuyển chọn chủng nấm men có hoạt tính invertase cao 56 3.1.1 Đặc tính hình thái khuẩn lạc – hình thái tế bào nấm men 56 3.1.2 Sự sinh trưởng phát triển chủng nấm men môi trường nhân giống 58 3.1.3 Sự sinh trưởng phát triển chủng nấm men môi trường cảm ứng invertase 60 3.2 Xúc tác thủy phân dung dịch sucrose nấm men tự phân 64 3.2.1 Ảnh hưởng lượng nấm men tự phân 64 3.2.2 Ảnh hưởng nồng độ chất sucrose 65 3.2.3 Ảnh hưởng nhiệt độ 66 3.2.4 Ảnh hưởng pH 67 3.3 Cố định tế bào nấm men có hoạt tính invertase cao phức chất mang BCalginate 68 3.3.1 Bẫy – hấp phụ tế bào nấm men lên chất mang BC 68 3.3.2 Nhốt tế bào nấm men hệ gel alginate 68 3.3.3 Cố định tế bào nấm men phức chất mang BC-alginate 73 3.4 Khả tái sử dụng chế phẩm nấm men cố định tự phân xúc tác thủy phân dung dịch sucrose 76 3.5 Khả tái sử dụng chế phẩm nấm men cố định tự phân xúc tác thủy phân sucrose nước mía 78 v 3.5.1 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến q trình thủy phân sucrose nước mía nấm men tự phân 78 3.5.2 Khả tái sử dụng chế phẩm nấm men cố định tự phân thủy phân sucrose nước mía 83 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 86 4.1 Kết luận 86 4.2 Đề nghị 88 TÀI LIỆU THAM KHẢO 89 PHỤ LỤC 97 vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Alg-Ca BC DNS TB Alginate-Calcium Bacterial cellulose 3, 5- Dinitrosalicylic acid Tế bào vii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Nấm men S cereviciae Hình 1.2: Cấu tạo tế bào nấm men S cerevisiae Hình 1.3: Đường cong sinh trưởng nấm men ni cấy theo chu kì Hình 1.4: Phản ứng thủy phân sucrose xúc tác invertase 10 Hình 1.5: Cơ chế xúc tác invertase 12 Hình 1.6: Sơ đồ phương pháp cố định tế bào 16 Hình 1.7: Các phương pháp cố định tế bào 16 Hình 1.8: Cấu tạo phân tử cellulose 19 Hình 1.9: Cellulose vi khuẩn cellulose thực vật 19 Hình 1.10: Cơ chế sinh tổng hợp BC A xylinum 20 Hình 1.11: Cấu trúc alginate 22 Hình 1.12: Các loại block alginate 23 Hình 1.13: Cơ chế trình tạo gel alginate 24 Hình 1.14: Cấu tạo hình “hộp trứng” Alg-Ca 25 Hình 1.15: Cây mía 26 Hình 2.1: Sơ đồ tổng hợp vấn đề nghiên cứu 36 Hình 2.2: Sơ đồ tuyển chọn chủng nấm men có hoạt tính invertase cao 37 Hình 2.3: Buồng đếm hồng cầu 38 Hình 2.4: Khuẩn lạc mọc đĩa Petri 39 Hình 2.5: Sơ đồ thực tự phân tế bào 40 Hình 2.6: Phản ứng DNS đường khử 41 Hình 2.7: Sơ đồ khảo sát nồng độ dung dịch sucrose thủy phân 44 Hình 2.8: Sơ đồ cố định tế bào lên phức chất mang BC-alginate 45 Hình 2.9: Sơ đồ bẫy hấp phụ tế bào lên chất mang BC 46 Hình 2.10: Phương pháp nhốt tế bào nấm men hệ gel alginate 47 Hình 2.11: Sơ đồ khảo sát khả tái sử