KLTN- Anthraquinon NGAN

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA HÓA HỌC Đinh Thị Tuyết Ngân XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN ANTHRAQUINON TRONG DƯỢC LIỆU HÀ THỦ Ô ĐỎ BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) Khóa luận tốt nghiệp đại học hệ quy Ngành Hóa phân tích (Chương trình đào tạo chuẩn) Hà Nội - 2016 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA HÓA HỌC Đinh Thị Tuyết Ngân XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN ANTHRAQUINON TRONG DƯỢC LIỆU HÀ THỦ Ô ĐỎ BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) Khóa luận tốt nghiệp đại học hệ quy Ngành Hóa phân tích Chương trình đào tạo chuẩn Cán hướng dẫn: TS Phương Thiện Thương ThS Nguyễn Thị Hà Ly Hà Nội - 2016 LỜI CẢM ƠN Lời em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Phương Thiện Thương, người tạo điều kiện, hướng dẫn giúp đỡ em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn nhiệt tình giúp đỡ Thạc Sĩ Nguyễn Thị Hà Ly, không dành nhiều thời gian quý báu để tận tình hướng dẫn truyền đạt cho em nhiều kiến thức, kinh nghiệm bổ ích mà cịn ln người động viên, khích lệ trực tiếp chia sẻ em khó khăn gặp phải từ bước hồn thành khóa luận Em xin cảm ơn tạo điều kiện PGS.TS Tạ Thị Thảo, giới thiệu giúp đỡ em có hội đến Viện Dược Liệu để thực hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn tới ban lãnh đạo Viện Dược liệu anh chị công tác khoa Hố phân tích – Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu tạo điều kiện thuận lợi cho em học tập nghiên cứu môi trường đại Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo giảng dạy Khoa Hóa Học trường Đại học Khoa học Tự nhiên, thầy cô mơn Hóa Phân Tích, cho em kiến thức vơ q báu, góp phần định hướng nghiên cứu sẵn sàng giải đáp vấn đề em chưa hiểu rõ liên quan đến nội dung đề tài Tôi xin gửi lời cám ơn đặc biệt tới gia đình bạn bè tơi, người ln bên động viên khuyến khích học tập nghiên cứu, quan tâm, chia sẻ tơi khó khăn Một lần xin gửi lời cám ơn chân thành tới giúp đỡ sẻ chia mà nhận thời gian qua, động lực khơng nhỏ giúp tơi hồn thành khóa luận Hà Nội, tháng năm 2016 Sinh viên Đinh Thị Tuyết Ngân MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU CHƯƠNG – TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan hà thủ ô đỏ 1.1.1 Cây hà thủ ô đỏ 1.1.2 Dược liệu hà thủ ô đỏ 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Công dụng tác dụng dược lý hà thủ ô đỏ 1.2 Tổng quan phương pháp phân tích thành phần hóa học hà thủ đỏ 10 1.2.1 Các nghiên cứu giới 10 1.2.2 Các nghiên cứu nước 13 CHƯƠNG : THỰC NGHIỆM 17 2.1 Mục tiêu đối tượng nghiên cứu 17 2.2 Chất chuẩn, hóa chất, thiết bị 18 2.2.1 Chất chuẩn 18 2.2.2 Hoá chất 18 - Các dung môi dùng cho sắc ký lỏng hiệu cao hãng Merck (hoặc tương đương) 18 2.2.3.Thiết bị, dụng cụ 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Chuẩn bị dung dịch mẫu chuẩn 19 2.3.2 Phương pháp xử lý mẫu 19 2.4 Phương pháp phân tích 21 2.4.1 Các điều kiện phân tích hệ thống HPLC-UV 21 2.4.2 Các điều kiện phân tích hệ thống HPLC-FLD 21 2.5 Phân tích mẫu thực tế 22 2.5.1 Công thức tính hàm lượng EM PS cho mẫu thực tế 22 2.6 Đánh giá phương pháp 23 2.6.1 Tính thích hợp hệ thống sắc kí 23 2.6.2 Tính đặc hiệu phương pháp 23 2.6.3 Độ tuyến tính 23 2.6.