Đồ án tách chiết, tinh sạch và cố định enzyme bromelain từ dứa

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CƠNG NGHỆ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH    ĐỀ TÀI: TÁCH CHIẾT, TINH SẠCH VÀ CỐ ĐỊNH ENZYME BROMELAIN TỪ DỨA CHUYÊN NGÀNH : CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ NGÀNH : 111 GVHD: PGS.TS NGUYỄN TIẾN THẮNG CN ĐỖ THỊ TUYẾN SVTH : PHAN THỊ HUỲNH NHƯ MSSV : 106111023 LỚP : 06 DSH TP Hồ Chí Minh, tháng năm 2010 LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng biết ơn đến Ban Giám Hiệu trường ĐH Kỹ Thuật Cơng Nghệ Tp Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho em suốt thời gian học tập bồi dưỡng trường Em vô biết ơn dìu dắt hướng dẫn nhiệt tình tồn thể q Thầy Cơ Khoa Mơi trường Công nghệ sinh học quý Thầy Cô trực tiếp giảng dạy em suốt bốn năm qua, người truyền thụ kiến thức quan trọng để em thực tốt Đồ án tốt nghiệp Em xin đặc biệt chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Tiến Thắng Cô Đỗ Thị Tuyến tạo điều kiện cho em làm Đồ án Viện Sinh Học Nhiệt Đới Tp.HCM tận tình hướng dẫn, động viên em suốt thời gian làm Đồ án tốt nghiệp Em xin cảm ơn anh chị phụ trách phòng hoạt chất có hoạt tính sinh học thuộc Viện Sinh Học Nhiệt Đới Tp.HCM cung cấp nhiều kiến thức bổ ích Chân thành cảm ơn tập thể lớp 06DSH giúp đỡ, hỗ trợ động viên suốt thời gian học tập thực tập trường Cuối xin gởi lòng biết ơn sâu sắc đến Ba Mẹ người gia đình ln bên chăm sóc, động viên chỗ dựa tinh thần vững cho suốt trình học tập TP HCM, ngày tháng năm 2010 SVTH: Phan Thị Huỳnh Như NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN Điểm số số: _ Điểm số chữ: TPHCM, ngày tháng năm 2010 GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN BỘ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐH KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ Độc lập – Tự – Hạnh phúc TPHCM KHOA MÔI TRƯỜNG & CNSH NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP HỌ VÀ TÊN: PHAN THỊ HUỲNH NHƯ MSSV: 106111023 NGÀNH : CÔNG NGHỆ SINH HỌC LỚP: 06DSH Đầu đề đồ án: TÁCH CHIẾT, TINH SẠCH VÀ CỐ ĐỊNH ENZYME BROMELAIN TỪ DỨA Nhiệm vụ (yêu cầu nội dung số liệu ban đầu) Ngày giao đồ án: Ngày hoàn thành nhiệm vụ: Họ tên người hướng dẫn: PGS TS NGUYỄN TIẾN THẮNG CN ĐỖ THỊ TUYẾN Phần hướng dẫn: a b c d Nội dung yêu cầu ĐATN thông qua môn Ngày tháng năm 20… Chủ nhiệm môn Người hướng dẫn (ký ghi rõ họ tên) (ký ghi rõ họ tên) MỤC LỤC TRANG CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1.2 MỤC TIÊU ĐỀ TÀI 1.2.1 Mục tiêu tổng quát 1.2.1 Mục tiêu cụ thể 1.3 MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU 1.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1.4.1 Nghiên cứu lý thuyết 1.4.2 Nghiên cứu thực nghiệm 1.5 GIỚI HẠN CỦA ĐỀ TÀI CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 SƠ LƯỢC VỀ CÂY DỨA 2.1.1 Lịch sử và phát triển của dứa 2.1.2 Thành phần dinh dưỡng dứa 2.1.3 Các bộ phận dứa có thể cho enzyme bromelain 2.1.3.1 Quả 2.1.3.2 Thân 2.1.3.3 Lá 2.1.3.4 Rễ 2.2 GIỚI THIỆU SƠ LƯỢC VỀ ENZYME 2.3 ENZYME PROTEASE 2.3.1 Giới thiệu sơ lược các enzyme protease 2.3.1.1 Protease vi sinh vật 2.3.1.2 Protease động vật 2.3.1.3 Protease thực vật 10 2.3.2 Ứng dụng của enzyme protease 10 2.4 ENZYME BROMELAIN THU NHẬN TỪ DỨA 11 2.4.1 Giới thiệu enzyme bromelain 11 2.4.2 Tính chất vật lý của enzyme bromelain 11 2.4.3 Tính chất hoá học của enzyme bromelain 12 2.4.3.1 Cấu tạo hoá học 12 2.4.3.2 Cấu trúc không gian của bromelain 13 2.4.4 Hoạt tính của enzyme bromelain 13 2.4.4.1 Cơ chế tác động 14 2.4.4.