dụng chế phẩm nấm men cố định tự phân thủy phân dung dịch sucrose 50 Hình 2.12: Sơ đồ khảo sát điều kiện thủy phân sucrose nước mía 52 Trang 110 Độ hấp thu OD540nm theo nồng độ glucose đệm Na-acetate pH 5,5 Bảng 14: Độ hấp thu OD540nm theo nồng độ glucose đệm Na-acetate pH 5,5 OD540nm 0,042 0,273 0,552 0,850 1,092 1,360 ΔOD540nm 0,000 0,231 0,510 0,808 1,050 1,318 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 Nồng độ glucose (mg/ml) Đồ thị 12: Độ hấp thu OD540nm theo nồng độ glucose đệm Na-acetate pH 5,5 Trang 111 Độ hấp thu OD540nm theo nồng độ glucose đệm Na-acetate pH 6,0 Bảng 15: Độ hấp thu OD540nm theo nồng độ glucose đệm Na-acetate pH 6,0 OD540nm 0,034 0,312 0,655 0,987 1,334 1,665 ΔOD540nm 0,000 0,278 0,621 0,953 1,300 1,631 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 Nồng độ glucose (mg/ml) Đồ thị 13: Độ hấp thu OD540nm theo nồng độ glucose đệm Na-acetate pH 6,0 Trang 112 Bảng 16: Hoạt độ chủng nấm men Thời gian 10 20 30 40 50 10 100 300 300 300 OD540nm 0,048 0,971 0,623 0,797 0,938 0,853 ΔOD540nm 0,016 0,939 0,591 0,765 0,907 0,821 Đường khử (µg/ml) 60,48 3231,36 20592 79439,4 93690 84993,8 Tổng đường khử (µmol) 5,04 269,28 1716 6619,95 7807,5 7082,82 Lượng sinh khối tế bào (g) 0,027 0,37 0,351 0,628 0,693 0,656 Đơn vị hoạt độ (UI/g ) 12,44 131,03 325,93 702,75 751,08 719,79 10 50 50 100 100 OD540nm 0,033 0,256 0,295 0,855 0,774 0,828 ΔOD540nm 0,001 0,224 0,263 0,823 0,742 0,796 Đường khử (µg/ml) 36,685 824,88 4781,55 14217,5 25705,4 27525,2 Tổng đường khử (µmol) 3,06 68,74 398,46 1184,79 2142,12 2293,77 Lượng sinh khối tế bào (g) 0,026 0,066 0,17 0,286 0,392 0,396 Đơn vị hoạt tính (UI/g) 7,84 69,43 156,26 276,18 346,31 386,16 Pha loãng 10 50 50 100 100 OD540nm 0,037 0,402 0,508 1,225 1,431 1,247 ΔOD540nm 0,005 0,37 0,476 1,193 1,399 1,215 Đường khử (µg/ml) 43,42 1316,9 8370,6 20452,05 47846,3 41645,5 Tổng đường khử (µmol) 3,62 109,74 697,55 1704,34 3987,19 3470,46 Lượng sinh khối tế bào (g) 0.026 0.084 0.216 0.474 0.508 0.494 Đơn vị hoạt tính (UI/g) 9,28 87,10 215,19 239,71 523,25 468,85 10 100 300 300 300 OD540nm 0,033 0,182 0,128 0,124 0,212 0,237 ΔOD540nm 0,001 0,15 0,096 0,092 0,18 0,205 Đường khử (µg/ml) 36,69 575,5 3935,2 1140,2 20298 22825,5 Tổng đường khử (µmol) 3,06 47,96 327,93 950,1 1691,5 1902,13 Lượng sinh khối tế bào (g) 0,02 0,056 0,15 0,246 0,352 0,356 Đơn vị hoạt tính (UI/g) 10,19 57,09 145,75 257,48 320,36 356,20 Pha loãng BK1 Pha loãng BK2 BK3 Pha loãng N28 Trang 113 Phụ lục D: Cố định tế bào BC Bảng 17: Mật độ tế bào chế độ lắc khác Mật độ tế bào (108 TB/g BC) Chế độ lắc (vòng) Đĩa Petri Đĩa