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 23 2.6.5 Độ xác 24 2.6.6 Độ (hiệu suất thu hồi) 24 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 3.1 Xây dựng phương pháp phân tích anthraquinon HTOĐ HPLC-UV 25 3.1.1 Tính thích hợp hệ thống 25 3.1.2 Độ đặc hiệu 26 3.1.3 Kết khảo sát độ tuyến tính 27 3.1.3.2 Đánh giá phương trình hồi quy đường chuẩn 29 3.1.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 29 3.1.5 Độ xác 30 3.1.6 Kết đánh giá độ (hiệu suất thu hồi) 32 3.1.7 Đánh giá hàm lượng EM PS số mẫu HTOĐ kỹ thuật HPLC-UV 33 3.2 Xây dựng phương pháp phân tích anthraquinon HTOĐ HPLC-FLD 35 3.2.1 Tính thích hợp hệ thống 35 3.2.2 Độ đặc hiệu 36 Các giá trị hệ số tương quan (r2) lớn 0.999, chứng tỏ phụ thuộc nồng độ EM (PS) với giá trị diện tích pic có tương quan tuyễn tính chặt chẽ 39 3.2.3.2 Đánh giá phương trình hồi quy đường chuẩn 39 3.2.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 39 3.2.5 Độ xác 39 3.2.6 Kết đánh giá độ (hiệu suất thu hồi) 42 3.2.7 Đánh giá hàm lượng EM PS số mẫu HTOĐ kỹ thuật HPLC-FLD 43 3.3.2 Đánh giá so sánh kết phân tích thành phần EM, PS HTOĐ phương pháp HPLC-UV HPLC-FLD 44 KẾT LUẬN 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 PHỤ LỤC 49 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Thông tin mẫu phân tích 17 Bảng 3.1 Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống HPLC-UV EM 25 Bảng 3.2 Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống HPLC-UV PS 26 Bảng 3.3 Kết khảo sát độ tuyến tính EM PS hệ thống HPLC UV 28 Bảng 3.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng EM PS hệ thống HPLC-UV 29 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ lặp lại hệ thống HPLC-UV 30 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ xác trung gian hệ thống HPLC UV 31 Bảng 3.7 Kết đánh giá hiệu suất thu hồi hàm lượng EM PS hệ thống HPLC-UV 33 Bảng 3.8 Kết phân tích thành phần EM PS mẫu dược liệu HTOĐ kỹ thuật HPLC-UV 33 Bảng 3.9 Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống HPLC-FLD EM 35 Bảng 3.10 Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống HPLC-FLD PS 36 Bảng 3.11 Kết khảo sát độ tuyến tính EM PS hệ thống HPLC-FLD 38 Bảng 3.12 Giới hạn phát giới hạn định lượng EM PS hệ thống HPLC-FLD 39 Bảng 3.13 Kết khảo sát độ lặp lại tên hệ thống HPLC-FLD 40 Bảng 3.14 Kết khảo sát độ xác trung gian hệ thống HPLC-FLD 41 Bảng 3.15: Kết đánh giá hiệu suất thu hồi hàm lượng EM PS hệ thống HPLC-FLD 42 Bảng 3.16 Kết phân tích thành phần EM PS mẫu dược liệu HTOĐ kỹ thuật HPLC-FLD 43 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh hà thủ ô đỏ Hình 1.2 Hình ảnh dược liệu HTOĐ dược liệu HTOĐ cắt lát Hình 1.3 Khung mạch cacbon nhóm chất stilben Hình 1.4 CTCT số hợp chất stilben có dược liệu HTOĐ Hình 1.5 Khung mạch cacbon hợp chất anthraquinon Hình 1.6 CTCT số hợp chất anthraquinon dược liệu HTOĐ Hình 2.1 Hình ảnh mẫu dược liệu HTOĐ 17 Hình 3.1.Hình ảnh sắc ký đồ đánh giá tính đặc hiệu phương pháp HPLCUV 27 Hình 3.2 Khoảng tuyến tính EM PS hệ thống HPLC-FLD 28 Hình 3.3 Hình ảnh sắc ký đồ đánh giá tính đặc hiệu phương pháp HPLCFLD 37 Hình 3.4 Khoảng tuyến tính EM PS hệ thống HPLC-UV 38 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt CAN DĐVN DĐTQ EM Tên đầy đủ HPLC-MS Acetonitril Dược Điển Việt Nam Dược Điển Trung