Nghiên cứu tác dụng gây độc tính cấp và ảnh hưởng của một số cao chiết từ quả dứa dại pandanus odoratissimus l đến chỉ số huyết học trên chuột nhắt trắng mus musculus var albino

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA SINH - MÔI TRƢỜNG TRẦN THỊ THANH NGA NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GÂY ĐỘC TÍNH CẤP VÀ ẢNH HƢỞNG CỦ MỘT S O HIẾT TỪ QUẢ DỨA DẠI (Pandanus odoratissimus L.) ĐẾN CHỈ S HUYẾT HỌC TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG (Mus musculus Var Albino) KHÓA LUẬN T T NGHIỆP Đà Nẵng – Năm 2015 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA SINH - MÔI TRƢỜNG TRẦN THỊ THANH NGA NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GÂY ĐỘC TÍNH CẤP VÀ ẢNH HƢỞNG CỦ MỘT S CAO CHIẾT TỪ QUẢ DỨA DẠI (Pandanus odoratissimus L.) ĐẾN CHỈ S HUYẾT HỌC TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG (Mus musculus Var Albino) Ngành: Sƣ phạm Sinh học Ngƣời hƣớng dẫn: ThS Nguyễn Công Thùy Trâm Đà Nẵng – Năm 2015 LỜI M ĐO N Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình khác Đà Nẵng, ngày 15 tháng 05 năm 2015 Sinh viên Trần Thị Thanh Nga LỜI ẢM ƠN Để hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp này, em xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến cô Th.S Nguyễn Công Thùy Trâm, giảng viên khoa Sinh - Môi trƣờng Đại học Sƣ phạm Đà Nẵng, ngƣời tận tình hƣớng dẫn, động viên, giúp đỡ em suốt thời gian qua Đồng thời em xin chân thành cảm ơn Lê Thị Mai - cán phịng thí nghiệm Di truyền sinh học động vật toàn thể thầy cô khoa Sinh - Môi trƣờng, bạn sinh viên quan tâm, giúp đỡ, đóng góp ý kiến tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập, nghiên cứu thực khóa luận nhƣ năm tháng học tập Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn động viên gia đình suốt trình học tập hồn thành khóa luận Trong q trình hồn thành khóa luận, kinh nghiệm thời gian cịn hạn chế nên khơng tránh khỏi thiếu sót Kính mong thầy góp ý Em xin chân thành cảm ơn! Đà Nẵng, ngày 15 tháng 05 năm 2015 Sinh viên Trần Thị Thanh Nga MỤ LỤ LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH ẢNH, ĐỒ THỊ MỞ ĐẦU .1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài .2 ngh a khoa học đề tài CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1.Tổng quan dứa dại (Pandanus odoratissimus L.) 1.1.1 Đặc điểm thực vật dứa dại .3 1.1.1.1 Đặc điểm chi Pandanus .3 1.1.1.2 Đặc điểm loài Pandanus odoratissimus L .4 1.1.2 Dạng sống sinh thái 1.1.3 Công dụng Dứa dại 1.1.3.1 Tác dụng dƣợc lý phận theo y học cổ truyền 1.1.3.2 Một số thuốc chữa bệnh 1.1.4 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc chi Pandanus 1.1.4.1 Thành phần hóa học số loài thuộc chi Pandanus 1.1.4.2 Hoạt tính sinh học số lồi thuộc chi Pandanus .7 1.2 Tổng quan chuột nhắt trắng 1.2.1 Đặc điểm sinh học 1.2.2 Vòng đời sức sinh sản .10 1.3 ĐẠI CƢƠNG VỀ ĐỘC CHẤT HỌC 10 1.3.1 Chất độc 10 1.3.1.1 Khái niệm chất độc 10 1.3.1.2 Khái niệm độc tính độc