Nghiên cứu khả năng tạo callus và tái sinh in vitro cây tỏi cô đơn allium sativum l của đảo lý sơn tỉnh quảng ngãi

SƯ P M KHOA SINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Nghiên cứu khả tạo callus tái sinh in vitro tỏi cô đơn (Allium Sativum L.) đảo Lý Sơn, tỉnh Quảng Ngãi Sinh viên thực : o n ạn Chuyên ngành : Cử nhân Sin Môi rường Lớp : 09CSM Người ướng dẫn : ThS Võ Châu Tuấn LỜI CẢM ƠN  , em xin chân thành cảm q ý ầ cô giá rườ g ại học Sư p ạm Nẵng, Khoa Sinh - Mơi rường, Tổ Sinh học thực nghiệm, gi đì v bạn bè ạo điều kiện thu n lợi mặt v t chất lẫn tinh thầ đ em có th hồn thành tốt khóa lu n tốt nghiệp Em xin đặc biệ gửi lời cảm sâ sắc chân thành nhấ đến ThS Võ Châu Tuấn S i ơ, gười rực tiếp ướng dẫn bảo t n tình cho em suốt thời gian thực khóa lu n Một lần em xin chân thành cảm ! , Sin 5/2013 i n t ực iện o n ạn M L DANH M C CÁC TỪ VIẾT TẮT DANH M C BẢNG DANH M C HÌNH ẢNH MỞ ẦU C ươ g ỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ ược nhân giống in vitro .3 1.1.1 C c p ươ 1.1.2 Ý ức nhân giống in vitro .3 ĩa nhân giống in vitro 1.2 Nuôi cấy callus .6 1.2.1 Giới thiệu chung 1.2.2 Các yếu tố ả ưở đến nuôi cấy callus .6 1.2.3 Một số ứng dụng nuôi cấy callus .9 N ôi cấ p ôi vô ệ c ụ 1.3.2 .12 12 ệc p 12 1.4 Một số nghiên cứu tái sinh in vitro ô gq ôi cấ c s 13 1.5 Giới thiệu tỏi 15 1.5.1 Phân lo i, nguồn gốc phân bố 15 52 ặc đ ểm thực vật học 15 1.5.3 Thành phần hóa học 15 1.5.4 Tác dụ ược lý .16 1.5.5 Một số nghiên cứu in vitro tỏi 17 ương ỐI ƯỢNG VÀ P ƯƠNG P ÁP NG IÊN ỨU .21 21 ối ượng nghiên cứu .21 2.2 m nghiên cứu 21 P ươ g p áp g iê cứu 21 P ươ p p 2 P ươ p p rù mẫu .22 o tỏi in vitro 22 P ươ p p o callus từ nguồn mẫu vật tỏi in vitro .22 P ươ p p â P ươ p p p p xử lý thống kê 23 P ươ a p call s 23 calll s c r ừp 23 ương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .24 3.1 3.2 Ả giá iệu khử trùng mẫu 24 ưởng chấ HS đến khả ă g ạo callus từ loại mẫu v củ câ tỏi cô in vitro 25 ưở tỏ c 4- đế o callus từ nguồn mẫu vậ câ r 26 ưởng 2,4- 3.2.2 ả ă KI đến khả ă o callus từ nguồn mẫu vậ câ ỏ c .27 ưởng 2,4- 3.2.3 3.3 Ả ưởng chấ BA đến khả ă o callus tỏ c .29 HS đến khả ă g ạo callus từ mẫu gốc thân tỏi cô 31 ưởng 2,4- 3.3.1 KI đến khả ă o callus từ gốc thân tỏi c 32 ưởng 2,4- 3.3.2 BA đến khả ă o callus từ mẫu gốc thân tỏ c 33 3.4 Ả ưởng củ việc cấy chuyề đến khả ă g si rưởng hình thái callus 35 3.5 Ả ưởng củ v 2,4-D đến khả ă g p si p ôi callus tái sinh chồi 36 KẾT LUẬN VÀ Ề NGHỊ .40 Kết lu n 40 ề ngh 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 P L N ẢN BẢNG THÀNH PHẦN MÔI RƯỜNG MS DANH M C CÁC TỪ VIẾT TẮT 2,4- D : 2,4- dicholorophenoxy acetic acid BA : 6-benzyl adenine B5 : Gamborf cs (1976) cs : cộng HS : điề ò si rưởng IAA : indole-3-acetic acid IBA : indole-3-butyric acid KIN : kinetin LS : Linsmaier & Skoog (1965) MS : Murashige & Skoog (1962) NAA : 1-naphthylacetic acid TDZ : thidiazuron DANH M C Á BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Thành phần hóa học củ tỏi 16 3.1 Hiệu khử trùng mẫu 24 3.2 3.3 Ả ưởng 2,4-D đến khả ă g ạo callus tỏi cô Ả ưởng 2,4-D v KIN đến khả ă g ạo callus tỏi cô đến khả ă g ạo callus 26 28 3.4 Ả ưởng 2,4-D v tỏi cô 3.5 Ả ưởng 2,4-D v KIN đến khả ă g ạo callus từ mẫu gốc thân tỏi cô 32 3.6 Ả ưởng 2,4-D v thân tỏi cô 33 3.7 Ả ưởng việc cấy chuyề đến khả ă g si hình thái callus 3.8 Ả ưởng củ v 2,4-D đến khả ă g p si tái sinh