nuôi cấy mô và tế bào thực vật

A ĐẶT VẤN ĐỀ Các kỉ thuật tạo giống trồng truyền thống lai tạo chọn lọc nhân tạo, người sử dụng hàng ngàn năm qua để tạo giống trồng có đặc tính nơng học thích hợp riêng biệt Tuy nhiên, kỉ thuật đòi hỏi nhiều thời gian phải trải qua nhiều hệ, có đặc tính mong muốn loại bỏ tính trạng không mong muốn Nhưng vấn đề lại đặt trải qua nhiều hệ vậy, suất giống bắt đầu suy giảm khơng đáp ứng nhu cầu người Hơn nữa, với tốc độ thị hóa diện tích đất nơng nghiệp ngày bị thu hẹp để xây dựng cơng trình, nhà máy Như vậy, làm giảm sản lượng nông nghiệp, ảnh hưởng đến an ninh lương thực quốc gia Với thành tựu mà sinh học đạt năm vừa qua, đặc biệt lĩnh vực nuôi cấy mô tế bào làm tăng suất giống trồng Với kỉ thuật nuôi cấy mô tế bào, tạo số lượng giống lớn, bệnh, cho suất cao Đồng thời thông qua nuôi cấy mơ tế bào, trì bảo tồn nhiều gen quý hiếm, nhân giống nhiều lồi hoa có chất lượng tốt, nhiều lồi dược liệu quí, đáp ứng nhu cầu người Trên giới, nuôi cấy mô tế bào đạt nhiều thành tựu quan trọng Ở nước ta, năm vừa qua nuôi cấy mô quan tâm nghiên cứu nhiều nhà khoa hoc Chúng ta xây dựng thành cơng nhiều quy trình nhân giống loại hoa, trồng Tuy nhiên nuôi cấy mô nước ta thật phát triển sở nghiên cứu, viện mà chưa áp dụng sở sản xuất Vì lí đó, chọn đề tài “nuôi cấy mô tế bào thực vật” để nhằm tìm hiểu rõ chất, qui trình ni cấy giúp nhiều người có hiểu biết nuôi cấy mô tế bào hi vọng nuôi cấy mô tế bào áp dụng rộng rãi sản xuất giống trồng B NỘI DUNG I KHÁI NIỆM VỀ NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT Định nghĩa khái niệm 1.1 Định nghĩa Nuôi cấy mô tế bào thực vật phạm trù chung cho tất loại nuôi cấy nguyên liệu thực vật hoàn toàn vi sinh vật môi trường dinh dưỡng nhân tạo, điều kiện vơ trùng 1.2 Các khái niệm Trong ni cấy mơ tế bào thực vật có số thuật ngữ thường sử dụng: - Bộ genom: bao gồm toàn vật liệu thông tin di truyền chứa đựng tế bào hay quan tử Có genom nhân, genom lục lạp genom ti thể - Cấy chuyển: Chuyển tế bào, mô hay mẫu thực vật ni cấy sang bình ni có chứa mơi trường kết hợp với việc tách nhỏ hay pha loãng mật độ để nhân số lượng Mẫu thực vật khử trùng nuôi cấy lần gọi mẫu nuôi cấy bước Mô sẹo phát sinh từ mẫu gọi mơ sơ cấp, gọi ni cấy sơ cấp Sau bước cấy chuyển lần gọi mơ cấy chuyển thứ hai, - Chồi phụ, chồi bất định: Là chồi hay mầm phát triển từ vùng mô khác từ hợp tử - Dòng chủng tế bào: Là tập hợp tế bào có nguồn gốc từ tế bào đơn, nuôi cấy liên tục điều kiện định, tương đối ổn định - Phát sinh quan: Là trình xuất quan thực vật rễ, chồi từ mô nuôi cấy hay mô sẹo - Phân hóa phơi: Là q trình phát triển hịan chỉnh từ mơ sẹo hay tế bào đơn, thơng qua giai đoạn phát triển phơi bình thường tế bào trứng thụ tinh Vì người