lực 11 1.3.2 Những nghiên cứu tác dụng gây độc tính cấp số dƣợc liệu 12 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu phạm vi nghiên cứu 14 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu .14 2.1.2 Phạm vi nghiên cứu 14 2.2 Nội dung nghiên cứu .14 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 14 2.3.1 Phƣơng pháp xác định mẫu 14 2.3.2 Các phƣơng pháp hóa học 14 2.2.3 Các phƣơng pháp sinh học 15 2.2.3.1 Phƣơng pháp thử độc tính cấp cao chiết Dứa dại 15 2.2.3.2 Phƣơng pháp xác định số lƣợng hồng cầu, bạch cầu 16 2.2.3.3 Phƣơng pháp xác định hàm lƣợng hemoglobin 18 2.2.3.4 Phƣơng pháp xử lý số liệu 18 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 19 3.1 Thử độc tính cấp cao dịch chiết dứa dại (Pandanus odoratissimus L.) chuột nhắt trắng (Mus musculus Var Albino) 19 3.2 Ảnh hƣởng cao chiết từ Dứa dại đến số huyết học 21 3.2.1 Ảnh hƣởng cao CHCl3 từ Dứa dại đến số huyết học 21 3.2.2 Ảnh hƣởng cao EtOAc từ Dứa dại đến số huyết học 23 3.2.3 Ảnh hƣởng cặn nƣớc từ Dứa dại đến số huyết học .25 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 28 4.1 Kết luận 28 4.2 Kiến nghị .28 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 29 D NH MỤ Á HỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ LD50 Lethal dose (Liều gây chết 50% động vật thử nghiệm) LC50 Lethal concentration (Nồng độ gây chết 50% động vật thử nghiệm) EtOAc Ethyl acetate CHCl3 Chloroform D NH MỤ Số hiệu bảng 3.1.1 3.1.2 3.1.3 Á BẢNG BIỂU Tên bảng Kết thử độc tính cấp cao chloroform từ Dứa dại (Padanus odoratissimus) Kết thử độc tính cấp cao EtOActừ Dứa dại (Padanus odoratissimus) Kết thử độc tính cấp cao nƣớc từ Dứa dại (Padanus odoratissimus) Trang 20 20 21 Số lƣợng hồng cầu chuột nhắt trắng (Triệu 3.2.1 TB/mm3), hàm lƣợng hemoglobin(g/100ml máu), số 22 lƣợng bạch cầu (ngàn TB/mm3) Số lƣợng hồng cầu chuột nhắt trắng (Triệu 3.2.2 TB/mm3), hàm lƣợng hemoglobin(g/100ml máu), số 24 lƣợng bạch cầu (ngàn TB/mm3) Số lƣợng hồng cầu chuột nhắt trắng (Triệu 3.2.3 TB/mm3), hàm lƣợng Hhemoglobin(g/100ml máu), số lƣợng bạch cầu (ngàn TB/mm3) 26 D NH MỤ HÌNH ẢNH, ĐỒ THỊ Số hiệu Tên hình vẽ Trang 2.2 Mơ tả cách đếm hồng cầu buồng đếm 17 Số lƣợng hồng cầu chuột nhắt trắng (Triệu TB/mm3), 3.2.1 hàm lƣợng Hemoglobin(g/100ml máu), số lƣợng bạch cầu 22 (ngàn TB/mm3) sử dụng cao CHCl3 từ Dứa dại Số lƣợng hồng cầu chuột nhắt trắng (Triệu TB/mm3), 3.2.2 hàm lƣợng Hemoglobin(g/100ml máu), số lƣợng bạch cầu 24 (ngàn TB/mm3) sử dụng cao EtOAc từ Dứa dại Số lƣợng hồng cầu chuột nhắt trắng (Triệu TB/mm3), 3.2.3 hàm lƣợng Hemoglobin(g/100ml máu), số lƣợng bạch cầu (ngàn TB/mm3) sử dụng cao nƣớc từ Dứa dại 26 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Hiện nay, khoa học kỹ thuật phát triển chất lƣợng sống ngƣời ngày đƣợc cải thiện Tuy nhiên, ngƣời phải đối mặt với nhiều vấn đề Một vấn đề giảm sút sức khỏe bệnh tật Chính vậy, việc tìm phƣơng thuốc, loại thuốc có nguồn gốc từ thiên nhiên để chữa