chồi từ callus đến khả ă g ạo callus từ gốc rưởng p ôi v 30 35 37 DANH M C Á HÌNH ẢNH Hình 2.1 Tên hình Trang Củ tỏi C 21 s tạo từ mẫ gốc â tỏi sau 50 ngày nuôi cấy : rê môi rườ g MS bổ s 3.1 b : rê môi rườ g MS bổ s C g mg/L 2,4-D 27 g 2,5 mg/L 2,4-D s tạo từ các loại mẫu v t tỏi sau 50 ngày nuôi cấy (a): Mẫu gốc 3.2 â rê môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L KIN 29 (b): Mẫ c p rễ rê môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L KIN (c): Mẫ C 3.3 rê môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L KIN s tạo từ loại mẫu v củ câ ỏi rê môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D 1mg/L BA sau 50 ngày nuôi cấy :C b :C C s tạo từ gốc thân s tạo từ s tạo từ mẫu gốc thân tỏi sau 50 ngày nuôi cấy : rê môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L KIN 3.4 31 33 b : rê môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D 0,5 mg/L KIN C 3.5 s tạo từ mẫu gốc thân tỏi sau 50 ngày nuôi cấy : rê môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L BA 34 b : rê môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L BA Callus qua lần cấy chuyề rê môi rường MS bổ sung mg/L 2,4- D mg/L KIN 3.6 (a): Callus sau cấy chuyền lần (b): Callus sau cấy chuyền lần (c): Callus sau cấy chuyền lần 36 Phơi hình thành sau 60 ngày ni cấy : rê môi rường MS bổ sung mg/L BA 3.7 b : rê môi rường MS bổ sung mg/L BA c : rê môi rường MS bổ s g mg 38 v 0,25 mg/L 2,4-D d : rê môi rường MS bổ sung mg/L BA Chồi tái sinh sau 30 ngày nuôi cấy 3.8 : rê môi rường MS bổ sung mg/L BA b : rê môi rường MS bổ sung mg/L BA 39 MỞ ẦU Tính cấp thiết đề tài Cùng với phát tri n xã hội, đời sống củ c â gc ,c gười có nhữ g p ươ g ướng quay với iê gười g c g iê đ tìm tịi sử dụng ốc truyền thống, v y mà thả dược thiên nhiên ngày c g đ g v i rò q rọng phòng, chữa bệnh nâng cao sức khỏe gười Nguồ dược liệ đ g sử dụng có th tổng hợp nhiề c ác hợp hóa học, từ vi sinh v t, thực v ,…, r c liệu từ thực v nay, nhu cầu củ c đường g đ , nguồ dược gười sử dụng từ lâu nhu cầu ngày lớn Hiện gười dược liệ g c g ă g T e ước tính Tổ chức Y tế Thế giới WHO c đế 80% gười dân chủ yếu sử dụng p ươ g p áp r ền thố g Tỏi từ â c ă ại thảo mộc đ chữa bệnh [72] gười biế đến khơng đồ gia v làm cho êm p ần hấp dẫn ngon miệng mà cịn v thuốc chữa bệnh kỳ diệu thiên nhiên [55, 65] Tỏi sử dụng y học từ thời cổ thuốc dâ gi đ điều tr bệ ô g , ỏi v c , v ă g cường sức khỏe [43, 63, 64] Theo ô , độc, có tác dụng nhiệt giải độc, sát trùng, thông khiếu, tiêu nhọt, hạch phổi, iê đờm, đầ c ướ g, đại ti u tiệ ă , ả lỵ…[18] Nhiều kết nghiên cứu cho thấy, củ tỏi có chứa 100 chất ư ại hợp ỳnh có giá tr y học, tiêu bi u N-aceryl – S-allyl cysteine, allyl mercaptan, diallyl disulfide, diallyl sulfide, diallyl sulfoxide, diallyl sulfone, me chế g s fide…[5, 41, 50, 54, 70] Các chất có vai trị quan trọ g r g [41, 50] Một số nghiên cứu tác dụng tỏi cũ g c tỏi có tác dụ g ă g ả ă g miễn d ch [39], phòng chố g tr số bệnh tim mạch, ti chố g ã , xơ vữ động mạch, bệ ổi tiếng chấ ượng từ b rư g m Nguyễ [45, 59] v điều đường [46], thiếu máu hồng cầu hình liềm [71], đường hơ hấp [56], giảm c đô g má [42, 59] Việt Nam có nhiều vùng trồng tỏi Sơ g g g r es er , c ố g g đ tỏi cô đời không mùi v ơm g ý đặc cò dùng làm thuốc phòng chữa nhiều bệnh Gầ đâ , g iê cứu ĩ v i K ắc Cườ g 2011 c d ch chiết từ tỏi Lý Sơ c ác dụng ức chế phát tri n tế b ý Sơ , Ng thành