Petri Đĩa Petri Mật độ tế bào trung bình (108 TB/g BC) 3,41 3,43 3,42 3,42 50 9,94 9,95 9,95 9,95 100 19,37 19,37 19,38 19,37 150 36,23 36,24 36,23 36,23 200 41,96 41,96 41,95 41,96 250 42,06 42,05 42,05 42,05 Bảng 18: Mật độ tế bào nhiệt độ ủ khác Mật độ tế bào (108 TB/g BC) Nhiệt độ (oC) Đĩa Petri Đĩa Petri Đĩa Petri Mật độ tế bào trung bình (108 TB/g) 20 3,75 3,76 3,75 3,75 25 8,79 8,79 8,80 8,79 30 42,01 42,02 41,98 42,00 35 1,55 1,55 1,54 1,55 Bảng 19: Mật độ tế bào ngày ủ khác Mật độ tế bào (108 TB/g BC) Ngày ủ (ngày) Đĩa Petri Đĩa Petri Đĩa Petri Mật độ tế bào trung bình (108 TB/g) 2,08 2,10 2,11 2,10 3,08 3,05 3,05 3,06 4,15 4,14 4,15 4,15 4,19 4,21 4,19 4,20 3,94 3,97 3,93 3,95 Trang 114 Phụ lục E: Khả tái sử dụng tế bào cố định tự phân thủy phân dung dịch sucrose Bảng 20: Khảo sát lượng tế bào tự phân xúc tác khác nhau* Tế bào tự phân (g) 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 Sucrose ban đầu (g/l) 150 150 150 150 150 Pha loãng 800 800 800 800 800 ΔOD540nm 0,243 0,379 0,517 0,532 0,540 Đường khử tạo thành (g/l) 70,895 107,684 144,947 148,895 150,947 Sucrose bị thủy phân (g/l) 67,35 102,30 137,70 141,45 143,40 Hiệu suất thủy phân (%) 44,9 68,2 91,8 94,3 95,6 Bảng 21: Khảo sát nồng độ sucrose thích hợp* Nồng độ sucrose 100g/l Thời gian Pha loãng 800 800 800 800 800 800 800 800 ΔOD540nm 0,075 0,164 0,237 0,293 0,325 0,343 0,344 0,347 25,79 49,68 69,26 84,52 93,05 98,00 98,42 98,95 24,5 47,2 65,8 80,3 88,4 93,1 93,5 94,0 24,5 47,2 65,8 80,3 88,4 93,1 93,5 94,0 0,081 0,202 0,303 0,398 0,469 0,517 0,522 0,525 27,16 60,00 87,00 112,74 132,00 144,95 146,21 147,00 25,8 57,00 82,65 107,10 125,40 137,70 138,90 139,65 17,2 38,0 55,1 71,4 83,6 91,8 92,6 93,1 ΔOD540nm Đường khử tạo thành (g/l) Sucrose bị thủy phân (g/l) Hiệu suất (%) 0,080 0,193 0,290 0,404 0,506 0,593 0,655 0,683 26,95 57,47 83,58 114,32 141,90 165,26 181,90 189,47 25,60 54,60 79,40 108,60 134,80 157,00 172,80 180,00 12,8 27,3 39,7 54,3 67,4 78,5 86,4 90,0 ΔOD540nm Đường khử tạo thành (g/l) Sucrose bị thủy phân (g/l) Hiệu suất (%) 0,082 0,169 0,296 0,397 0,493 0,583 0,687 0,755 27,63 51,05 85,26 112,37 138,42 162,63 190,79 208,95 26,25 10,5 48,50 19,4 81,00 32,4 106,75 42,7 131,50 52,6 154,50 61,8 181,25 72,5 198,50 79,4 Đường khử tạo thành (g/l) Sucrose bị thủy phân (g/l) Hiệu suất (%) ΔOD540nm 150g/l 200g/l 250g/l Đường khử tạo thành (g/l) Sucrose bị thủy phân (g/l) Hiệu suất (%) *Điều kiện phản ứng: lượng tế bào tự phân 0,8 g/l, pH 5,0; nhiệt độ 50oC Trang 115 Bảng 22: Khảo sát nhiệt độ thủy phân dung dịch sucrose Nhiệt độ oC 45oC o 50 C o 55 C o 60 C Thời