Tách chiết, tinh sạch và cố định enzyme bromelin từ dứa

 TRANG 1:  1 1.1.  1 1.2.  2 1.2.1.  2 1.2.1.  2 1.3.  2 1.4.  3 1.4.1.  3 1.4.2.  3 1.5.   3 2 4 2.1.  4 2.1.1.  4 2.1.2.  5 2.1.3. zyme bromelain 6 2.1.3.1.  6 2.1.3.2. Thân 6 2.1.3.3.  6 2.1.3.4.  6 2.2.  7 2.3. ENZYME PROTEASE 8 2.3.1.  enzyme protease 8  8  9  10 2.3.2.  10 2.4.  11 2.4.1. ain 11 2.4.2.  11 2.4.3.  12  12  13 2.4.4.  13  14  14 2.4.5.  16  16  17  17 2.4.6.  18  18  18 2.5.  19 2.6.  19 2.6.1.  19 2.6.2.  20 2.6.3.  20 2.6.4.  20 2.6.5.  phân 21 2.7.  21 2.7.1.  21 2.7.2.  21  21  22 2.7.3.  22 2.7.4.  23 2.7.4.1.  23 2.7.4.2.  24 2.7.4.3.  24 2.7.4.4.  25 2.7.5.  25 2.7.6.  26 2.7.6.1.  26 2.7.6.2.  26 2.7.6.3.  27 2.7.6.4.  27 2.7.7.  27 2.7.7.1.  27 2.7.7.2.  28 3:  29 3.1.  29 3.1.1.  29 3.1.2.  30 3.1.3.  30 3.2.  31 3.2.1.  31 3.2.2.   32 3.2.2.1.  33 3.2.2.2.  35 3.2.3.  0 , mu Ammonium sulfate (NH 4 ) 2 SO 4 aceton(CH 3 COCH 3 ) 39 3.2.3.1.  39 3.2.3.2.  0 39  Ammonium sulfate 40 3.2.3.4. Pht 41 3.2.4.  0  4 ) 2 SO 4   42 3.2.5.   42 3.2.5.1.  42 3.2.5.2.  42 3.2.5.3.  43   43 3.2.6.1.  43 3.2.6.2.  43   43 3.2.7.  . 44 3.2.7.1.   44 3.2.7.2.  45 3.2.7.3.  45 3.2.8.  45 3.2.9.  46 3.2.9.1.  46 3.2.9.2.  46 3.2.9.3.  47 3.2.9.4.   49 3.2.10.  - PAGE 49 3.2.10.1.  50 3.2.10.2.  50 3.2.10.3.  52 3.2.10.4.  54 4N  55 4.1.  . 55 4.2.  0 56 4.2.1.   0 56 4.2.2.   58 4.2.2.1.  58 4.2.2.2. N 59 4.2.2.3.  60  AMMONIUM SULFATE 61 4.3.1. H là ium sulfate ((NH 4 ) 2 SO 4 ) 61 4.3.2.   62 4.3.2.1.  62 4.3.2.2. N 63 4.3.2.3.  64  (CH 3 COCH 3 ) 66 4.4.1. H là aceton (CH 3 COCH 3 ) 66 4.4.2.  aceton5 aceton 67 4.4.2.1.  67 4.4.2.2. N 68 4.4.2.3.  69 4.5.  0  AMMONIUM SULFATE  70 4.6.  71 4.6.1.  Natrialginate 71 4.6.2.  bromelain trên gel Natrialginate 71 4.6.3.   72 4.6.4.   72 4.6.4.1.  72 4.6.4.2.  theo  74 4.6.4.3.  theo  75 4.6.5.  76 4.6.6.   78 4.7. -100 79 4.7.1.  79 4.7.2.  79 4.7.3.  0 79 4.7.4. ate 80 4.7.5.  82 4.7.6.   83 4.8.  - PAGE 84 4.8.1.  84 4.8.2.  84 5 87 5.1.  87 5.2. K 89  I  III Chương 1: Mở đầu Trang 1  M U 1.1. T V Trong nh i ta dành s quan tâm rt nhin vic tách chi s dng làm tác nhân kích thích tiêu hóa, cha v nh dch lên men. Vic nghiên cu thành công mt enzyme là  vic chit xut, t tính, yu t ng hong ca enzyme. Vic tinh ch enzyme ht sc cn thit bi làm cho enzyme tinh sch ít còn ln tp cht (các protein không phi enzyme), nâng cao hot tính enzyme so vi dng thô nhiu ln, thun li cho nghiên cu, bo qun, nguyên liu cho mt s ngành công ngh thc ph  c phm dùng làm thuu tr và sn xut. Bên cc nâng cao hiu sut s dc nghiên c nh enzyme là mt trong nhng nghiên cu nhm nâng cao hiu sut s dng enzyme. Bng cách c nh enzyme trong cht mang c enzyme có th tách ra kht d dàng sau phn ng. Thêm  c tái s dng nhiu ln khc phc tình trng khan him n nay. c sn xut và s dng trong nhi ngh thc phm, y hc phm và các ngành công nghii vc ta ngun enzyme t thc vt có trin vng ln vì ngun nguyên liu rt phong phú (da, , ). Trong