phần hóa học tỏi g ễ Mi allicin tỏi ý Sơ c iếm 0,767% c [5, 2] Khi nghiên cứu C cũ g c ấ m ượng s với tỏi ta (0,67%) tỏi Trung Quốc (0,712%) [4] Tuy nhiên, việc trồng tỏi cô ý Sơ e p ươ g p áp r ền thố g làm suy thoái giống, dẫ đến giảm ă g s ất chấ ượng giống, xuất d ch bệnh số biến d di truyề Hơ ữ , ượng tỏi d g đ làm giống cho mùa vụ sau lớn việc bảo quản giố g cũ g gặp nhiề đáp ứ g nhu cầu củ trồ g g gười tiêu dùng Chính v y, việc cải thiện nâng cao ă g s ất, chấ ượng giống tỏi ý Sơ có nhiề p ươ g ă , ê ức đ cải thiệ v vấ đề mang tính cấp thiết Hiện nay, â g c ă g s ất, chấ ượng giống g ỹ thu t nuôi cấy mô, tế bào thực v t công cụ việc cải thiện giống [22, 35, 36] Xuất phát từ nhữ g sở lựa chọ đề tài “Ng i n cứu khả tạo callus tái sinh in vitro tỏi cô đơn (Allium Sativum L.) đảo Lý Sơn, tỉnh Quảng Ngãi” nhằm thiết l p p ươ g cho vấ đề nghiên đ cải thiệ , â g c ức tái sinh, tạ sở khoa học ă g s ất, chấ ượng giống tỏi cô ý Sơ Mục tiêu nghiên cứu: Xây dự g quy trình tái sinh in vitro tỏi cô callus Nội dung nghiên cứu: đạ mục tiêu nghiên , đề tài thực nội dung sau đâ : - Khảo sát hiệu khử trùng mẫu cồn 700 dung d ch NaOCl 2%, 3% khoảng thời gian khác - Khảo sát ả ưởng chất HS đến khả ă g ạo callus từ nguồn mẫu v t tỏi in vitro - Khảo sát ả ưởng chất sinh chồi từ callus HS đến khả ă g p si p ôi v 34 mg/L, tỷ lệ mẫu hình thành callus ă g dần từ 33,33 - 46,67% Ở nồ g độ 2,4-D mg/L, k i ă g g độ BA từ - mg/L, tỷ lệ mẫu hình thành callus giảm mạnh từ 56,67 - 26,67% Môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L BA cho khả ă g ạo calllus tốt với tỷ lệ mẫu hình thành callus 56,67%, ời gi ì sớm (24 -26 ngày v callus có màu vàng, rắn Nghiên cứu Haque cs 200 cho thấy môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L BA kích thích tạo callus tốt với tỷ lệ mẫu hình thành callus 80% [53] Kết nghiên cứu củ c ú g ôi cũ g c ấ môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L BA cho khả ă g ạo callus tốt nhấ g ỷ lệ mẫu hình thành callus thấp , c ỉ đạt 56,67% a Hình 3.5 C b s tạo từ mẫu gốc thân tỏi sau 50 ngày nuôi cấy (a): Trên môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L BA; (b): rê môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L BA Qua nghiên cứu ả ưởng chất HS đến khả ă g ì callus từ mẫu gốc thân tỏi cô , nh n thấy, môi rường MS bổ sung kết hợp 2,4-D + KIN có tác dụng kích thích tạo callus tố 2,4-D + BA s với kết hợp ặc biệ , môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L KIN cho khả ă g ạo callus tốt với tỷ lệ mẫ hình thành sớm (20 - 22 g ì c s đạt 73,33%, thời gian v callus có màu vàng, rắn 35 3.4 Ản ưởng iệc cấy chuyền đến khả in trưởng hình thái callus Chọn dịng callus rắn có màu vàng, tách thành khối c đường kính 0,4 cm, cấy vào mơi rường MS có 3% saccharose, 0,8 % agar, bổ sung mg/L 2,4-D mg/L KIN đ khảo sát ả ưởng việc cấy chuyề đến khả ă g si rưởng hình thái callus Kết trình bày bảng 3.7 Bảng 3.7 Ả ưởng việc cấy chuyề đến khả ă g si rưởng hình thái callus Chỉ tiêu theo dõi Số lần cấy chuyền Khả in Hình thái callus trưởng ++++ Vàng sáng, rắn +++ V g sẫm, rắn + V g sẫm, rắn, rời rạc Chú thích: +: s rưởng yếu; ++: s ++++: s rưởng trung bình; +++: s rưởng khá; rưởng tốt Kết bảng 3.7 cho thấy, sau lần cấy chuyề s g mơi rường MS có bổ sung mg/L 2,4-D mg/L KIN khả ă g si th hiệ q c rưởng callus giảm dần, ước hình thái callus Callus lần cấy chuyền thứ sinh rưởng