ta gọi dạng phơi hay phơi vơ tính 2 Ngun lí khoa học 2.1 Tính tồn tế bào Đầu kỉ XX, Gottlieb Haberlandt (1920), nhà thực vật học người Đức, đặt móng cho ni cấy mơ tế bào thực vật Ơng đưa giả thuyết tính tồn tế bào sách “thực nghiệm nuôi cấy tế bào tách rời” Theo tác giả, tế bào sinh vật mang tồn lượng thơng tin di truyền cần thiết đủ sinh vật Khi gặp điều kiện thích hợp, tế bào phát triển thành cá thể hồn chỉnh Tính tồn tế bào mà Haberlandt đưa sở lí luận nuôi cấy mô tế bào thực vật Cho đến khoa học hoàn toàn chứng minh khả tái sinh thể thực vật hoàn chỉnh từ tế bào riêng rẽ 2.2 Sự phân hóa phản phân hóa Q trình phát sinh hình thái ni cấy thực vật invitro thực chất kết phân hóa phản phân hóa tế bào Cơ thể thực vật trưởng thành chỉnh thể thống bao gồm nhiều quan có chức khác nhau, có nhiều loại tế bào khác Tuy nhiên tất tế bào bắt nguồn từ tế bào tế bào phơi sinh Sự phân hóa tế bào chuyển hóa tế bào phơi sinh thành tế bào mơ chun hóa, đảm nhận chức khác Ví dụ, mơ dậu làm nhiệm vụ quang hợp cịn mơ bì có chức bảo vệ, nhu mơ làm nhiệm vụ dự trữ… Q trình phân hóa tế bào biểu thị Tế bào phơi sinh Tế bào dẫn Tế bào phân hóa chức Tuy nhiên, tế bào phân hóa thành mơ chức chúng khơng hồn tồn khả phân chia Trong trường hợp cần thiết, điều kiện thích hợp chúng lại trở dạng tế bào phôi sinh phân chia mạnh mẽ Q trình gọi phản phân hóa tế bào, ngược lại với q trình phân hóa tế bào Phân hóa tế bào Tế bào phơi sinh Tế bào dẫn Tế bào chun hóa Phản phân hóa tế bào Ví dụ, ni cấy mơ thuốc lá, tế bào phân hóa gặp điều kiện thích hợp mơi trường phản phân hóa phân chia liên tục tạo thành mơ sẹo Các tế bào mơ sẹo khơng cịn chức tế bào mô Nếu chuyển tế bào sang môi trường khác, tùy theo thành phần môi trường mà tế bào mô sẹo lại phấn hóa theo hướng hình thành chồi, rễ tạo hồn chỉnh Về chất q trình phân hóa phản phân hóa q trình hoạt hố, phân hóa gen Tại thời điểm q trình phát triển cá thể, có số gen hoạt hóa (mà trước bị ức chế) ta tính trạng mới, số gen khác lại bị đình hoạt động Điều xảy theo chương trình mã hóa cấu trúc phân tử AND tế bào Mặt khác tế bào nằm khối mô thể thường bị ức chế tế bào xung quanh Khi tách riêng rẽ tế bào, thuận lợi gen hoạt hóa Q trình phân hóa xảy theo chương trình định sẵn 2.3 Môi trường nuôi cấy Môi trường nuôi cấy điều kiện tối cần thiết, yếu tố định cho phân hóa phản phân hóa tế bào quan ni cấy Mơi trường dinh dưỡng phải có đầy đủ chất dinh dưỡng, chất cần thiết cho phân chia, phân hóa tế bào sinh trưởng bình thường Mơi trường phải có mặt đầy đủ chất sau: 2.3.1 Các nguyên tố đa lượng Các nguyên tố đa lượng cần thiết cho sinh trưởng phát triển là: N, P, K, S, Mg, Ca, C chúng tham gia vào cấu tạo tế bào tham gia vào q trình chuyển hóa chất Nồng độ thay đổi