gian Pha loãng 800 800 800 800 800 800 800 800 ΔOD540nm 0,063 0,141 0,228 0,312 0,400 0,458 0,533 0,594 22,53 43,37 66,95 89,47 113,26 128,84 149,26 165,68 21,4 41,2 63,6 85,0 107,6 122,4 141,8 157,4 Hiệu suất (%) 10,7 20,6 31,8 42,5 53,8 61,2 70,9 78,7 ΔOD540nm 0,080 0,193 0,290 0,404 0,506 0,593 0,655 0,683 26,95 57,47 83,58 114,32 141,90 165,26 181,90 189,47 25,6 54,6 79,4 108,6 134,8 157,0 172,8 180,0 Hiệu suất (%) 12,8 27,3 39,7 54,3 67,4 78,5 86,4 90,0 ΔOD540nm 0,103 0,218 0,341 0,437 0,556 0,657 0,679 0,690 33,26 64,21 97,26 123,37 155,37 182,53 188,42 191,58 31,6 61,0 92,4 117,2 147,6 173,4 179,0 182,0 Hiệu suất (%) 15,8 30,5 46,2 58,6 73,8 86,7 89,5 91,0 ΔOD540nm 0,067 0,132 0,189 0,250 0,280 0,295 0,314 0,321 23,58 41,05 56,42 72,84 81,05 84,84 90,11 92,00 22,4 39,0 53,6 69,2 77,0 80,6 85,6 87,4 11,2 19,5 26,8 34,6 38,5 40,3 42,8 43,7 Đường khử tạo thành (g/l) Sucrose bị thủy phân (g/l) Đường khử tạo thành (g/l) Sucrose bị thủy phân (g/l) Đường khử tạo thành (g/l) Sucrose bị thủy phân (g/l) Đường khử tạo thành (g/l) Sucrose bị thủy phân (g/l) Hiệu suất (%) *Điều kiện phản ứng: nồng độ sucrose 200 g/l, lượng tế bào tự phân 0,8 g/l, pH 5,0 Trang 116 Bảng 23: Khảo sát pH thủy phân dung dịch sucrose Thời gian Pha loãng 800 800 800 ΔOD540nm 0,468 0,560 0,587 Đường khử tạo thành (g/l) 131,58 156,42 163,79 Sucrose bị thủy phân (g/l) 125,0 148,6 155,6 Hiệu suất (%) 62,5 74,3 77,8 ΔOD540nm 0,515 0,605 0,644 Đường khử tạo thành (g/l) 144,21 168,63 178,95 Sucrose bị thủy phân (g/l) 137,0 160,2 170,0 Hiệu suất (%) 68,5 80,1 85 ΔOD540nm 0,556 0,657 0,679 155,37 182,53 188,42 147,6 173,4 179,0 Hiệu suất (%) 73,8 86,7 89,5 ΔOD540nm 0,459 0,520 0,564 129,26 145,68 157,47 122,8 138,4 149,6 61,4 69,2 74,8 pH 4,0 4,5 Đường khử tạo thành (g/l) 5,0 Sucrose bị thủy phân (g/l) Đường khử tạo thành (g/l) 5,5 Sucrose bị thủy phân (g/l) Hiệu suất (%) Trang 117 Bảng 24: Khảo sát khả tái sử dụng chế phẩm nấm men cố định tự phân thủy phân dung dịch sucrose BC-alginate BC Alginate Đối chứng Chất mang Lần tái sử dụng 10 11 12 13 14 15 Pha loãng 800 800 800 800 800 800 800 800 800 800 800 800 800 800 800 ΔOD540nm 0,657 X X X X Đường khử tạo thành (g/l) Sucrose bị thủy phân (g/l) 182,55 173,42 Hiệu suất (%) 86,7 ΔOD540nm 0,631 0,631 0,628 0,625 0,603 0,554 175,5 175,5 174,8 174,0 167,9 154,7 166,73 166,73 166,06 165,30 159,5 147,0 Hiệu suất (%) 83,4 83,4 83,0 82,7 79,8 73,5 X X X X X ΔOD540nm 0,631 0,631 0,630 0,629 0,627 0,625 0,622 0,613 0,601 0,581 0,548 175,5 175,5 175,3 175,0 174,6 174,0 173,2 170,6 167,6 162,0 153,1 83,4 83,4 83,3 83,1 82,9 82,7 82,3 81,0 