trị bệnh tật đƣợc nhà khoa học ý Với ƣu điểm độc tính thấp, dễ hấp thu chuyển hóa thể, loại thuốc có nguồn gốc từ thiên nhiên ngày thu hút quan tâm nhà khoa học nhu cầu sử dụng chúng ngày tăng trƣởng mạnh mẽ Từ tiền chất đƣợc phát phân lập từ thảo dƣợc, thông qua hệ thống phép thử sinh học in vitro in vivo, nhà khoa học chuyển chúng thành chế phẩm hay thực phẩm chức có khả hỗ trợ điều trị bệnh chí loại thuốc đặc trị để sử dụng phác đồ điều trị y tế cách hiệu Một bƣớc khởi đầu q trình nghiên cứu loại thuốc có nguồn gốc thiên nhiên để sử dụng hỗ trợ điều trị bệnh cần kiểm sốt độc tính chúng [17], [18], [22] Chi Pandanus thuộc họ dứa dại Pandanaceae với tổng số khoảng 600 lồi đƣợc tìm thấy khắp giới phân bố vùng nhiệt đới, trừ châu Mỹ Ở Việt Nam, Dứa dại phân bố nhiều nơi, vùng ven bờ biển, dễ thu hái chế biến Về công dụng y học, Dứa dại dƣợc liệu quý giá đƣợc sử dụng nhiều thuốc dân gian với mục đích bảo vệ gan, lợi tiểu, cảm mạo, lỵ, ho, đái tháo đƣờng … Với cơng dụng điều trị bệnh, lồi Dứa dại đƣợc nhà khoa học ngồi nƣớc ý nghiên cứu Kết cơng trình nghiên cứu cho thấy, lá, hoa loại có chứa hợp chất flavonoid, phenolic, vanilin, tinh dầu … 25 x 16 = 400 ô nhỏ Số lƣợng bạch cầu 1mm3 là: M = (B x 20 x 4000)/400 = B x 200 (tế bào/mm3 máu) [5], [19] 2.2.3.3 Phƣơng pháp xác định hàm lƣợng hemoglobin Hàm lƣợng Hemoglobin đƣợc xác định b ng huyết sắc kế Sali - Phƣơng pháp lấy máu chuột tiến hành thí nghiệm + Dùng ống nhỏ giọt cho HCl 0,1N vào ống nghiệm đến vạch quy định gần đáy + Bắt chuột vào ống nhốt chuột, treo lên giá Sát trùng đuôi chuột b ng cồn dùng kéo cắt đoạn ngắn khoảng cm đuôi chuột, vuốt nhẹ cho máu chảy + Dùng pipette hút cột máu liên tục vạch 20 CMM (khơng bị lẫn bọt khí) + Lau máu dính bên pipette Cho đầu pipet vào đáy ống nghiệm thổi nhẹ để máu từ từ n m gọn đáy Nâng đầu pipet lên phần acid không lẫn máu, hút nhẹ acid vào pipet lại thổi để tráng rửa vết máu Lắc ống nghiệm để vào giá, chờ phút cho phản ứng tạo chlohydrat hematin (lúc dung dịch có màu nâu đen) + Dùng ống hút nhỏ nƣớc cất vào để pha loãng dung dịch ống nghiệm, đồng thời dùng đũa thủy tinh khuấy quan sát, so sánh màu nâu ống nghiệm với màu nâu hai ống mẫu hai bên Đến đồng màu đọc kết [5], [19] 2.2.3.4 Phƣơng pháp xử lý s liệu Các số liệu đƣợc xử lý theo phƣơng pháp thống kê phần mềm Excel 18 HƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1 Thử độc tính cấp cao dịch chiết dứa dại (Pandanus odoratissimus L.) chuột nhắt trắng (Mus musculus Var Albino) Trong nghiên cứu giai đoạn thử độc tính cấp có vai trị quan trọng đánh giá hiệu lực an toàn thuốc phƣơng hƣớng dùng liều cho nghiên cứu Nghiên cứu độc tính cấp thuốc động vật thí nghiệm, chủ yếu xác định liều chết trung bình liều làm chết 50% số động vật thí nghiệm (LD50) điều kiện định Chỉ số LD50 sở để đánh giá độc tính thuốc, liều dùng thí nghiệm dƣợc lý cách đắn [19] Tuy nhiên vào LD50 mà bỏ qua dấu hiệu ngộ độc khác không khách quan Trên thí