Quốc Emodin High performance liquid chromatography: Sắc ký lỏng hiệu cao Sắc ký lỏng hiệu cao kết nối detector khối phổ HPLC-UV Sắc ký lỏng hiệu cao kết nối detector tử ngoại HPLC-FLD Sắc ký lỏng hiệu cao kết nối detector huỳnh quang HTO Hà thủ ô HTOĐ Hà thủ ô đỏ LOD LOQ MeOH PS Ppm Ppb RP-HPLC % RSD SD tR THSG UV-VIS VWD Limit of Detection: Giới hạn phát Limit of Quantitation: Giới hạn định lượng Metanol Physcion Parts per million: Phần triệu Parts per billion: Phần tỷ Reverse phase-HPLC: Sắc ký lỏng pha đảo % Relative standard deviation: % Độ lệch chuẩn tương đối Standard deviation: Độ lệch chuẩn Retention time: Thời gian lưu 2,3,5,4′-tetrahydroxystilben-2-O-β-D-Glucosid Ultraviolet-Visible: Tử ngoại khả kiến Variable Wavelength Detector HPLC MỞ ĐẦU Từ xa xưa dân tộc ta biết sử dụng cỏ dùng làm thuốc để phòng điều trị bệnh Xã hội ngày phát triển tiến bộ, y học Ngồi chuẩn đốn điều trị y học tiên tiến đại, người Việt thừa hưởng thêm phương pháp chữa bệnh độc đáo từ thuốc, thuốc dân gian gìn giữ truyền thụ qua nhiều hệ Giá trị góp phần xây dựng nên y học nước ta phát triển giữ nét sắc riêng dân tộc Hà thủ ô đỏ dược liệu quý mà dân gian lưu truyền từ xa xưa , xem loại thần dược cho việc tăng cường sức khỏe kéo dài tuổi thọ Theo y học cổ truyền, hà thủ đỏ có cơng dụng bổ gan thận, ích tinh huyết, nhuận tràng, thơng tiện, làm đen râu tóc Kết nghiên cứu đại cho thấy, tác dụng dược lý hà thủ ô đỏ phong phú điều chỉnh rối loạn lipid máu, giúp ngăn ngừa tình trạng vữa xơ động mạch, bảo vệ gan, thúc đẩy trình sản sinh hồng cầu, tăng khả miễn dịch, cải thiện hoạt động hệ thống tuyến nội tiết, đặc biệt tuyến thượng thận giáp trạng Ngồi ra, hà thủ đỏ cịn có tác dụng kháng khuẩn, nhuận tràng, giải độc, tăng khả chống rét thể, chống lão hóa giúp trẻ hóa da Với nhiều cơng dụng q vậy, hà thủ ô đỏ ngày sử dụng rộng rãi thị trường Nguồn nguyên liệu phần trồng Việt Nam, phần lớn nhập từ nước khác (Lào, Trung Quốc,…) với chất lượng chưa kiểm sốt Vì xuất tình trạng dược liệu hà thủ ô đỏ lưu thông thị trường thường bị giả mạo không đạt yêu cầu chất lượng Điều dẫn tới hậu ảnh hưởng đến sức khỏe người bệnh, ảnh hưởng đến quyền lợi người tiêu dùng, lâu ngày dẫn tới niềm tin người dân vào thuốc y học cổ truyền Vì vậy, cơng tác kiểm tra, đánh giá chất lượng dược liệu hà thủ ô đỏ quan trọng Ở Việt Nam, việc đánh giá chất lượng dược liệu hà thủ ô đỏ thường thực theo Dược điển Việt Nam IV, nhiên quy định cịn sơ sài, khơng đáp ứng yêu cầu kiểm tra đánh giá chất lượng hà thủ ô đỏ thị trường Một số nghiên cứu phân tích thành phàn hóa học, đánh giá chất lượng dược liệu hà thủ ô đỏ Việt Nam thực nhằm gợi ý cho việc nâng cấp chuyên luận hà ... dẫn chất anthraquinon tự do, 0,8058% dẫn chất anthraquinon toàn phần Sau chế, 3,82% tanin 0,1127% dẫn chất anthraquinon tự 0,2496% dẫn chất anthraquinon toàn phần [4] Trong đó, stilbenoid anthraquinon. .. chất stilben có dược liệu HTOĐ 1.1.3.3 Thành phần anthraquinon hà thủ ô đỏ Những hợp chất anthraquinon nằm nhóm lớn hydroxyquinon (xem hình 1.5) Anthraquinon tồn dạng glycosid gọi anthraglycosid... anthraglycosid polyoxy anthraquinon Gắn vào nhân thường có nhóm chức -OH, -OCH3, -CH3, -COOH Những dẫn chất anthraquinon có màu từ vàng, vàng cam đến đỏ [13] Một số dẫn xuất anthraquinon phổ biến