79,6 76,9 72,7 Hiệu suất (%) 83,4 83,4 83,3 83,1 82,9 82,7 82,3 81,0 79,6 76,9 72,3 X X X X ΔOD540nm 0,631 0,631 0,631 0,630 0,629 0,627 0,625 0,623 0,620 0,618 0,615 0,601 0,589 0,569 0,538 175,5 175,5 175,5 175,3 175,0 174,6 174,0 173,5 172,6 172,1 171,2 167,5 164,3 158,8 150,5 166,73 166,73 166,73 166,53 166,25 165,87 165,3 164,83 163,97 163,48 162,64 159,16 156,0 150,9 143,0 83,4 83,4 83,4 83,3 83,1 82,9 82,7 82,4 82,0 81,7 81,3 79,6 78,02 75,43 71,50 Đường khử tạo thành (g/l) Sucrose bị thủy phân (g/l) Đường khử tạo thành (g/l) Sucrose bị thủy phân (g/l) Đường khử tạo thành (g/l) Sucrose bị thủy phân (g/l) Hiệu suất (%) Trang 118 Phụ lục F: Khả tái sử dụng chế phẩm tế bào cố định tự phân thủy phân sucrose nước mía Bảng 25: Đường cong chuẩn đường tổng hịa tan-OD490nm Nồng độ sucrose (µg/ml) 10 20 30 40 50 60 Δ OD490nm 0,122 0,231 0,325 0,446 0,542 0,665 Đồ thị 14: Đường cong chuẩn đường tổng số hòa tan Trang 119 Bảng 26: Nồng độ sucrose đường khử ban đầu nước mía Đường tổng số hòa tan Đường khử Sucrose ban đầu Δ OD490nm 0,262 Pha loãng 8000 Tổng sucrose (mg/ml) 188,24 Δ OD540nm 0,196 Pha loãng 100 Đường khử ban đầu (mg/ml) 7,3 Sucrose tương ứng với đường khử ban đầu (mg/ml) 6,93 Sucrose ban đầu (mg/ml) 181,3 Bảng 27: Khảo sát lượng tế bào tự phân 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 Δ OD540nm 0,229 0,343 0,462 0,578 0,598 Pha loãng 800 800 800 800 800 Đường khử đo (g/l) 67,22 98,14 130,11 161,31 166,65 Đường khử tạo thành (g/l) 59,92 90,84 122,71 154,00 159,35 Sucrose bị thủy phân (g/l) Hiệu suất thủy phân (%) 56,93 31,4 86,30 47,6 116,58 64,3 146,31 80,7 151,38 83,5 Lượng tế bào tự phân (g) Bảng 28: Khảo sát nhiệt độ thủy phân Nhiệt độ (oC) 40 45 50 55 60 Δ OD540nm 0,35 0,474 0,578 0,612 0,393 Pha loãng 800 800 800 800 800 Đường khử đo (g/l) 99,90 133,22 161,37 170,47 111,52 Đường khử tạo thành (g/l) 92,60 125,92 154,08 163,170 104,22 Sucrose bị thủy phân (g/l) Hiệu suất thủy phân (%) 87,98 48,52 119,62 65,98 146,36 80,73 155,01 85,5 99,01 54,61 Trang 120 Bảng 29: Khảo sát thời gian thủy phân Δ OD540nm 0,350 0,455 0,541 0,611 0,619 Pha loãng 800 800 800 800 800 Đường khử đo (g/l) 99,90 128,05 151,33 170,43 172,36 Đường khử tạo thành (g/l) 92,20 120,75 144,03 163,13 165,06 Sucrose bị thủy phân (g/l) Hiệu suất thủy phân (%) 87,97 48,52 114,71 63,27 136,83 75,47 154,98 85,48 156,81 86,49 Thời gian (h) Bảng 30: Khảo sát khả tái sử dụng 800 Đường khử đo (g/l) 164,59 Đường khử tạo thành (g/l) 157,29 Sucrose bị thủy phân (g/l) 149,43 Hiệu suất thủy phân (%) 82,42 0,590 800 164,59 157,29 149,43 82,42 0,587 800 163,75 156,45 