nghiệm thử độc tính cấp quan sát thấy triệu chứng bệnh lý quan trọng chuột không chết trƣớc chết nhƣ: gãi mõm liên tục, chạy hoảng loạn, ngã xiêu vẹo, co giật, run rẩy, mồ hơi, tím tái tai, chân, đuôi, tƣ n m, đứng Thể tích cho uống chuột 0.5ml/con đợt thực nghiệm Chuột đƣợc uống dịch chiết nƣớc liều từ thấp đến cao bƣớc nhảy liều đƣợc dùng thí nghiệm 10g/kg (tăng dần theo lơ) Liều cao cho uống đợt thực nghiệm 50g/kg Kết thử độc tính cấp cao CHCl3, cao EtOAc cặn nƣớc từ Dứa dại (Padanus odoratissimus L.) đƣợc thể qua bảng 3.1.1, 3.1.2 3.1.3 19 Bảng 3.1.1 Kết thử độc tính cấp cao CHCl3 từ Dứa dại (Padanus odoratissimus L.) Nhóm chuột Liều dùng cao CHCl3 (g/kg thể trọng) Số chuột thí nghiệm Số chuột chết Tỷ lệ chuột chết (%) ĐC 0 0 10 0 20 0 30 0 40 0 50 0 Bảng 3.1.2 Kết thử độc tính cấp cao EtOAc từ Dứa dại (Padanus odoratissimus L.) Nhóm chuột Liều dùng cao EtOAc (g/kg thể trọng) Số chuột thí nghiệm Số chuột chết Tỷ lệ chuột chết (%) ĐC 0 0 10 0 10 20 0 11 30 0 12 40 0 13 50 0 20 Bảng 3.1.3 Kết thử độc tính cấp cặn nước từ Dứa dại (Padanus odoratissimus L.) Nhóm chuột Liều dùng cặn nƣớc (g/kg thể trọng) Số chuột thí nghiệm Số chuột chết Tỷ lệ chuột chết (%) ĐC 0 14 0 15 10 0 16 20 0 17 30 0 18 40 0 19 50 0 Qua bảng 3.1.1, 3.1.2, 3.1.3, ta thấy sau uống cao CHCl3, cao EtOAc cao nƣớc nồng độ khác nhau, chuột lơ thực nghiệm hoạt động khơng có dấu hiệu bất thƣờng xảy ra, khơng có chuột bị chết Sau 48 sau 72 theo dõi, chuột biểu sinh lí bình thƣờng, khơng có biểu ngã xiêu vẹo, co giật, run rẩy, mồ hôi, tím tái tai, chân, khơng có chuột chết Nhƣ vậy, với nồng độ 1g/kg, 10g/kg, 20g/kg, 30g/kg, 40g/kg, 50g/kg cao chiết CHCl3, cao EtOAc cặn nƣớc từ Dứa dại khơng gây độc tính chuột nhắt trắng 3.2 Ảnh hƣởng cao chiết từ Dứa dại đến s huyết học 3.2.1 Ảnh hƣởng cao CHCl3 từ Dứa dại đến s huyết học Kết nghiên cứu số lƣợng hồng cầu, hàm lƣợng hemoglobin, số lƣợng bạch cầu chuột nhắt trắng sau sử dụng cao CHCl3 từ Dứa dại đƣợc trình bày bảng 3.2.1 21 Bảng 3.2.1 Số lượng hồng cầu chuột nhắt trắng (Triệu TB/mm3), hàm lượng Hemoglobin(g/100ml máu), số lượng bạch cầu (ngàn TB/mm3) Liều lƣợng Phân lô cao CHCl3 (g/kg/ngày) Số lƣợng Hàm lƣợng Số lƣợng hồng cầu Hemoglobin bạch cầu (triệu (g/100ml (ngàn TB/mm3) máu) TB/mm3) 1: ĐC âm Uống nƣớc 7,97  0,03 10,68  0,04 7,04  0,04 8,01  0,03 10,82  0,09 9,11  0,03 10 8,08  0,07 11,12  0,11 9,71  0,03 20 8,13  0,06 11,35  0,05 10,82  0,02 30 8,34  0,03 11,48  0,21 14,21  0,02 40 8,47  0,02 11,54  0,02 17,01  0,02 50 9,11  0,06 12,01  0,07 19,03  0,04 Hình 3.2.1 Số lượng hồng cầu chuột nhắt trắng (Triệu TB/mm3), hàm lượng Hemoglobin(g/100ml máu), số lượng bạch cầu (ngàn TB/mm3) sử dụng cao CHCl3 từ Dứa dại 22 Qua bảng 3.2.1 hình 3.2.1 cho thấy: - Số lƣợng hồng cầu tăng dần từ lô (8,01 triệu TB/mm3) đến lô 7(9,11 triệu TB/mm3 ) cao so với lô đối chứng âm (lô 1) (7,97 triệu TB/mm3 ) - Hàm lƣợng Hb tăng dần từ lô (10,82 g/100ml máu) đến lô (12,01 g/100ml