quá trình ch bin dp ch khong 30% qu dc s dng, còn li 70% ph phm mà ch yu là chi trên qu da, thân da (Hi tho quc u tn dc ngun ph phm thì va có th gim thiu cht thi hng va có th sn xut sn phm bromelain bi vì hu t c các b phn ca cây du có enzyme. Bromelain có ba hot tính khác nhau: peptidase, amidase, esterase. Bromelain thân, chi có th phân hy c  cht t nhiên lt tng hp, chúng là enzyme có giá tr kinh t và hu ht sn phc ly trích t thân da. Chương 1: Mở đầu Trang 2  n hành tách chit, tinh sch enzyme bromelain  quy mô nh. Kho sát các tác nhân tnh pH, nhi t bn nhit cho hong ca enzyme trên chi da. C nh enzyme bromelain trên Natrialginate ba Ammonium sulfate. 1.2. M TÀI 1.2.1. Mc tiêu tng quát Tách chit và tinh sch enzyme bromelain t chi da. C nh enzyme bromelain trên Natrialginate. 1.2.2. Mc tiêu c th Thu nhn dch enzyme bromelain t các b phn qu da: chi da, mt da, thân da, cùi da. nh t l cn 96 o , n mui Ammonium sulfate ta enzyme bromelain.  nh pH, nhi  t    bn nhit cho s ho ng ca enzyme bromelain. So sánh các tác nhân ta ca b phn chi da sau khi ta. C nh enzyme bromelain trên Natrialginate.        Tinh sch enzyme bromelain. nh trng phân t enzyme bromelain bn di. 1.3. M  nghiên c sn xut enzyme bromelain t ng ph phm ln là chi dng thi c  mang li hiu qu kinh t trong công nghip. [...]... nghiệm Xử lý kết quả bằng Excel và phần mềm Statgraphics 1.5 GIỚI HẠN ĐỀ TÀI Vì lý do giới hạn về thời gian và kinh tế, đề tài chỉ thực hiện tủa enzyme với ba tác nhân tủa (muối, cồn và aceton), tinh sạch enzyme bromelain trên Biogel P-100, điện di bằng phương pháp -PAGE và chỉ thực hiện cố định enzyme trên cơ chất Natrialginate ở quy mô phòng thí nghiệm Trang 3 Chương 2: Tổng quan về vấn đề nghiên cứu... ch t i nc y s bi ph n ng và n glucose nh n c c oxy trên b m t gel polyacryamide n c c vào dung d ch gl N nh n t và oxy s khu ch tán vào gel ch a n trong h th n c c ph thu c vào t glucose K nc cholesterol Cl nc Ngoài ra enzyme c nh n nh còn có th c n c dùng vào nhi u m t hóa enzyme zymogen, nghiên c u c u trúc phân tử protein, sử d ng trong c kí ái l tinh ch m t s ch t có kh enzyme Ngày nay có nhi u... a nhóm sulfurhydryl th y gi i protein Khi chi t tách và tinh s n có ch a nhóm sulfhydryl c a Bromelain thì thu c m t enzyme th y phân protein hi u qu in vitro (Nguy 2.4.2 Tính chất v t lí c a enzyme bromelain Trang 11 cL ng, 2004) Chương 2: Tổng quan về vấn đề nghiên cứu Murachi và c ng s u v tính ch t v t lý c a enzyme Bromelain trích t thân cây d a và th au: ng 2 : T nh hấ ậ T in h n ấ ệ G H S 2.73... không b E d cao c a enzyme ng c a các ph n ng ph c c c dùng trong chu nh Ngoài các ng n c c enzyme trong phân tích các chỉ tiêu sinh hóa c glucose, urea, Enzyme Horseradish peroxidase c cùng v i kháng th , giúp chu nhanh và chính xác ( Enzyme L-asparaginase có kh tr c ti d lâu dài vì enzyme b ng: nh trên polystyren t ELISA) c ch s phát tri n c a u ác tính, n s b ng u c u có g n enzyme vào Trang 26 s