148,63 81,98 0,587 800 163,64 156,34 148,52 81,92 0,585 800 163,16 155,86 148,07 81,67 0,583 800 162,70 155,40 147,63 81,43 0,581 800 162,15 154,85 147,11 81,14 0,578 800 161,35 154,05 146,35 80,72 0,576 800 160,81 153,51 145,83 80,44 10 0,568 800 158,59 151,29 143,73 79,28 11 0,563 800 157,33 150,03 142,53 78,62 12 0,562 800 157,02 149,72 142,23 78,45 13 0,545 800 152,28 144,98 137,73 75,97 14 0,535 800 149,75 142,45 135,33 74,64 15 0,506 800 141,75 134,45 127,73 70,45 Lần sử dụng Δ OD540nm Pha loãng 0,590 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM BỘ, TỈNH: Độc Lập – Tự Do – Hạnh Phúc -Họ Tên: Bùi Thị Thanh Hương ĐƠN VỊ CÔNG TÁC: Sinh 13 / 05 / 1985 Nam, Nữ LÝ LỊCH KHOA HỌC Bí danh: Dùng cho cán khoa học – kỹ thuật có Chức vụ, đơn vị cơng tác trước trình độ đại học, lập theo thông tư Khi nghiên cứu, thực tập: số 612/KKT/CB ngày 18-8-1966 Ủy Ảnh 4x6 ban Khoa học Kỹ thuật Nhà Nước (Đóng dấu giáp lai ảnh) Hệ số lương chính: _ Ngành học: Cơng nghệ Sinh học Chuyên môn: Công nghệ Sinh học I LÝ LỊCH SƠ LUỢC : Nguyên quán:Tư Nghĩa, Quảng Ngãi Nơi sinh:Buôn Ma Thuột, Dak Lak Chổ riêng địa liên lạc: 72 Thăng Long, Tp Buôn Ma Thuột Dân tộc: Kinh Tôn giáo: Không Thành phần gia đình: Bần Nơng Thành phần thân: Học viên Ngày vào Đoàn TNCS HCM: 26/03/2000 Ngày vào Đảng CSVN: _ Ngày thức vào Đảng: _ Chính quyền cao quyền đồn thể qua (nơi, thời gian): Sức khoẻ: Tốt II QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO : TRUNG HỌC CHUYÊN NGHIỆP : Chế độ học: Thời gian học: Từ _ / _ / đến _ / _ / Nơi học (trường, thành phố….): Ngành học: ĐẠI HỌC : Chế độ học: Chính quy? Chuyên tu? Tại chức?: Chính qui Thời gian học: Từ 15 / 09 / 2003 đến 15/01/ 2008 Nơi học (trường, thành phố….): Trường Đại học Bách Khoa Tp Hồ Chí Minh Ngành học: Cơng nghệ Sinh học Tên đồ án, luận án, môn thi tốt nghiệp chủ yếu: Nuôi cấy invitro chuyển gen kháng sâu vào rau muống Ngày nơi bảo vệ đồ án, luận án, thi tốt nghiệp: Trường Đại học Bách Khoa Tp Hồ Chí Minh Người hướng dẫn: Tiến sĩ Nguyễn Hữu Hổ - Kỹ sư Nguyễn Tấn Đức TRÊN ĐẠI HỌC: - Thực tập khoa học kỹ thuật từ: / / đến / / (trường, viện, nước): Nội dung thực tập _ - Cao học từ: 15/ 09 / 2008 đến 15 / 01/ 2010 (trường, viện, nước): Trường Đại học Bách Khoa Tp Hồ Chí Minh Tên luận án: Cố định tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae có hoạt tính invertase trẹn phức chất mang Bacterial cellulose-alginate ứng dụng Ngày nơi bảo vệ: ngày 15/01/2010 Trường Đại học Bách Khoa Tp Hồ Chí Minh Người hướng dẫn: Tiến sĩ Nguyễn Thúy Hương - Nghiên cứu sinh từ: / / _ đến / / _ (trường, viện, nước): _ _ Tên