Xác định hàm lượng phẩm màu tartrazine và sunset yellow trong thực phẩm bằng phương pháp HPLC.Tartrazine (FDC), là một loại thuốc nhuộm thực phẩm nhân tạo (tổng hợp).Nó là một trong số thuốc nhuộm thực phẩm azo được làm từ các sản phẩm dầu mỏ. Tartrazine được chiết xuất từ nhựa than đá, là một dẫn xuất của nhựa đường. Tartrazine được sử dụng để cung cấp cho thực phẩm màu vàng chanh tươi sáng.
BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PHẨM MÀU TARTRAZINE VÀ SUNSET YELLOW TRONG THỰC PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC NỘI DUNG 01 Tổng quan phụ gia thực phẩm 02 Phương pháp HPLC 03 Phẩm màu tartrazine sunset yellow 04 Xác định phẩm màu Tổng quan phụ gia thực phẩm - Phụ gia thực phẩm chất tự nhiên hóa học Kéo dài thời gian bảo quản thực phẩm Tăng tính cảm quan thực phẩm Phụ gia thực phẩm có khơng có giá trị dinh dưỡng Phân loại phụ gia thực phẩm Các chất tạo Các chất bảo quản 44 55 Các chất làm bóng 66 33 Các chất ổn định Chất điều chỉnh độ acid hay độ chua 77 22 11 88 Các chất điều vị Các loại phẩm màu Các chất tạo hương thơm cho thực phẩm Phương pháp HPLC Khái niệm Nguyên tắc Ưu nhược điểm Ứng dụng Khái niệm HPLC là phương pháp Sắc ký lỏng hiệu cao HPLC kỹ thuật hóa phân tích dùng để tách, nhận biết, định lượng thành phần hỗn hợp Ưu nhược điểm - Độ nhạy cao, khả định lượng tốt - Thích hợp tách hợp chất khó bay dễ phân hủy nhiệt, tương đối đơn giản - Chi phí hiệu tác động đến môi trường Ứng dụng Định lượng chất lượng nước giải khát nước Phân tích hợp chất đa vịng Phân tích đường nước ép trái Phân tích chất bảo quản Phẩm màu tartrazine sunset yellow Phẩm màu thực phẩm Phẩm màu tartrazine Phẩm màu sunset yellow Phẩm màu thực phẩm Phẩm màu thực phẩm dùng làm phụ gia thực phẩm, để tạo cải thiện màu sắc thực phẩm Tăng tính thẩm mỹ cho ăn Thu hút người tiêu dùng Tạo sinh động Tạo đặc trưng cho ăn Phẩm màu sunset yellow Màu Sunset Yellow (FCF) màu vàng tổng hợp, dạng bột dùng cho sản phẩm thực phẩm Sunset Yellow có tơng màu vàng cam, tan tốt nước tan ethanol Nó thêm vào thực phẩm để cải thiện màu sắc, kết cấu hình thức tổng thể Trong thực phẩm, phẩm màu có 3nước dạng: Dạng Ưu điểm: Dễ lên màu, tạo màu dễ dàng Nhược điểm: Màu dạng nước dùng tốn Bạn phải cho nhiều màu để chỉnh độ đậm nhạt Dạng bột Ưu điểm: Chất màu đậm, bắt màu tốt, không bị khô màu Tiết kiệm so với màu nước hay màu gel cần chút xíu bột lên màu Nhược điểm: Khó để pha màu có sắc độ ưng ý Dễ vón cục Dạng Gel Ưu điểm: Màu gel đặc nên lên màu đậm tốn màu Nhược điểm: Khó kết hợp với số loại bột cứng; Khó pha màu Tác hại việc sử dụng màu tổng hợp • Màu tổng hợp thường có chất như: thủy ngân, chì, crom, đồng, natri clorua, toluen benzen • Sử dụng nhiều màu tổng hợp dẫn đến ngộ độc, tích lũy lâu dài dẫn đến ung thư Xác định phẩm màu Nguyên tắc Dụng cụ, hóa chất, thiết bị Cách tiến hành Tính kết Ưu nhược điểm Ngun tắc • Mẫu pha lỗng chiết nước, sau định lượng phương pháp