có... xu t enzyme và có th d n quá trình nuôi c có th thu c hi u su t cao trong s n xu t  S n xu t enzyme t vi sinh v t hoàn toàn có th th c hi n theo quy mô công nghi p 2.3 ENZYME PROTEASE Enzyme protease là enzyme thu c nhóm hydrolase, xúc tác cho quá trình th y phân liên k t peptide (-CO-NH-) c a phân tử protein và peptide thành các acid amin t do, m t peptide ng n,pepton 2.3.1 Giới thiệ ơ ƣợc các Enzyme. .. khâu m ch các phân tử enzyme Nh c khâu m ch t o thành m t tính c a enzyme c m ch có th liên k 2.7.5 Đ ng th p, do các h p ch t khâu c hi u vào trung tâm ho b liên k t t o thành m t kh đ ấ c Theo ng c a enzyme và enzyme ng N L N G N 2+ -LM - N -K - Kh -K Trang 25 - Chương 2: Tổng quan về vấn đề nghiên cứu 2.7.6 Ứng dụng c ốđ 2.7.6.1 Trong công nghiệp Ngày nay, nhi u quy trình ng d ng enzyme c nh trong... bia: Các enzyme amylase, t bào n m men c c sử d ng quy mô l n Ch bi n s a: Enzyme lactase c N th y phân lactose trong s a n xu t liên t c glucose b ng glucoseamylase c N nh Chimotrypsin liên k t c ng hóa tr v i carboximethyl s a t ti n 2.7.6.2 Trong y h c Enzyme c c ng d ng nhi u trong y h thi u enzyme ho c ho ch a các b nh di truy n do enzyme y u N c vi ti u c u bán th m có g n enzyme, nh th enzyme. .. Casein và tt c dùng nhi u nh t u tiên, bromelain k t h p v i protein và th y cho ra polypeptide và acid amin Protein k t h p v i nhóm –SH c a enzyme khi n nó b ester hóa r i nhóm imidazole s khử gi i phóng enzyme, acid amin và peptide u, Zn2+ r t quan tr ng, chúng k t h p v i nhóm –SH c a tâm ho t ng hình thành mercaptid phân ly y b sung v i các nhóm ch n còn kh o liên k t ph i trí … a phân tử Enzyme. .. n t i c a enzyme d ng tinh khi t thì nh y v i nhi t: 5o C, pH = 4-10, Bromelain có 55oC, pH=6 trong 20 phút, ho t tính gi m ho t tính t 50% Quá trình s ) m t ho t tính 27% (Nguy L ng, 2004)  Ảnh hưởng c a pH pH là y u t quan tr ng nh t thích h p nh n ho t tính xúc tác c a enzyme pH i v i bromelain không nh mà ph thu c vào nhi ph n ng, b n ch t và n ng d m, s có m t c a ch tinh s ch c a enzyme, b n... uc … vi khu ƣớc ngoài 2.7.7.2 Tình hình nghiên c Nghiên c u enzyme c nh b N lson và Griffin quan sát ut và cho th y r ng enzyme invertase c a n m men khi h p th th c ph m ng s gi i xu t hi n nhi u báo cáo v kh nh các enzyme b ng liên k N vào than có kh ng hóa tr trên ch t mang f m thành công vi c nh amylase, tripsin, papain, ribonuclease và polyacryamide N ng th c nghi glucose b ng glucoseamylase c . ng hong ca enzyme. Vic tinh ch enzyme ht sc cn thit bi làm cho enzyme tinh sch ít còn ln tp cht (các protein không phi enzyme) , nâng cao hot tính enzyme so vi dng thô. ca enzyme trên chi da. C nh enzyme bromelain trên Natrialginate ba Ammonium sulfate. 1.2. M TÀI 1.2.1. Mc tiêu tng quát Tách chit và tinh sch enzyme. chit tách và tinh sn có cha nhóm sulfhydryl ca Bromelain thì thu c mt enzyme thy phân protein hiu qu in vitro (Nguyc ng, 2004). 2.4.2. Tính cht vt lí ca enzyme