tùy theo nhu cầu lồi Nhưng thơng thường nồng độ ngun tố nói mơi trường khoảng 30ppm Có nhiều mơi trường có thành phần tỉ lệ chất khác Tùy thuộc vào đối tượng mà sử dụng như: Dung dịch Knop (Gauthret 1959), Murashige Skoog (1962), Gamborg (1968)… 2.3.2 Các nguyên tố vi lượng Cu, Zn, Mn, Mo, Bo, Co, I nguyên tố vi lượng thường hay sử dụng Chúng đóng vai trị quan trọng hoạt động enzyme trình trao đổi chất 2.3.3 Các vitamin Mặc dù xanh có khả tổng hợp vitamin, không đủ cho nhu cầu nên cần phải bổ sung thêm vào môi trường 2.3.4 Các chất tự nhiên Các chất hữu thường hay sử dụng là: nước dừa, dịch chiết nấm men, dịch chiết khoai tây 2.3.5 Các chất điều tiết sinh trưởng Các chất điều tiết sinh trưởng yếu tố quan trọng môi trường định đến kết qủa ni cấy Trong nhóm chất điều tiết sinh trưởng thực vật: Auxin, gibberalin, xytokinin, ethylene, axit abxixic auxin xytokinin sử dụng nhiều Auxin kích thích hình thành mơ sẹo, xuất rễ bất định, kích thích dãn tế bào Xytokinin: kích thích phân chia tế bào định phân hóa chồi Tỷ lệ Auxin/xytokinin định phân hóa mơ theo hướng tạo rễ hay tạo chồi hay tạo mô sẹo 2.3.6 Các chất làm đông cứng môi trường Để làm giá thể cho môi trường nuôi cấy, người ta thường sử dụng agar (thạch) Agar loại polysaccarit tảo Ở 30 0C thạch ngậm nước nên trạng thái sol nhiệt độ 400C chuyển sang trạng thái gel Khi dạng gel thạch đảm bảo cho ion vận chuyển 2.3.7 Độ pH môi trường pH môi trường dinh dưỡng ảnh hưởng trực tiếp tới trình thu nhận chất dinh dưỡng từ mơi trường vào tế bào Vì vậy, loại môi trường định loại nuôi cấy phải điều chỉnh pH mơi trường cho thích hợp 2.4 Điều kiện vơ trùng Nuôi cấy invitro nuôi cấy điều kiện vô trùng Nếu không đảm bảo tốt điều kiện vô trùng mẫu nuôi cấy môi trường nuôi cấy bị nhiễm mơ ni cấy bị chết Điều kiện vơ trùng có ý nghĩa định đến thành bại ni cấy mơ II NI CẤY MƠ TẾ BÀO BẰNG KỈ THUẬT VI NHÂN GIỐNG INVITRO Khái niệm Nhân giống invitro hay vi nhân giống (micropropagation) bốn lĩnh vực ứng dụng cơng nghệ tế bào thực vật, bao gồm: Làm virut, nhân nhanh giống trồng quí, sản xuất chuyển hóa hợp chất tự nhiên, cải lương mặt di truyền giống trồng Trong phạm vi luận mình, tơi tập trung vào lĩnh vực nhân nhanh giống trồng nơng nghiệp, lâm nghiêp, y học Trong kỉ thuật nhân nhanh ứng dụng nhằm mục đích sau: + Duy trì nhân nhanh kiểu gen q làm vật liệu cho công tác chọn giống + Nhân nhanh trì cá thể đầu dịng tốt để cung cấp hạt giống loại trồng khác lương thực có củ, loại rau, hoa, cảnh, dược liệu thuộc nhóm thân thảo + Nhân nhanh kiểu gen quí giống lâm nghiệp gốc ghép nghề trồng ăn quả, cảnh thuộc nhóm thân gỗ + Nhân nhanh điều kiện vô trùng cách li tái nhiễm, kết hợp với làm virut + Bảo quản tập đồn giống, nhân giống vơ tính lồi giao