yếu có màu vàng sẫm, rắn, rời rạc 36 a b c Hình 3.6 Callus qua lần cấy chuyề rê mơi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L KIN (a): Callus sau cấy chuyền lần 1; (b): Callus sau cấy chuyền lần 2; (c): Callus sau cấy chuyền lần 3.5 Ản ưởng BA 2,4-D đến khả át in ôi từ callus tái sinh chồi Callus s c ỉ vitro cấ c g iệm ợp c i ì N iề p si ,c p ôi v ấ bổ s v g iê c p ôi v , c ú g ôi iế ợp với 2,4-D ê ả ă g p si ả ă g p si si ả sá ả p ôi v ôi cấ , kết trình bày bảng 3.8 g in môi rườ g ôi c ồi ỏi [40, 48, 57,62] Trong ưở g củ si riê g ẻ v c ồi c s S p ối 60 g 37 Bảng 3.8 Ả ưởng củ v 2,4-D đến khả ă g p si p ôi v si c ồi từ callus S (mg/L) Chất BAP 2,4-D Khả tái in c ồi Phát sinh phôi Tỷ lệ tái Khả ă g p Hình thái phơi sinh phơi sinh chồi Chiều cao Số chồi/mẫu chồi (cm) (%) 0d 0b rắng, rắn 37,78 5,67b 2,26a X đ m, rắn 52,79 6,4a 2,12a X đ m, rắn 77,38 6,62a 2,28a rắng, xốp 18,78 2,50c 1,79a 0d 0b rắ g, rắ 0d 0b ++ rắ g, rắ 0d 0b ++ rắ g, rắ 0d 0b 2,0 - ++ 3,0 - ++++ 4,0 - ++++ 5,0 - ++++ 6,0 - +++ 3,0 0,25 +++ 3,0 0,5 ++ 3,0 1,0 3,0 1,5 Trắ g x X X rắ g x , rắn , rắ Chú thích: Các chữ khác cột sa c có ý ĩa ống kê trung bình mẫu với p < 0,05, ++: phát sinh phơi trung bình; +++: phát sinh phôi khá; +++: phát sinh phôi tốt Kết bảng 3.8 cho thấ , môi rường MS có bổ sung BA (2 – mg/L) riêng lẻ ặc ế ợp phát sinh phôi c khả ă g p si m x mg v 2,4-D (0,25 – 1,5) có khả ă g s r g đ , môi rườ g MS c bổ s phơi tốt nhất, phơi úc đầu có màu trắng, s c (3 - mg/L) cho đ c n thành đ m ối với môi rường MS bổ sung BA (2 - mg mg/L) khả ă g p si p ă g dầ mg/L thì khả ă g p si ợp g c mg , i ă g g độ BA (2 - g ếu tiếp tục ă g g độ BA lên p ôi ại giảm ối với môi rườ g MS bổ s v 2,4-D (0,25 – 1,5 mg/L), khả ă g p si môi rường bổ sung riêng lẻ mg/L BA p ôi ế g ế s với 38 a b c d Hình 3.7 Phơi hình thành sau 60 ngày ni cấy (a): rê môi rường MS bổ sung mg/L BA; (b): rê môi rường MS bổ sung mg/L BA; (c): rê môi rường MS bổ sung mg/L P ôi s v 0,25 mg/L 2,4-D; (d): Trên môi rường MS bổ sung mg/L BA i hình thành, cấy sang c g môi rường phát sinh phôi đ khảo sát khả ă g tái sinh chồi Sau 30 ngày ni cấy, kết trình bày bảng 3.8 Kết bảng 3.8 cho thấy, p hình thành mơi trường MS có bổ sung BA (3 - mg/L) có khả ă g si c ồi K i ă g g độ BA từ - mg/L tỷ lệ tái sinh chồi ă g dần từ 37,78% - 77, 8%, đồng thời hệ số nhân chồi cũ g ă g e 5,67 – 6,62 chồi/mẫu tiếp tục ă g g độ BA lên mg/L tỷ lệ tái sinh chồi giảm cịn 18,78%, đồng thời ệ số 2,5 chồi/mẫu, chồi si ă g si â c ồi cũ g giảm, cịn rưởng yếu Mơi rường MS bổ sung mg/L BA cho khả c ồi cao với tỷ lệ mẫu tái sinh chồi đạt 77,38%, số chồi/mẫ đạt 6,62 chồi/mẫu chiều cao chồi đạt 2,28cm ối với môi rườ g MS c bổ s ợp mg c ồi phôi v 2,4-D 0,25 - 1,5 mg ô gc ả ă g c c g ế si 39 N v , môi rường MS bổ sung mg/L BA kích thích phát sinh phơi tái sinh chồi mạnh với hệ số nhân chồi đạt 6,62 chồi/mẫu, chiều cao chồi đạt 2,28 cm chồi si rưởng tốt Khi nghiên cứu khả ă g si chồi tỏi, K môi rường MS bổ sung 10 mg/L BA cho hiệu si v cs 2004 c c ồi cao với tỷ lệ tái sinh chồi đạt 56,8% [57] N v y, nghiên cứu cho ỷ ệ tái sinh chồi c (77,38%) rê môi rường MS bổ sung mg/L BA a b Hình 3.8 Chồi tái sinh sau 30 ngày nuôi cấy (a): rê môi rường MS bổ sung mg/L BA; (b): rê môi rường MS bổ sung mg/L BA 40 KẾT LUẬN VÀ Ề NGHỊ Kết luận ế q ả g iê , c ú g ôi rú r mộ số ế ưs : Khử trùng mẫu cồn 700 thời gian phút kết hợp