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme bromelain 14 2.4.5 Ứng dụng của enzyme bromelain 16 2.4.5.1 Trong công nghiệp thực phẩm 16 2.4.5.2 Trong y dược học 17 2.4.5.3 Một số enzyme bromelain thương mại 17 2.4.6 Tình hình nghiên cứu và ngoài nước về enzyme bromelain 18 2.4.6.1 Nghiên cứu nước 18 2.4.6.2 Nghiên cứu ngoài nước 18 2.5 KĨ THUẬT CƠ BẢN CHUẨN BỊ DỊCH PROTEIN THÔ 19 2.6 CÁC PHƯƠNG PHÁP TỦA PROTEIN 19 2.6.1 Tủa bằng muối sulfate ở các nồng độ khác 19 2.6.2 Tủa bằng dung môi hữu 20 2.6.3 Tủa bằng điểm đẳng nhiệt 20 2.6.4 Tủa bằng các loại polymer 20 2.6.5 Tủa bằng các chất đa điện phân 21 2.7 SỰ CỐ ĐỊNH ENZYME 21 2.7.1 Định nghĩa enzyme cố định 21 2.7.2 Tính chất ưu và nhược của enzyme cố định 21 2.7.2.1 Ưu điểm 21 2.7.2.2 Nhược điểm 22 2.7.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme cố định 22 2.7.4 Các phương pháp cố định enzyme 23 2.7.4.1 Phương pháp liên kết enzyme với vật liệu cố định 23 2.7.4.2 Phương pháp hấp thụ vật lí 24 2.7.4.3 Phương pháp nhốt 24 2.7.4.4 Phương pháp khâu mạch 25 2.7.5 Đặc điểm, tính chất của Natrialginate 25 2.7.6 Ứng dụng của enzyme cố định 26 2.7.6.1 Trong công nghiệp 26 2.7.6.2 Trong y học 26 2.7.6.3 Trong nghiên cứu khoa học 27 2.7.6.4 Trong bảo vệ môi trường 27 2.7.7 Tình hình nghiên cứu nước và ngoài nước 27 2.7.7.1 Tình hình nghiên cứu nước 27 2.7.7.2 Tình hình nghiên cứu nước ngoài 28 CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 29 3.1 VẬT LIỆU 29 3.1.1 Chế phẩm enzyme thô 29 3.1.2 Hóa chất 30 3.1.3 Thiết bị 30 3.2 PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 31 3.2.1 Chiết thô enzyme từ chế phẩm dứa 31 3.2.2 Phương pháp xác định hàm lượng protein và hoạt tính bromelain từ dịch chiết enzyme thô 32 3.2.2.1 Xác định hàm lượng protein bằng phương pháp Bradford 33 3.2.2.2 Xác định hoạt tính enzyme theo phương pháp Amano 35 3.2.3 Tách enzyme bằng các phương pháp tủa bằng cồn 960, muối Ammonium sulfate (NH4)2SO4 và aceton(CH3COCH3) 39 3.2.3.1 Nguyên tắc 39 3.2.3.2 Phương pháp thí nghiệm tủa enzyme bằng cồn 960 39 3.2.3.3 Phương pháp thí nghiệm tủa bằng muối Ammonium sulfate 40 3.2.3.4 Phương pháp thí nghiệm tủa bằng aceton 41 3.2.4 Phương pháp xác định tỉ lệ cồn 960, nồng độ muối (NH4)2SO4 và tỉ lệ aceton tối ưu để tủa enzyme bromelain 42 3.2.5 Phương pháp xác định pH, nhiệt độ tối ưu và độ bền nhiệt cho hoạt động của enzyme bromelain 42 3.2.5.1 Xác định pH tối ưu cho hoạt động của bromelain 42 3.2.5.2 Xác định nhiệt độ tối ưu cho hoạt động của bromelain 42 3.2.5.3 Khảo sát độ bền nhiệt 43 3.2.6 Cố định enzyme bromelain chất Natrialginate bằng phương pháp nhốt 43 3.2.6.1 Tạo dung dịch Natrialginate 3% 43 3.2.6.2 Tiến hành cố định 