phấn ngân hàng gene Những ưu việt nhân giống invitro Hệ số nhân cao, rút ngắn thời gian đưa giống vào sản xuất Hệ số nhân loài khác nhau, nhiên thường nằm khoảng đến 1012/ năm Trong thời gian ngắn cho số lượng lớn giống diện tích nhỏ Có tiềm cơng nghiệp hóa cao, khơng phụ thuộc q nhiều vào thời tiết, mùa vụ Thuận tiện hạ giá thành sản xuất Qui trình nhân giống invitro Về nguyên tắc, quy trình nhân giống vơ tính in vitro gồm giai đoạn : 2.1 Giai đoạn 1: Vào mẫu cấy gây: Đây giai đoạn khó khăn có ý nghĩa định tồn quy trình nhân giống Mục đích giai đoạn phải tạo nguyên liệu thực vật vô trùng để đưa vào nuôi cấy in vitro Giai đoạn phải đảm bảo yêu cầu sau: - Tỷ lệ nhiễm thấp - Tỷ lệ sống cao - Mô tồn sinh trưởng tốt Để khử trùng mô nuôi cấy, phương pháp phổ biến sử dụng hoá chất có khả diệt vi sinh vật Hiệu khử trùng chất phụ thuộc vào thời gian, nồng độ xử lý khả xâm nhập chúng vào ngõ ngách bề mặt mẫu cấy Hoá chất lựa chọn để khử trùng mẫu cấy phải đảm bảo hai thuộc tính: có khả diệt vi sinh vật tốt khơng có mức độ độc thấp mô thực vật Mẫu cúc cấy gây sau tuần nuôi cấy Mẫu cúc cấy gây sau tuần nuôi cấy 2.2 Giai đoạn 2: Nhân nhanh Chồi cúc nhânh nhanh sau 2-3 tuần Giai đoạn nhằm kích thích mơ ni cấy phát sinh hình thái tăng nhanh số lượng thơng qua đường: hoạt hoá chồi nách, tạo chồi bất định hay tạo phơi vơ tính Để tăng hệ số nhân chồi, phải đưa thêm vào môi trường dinh dưỡng chất điều tiết sinh trưởng: auxin, xytokinin, gibberellin, hợp chất tự nhiên kết hợp với yếu tố nhiệt độ, ánh sáng 2.3 Giai đoạn 3: Kích thích rễ tạo in vitro hồn chỉnh Mơi trường nuôi cấy thường bổ sung lượng nhỏ auxin nhóm hormon thực vật có vai trị sinh lý tạo rễ bất định cho mô nuôi cấy, IAA; IBA; a-NAA; 2,4 D sử dụng nhiều Giai đoạn thường kéo dài từ - tuần C©y in vitro sau - tuần rễ Cây invitro sau tuần rễ chuẩn bị vờn ơm Giai đoạn 4: Giai đoạn huấn luyện thích nghi C©y invitro thÝch nghi víi m«i trêng 10 Đây giai đoạn cuối trình vi nhân giống, định khả ứng dụng trình vào thực tiễn sản xuất Cây chuyển từ điều kiện vơ trùng phịng thí nghiệm ngồi điều kiện tự nhiên nên cần phải có q trình huấn luyện để thích nghi, tồn phát triển Thời gian tối thiểu cho thích nghi - tuần, thời gian cần chăm sóc, bảo vệ cẩn thận trước bất lợi nước, nhiễm khuẩn, nấm Yêu cầu giai đoạn là: - Cây ống nghiệm đạt tiêu chuẩn hình thái định - Có giá thể tiếp nhận in vitro thích hợp, đạt yêu cầu tơi xốp, thoát nước - Phải giữ ẩm cho cây, đưa từ ống nghiệm cần che chắn để giữ ẩm tránh ánh sáng mạnh Cụ thể độ ẩm đất phải đạt 76 - 80%, độ ẩm khơng khí phải đạt 82 - 85% III THÀNH TỰU QUỐC TẾ VÀ TRONG NƯỚC Thành tựu quốc tế Kỉ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật khởi xướng vào năm cuối kỉ 19, trải qua 