Nghiên cứu vi nhân giống cây trân châu xanh (nervilia aragoana gaudich)

TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ DẦU MỘT KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CHUYÊN NGÀNH: SƯ PHẠM SINH HỌC Nghiên cứu vi nhân giống Trân châu xanh (Nervilia aragoana Gaudich) SINH VIÊN: NGUYỄN THỊ XUÂN THÙY Bình Dương, tháng năm 2014 TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ DẦU MỘT KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CAO ĐẲNG NIÊN KHÓA 2014 - 2018 NGHIÊN CỨU VI NHÂN GIỐNG CÂY TRÂN CHÂU XANH (Nervilia aragoana Gaudich) Ngành: Sư phạm Chuyên ngành: Sư phạm sinh học Giảng viên hướng dẫn : ThS NGUYỄN THANH THUẬN Sinh viên thực hiện: NGUYỄN THỊ XUÂN THÙY MSSV: 111C840072 Lớp : C11SH02 Bình Dương, tháng năm 2014 MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT iii DANG MỤC BẢNG BIỂU iv DANH MỤC HÌNH v MỞ ĐẦU 1 Lý lựa chọn đề tài Mục tiêu đề tài Đối tượng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đối tượng nghiên cứu 3.2 Phạm vi nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Lược sử phát triển nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2 Những ưu điểm hạn chế cơng nghệ nhân giống vơ tính in vitro 1.2.1 Ưu điểm nhân giống vơ tính in vitro 1.2.2 Hạn chế nhân giống vơ tính in vitro 10 1.3 Ứng dụng nhân giống vơ tính in vitro số dược liệu 10 1.4 Tình hình nghiên cứu thuộc lĩnh vực đề tài 11 Chương PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Phương pháp nghiên cứu tài liệu 14 2.2 Phương pháp nghiên cứu phịng thí nghiệm 14 2.2.1 Điều kiện môi trường nuôi cấy 14 2.2.2 Nghiên cứu khả khử trùng mẫu 15 2.2.3 Nghiên cứu khả tạo cụm chồi điều kiện in vitro 16 2.2.4 Nghiên cứu khả tạo củ Trân châu xanh điều kiện in vitro 16 2.2.5 Nghiên cứu khả tạo Trân châu xanh điều kiện in vitro 17 2.3 Phương pháp xử lý thống kê số liệu 17 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 19 3.1 Thí nghiệm 1: Khử trùng mẫu 19 3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng BAP đến khả tạo cụm chồi mẫu 20 3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng BAP kết hợp với nước dừa lên khả tạo cụm chồi từ chồi đỉnh 22 3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng BAP kết hợp với nước dừa lên khả tạo cụm chồi từ chồi nách 24 3.5 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu khả tạo củ Trân châu xanh điều kiện in vitro 26 3.6 Thí nghiệm 6: Nghiên cứu khả tạo Trân châu xanh điều kiện in vitro 27 KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 DANH MỤC NHỮNG TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Ý nghĩa BAP Benzyl amino purine DNA Deoxyribonucleotid acid WPM Woody plant medium IAA β – indolacetic acid INRA Institut Agronomique National dela Recherche DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 2.1 Thành phần môi trường WPM (Woody plant medium) 14 Bảng 3.1 Tỉ lệ (%) mẫu vô trùng nảy chồi sau tuần nuôi cấy 19 Bảng 3.2 Sự thành lập cụm chồi từ chồi đỉnh in vitro 20 Bảng 3.3 Ảnh hưởng BAP kết hợp với nước dừa lên khả tạo cụm chồi chồi đỉnh 22 Bảng 3.4 Ảnh hưởng BAP kết hợp với nước dừa lên khả tạo cụm chồi chồi nách 24 Bảng 3.5Khả tạo củ trân châu xanh môi trường nuôi cấy 26 Bảng 3.6Khả tạo trân châu xanh môi trường nuôi cấy 28 DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Củ Trân châu xanh Hình 3.1 Cây chồi in vitrotừ củ Trân châu xanh 20 Hình 3.2 Chồi in vitro hình thành sau tuần ni cấy môi trường WPM bổ sung 