43 3.2.6.3 Phương pháp xác định hiệu suất cố định protein và hiệu suất cố định hoạt tính của enzyme cố định 43 3.2.7 Phương pháp khảo sát ảnh hưởng của các yếu tố lý hoá đến hoạt tính của enzyme bromelain được cố định Natrialginate 44 3.2.7.1 Khảo sát ảnh hưởng của pH 44 3.2.7.2 Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ 45 3.2.7.3 Khảo sát độ bền nhiệt 45 3.2.8 Khảo sát số lần tái sử dụng bromelain cố định Natrialginate 45 3.2.9 Bước đầu tinh sạch enzyme bromelain chồi dứa bằng sắc ký lọc gel 46 3.2.9.1 Nguyên tắc 46 3.2.9.2 Thiết bị và hóa chất 46 3.2.9.3 Các bước tiến hành 47 3.2.9.4 Tính hiệu suất về hoạt tính enzyme protease và độ tinh sạch của enzyme sau tinh sạch bằng sắc ký lọc gel 49 3.2.10 Xác định trọng lượng phân tử enzyme bromelain bằng phương pháp điện di SDS - PAGE 49 3.2.10.1 Nguyên tắc 50 3.2.10.2 Thiết bị và hóa chất 50 3.2.10.3 Phương pháp 52 3.2.10.4 Xác định trọng lượng phân tử của protein 54 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 55 4.1 HÀM LƯỢNG PROTEIN VÀ HOẠT TÍNH ENZYME BROMELAIN DỊCH CHIẾT THÔ CÁC BỘ PHẬN TRÊN QUẢ DỨA 55 Chương 5: Kết luận và kiến nghị Nhiệt độ tối ưu: 500C Độ bền nhiệt: % hoạt tính được giữ lại ủ enzyme ở 180 phút 5.48 %  Đối với dịch enzyme tủa bằng aceton tỉ lệ tối ưu : có: Hoạt tính riêng: 2.95 U/mg pH tối ưu: Nhiệt độ tối ưu: 600C Độ bền nhiệt: % hoạt tính được giữ lại ủ enzyme ở 180 phút 8.38 %  Enzyme bromelain nhốt chất mang Natrialginate Hoạt tính riêng: 2.31 U/mg pH tối ưu: Nhiệt độ tối ưu:700C Độ bền nhiệt: % hoạt tính được giữ lại ủ enzyme ở 180 phút 13.5 % Số lần tái sử dụng: % hoạt tính được giữ lại sau lần tái sử dụng 10.44 %  Sau qua sắc ký Hiệu suất về hoạt tính dịch tủa cồn được tinh so với chế phẩm thô là 55.97% Độ tinh của enzyme tăng lên 3.33 lần so với chế phẩm thô Hiệu suất về hoạt tính dịch tủa muối (NH4)2SO4 được tinh so với chế phẩm thô là 60.27% Độ tinh của enzyme tăng lên 3.54 lần so với chế phẩm thô Hiệu suất về hoạt tính dịch tủa aceton được tinh so với chế phẩm thô là 49.43 % Độ tinh của enzyme tăng lên 3.05 lần so với chế phẩm thô Trang 88 Chương 5: Kết luận và kiến nghị 5.2 KIẾN NGHỊ Khảo sát thêm các phương pháp tủa lắng tủa đẳng điện, lắng tủa chất đa điện phân Tiến hành thử nghiệm các phương pháp khác để loại muối khỏi chế phẩm, để thu được enzyme bromelain có độ tinh cao Tiến hành chạy sắc ký với loại gel khác Bio-Gel P-100 nhằm tìm loại gel tớt để phân tích enzyme bromelain cho kết quả tinh Tinh tiếp tục enzyme bromelain sắc ký trao đổi ion sau qua sắc ký lọc gel Nghiên cứu tạo gel Natrialginate với các kích thước khác để thu được hạt gel cho hiệu suất cố định hoạt tính bromelain cao Tiến hành cố định enzyme bromelain các phương pháp cố định khác nhằm tìm phương pháp tốt Trang 89 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Trần Thị Hồng Châu, 2005 Báo cử nhân khoa học ngành sinh học: Tinh sạch enzyme Carboxymathyl Cellulase từ canh trường nuôi cấy nấm Trichoderma viride Trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên Tp.HCM Phạm Thị Trân Châu, Phan Tiến Hoà và Nguyễn Thị Bảo, 1987 Thành phần và một số