máu) tƣơng ứng với mức tăng hồng cầu cao lô đối chứng sinh học (10,68 g/100ml máu) - Số lƣợng bạch cầu tăng dần từ lô (9,11 ngàn TB/mm3) đến lô (19,03 ngàn TB/mm3) cao so với lô đối chứng âm (lô 1) (7,04 ngàn TB/mm3) Nhƣ vậy, số huyết học lô uống cao chiết CHCl3 cao so với lơ đối chứng, hay nói cách khác cao CHCl ảnh hƣởng đến chức tạo hồng cầu bạch cầu Điều giải thích chất có dịch chiết mà điển hình Flavonoid + Flavonoid: giúp tiết kiệm lƣợng vitamin C sử dụng, giúp tích lũy vitamin C mơ tổ chức Khi nồng độ vitamin C tăng lên thúc đẩy trình khử Fe3+ thành Fe2+ dày tăng khả hấp thu sắt ruột Nguyên tố sắt thành phần cấu tạo nên nhân hem tham gia cấu trúc nên tế bào hồng cầu [8], [16] + Các Flavonoidgiúp tăng cƣờng chức hệ miễn dịch, chúng có khả tạo phức với ion kim loại nên có tác dụng nhƣ chất xúc tác ngăn cản phản ứng oxy hoá Do đó, chất flavonoid có tác dụng bảo vệ thể thơng qua việc tăng số lƣợng bạch cầu Ngồi ra, flavonoid cịn có khả ức chế sản xuất giải phóng histamin 3.2.2 Ảnh hƣởng cao EtOAc từ Dứa dại đến s huyết học Kết nghiên cứu số lƣợng hồng cầu, hàm lƣợng hemoglobin, số lƣợng bạch cầu chuột nhắt trắng sau sử dụng cao EtoAc từ Dứa dại đƣợc trình bày bảng 3.2.2 23 Bảng 3.2.2 Số lượng hồng cầu chuột nhắt trắng (Triệu TB/mm3), hàm lượng Hemoglobin(g/100ml máu), số lượng bạch cầu (ngàn TB/mm3) Liều lƣợng Phân lô cao EtOAc (g/kg/ngày) Số lƣợng Hàm lƣợng Số lƣợng hồng cầu Hemoglobin bạch cầu (triệu (g/100ml (ngàn TB/mm3) máu) TB/mm3) 1: ĐC âm Uống nƣớc 7,97  0,03 10,68  0,04 7,04  0,04 8,02  0,03 10,98  0,11 9,34  0,03 10 8,12  0,08 11,02  0,11 10,31  0,06 20 8,39  0,07 11,35  0,05 15,11  0,06 30 9,08  0,02 11,98  0,21 24,62  0,02 40 9,34  0,02 12,21  0,17 27,90  0,05 50 9,42  0,07 12,27  0,21 36,63  0,02 Hình 3.2.3 Số lượng hồng cầu chuột nhắt trắng (triệu TB/mm3), hàm lượng Hemoglobin(g/100ml máu), số lượng bạch cầu (ngàn TB/mm3) sử dụng cao EtOAc từ Dứa dại 24 Qua bảng 3.2.2 hình 3.2.2 cho thấy: - Số lƣợng hồng cầu tăng dần từ lô (8,02 triệu TB/mm3) đến lô (9,42 triệu TB/mm3 ) cao so với lô đối chứng âm (lô 1) (7,97 triệu TB/mm3 ) - Hàm lƣợng Hb tăng dần từ lô (10,98g/100ml máu) đến lô (12,27 g/100ml máu) tƣơng ứng với mức tăng hồng cầu cao lô đối chứng sinh học (10,68 g/100ml máu) - Số lƣợng bạch cầu tăng dần từ lô (9,34ngàn TB/mm3) đến lô (36,63 ngàn TB/mm3) cao so với lô đối chứng âm (lô 1) (7,04 ngàn TB/mm3) Nhƣ vậy, số huyết học lô uống cao chiết EtOAc cao so với lơ đối chứng, hay nói cách khác cao EtOAc ảnh hƣởng đến chức tạo hồng cầu bạch cầu Điều giải thích chất có dịch chiết: + Ankaloid có tác dụng kích thích hình thành protein tủy xƣơng giúp tủy xƣơng tổng hợp tế bào hồng cầu [8], [16] + Cao dịch chiết Dứa dại có hoạt tính kháng viêm, chống khối u, làm gia tăng khả miễn dịch thông qua việc tăng số lƣợng TB bạch cầu hệ tuần hoàn [29], [31] 3.2.3 Ảnh hƣởng cặn nƣớc từ Dứa dại đến s huyết học Kết nghiên cứu số lƣợng hồng cầu, hàm lƣợng hemoglobin, số lƣợng