100 năm phát triển Qua 100 năm phát triển nuôi cấy mô tế bào thực vật đạt nhiều thành tựu to lớn nhiều nước giới Đặc biệt nước như: Mỹ, Hà Lan, Nhật, Malaysia, Trung Quốc, Đài Loan cơng nghệ ni cấy mô tế bào thực vật đạt nhiều thành tựu quan trọng Trong lĩnh vực nhân giống hoa: Xây dựng thành cơng nhiều quy trình nhân nhanh lồi hoa có chất lượng tốt như: Các lồi hoa lan, hoa cúc, hoa ly, hoa hồng, hoa đồng tiền với số lượng lớn, đáp ứng nguồn giống hoa cho sở sản nuôi trồng hoa Bảo tồn nhân giống thành cơng nhiều lồi dược liệu q như: Sa nhân, sâm 11 Tạo nhiều giống trồng có phẩm chất suất cao như: dưa hấu không hạt, khoai tây, đu đủ, cà chua, dứa, cà phê, lúa Thành tựu nước Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật (NCMTBTV) du nhập vào nước ta từ năm 1960 Miền Nam đầu năm 1970 Miền Bắc, thực phát triển từ năm 1980 Tuy áp dụng năm gần nhiên thu nhiều thành tựu quan trọng, đáng kể việc nhân nhanh loại cây: cà phê, cỏ ngọt, chuối (Viện công nghệ sinh học), dứa (Viện nghiên cứu dầu có dầu – Viện Khoa Học Việt Nam), mía đường (trung tâm công nghệ sinh học, viện nghiên cứu dầu có dầu),nho khơng hạt (trung tâm cơng nghệ sinh học), dâu tằm, măng cụt, lúa, khoai tây loại có củ khác Đối với giống hoa thành công việc xây dựng quy trình nhân giống nhiều giống hoa có chất lượng tốt như: hoa phong lan, hoa cúc, hoa ly, hoa cẩm chướng, hoa đồng tiền Bên cạnh thu nhiều thành tựu đáng ghi nhận việc nhân giống nhiều thuốc quí như: sa nhân, sâm, lô hội Với công nghệ nuôi cấy mô tế bào suất người lao động nông nghiệp tăng thêm 2500 lần – khơng có cơng nghệ sánh Ở Miền Bắc, nhân vơ tính thực vật ứng dụng hầu hết nông lâm sản bảo tồn thành công nguồn gen loài gỗ quý như: Vù Hương loài gỗ tách chiết tinh dầu dược, mỹ phẩm Cây Đăng lấy gỗ, Chè vằng loại chè khó trồng điều kiện tự nhiên Kĩ thuật giúp lai tạo thành công giống lúa chịu hạn DR1, nhân nhiều loại khoai tây, mía 12 Chỉ với người, phịng ni cấy mô, tế bào thực vật – trung tâm giống trồng phú yên tạo 500.000 lan theo yêu cầu nhà nuôi trồng Từ năm 2001 đến nay, sở khoa học công nghệ Lạng Sơn, hàng năm cung cấp hàng vạn giống bạch đàn phục vụ cơng tác trồng rừng tồn tỉnh Hiện 100%, nông dân Đà Lạt sử dụng giống từ nuôi cấy mô Năm 2008, công nghệ nuôi cấy mơ tế bào có bước đột phá Nhân thành công giống sâm Ngọc linh quý hiếm, khơi phục nhiều lồi Lan rừng q khỏi nguy tuyệt chủng, đặc biệt loài lan Hài Hồng, lồi lan có hương thơm giới Lan vũ nữ Lan Hồ Điệp Lan Hài Hồng Sâm Ngọc Linh nuôi cấy mô 13 IV PHƯƠNG HƯỚNG HIỆN TẠI VÀ TƯƠNG LAI Những vấn đề cần giải quyêt 1.1 Tính bất định mặt di truyền Mục đích nhân giống invitro tạo quần thể đồng với số lượng lớn Tuy nhiên số trường hợp, phương pháp tạo biến dị soma Tần số biến