tính chất của chế phẩm bromelain chồi ngọn Dứa tây (Ananas comosus L – Group Queen) Tạp chí sinh học, trang – Dương Thị Hương Giang, 2004 Giáo trình thực tập công nghệ enzyme Trường Đại Học Cần Thơ Dương Thị Hương Giang, Lê Thanh Hùng, Võ Văn Song Toàn, Sonia Beekmans, Edilbert Van Driessche Trần Phước Đường Đánh giá các phương pháp ly trích enzyme bromelain từ nước khóm thơ Tuyển tập cơng trình nghiên cứu khoa học, Trường Đại Học Cần Thơ Nguyễn Văn Kế, 2001 Cây ăn quả nhiệt đới, tập Nhà xuất bản Nông nghiệp, Tp.HCM Nguyễn Đức Lượng, 2004 Công nghệ enzyme NXB Đại học Quốc gia Tp.HCM Lê Thanh Mai, 1997 Nghiên cứu bromelain và đường ứng dụng của chúng, luận án phó tiến sĩ sinh học Trường Khoa Học Tự Nhiên, ĐH Quốc Gia TP.HCM Diệp Quỳnh Như, Nguyễn Diên Sanh, tài liệu thực tập Công nghệ enzyme protein Viện Sinh Học Nhiệt Đới (Đào tạo thạc sĩ) Lưu hành nội Nguyễn Văn Rư – Nguyên Xuân Thắng Nghiên cứu sự phân giải protid thực phẩm của các chế phẩm pancreatin, papain và hỗn hợp của chúng Bộ môn hoá sinh – vi sinh, Trường Đại Học Dược Hà Nội 10 Nguyễn Tiến Thắng, 2003 Một số kỹ thuật phòng thí nghiệm sinh học Tủ sách Viện Sinh Học Nhiệt Đới 11 Ngũn Tiến Thắng, 2004 Giáo trình cơng nghệ enzyme Tủ sách trường ĐH Nông Lâm TP.HCM 12 PGS – TS Đồng Thị Thanh Thu, 2002 Giáo trình sinh hoá bản Tủ sách Đại Học Khoa Học Tự Nhiên Tp.HCM 13 Trần Thế Tục và Vũ Mạnh Hải, 2000 Kỹ thuật trồng dứa Nhà xuất bản Nông nghiệp 14 Lê Ngọc Tú, 2002 Hoá sinh Công Nghiệp NXB Khoa học và Kĩ thuật 15 Lê Ngọc Tú, La Văn Chứ, Phạm Thị Trân Châu, Nguyễn Lân Dũng, 1982 Enzym vi sinh vật Nhà xuất bản khoa học kỹ thuật TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI 16 Anthony J and Cichoke D.C, 1998 Bromelain Keats Publising, Inc New Canaan, Connecticut 17 Chandler D.S anh Mynott T.L, 1998 Bromelain protects piglets from diarrhea caused by oral challege with K88 positive enterotoxigenic Eschrichia Coli Gut, pp: 196-202 18 Liang H.H, Huang H.H, Kwok K.C, 1999 Properties of tea-polyphenol-complexed bromelain Food Research International 32, pp: 545-551 19 Nielsen P.M, Petersen D.N, Dambmanm C, 2001 Improved Method for Determining Food Protein Degree of Hyrolysis Journal of food science, Vol.66, No.2, pp: 642-646 20 Rubens Monti, Carmelita A Basilio, Henrique C Trevisan and Jonas, Purification from fresh latex of Carica papaya, Braz Arch Biol Tech., Vol 43, 501-507, 2000 21 Salem F.M.A, Somaya M.A.A, Seliem E.I, 1995 Manufacturing of fish sauceby proteolyic enzymes Department of food technology in national reseach centre, Dokki, Cairo, Egypt 22 Stein Ivar Aspmo, Svein Jarie Horn, Vincent G.H, Eijnk, 2004 Enzymatic hydrolysis of Athantic cod (Gadus marhua L.) viscera Process Biochmistry PHỤ LỤC Phụ lục Đường chuẩn Albumin Phụ lục Đường chuẩn Tyrosin Phụ lục Phân tích hàm lượng protein và hoạt tính enzyme các bộ phận quả dứa ANOVA Table for Ham luong by Bo phan tren qua dua Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 323.649 107.883 744.53 Within groups 1.1592 0.1449 Total (Corr.) 324.808 11 All F-ratios are based on the residual mean square error