bạch cầu chuột nhắt trắng sau sử dụng cặn nƣớc từ Dứa dại đƣợc trình bày bảng 3.2.3 25 Bảng 3.2.3 Số lượng hồng cầu chuột nhắt trắng (Triệu TB/mm3), Hàm lượng Hemoglobin(g/100ml máu), Số lượng bạch cầu (ngàn TB/mm3) Phân lô Số lƣợng Hàm lƣợng Số lƣợng Liều lƣợng cao nƣớc hồng cầu Hemoglobin bạch cầu (g/kg/ngày) (triệu (g/100ml (ngàn TB/mm3) máu) TB/mm3) 1: ĐC âm Uống nƣớc 7,97  0,03 10,68  0,04 7,04  0,04 8,05  0,03 11,01  0,12 9,01  0,03 10 8,24  0,08 11,22  0,11 9,61  0,07 20 8,59  0,07 11,69  0,05 10,41  0,06 30 9,11  0,02 12,01  0,21 11,23  0,03 40 9,43  0,05 12,25  0,17 11,98  0,02 50 9,52  0,03 12,37  0,21 12,42  0,07 Hình 3.2.3 Số lượng hồng cầu chuột nhắt trắng (Triệu TB/mm3), hàm lượng Hemoglobin(g/100ml máu), số lượng bạch cầu (ngàn TB/mm3) sử dụng cặn nước từ Dứa dại 26 Qua bảng 3.2.3 hình 3.2.3 cho thấy: - Số lƣợng hồng cầu tăng dần từ lô (8,05 triệu TB/mm3) đến lô (9,52 triệu TB/mm3 ) cao so với lô đối chứng âm (lô 1) (7,97 triệu TB/mm3 ) - Hàm lƣợng Hb tăng dần từ lô (11,01g/100ml máu) đến lô (12,37 g/100ml máu) tƣơng ứng với mức tăng hồng cầu cao lô đối chứng sinh học (10,68 g/100ml máu) - Số lƣợng bạch cầu tăng dần từ lô (9,01ngàn TB/mm3) đến lô (12,42 ngàn TB/mm3) cao so với lô đối chứng âm (lô 1) (7,04 ngàn TB/mm3) Nhƣ vậy, số huyết học lô uống cặn nƣớc cao so với lô đối chứng, hay nói cách khác cao cặn nƣớc ảnh hƣởng đến chức tạo hồng cầu bạch cầu Điều giải thích chất có dịch chiết: + Coumarin chất có tác động kích thích vào khả miễn dịch thể chuột nhắt trắng thông qua việc huy động số lƣợng bạch cầu máu dẫn đến số lƣợng TB bạch cầu [4],[8] So sánh vào kết khảo sát ảnh hƣởng cao chiết CHCl3 EtOAC cặn nƣớc từ Dứa dại đênc số huyết học cho thấy cặn nƣớc có tác dụng làm tăng số lƣợng hồng cầu hàm lƣợng hemoglobin cao cao EtOAc có tác dụng làm tăng số lƣợng bạch cầu cao 27 HƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Từ kết thu đƣợc rút số kết luận sau: - Cao chiết CHCl3, EtOAc cặn nƣớc từ dứa dại liều 1g/kg thể trọng, 10g/kg thể trọng , 20g/kg thể trọng, 30g/kg thể trọng, 40g/kg thể trọng 50g/kg thể trọng khơng gây độc tính cấp nhóm chuột nghiên cứu - Các cao chiết CHCl3, EtOAc cặn nƣớc từ Dứa dại có tác dụng làm tăng số hồng cầu, bạch cầu hemoglobin Trong đó, cặn nƣớc có tác dụng làm tăng số lƣợng hồng cầu hàm lƣợng hemoglobin cao cao EtOAc có tác dụng làm tăng số lƣợng bạch cầu cao 4.2 Kiến nghị Qua trình tiến hành đề tài, tơi nhận thấy số cao từ Dứa dại khơng gây độc tính cấp chuột nhắt trắng nồng độ nghiên cứu Tuy nhiên cao chiết làm tăng số huyết học máu chuột nhắt trắng cho chuột uống khoảng thời gian 15 ngày Vì vậy, để thu đƣợc kết tốt tồn diện hơn, em có số kiến nghị sau: Cần tiến hành thực nghiệm nghiên cứu tác dụng gây độc tính cấp số cao nồng độ cao tiến hành nghiên cứu độc tính cấp bán trƣờng diễn Tiếp tục tiến hành nghiên cứu phân đoạn dịch chiết từ Dứa dại để khẳng định đƣợc đƣợc tác dụng gây độc tính cấp Cần thí nghiệm nhiều đối tƣợng