với dung d ch NaOCl 2% thời gian 10 phút cho hiệu khử trùng tốt với tỷ lệ mẫu số g đạt 86,67% Nguồn mẫu v t tỏi in vitro tạo callus tốt gốc thân môi rường MS bổ sung mg/L 2,4-D mg/L KIN Callus hình thành có màu vàng, rắn sau 20 – 22 ngày nuôi cấy Mơi rường MS có 3% saccharose, 0,8% agar, bổ sung mg/L 2,4-D mg/L KIN tạo callus tốt mẫu gốc thân tỏi với tỷ lệ mẫu hình thành callus 73,33%, callus có màu vàng, rắn Mơi rường MS có 3% saccharose, 0,8% agar, bổ sung mg/L BA thích hợp cho phát sinh phôi tái sinh chồi in vitro từ callus, với tỷ lệ mẫu tái sinh chồi đạt 77,38% , hệ số nhân chồi đạt 6,62 chồi/mẫu chiều cao chồi đạt 2,28 cm ề ngh hoàn thiện hệ thống tái sinh in vitro tỏi cô , cần tiếp tục: Nghiên cứu khả ă g ạo rễ chồi in vitro s Nghiên cứu khả ă g số g s v si i tái sinh rưởng in vitro tự nhiên 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Nguyễn Th Th H ý , i rườ g Sơ , Ng ễn Th P ươ g, Ng ễn 2009 , “Ng iê cứu tái sinh in vitro chuy n gen green fluorescent protein (GFP) vào hoa loa kèn (Lilium longiflorum) nhờ vi khuẩn gr b c eri m”, T p chí khoa học phát triển, 7( 2), tr 121 – 129 [2] ê rầ ì , ê M ội (1998), P â lập ấ lợ câ l a, NX ại ọc c ọ c ố ốc gi H Nội [3] Ngơ Xn Bình, Nguyễ Vă Hồ g 2011 , “ Ng iê cứu ả điề ò si c ưởng chất rưở g đến khả ă g ạo callus tái sinh chồi nhân giống hoa đồng tiền (Gerbera Jamesonii Bolus) bằ g p ươ g p áp ôi cấ mô”, T p chí khoa học cơng nghệ, 59 (11), tr 62 – 67 [4] Nguyễn Minh Chính, Nguyễ Vă học tỏi ý Sơ ”, T p c ược học quân sự, số [5] Bùi Khắc Cườ g, H d ch chiết tỏi ý Sơ g 2011 , “Ng iê cứu thành phần hóa g Vă ươ g, Ng rê dò g ế b g ễ ĩ 2011 , “Tác dụng Hep 2”, T p chí y ược học lâm sàng, số [6] Nguyễn Hữ nigrum) bằ nh (2005), Nghiên cứu nhân giống vơ tính tiêu (Piper p ươ p p cấy mơ, Khóa lu n tốt nghiệp, rườ g đại học nông lâm TP Hồ Chí Minh [7] Lê Hồng Giang, Nguyễn Bả 2011 , “Sự hình thành mơ sẹo, phơi in vitro mỏ quạ (Dischidia rafflesiana Wall ”, T p chí khoa học, số 20, tr 61 -167 [8] Phan Th Thu Hiề 2012 , “Ng iê cứu khả ă g ạo callus tái sinh t pđ ươ g miền Bắc Việt Nam phục vụ công tác chuy giố g ú ge ”, T p chí khoa học phát triển, 10(4), tr 567-575 [9] ê Vă H g 2007 , Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật, NXB khoa học kỹ thu t Hà Nội 42 i Vă [10] điề ò ệ, Nguyễn Ngọc Hồ g 2006 , “Ng iê cứu ả ă g rưởng thực v ưởng chất v đường saccharose lên d ch nuôi cấy huyền phù tế bào dừa cạn (Catharanthus roseus ”, T p chí phát triển khoa học cơng nghệ, 9(6) ức [11] Quách Th Liên, Nguyễ 200 , “Kết bước đầu tái sinh trinh nữ hoàng cung (Crinum latifolium L.) từ mơ sẹ ”, T p chí sinh học 25 (2), tr 29 - 34 [12] Nguyễn Hồng Lộc (2007), Giáo trình nhập mơn cơng nghệ sinh học, NXB ại học Huế [13] Nguyễn Hoàng Lộc (2006), Giáo trình cơng nghệ tế bào, NX ại học Huế [14] Nguyễn Hoàng Lộc (2006), Sản xuất hợp chất thứ cấp từ nuôi cấy mô tế bào thực vật, Việ i g ê , Môi rường Công nghệ sinh học, ại học Huế [15] Ng ễ H g (Aerides odorata ộc, M i Vă P ô 1998 , “N ôi cấ mô q ế r ”, T p c ọc, 20(2), tr 41 – 43 [16] Nguyễn Hoàng Lộc, rươ g Hữ [17] Ng ễ H ằ [18] c P ượ g, ố g (2003), “C ọ dò g m thông qua nuôi cấy callus”, ạp c ậ ế ặ g ủ , Ng c ố g c (Saccharum officinarum si ễ ọc, 25(1a), tr 112-118 g ộc (1992), C ọ cấ m ươ g c ực ậ , m ố p c mấ iế sỹ si ước ốc l ọc, H Nội ỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc v thuốc Việt Nam, NXB y