HPLC với đầu dị UV DAD • Phạm vi: xác định hàm lượng phẩm màu tartrazine sunset yellow sử dụng mẫu thực phẩm Dụng cụ, hóa chất, thiết bị Dụng cụ thuỷ tinh thông thường phịng thí nghiệm Cân phân tích xác đến 0.0001 g Máy siêu âm Máy ly tâm Máy lắc votex Hệ thống lọc khí chân không Giấy lọc băng vàng, màng lọc 0,45 µm Dụng cụ, hóa chất, thiết bị Methanol for HPLC KH2PO4 K2HPO4, H3PO4 Cân 0,4 g NaOH 0,1N hoà tan 100 ml nước cất Dung môi pha động A: Cân 1,35g KH2PO4 1,74g K2HPO4 hòa tan 900ml nước cất, dung dịch NaOH 0,1 N điều chỉnh pH đến 7,0 lọc qua hệ thống lọc hút chân khơng, siêu âm 5÷10 phút Hệ thống sắc kí lỏng hiệu cao với detector UV DAD, cột sắc kí pha đảo C18 (250 × 4,6 ×5 µm) Dung dịch tatrazine chuẩn 1.000 g/l Dung dịch chuẩn ponceau 4R 1.000 mg/l Dung dịch chuẩn hỗn hợp 50 ml Dung dịch chuẩn hỗn hợp mg/l Dụng cụ, hóa chất, thiết bị Cách tiến hành Xử lý mẫu Lấy mẫu Xay nghiền nhỏ,trộn Cân Đánh votex Lọc Định mức Ly tâm Siêu âm Đuổi CO2 Định mức Lọc Cách tiến hành Đo mẫu trắng: • Tiến hành thực mẫu trắng (không chứa tartrazin ponceau 4R) tương tự mẫu thử Điều kiện sắc ký: • • • • Cột pha đảo C18, 250mm ᵡ 4,6mm ᵡ 5μm Detector: UV DAD bước sóng 428nm (với Tartrazine) 511nm (với Ponceau 4R) Thể tích tiêm mẫu: 20μl Pha động: A (đệm phosphate) : B (methanol) Tính kết Hàm lượng chất cần xác định mẫu X (mg/kg mg/l) tính theo cơng thức : *Trong đó: nồng độ mẫu tính dựa đường chuẩn (mg/l) f : Hệ số pha loãng mẫu m : Khối lượng mẫu phân tích.(g) V : Thể tích mẫu phân tích.(ml) Tính kết Bài tập Cân 2,5g sữa bột đem xử lí mẫu để xác định Fe, sau định mức tới 100ml Lấy 20ml dung dịch mẫu có chứa sắt cho tạo phức với thuốc thử thích hợp pha lỗng thành 50ml dung dịch đo Đo độ hấp thu dung dịch giá trị A = 0,235 A) Biết phương trình hồi qui dãy chuẩn sắt (C tính theo ) y = 0,110x + 0,002 Tính hàm lượng Fe (mg/kg) B) Biết phương trình hồi qui dãy chuẩn Fe (C tính theo mg/l) y = 0,276x – 0,008 Tính hàm lượng Fe (mg/kg) Giải A) y = 0,011x + 0,002 0,25 = 0,110x + 0,002 x = 2,1181 () = 4,2362 (mg/kg) B) y= 0,276x – 0,008 0,235 = 0,276x – 0,008 x = 0,88 88(mg/kg) Ưu nhược điểm Ưu điểm: - Nói chung có tính đặc hiệu cao, tách riêng hoạt chất - Độ nhạy cao, thời gian phân tích nhanh Nhược điểm: - Tiến hành phức tạp - Địi hỏi có trang thiết bị thuốc thử giá thành cao detector UV thường không dùng mà thường phải tạo dẫn chất ... chất tạo hương thơm cho thực phẩm Phương pháp HPLC Khái niệm Nguyên tắc Ưu nhược điểm Ứng dụng Khái niệm HPLC? ?là phương pháp Sắc ký lỏng hiệu cao HPLC kỹ thuật hóa phân tích dùng để tách, nhận...NỘI DUNG 01 Tổng quan phụ gia thực phẩm 02 Phương pháp HPLC 03 Phẩm màu tartrazine sunset yellow 04 Xác định phẩm màu Tổng quan phụ gia thực phẩm - Phụ... tiến hành Tính kết Ưu nhược điểm Ngun tắc • Mẫu pha lỗng chiết nước, sau định lượng phương pháp HPLC với đầu dị UV DAD • Phạm vi: xác định hàm lượng phẩm màu tartrazine sunset yellow sử dụng mẫu