để kết luận có độ tin cậy cao 28 D NH MỤ TÀI LIỆU TH M KHẢO * Tài liệu nƣớc [1] Bùi Thị B ng (2008), “ Sàng lọc số vị thuốc, thuốc nhằm điều chế thuốc điều trị viêm gan mạn siêu vi B” [2] Tạ Văn Bình (2007), Những nguyên lý tảng bệnh đái tháo đường, tăng glucose máu, Nhà xuất Y học, Hà Nội [3] Võ Văn Chi (2004), Từ điển thực vật thông dụng tập II, NXB khoa học kỹ thuật Hà Nội, 1857-1859 [4] Tạ Công Thùy Dƣơng (2011), Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học rễ dứa kaida (Pandanus kaida Kurz), khóa luận tốt nghiệp Dƣợc s đại học, Đại học Y dƣợc Tp.Hồ Chí Minh [5] Trịnh Hữu H ng, Đỗ Công Huỳnh (2001), Sinh lý học người động vật, NXB khoa học kỹ thuật [6] Phạm Hoàng Hộ (2002), Cây cỏ Việt Nam, tập III, NXB trẻ, 333 [7] Nguyễn Minh Khởi, Trịnh Thị Điệp, Đỗ Thị Phƣơng, Phạm Nguyệt H ng, Nguyễn Thị Phƣợng, Hồng Thị Diệu Hƣơng (2011), Độc tính cấp bán trường diễn thân bồ lược vàng, Tạp chí Dƣợc liệu, tập 16, số 1+2, tr 3844 [8] Phạm Thanh Kỳ (1998), Bài giảng dược liệu tập II, trƣờng đại học dƣợc Hà Nội [9] Nguyễn Chi Mai, Trần Thị Việt Hồng, Phan Kim Ngọc (2001), Thực tập sinh lý ngƣời động vật, NXB đại học quốc gia Tp Hồ Chí Minh, trang 23-31, 35-37 [10] Ngô Văn Thu (2001), Bài giảng dược liệu tập I, Trƣờng ĐH Dƣợc Hà Nội [11] Trần Văn Hoài Thƣơng, Giáo trình độc chất học đại cương – chương I, Đại học nơng lâm TP Hồ Chí Minh, 2012 [12] Phan Hoài Trung, Đào Văn Phan, Vũ Thị Phƣơng Nguyễn Khánh Hòa, Viện Y học cổ truyền Quân đội, Trƣờng Đại học Y Hà Nội (2003), Nghiên 29 cứu độc tính cấp bán trường diễn thuốc sinh tinh thang, Tạp chí nghiên cứu y học [13] Viện Dƣợc liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam * Tài liệu nƣớc [14] Afifah Binti Asmain (2010), Extracts of the subterranean roots from Pandanus amaryllifolius, dissertation of pharmacist, Faculty of pharmacy, Universiti Teknilogi Mara [15] Akira Inada, Yasuyuki Ikeda, Hiroko Murata, Yuka Inatomi, Tsutomu Nakanishi, Kinkini Bhattacharyya, Tanusree Kar, Gabriele Bocelli, Andrea Cantoni (2005), Unusual cycloanostanes from leaves of Pandanus boninensis, Phytochemistry, 66, 2729-2733 [16] Anglela A Salim, Mary J Garson, and David J Craik (2004), New alkaloids from Pandanus amaryllifolius, Journal of Natural Products, 67, 54-57 [17] Hamid, Kaiser (2011), Screening of different parts of the plant Pandanus odorus for its cytotoxic and antimicrobial activity, Journal ofPharmaceutical Sciences and Research [18] Hiromitsu Takayama, Tomotake Ichikawa, Mariko Kitajima, Norio Aimi, Dazy Lopezb, Maribel G Nonatob (2001), A new alkaloid, pandanamine; finding of an anticipated biogenetic intermediate in Pandanus amaryllifolius Roxb, Tetrahedron Letters, 42, 2995-2996 [19] Laksanalamai, V and Ilangantileke, S (1993) Cereal Chem.70, 381 [20] Lawrence MJ, & Brown RW (1974) Mammals of Britain Their Tracks, Trails and Signs Blandford Press [21] Linda S M Ooi, Samuel S M Sun, Vincent E C Ooi (2004), Purification