học, tr 181-183 [19] Nguyễ ức ượng (2002), Công nghệ tế bào, NX đại học quốc gia TP Hồ Chí Minh [20] Dươ g ấn Nhự , ỗ Nă g V i Vă K iêm, Ng ễn Th Thanh Hằng, Hà Th Thúy, 2004 , “Sự tái sinh chồi từ callus, tạo từ hạt ứng dụng việc nhân nhanh giống hoa hồng mơn (Anthurium sp ”, T p chí khoa học cơng nghệ, 42(3), tr 32 – 36 [21] Dươ g ấ N ự , rầ Ngọc Hiề , P X â H ê , ủ i Vă iê , M i ệ, Ngọc Hươ g, Ng ễ ỗ Nă g V 2004 , “Mộ số ế 43 q ả g iê â củ i (Lilium spp ”, pc C ệ ọc, (3), tr 359 - 370 [22] i P ò g (2001), ởl a ằ g ệ Si ậ cấ m ả ă ực ậ , c c ọ vă iế sĩ Si c ọc, Việ Cô g ọc H Nội P ươ g, Nguyễn Th [23] Nguyễn Th ý 2011 , “Ng iê cứu làm virus cho tỏi ta (Allium sativum L.) ni cấ đỉ si rưở g”, T p chí khoa học phát triển, t p 10, số 2, tr 244 – 255 [24] rươ g c P ượng, Nguyễn Hồng Lộc, Nữ ố g (2002), “C ọ dò g ú (Oryza sativa callus”, pc ệp [25] Ng ễ H lan vanda, K g p ô gq ôi cấ r ể nông thôn, số 7, tr 579-580 â (2007), ố c ố gc i Ái, Ng ễ Hữ ậ â ừp g iệp, rườ g ại ọc ô g âm P Hồ C câ Mi [26] Hoàng Th Sản (2003), Phân lo i học thực vật, NXB Giáo dục [27] Ng ễ ế âm, ực ậ si ọc i P ò g, ê rầ ệc c ọ c ó ụ (1999), l a, cá c ội g ệ Cô g g ệ q ốc, 819 – 826 [28] Nguyễn Trung Thành, Kee Y e p P e c si ì 2010 , “Ả ưởng chất kích rưởng số thành phầ mơi rườ g đến sinh khối sản phẩm ginsenoside nuôi cấy huyến phù tế bào nhân sâm (Panax ginseng C A Me er ”, T p chí khoa học- i học quốc gia Hà Nội, số 26, tr 191-196 ường Thu, Trầ Vă Mi [29] Bùi Th 2007 , ng dụng cơng nghệ phơi soma dịng hóa keo lai (Acacia sp.) in vitro, Hội ngh Khoa học Công nghệ, Viện Sinh học Nhiệ đới [30] Vũ a đế [31] ủ (2011), c c câ l c, Ái Thuyề , ỗ vă ă g iáp, p â lập iế sĩ Si ọc, ại ọc X â D c sa l Ng ê 2007 , Nhân giống in vitro số giống hồ tiêu (Piper nigrum L.) s ch virus, Phịng Cơng nghệ tế bào thực v t, Viện Sinh học Nhiệ đới 44 [32] Nguyễ ĩ 2011 , “D ch chiết tỏi ý sơ ức chế phát tri n tế bào ung ến tiền liệ [33] Ngơ gười dịng PC-3 ú ri r ”, T p c ược học quân sự, số (2010), Nghiên cứu phơi vơ tính thử nghiệm chuyển GEN t o rễ tóc thơng qua vi khuẩn Agrobacterium rhizogenes câ đ fruticosa L Harms), rườ g ại ọc ô g âm P Hồ C Mi [34] Từ Th Tú (2010), Nghiên cứu ả c ưởng chất nhân nhanh chuối lùn (Musa nana Lour) bằ Khóa lu n tốt nghiệp, rườ g ại học sư p ạm [35] Ng ễ ởl a ằ ườ g Vâ , ê rầ c ệ ế ọc v Kỹ H Nội [36] Ng ễ Vi r ề ọc , êD ứ , ê c s p p M ội (1994), C ọ , ê rầ p è bằ g ỹ ụ (P l sc as rưở đến cấy in vitro, Nẵng ực ậ , Kỷ ế Việ Cô g g ệ si dò g ú c ố g c c ì p ươ lă ì c ọ , Lê T c m ố ọc, NX K M ội (1995), “ â ọc biế d dò g s m ”, p , số 4, tr 21 – 27 [37] Hà Thanh Võ (2005), Nghiên cứu k thuậ ép câ ưởi (Citrus grandis), Khóa lu n tốt nghiệp, rườ g đại học nơng lâm TP Hồ Chí Minh [ 8] Vũ Vă Vụ, Ng ễ Mộ g H g, ê g iệp (2010), C ệs ọc, NX giá dục Việ N m Tài liệu tiếng Anh [39] Abdullah T., Kirkpatrick DV, Williams L and Carter J (1989), Garlic (Allium sativum L.) as annantimicrobial and immune modulator in AIDS, Proceedings of the International Conference on AIDS, pp 466 [40] Alejandrina R., Victor M., Villalobos A., Alba E., Jofre G (2000), “Efficient plant regeneration of garlic (Allium sativum L.) by roor-tip culture”, Biol Plant, 36: 416 - 419 [41] Arunkumar A., Vijayababu MR., Srinivasan N., Aruldhas MM., Arunakaran J (2006), “Garlic (Allium sativum L.) compound, diallyl disulfide induces cell cycle arrest in prostate cancer