dị hồn tồn khác khơng lặp lại, tạo ni cấy tế bào mơ sẹo có nhiều biến dị so với nuôi cấy chồi đỉnh 1.2 Sự nhiễm mẫu Các vi sinh vật nấm, vi khuẩn nói chung bị loại trừ khử trùng mẫu nuôi cấy Tuy nhiên, mẫu nhiễm virus khó loại trừ vi sinh vật gây nguy hại sau Bởi vì, vơ tình nhân nhanh số lượng giống lớn bị nhiễm bệnh trồng trọt Biện pháp khắc phục Sử dụng mô phân sinh đỉnh để tiến hành nuôi cấy, sử dụng đỉnh sinh trưởng chúng khơng có mơ dẫn truyền nên tránh lây nhiễm nhân lên virut Trồng mẫu nơi mát khơ hạn chế lây nhiễm virut Ngồi sử dụng số chất kháng sinh để chống nhiễm khuẩn nấm mốc Tuy nhiên, mô thực vật mẫn cảm với kháng sinh có phản ứng lên kiểu di truyền cần phải thận trọng sử dụng kháng sinh Chất kháng sinh thường gây hủy hoại ty thể, lạp thể nên có ảnh hưởng đến di truyền tế bào chất 1.3 Việc sản sinh chất độc từ mô nuôi cấy 14 Trong nuôi cấy mô thường quan sát thấy tượng hố nâu hay đen mẫu, mẫu khuyếch tán môi trường Hiện tượng mẫu có chứa nhiều chất tanin hydrylphenol (mơ già thường gặp mô non) Phương hướng khắc phục Bổ sung than hoạt tính vào mơi trường ni cấy (0.1 – 0.3%), phương pháp đặc biệt có hiệu lồi phong lan Tuy nhiên, than hoạt tính làm chậm q trình nhân nhanh hấp thụ số chất điều tiết sinh trưởng dinh dưỡng cần thiết khác Có thể bổ sung polyvinyl pyrolidone (PVP), hợp chất có tác dụng khử nâu hóa tốt mẫu số ăn Sử dụng mẫu cấy từ mô non Gây vết thương nhỏ khử trùng Ngâm mẫu vào dung dịch ascobic xytric vài trước cấy Nuôi cấy mẫu môi trường lỏng, nồng độ O thấp, ánh sáng (khoảng - tuần) Chuyển mẫu sang mơi trường có nồng độ chất kích thích cao 1.4 Hiện tượng thủy tinh hóa Trong quy trình nhân nhanh invitro thường xuất hiện tượng bị “thủy tinh hóa”, thân mọng nước, suốt, khó sống đưa ngồi mơi trường bị nước nhanh Cây bị thủy tinh hóa thường có hàm lượng lớp sáp bảo vệ thấp, cấu tạo có nhiều phân tử phân cực nên dễ hấp thu nước, có mật độ khí khổng cao, khí khổng có dạng trịn khơng dạng elip, dạng mở liên tục Chính vậy, dễ nước đưa môi trường nuôi cấy Phương pháp giải Để tránh tượng thủy tinh hóa tiến hành số giải pháp sau: 15 Giảm hút nước cách tăng nồng độ đường chất gây áp suất thẩm thấu cao Giảm nồng độ chất chứa nitơ môi trường Giảm sản sinh ethylen môi trường nuôi cấy Xử lí axit absixic số chất ức chế sinh trưởng khác Tăng cường độ ánh sáng, giảm nhiệt độ phịng ni Phương hướng nghiên cứu, khả triển vọng ứng dụng Nuôi cấy mô, tế bào thực vật phục vụ nhiều lĩnh vực khác đặc biệt lĩnh vực trồng như: Làm phong phú vật liệu di truyền cho công tác chọn giống Nhân nhanh trì giống cá thể có ý nghiã khoa học, có giá trị kinh tế cao Làm bệnh virut để phục tráng giống thối hóa Hiện ni cấy mơ có hướng nghiên cứu Bộ phận sử dụng ni cấy Mục đích Đỉnh