P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for Ham luong by Bo phan tren qua dua Level cui mat thit choi Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups X 20.84 X 21.02 X 25.13 X 33.65 ANOVA Table for Hoat tinh by bo phan tren qua dua Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 8030.26 2676.75 9709.82 0.0000 Within groups 2.2054 0.275675 Total (Corr.) 8032.47 11 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Hoat tinh by bo phan tren qua dua Level cui mat thit choi Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups X 57.54 X 70.83 X 89.66 X 126.29 Phụ lục Phân tích ảnh hưởng tỉ lệ tủa cồn 960 lên hoạt tính enzyme bromelain ANOVA Table for Hoat tinh by Ti le tua Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 26230.2 5246.05 187.47 0.0000 Within groups 335.804 12 27.9837 Total (Corr.) 26566.0 17 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Hoat tinh by Ti le tua Ti le tua Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups 1:01 167.85 1:06 178.32 1:02 199.34 1:03 220.71 1:05 240.65 1:04 277.12 X X X X X X Phụ lục Phân tích ảnh hưởng pH (dịch tủa cồn) lên hoạt tính enzyme ANOVA Table for Hoat tinh by pH Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 29131.9 7282.98 3826.94 0.0000 Within groups 19.0308 10 1.90308 Total (Corr.) 29150.9 14 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Hoat tinh by pH pH Count Method: 95.0 percent LSD Mean Homogeneous Groups 10 189.57 210.08 231.33 278.63 309.1 X X X X X Phụ lục Phân tích ảnh hưởng nhiệt độ (dịch tủa cồn) lên hoạt tính enzyme ANOVA Table for Hoat tinh by Nhiet Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 71817.2 14363.4 13195.22 0.0000 Within groups 13.0624 12 1.08853 Total (Corr.) 71830.2 17 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Hoat tinh by Nhiet Nhiet Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups 30 125.78 80 161.58 40 190.05 70 243.55 50 265.41 60 310.68 X X X X X X Phụ lục Phân tích ảnh hưởng nồng độ tủa muối lên hoạt tính enzyme bromelain ANOVA Table for Hoat tinh by Nong muoi Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 39046.9 6507.82 1329.78 0.0000 Within groups 68.5146 14 4.8939 Total (Corr.) 39115.4 20 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Hoat tinh by Nong muoi Nong muoi Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups 80 190.65 75 234.34 50 240.59 70 267.68 X 55 269.14 X 65 288.33 60 338.99 X X X X X Phụ lục Phân tích ảnh hưởng pH (dịch tủa muối) lên hoạt tính enzyme ANOVA Table for Hoat tinh by pH Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 33343.4 8335.84 4.29 Within groups 19449.7 10 1944.97 Total (Corr.) 52793.1 14 All F-ratios are based on the residual mean square error P-Value 0.282 Multiple Range Tests for Hoat tinh by pH pH Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups 10 192.14 X 232.76 XX 247.31 XX 289.22 XX 329.07 X Phụ lục Phân tích ảnh hưởng nhiệt độ (dịch tủa muối) lên hoạt tính enzyme ANOVA Table for Hoat tinh by Nhiet Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 63119.1 12623.8 12145.49 0.0000 Within