cell line PC-3, Mol Cell Biochem”, 288 (1-2): 107-113 [42] Augusti K T (1990), Therapeutic and medicinal values of onion and garlic, Onions and Allied Crops, pp 94-108 45 [43] Block E (1985), “The chemistry of garlic and onions”, Sci A, 252: 114-119 [44] C g W C , Hsi g Y I 1980 , “Plant regeneration through somatic embryogenesis in root-derived callus of ginseng (Panax ginseng C.A Meyer)”, Theoretical and Applied Genetics, Vol 57 No 3, pp 133-135 [45] Chung J G., Lu H F., Yeh C.C., Cheng K C., Lin S and Lee J H (2004), “Inhibition of Nacetyl transferase activity and gene expression in human colon cancer cell lines by diallyl sulfide”, Proceedings of the International Conference on AIDS 42: 195-201 [46] Collin H A (2004), Garlic (Allium sativum L.) and cardiovascular disease in functional foods, diet, cardiovascular disease and diabetes, Woodhead Publishings, U K., pp: 240 – 295 [47] Fatima A., Ahmad T., Khan SJ, Deeba F and Zaidi N (2011), “Assessment of antibacterial activity of in vitro and in vitro grown garlic (Allium Sativim L.)”, Pak J Bot., 43(6): 3029-3033 [48] Fereol L., Chovelon, Chovelon V., Causse S., Michaux F., Michaux-Ferriere N., Kahane R (2002), “Evidence of a somatic embryogenesis process for plant regeneration in garlic (Allium sativum L.)”, Plant Cell Reports, 21: 197-203 [49] Gabriela F., Luciani A., Mary K., Pellegrini C., Curvetto N R (2006), “Effects of explants and growth regulators in garlic (Allium sativum L.) callus formation and plant regeneration”, Plant Cell Tiss Organ Cult 87:139–143 [50] Ghulam Rehmani Lakho and Dileep Kumar Rohra (2006), “Targeting apoptosis with compounds from commonly-used medicinal plants: A possible aid in the fight against cancer”, Medical Hypotheses and Research, Vol No1 [51] Haque M S., Wada T., Hattori K (1997), “High frequency shoot regeneration and plantlet formation from root tip of garlic (Allium sativum L.)”, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 50: 83-89 [52] Haque M S., Wada T., Hattori K (1998), “Efficient plant regeneration in garlic (Allium sativum L.) through somatic embryogenesis from root tip explants”, Plant Prod Sci 1: 216-222 46 [53] Haquae M A., Nath U K., Ahmad Q N and Alam S (2003), “Effect of 2,4-D and BA on invitro regeneration of garlic”, Online Journal of Biological Sciences, (12): 771-774 [54] Hu X., Cao BN, Hu G., He J., Yang DQ, Wan YS (2002), “Attenuation of cell migr i di d ci f ce de b ged g r ic ex r c i r s rc m ce s”, Int J Mol Med, (6), pp.641-643 [55] Kapoor R., Nasim SA, Mahmooduzzafar and Mujib A (2011), “Establishment of efficient method for callus culture and shoot regeneration of local Indian garlic (var Yamuna safed)”, Journal of Ecobiotechnology, 3(12): 14-17 [56] Keusgen M (2002), Health and Alliums, Allium Crop Sciences Recent Advances, pp 357-378 [57] Khan N., Alam MS, Nath UK (2004), “In vitro regeneration of garlic (Allium sativum) through callus culture”, Journal of Biological Sciences (2): 189-191 [58] Lawson L D., Koch H P (1996), The composition and chemistry of garlic cloves and processed garlic, The Science and Therapeutic Application of garlic and related species, Williams and Wilkins Press, Baltimore, Ma., U.S.A pp 37-107 [59] Milner JA (2001), “A historical perspective on garlic and cancer, Journal of Nutrition”, 131 (3s): 1027S - 1031S [60] Myers JM, Simon PW (1998), “Continuous