and characterization of a new antiviral protein from the leaves of Pandanus amaryllifolius, The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 36 (8), 1440-1446 [22] Lois Englberger, Joseph Schierle, Peter Hofmann, Adelino Lorens, Kiped Albert, Amy Levendusky, Yumiko Paul, Edgar Lickane, Amato Elymore, Marie Maddison, Ione deBrum, Janet Nemra, Julia Alfred, Nancy 30 Vander Velde, Klaus Kraemer (2009), Carotenoid and vitamin content of Micronesian atoll foods: pandanus (Pandanus tectorius) and garlic pear (Crataeva speciosa) fruit, Journal of Food Composition and Analysis, 22, 1-8 [23] Mario A Tan, Noriyuki Kogure, Mariko Kitajima, Hiromitsu Takayama (2011), Total synthesis of dubiusamine C, a plausible minor alkaloid in Pandanus dubius, Philippine Science Letters, (2), 98-102 [24] Nigel Unwin and Amanda Marlin (2004), Diabetes Action Now: WHO and IDF working together to raise awareness worldwide, Diabetes Voices, 49 (2), June 2004 [25] Panigrahi B.B, Panda P.K., Patro V.J (2011), Antitumor and in vitro antioxidant activities of Pandanus odoratissimus Linn against ehrlich ascites carcinoma in swiss albino mice, Internation Joural of Pharmaceutical Science Review and Research, (2), 202 [26] Ramesh Londonkar and Abhaykumar Kamble (2011), Hepatotoxic and invivo antioxidant potential of Pandanus odoratissimus against carbon tetrachloride induced liver injury in rats, Orient Pharm Exp Med 11: 229-234 [27] Ramesh Londonkar, Abhaykumar Kamble and V Chinnappa Reddy (2010), Anti- inflammatory activity of Pandanus odoratissimus extract, International Journal of Pharmacology, 6, 311-314 [28] Sasidharan S, Sumathi V, Jegathambigai NR, Latha LY (2011), Antihyperglyaemic effects of ethanol extracts of Carica papaya and Pandanus amaryllifolius leaf in streptozotocin-induced diabetic mice, Natural Products Reseach, 25 (20),1982-7 [29] Siti Alwani Ariffin, Hannis Fadzillah Mohsin, Zolkapli Eshak, Ibtisam Abdul Wahab (2012), Crystalline calcium oxalate in Pandanus odoratissimus, International Journal on Advanced Science, Engineering and Information Technology, (4) [30] SunKun (2010), Robert A DeFilipps,Floraof ChinaPandanaceae,23, 128-130 31 [31] Ting-Ting Jong, Shang-Whang Chau (1998), Antioxidative activities of constituents isolated from Pandanus odoratissimus, Phytochemistry, 49 (7), 2145-2148 32 ... s huyết học chuột nhắt trắng (Mus musculus Var Albino) ” Mục tiêu đề tài Nghiên cứu tác dụng gây độc tính cấp ảnh hƣởng đến số huyết học cao chiết từ Dứa dại (Pandanus odoratissimus L. ) chuột nhắt. .. nhắt trắng (Mus musculus Var Albino) 19 3.2 Ảnh hƣởng cao chiết từ Dứa dại đến số huyết học 21 3.2.1 Ảnh hƣởng cao CHCl3 từ Dứa dại đến số huyết học 21 3.2.2 Ảnh hƣởng cao EtOAc từ Dứa dại. .. sử dụng nghiên cứu tác dụng Dứa dại Xuất phát từ l? ? trên, chúng tơi tiến hành chọn đề tài: ? ?Nghiên cứu tác dụng gây độc tính cấp ảnh hƣởng s cao chiết từ Dứa dại (Pandanus odoratissimus L. ) đến