groups 12.4726 12 1.03938 Total (Corr.) 63131.6 17 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Hoat tinh by Nhiet Method: 95.0 percent LSD Mean Homogeneous Groups Nhiet Count 80 182.34 30 195.12 70 255.27 60 296.75 40 311.96 50 342.6 X X X X X X Phụ lục 10 Phân tích ảnh hưởng tỉ lệ tủa aceton lên hoạt tính enzyme bromelain ANOVA Table for Hoat tinh by Ti le tua Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 27090.4 5418.08 1537.41 0.0000 Within groups 42.29 12 3.52417 Total (Corr.) 27132.7 17 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Hoat tinh by Ti le tua Ti le tua Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups 1:01 134.85 1:02 167.77 1:06 198.32 1:03 210.98 1:04 228.34 1:05 253.22 X X X X X X Phụ lục 11 Phân tích ảnh hưởng pH (dịch tủa aceton) lên hoạt tính enzyme ANOVA Table for Hoat tinh by pH Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 27286.9 6821.72 4652.91 0.0000 Within groups 14.6612 10 1.46612 Total (Corr.) 27301.6 14 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Hoat tinh by pH pH Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups 10 101.46 149.12 168.85 181.39 232.35 X X X X X Phụ lục 12 Phân tích ảnh hưởng nhiệt độ (dịch tủa aceton) lên hoạt tính enzyme ANOVA Table for Hoat tinh by Nhiet Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 56699.6 11339.9 6360.80 0.0000 Within groups 21.3934 12 1.78278 Total (Corr.) 56721.0 17 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Hoat tinh by Nhiet Nhiet Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups 30 103.37 80 175.52 40 185.41 70 225.77 50 236.78 60 282.14 X X X X X X Phụ lục 13 Phân tích ảnh hưởng pH lên hoạt tính enzyme cố định ANOVA Table for Hoat tinh by pH Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 7661.27 1915.32 2002.84 0.0000 Within groups 9.563 10 0.9563 Total (Corr.) 7670.83 14 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Hoat tinh by pH pH Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups 75.74 83.75 10 100.26 125.17 133.72 X X X X X Phụ lục 14 Phân tích ảnh hưởng nhiệt độ lên hoạt tính enzyme cố định ANOVA Table for Hoat tinh by Nhiet Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 16299.6 3259.93 5889.25 0.0000 Within groups 6.64247 12 0.553539 Total (Corr.) 16306.3 17 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Hoat tinh by Nhiet Nhiet Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups 30 32.58 40 43.35 50 52.16 X 80 52.43 X 60 97.24 70 115.86 X X X X ... động enzyme chồi dứa Cố định enzyme bromelain Natrialginate phương pháp tủa muối Ammonium sulfate 1.2 MỤC TIÊU ĐỀ TÀI 1.2.1 Mục tiêu tổng quát Tách chiết tinh enzyme bromelain từ chồi dứa Cố định. .. Natrialginate So sánh hàm lượng hoạt tính enzyme bromelain cố định với hàm lượng hoạt tính enzyme trước cố định Tinh enzyme bromelain Xác định trọng lượng phân tử enzyme bromelain phương pháp điện di 1.3... để tủa enzyme bromelain Xác định pH, nhiệt độ tối ưu độ bền nhiệt cho hoạt động enzyme bromelain So sánh tác nhân tủa phần chồi dứa sau tủa Cố định enzyme bromelain Natrialginate So sánh hàm