callus production and regeneration of garlic (Allium sativum L.) using root segments from shoot tip-derived plantlets”, Plant Cell Reports, 17: 726 – 730 [61] Nasim S.A., Mujib A., Kapoor R., Fatima S., Aslam J & Mahmooduzzafar 2010 , “S m ic embr ge esis i Impr vi g embr m r i Allium sativum L (cv Yamuna Safed 3): d germi i wi P Rs d c rb dr es”, Anales de Biología, 32: 1-9 [62] Poly TA, Huq H., Hoque ME, Alam MS (2012), “In vitro plant regeneration in garlic (Allium sativum L.)”, J Expt Biosci 3(2):37- 44 [63] Rivlin RS (2001), “Historical perspective on the use of garlic”, Journal of Nutrition, 131: 951S - 954S 47 [64] Rivlin RS (2006), “Is garlic alternative medicine?”, Journal of Nutrition, 136: 713S – 715S [65] Salam MA , Ali MR, Eunus Ali MD, Alam KA, Reza MSH, Islam S., Islam S and Rahman SMM (2008), “Callus Induction and Regeneration of Indigenous Garlic (Allium sativum L.)”, American Journal of Plant Physiology, 3: 33-39 [66] Sata S J., Bagatharia S B., Thaker V S (2001), “Induction of direct somatic embryogenesis in garlic (Allium sativum L.)”, Methods in Cell Science, 22: 299– 304 [67] Seo PJ, Xiang F., Qiao M., Park JY, Lee YN., Kim SG, Lee YH, Park WJ, Park CM (2009), “The MYB96 transcription factor mediates abscisic acid signaling during drought stress reponse in Arabidopsis”, Plant Physol, 151: 275 – 289 [68] Shankar S., Qinghe Chen, Suthakar Ganapathy, Karan P Singh, Rakesh K Srivastava (2008), “Diallyl trisulfide increases the effectiveness of TRAIL and inhibits prostate cancer growth in an orthotopic m de : m ec r mec isms”, Mol Cancer Ther, (8) [69] Sh rz de M d Eb di 2006 , “Antibacterial Effect of Garlic (Allium sativum L.) on Staphylococcus aureus”, Pakistan Journal of Biological Sciences, 9: 1577-1579 [70] Sundaram S G and Milner J A (1993), “Impact of organosulfur compounds in garlic on canine mammary tumour cells in culture”, Cancer Lett, 74, pp.85-90 [71] Takasu J., Uykimpang R., Sunga M A., Amagase H., Niihara Y (2002), “Aged garlic (Allium sativum L.) extract therapy for sickle cell anemia patients”, BMC Blood Disorders, 2: 3-3 [72] p rip i d rip i JN 200 , “R e f bi ec g i medici s”, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 2( 2): 243-253 [73] Yan MM, Xu C., Kim CH, Um YC, Bah AA, Guo DP (2009), “Effects of explant type, culture media and growth regulators on callus induction and plant regeneration of Chinese jiaotou (Allium chinense)”, Scientia Horticulturae, 123: 124–128 48 [74] Zheng SJ, Henken B., Frans A Krens, Chis Kik (2003), “The development of an efficient cultivar – independent plant regeneration system from callus derived from both apical and non-apical root segments of garlic (Allium sativum L.)”, In Vitro Cell Dev Biol Plant, 39: 288–292 ... thực v t công cụ việc cải thiện giống [22, 35, 36] Xuất phát từ nhữ g sở l? ??a chọ đề tài “Ng i n cứu khả tạo callus tái sinh in vitro tỏi cô đơn (Allium Sativum L. ) đảo L? ? Sơn, tỉnh Quảng Ngãi? ?? nhằm... cảm ứng hình thành callus cịn mơi N mơi rường tốt cho tái sinh v cs 2012 g iê cứu tái sinh in vitro tỏi (Allium sativum L. ) mẫu l? ?, rễ gốc 8v ôi cấy callus tái sinh chồi â giống tỏi khác (G1, G5,... sung mg /L 2,4-D mg /L KIN (a): Callus sau cấy chuyền l? ??n 1; (b): Callus sau cấy chuyền l? ??n 2; (c): Callus sau cấy chuyền l? ??n 3.5 Ản ưởng BA 2,4-D đến khả át in ôi từ callus tái sinh chồi Callus s