chồi (Đỉnh sinh trưởng) - Tạo nhân nhanh giống đồng di truyền - Làm virut - Nghiên cứu sinh lí phát triển Hoa (Bầu noãn) - Thụ phấn ống nghiệ phục vụ lai xa - Tạo đơn bôi - Tạo đa bội Hoa đực (Bao phấn, hạt phấn) - Tạo mô sẹo đơn bội - Tạo đột biến mức đơn bội - Tạo dòng đồng hợp tử Phôi - Nuôi phôi lai xa - Nhân dòng lai xa - Phá ngủ nghỉ hạt Tế bào - Tạo đột biến mức độ tế bào - Tạo tế bào trần để lai vơ tính - Biến nạp gen - Nuôi cấy tế bào đơn Mô sẹo - Tạo phơi đơn tính 16 - Ni cấy tế bào đơn tách tế bào trần - Tạo có biến di sơma C KẾT LUẬN Ni cấy mơ phương pháp nhân giống vơ tính đảm bảo cho mang đặc tính hồn tồn giống mẹ, khơng bị nhiễm bệnh tạo số lượng lớn thời gian ngắn Hiện nay, với công nghệ nuôi cấy mô đạt nhiều thành tựu to lớn đặc biệt lĩnh vực nhân giống trồng như: Nhân nhanh số lượng giống tromng thời gian ngắn, lưu giữ bảo vệ nguồn gen q hiếm, lồi có giá trị kinh tế cao, dược liệu có ý nghĩa y học Tuy nhiên phương pháp địi hỏi có vốn đầu tư lớn, yêu cầu kỉ thuật cao, tuân thủ nghiêm ngặt bước Chính vậy, phương pháp áp dụng sở nghiên cứu viện, trung tâm nghiên cứu mà chưa áp dụng phổ biến quy mô hộ gia đình Hi vọng thời gian tới ni cấy mô áp dụng quy mô hộ gia đình, nâng cao suất lao động nơng nghiệp 17 Tài liệu tham khảo Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Quang Thạch (1998) Công nghệ sinh học thực vật Nxb Nơng nghiệp Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thị Muội (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng Nxb Nông nghiệp Lê Trần Bình (2008), Những thành tựu trồng chuyển gen Việt Nam Nxb Nguyễn Như Khanh (2002), sinh học phát triển thực vật Nxb Giáo dục Nhân giống vơ tính thực vật http://tailieu.vn/xem-tai-lieu/nhangiong-vo-tinh-o-thuc-vat-nuoi-cay-mo-te-bao-.288873.htm Ni cấy mơ tế bào http://thuviensinhhoc.com/chuyende-sinh-hoc/cong-nghe-sinh-hoc/1960-nuoi-cy-mo-va-tbao Tình hình phát triển nuôi cấy mô tế bào thực vật Hà Nội Việt Nam http://baigiang.violet.vn/present/same/entry_id/693909 Nuôi cấy mô Phong Lan http://baigiang.violet.vn/present/show? entry_id=1280864 18 ... TỰU QUỐC TẾ VÀ TRONG NƯỚC Thành tựu quốc tế Kỉ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật khởi xướng vào năm cuối kỉ 19, trải qua 100 năm phát triển Qua 100 năm phát triển nuôi cấy mô tế bào thực vật đạt... (1920), nhà thực vật học người Đức, đặt móng cho ni cấy mơ tế bào thực vật Ông đưa giả thuyết tính tồn tế bào sách ? ?thực nghiệm nuôi cấy tế bào tách rời” Theo tác giả, tế bào sinh vật mang tồn... KHÁI NIỆM VỀ NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT Định nghĩa khái niệm 1.1 Định nghĩa Ni cấy mơ tế bào thực vật phạm trù chung cho tất loại ni cấy ngun liệu thực vật hồn tồn vi sinh vật môi trường dinh