luận án: _ _ _ Ngày nơi bảo vệ: _ _ Người hướng dẫn: Các môn học bắt buộc chương trình đào tạo sau đại học : Triết học trình độ B: số tiết học: 60 tiết, nơi học: Đại học Bách Khoa Lý luận sư phạm đại học: số tiết học: _ tiết, nơi học: _ Phương pháp luận NCKH: số tiết học: 30 tiết, nơi học: Đại học Bách Khoa Tin học: số tiết học: _ tiết, nơi học: _ Biết ngoại ngữ gì? Trình độ (viết, đọc, nghe, nói; ghi rõ mức độ cụ thể A,B,C…) : Anh Văn – trình độ B _ _ _ Học vị, học hàm, chức vụ kỹ thuật thức cấp (bằng tốt nghiệp đại học, Kỹ sư, Bác sĩ …., Phó tiến sĩ … Kỹ sư trưởng, Cơng trình sư, Phó giáo sư, Giáo sư ….) ghi rõ ngày, quan cấp tốt nghiệp hay định phong cấp _ _ _ _ _ III HOẠT ĐỘNG KHOA HỌC KỸ THUẬT: 1- Quá trình hoạt động khoa học-kỹ thuật, chuyên môn Trước sau tốt nghiệp làm làm công tác khoa học-kỹ thuật gì? (kỹ thuật, nghiên cứu, thí nghiệm, giảng dạy, quản lý, phục vụ khoa học) Thời gian Tóm tắt trình hoạt động khoa học – kỹ thuật, nơi công tác 2- Kết hoạt động khoa học-kỹ thuật: Cơng trình thiết kế, thi cơng, nghiên cứu khoa học kỹ thuật, sáng kiến phát minh, giáo trình giáo án, phương án, tác phẩm … Đã tiến hành hoạt động khoa học-kỹ thuật Ghi rõ nơi, thời gian trước sau tốt nghiệp, độc lập tiến hành hay cộng tác với người khác, tự nhận xét kết tác dụng v.v 3- Tham dự hội nghị khoa học-kỹ thuật quốc tế (trong nước nước) : tham quan khảo sát, thực tập sản xuất, kỹ thuật… Ở nước ngồi (thời gian, nơi, nội dung chun mơn) 4- Khen thưởng giải thưởng hoạt động khoa học - kỹ thuật (thời gian, hình thức khen thưởng, quan định) 5- Khả chuyên môn, nguyện vọng hoạt động khoa học-kỹ thuật (ghi cụ thể tỉ mỉ) IV HOẠT ĐỘNG CHÍNH TRỊ XÃ HỘI: Tóm tắt q trình tham gia đồn thể quần chúng (thanh niên cộng sản, cơng đồn… ) hội khoa học (hội phổ biến, hội khoa học chuyên ngành… ) phong trào lớn (cải tiến quản lý hợp tác xã,… ) ghi rõ nơi, thời gian XÁC NHẬN CỦA CƠ QUAN HOẶC ĐỊA PHƯƠNG (Thủ Trưởng ký tên đóng dấu) Ngày 05 tháng 01năm 2010 NGƯỜI KHAI (Họ tên chữ ký) ... 3.3 Cố định tế bào nấm men có hoạt tính invertase cao phức chất mang BCalginate 68 3.3.1 Bẫy – hấp phụ tế bào nấm men lên chất mang BC 68 3.3.2 Nhốt tế bào nấm men hệ gel alginate. .. cerevisiae có hoạt tính invertase phức chất mang Bacterial cellulose- alginate ứng dụng 2- NHIỆM VỤ LUẬN VĂN: - Tuyển chọn chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae có hoạt tính invertase cao - Cố định. .. chọn chủng nấm men S cerevisiae có hoạt tính invertase cao, sau cố định chủng nấm men phức chất mang BC -alginate ứng dụng thủy phân sucrose Một số kết thu sau: chủng BK1 có hoạt tính invertase