0,5mg/l BAP 22 Hình 3.3 Chồi in vitro hình thành từ đỉnh chồi sau tuần nuôi cấy môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/l BAPvà 15% nước dừa 24 Hình 3.4 Chồi in vitro hình thành từ chồi nách sau tuần nuôi cấy môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/l BAPvà 15% nước dừa 26 Hình 3.5Củ Trân châu xanh hình thành sau tuần ni cấy mơi trường WPM bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp với 15% nước dừa 27 Hình 3.6 Lá Trân châu xanh hình thành sau tuần ni cấy môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp với 15% nước dừa 29 MỞ ĐẦU Lý lựa chọn đề tài Ngày nay, nguồn dược liệu quý bị khai thác mức dẫn đến cạn kiệt nguồn dược liệu phục vụ cơng tác phịng trị bệnh, chí nhiều loài thực vật dược quý đứng trước nguy bị tuyệt chủng Do đó, cơng tác bảo tồn phát triển nguồn dược liệu quý u cầu cấp bách Nó khơng đáp ứng nhu cầu tạo nguồn dược liệu ổn định phục vụ cơng tác phịng trị bệnh mà cịn góp phần bảo tồn nguồn gen q, ngồi cịn góp phần to lớn vào phát triển kinh tế xã hội Một vấn đề khó khăn nguồn nguyên liệu để thực nhân giống loài thực vật dược liệu quý khan Do đó, số phương pháp nhân giống truyền thống nhân giống hữu tính, nhân giống vơ tính chiết, ghép, giâm cành … gặp nhiều hạn chế nguồn nguyên liệu khả nhân nhanh số lượng lớn thuốc quý Kỹ thuật nhân giống in vitro liệu pháp tốt cho việc giải vấn đề này, khơng cho hiệu kinh tế cao việc nhân nhanh tạo số lượng lớn đồng điều, bệnh mà cịn giữ tính trạng q bố mẹ cho phép chủ động cung cấp nguồn giống vật liệu vơ trùng cho thí nghiệm chọn dịng tế bào vào thời điểm năm Trân châu xanh (Nervilia aragoana Gaudich) (tên khác: Thanh thiên quỳ xanh, Lan lá) thuộc họ Lan (Orchidaceae) loại địa lan nhỏ, cao từ 10 - 20 cm Thân ngắn, củ trịn to, nặng tới 15 - 20 g Thẳng từ củ, mọc lên có riêng lẻ sau hoa tàn Lá hình tim trịn, xếp theo gân hình chân vịt, đường kính 10 - 25 cm, mép uốn lượn Ra hoa khoảng tháng - Cụm hoa có cán dài 20 - 30 cm Hoa thưa 15 - 20 cái, màu trắng hay màu vàng xanh lục Ra tháng - Loài phân bố Nam Trung Quốc, Thái Lan, Việt Nam Ở nước ta, mọc núi đá, chỗ ẩm mát bóng to đám cỏ dày đặc tỉnh từ Hồ Bình, Lạng Sơn, Kon Tum đến Sơng Bé Ngồi giá trị thẩm mỹ, cịn lồi thực vật dược q có cơng dụng lợi phổi, chữa lao phổi, ho, mụn nhọt, giải độc Bộ phận dùng toàn hay củ, có dùng [4] Do đó, loài bị khai thác mức, dẫn đến nguy tuyệt chủng tự nhiên cao tương lai không xa Theo ghi nhận Sách đỏ Việt Nam, Trân châu xanh mức V – nguy cấp (có thể bị đe dọa tuyệt chủng) [15] Một nghiên cứu Reddy cộng cho thấy cao chiết N aragoana dung môi ethyl acetate có tác dụng kháng nấm chống oxi hóa [22] Từ lí trên, chúng tơi chọn đề tài: “Nghiên cứu vi nhân giống Trân châu xanh (Nervilia aragoana Gaudich)” Mục tiêu đề tài Xác định điều kiện khử trùng mơi trường thích hợp đểvi nhân giống Trân châu xanh Đối tượng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đối tượng nghiên cứu Cây Trân châu xanh (Nervilia aragoana Gaudich) thu nhận tự nhiên thuộc: Chi: Nervilia Lớp: Monocoty Họ: Orchidaceae Bộ: Orchidalesledonae Ngành: Magnoliophyta Hình 3.1 Củ Trân châu xanh 3.2 Phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu điều kiện khử trùng môi trường tối ưu nhân giống vô tính in vitro Trân châu xanh Q trình nghiên cứu diễn phòng thực hành Sinh học, khoa Khoa học tự nhiên, trường Đại học Thủ Dầu Một Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu điều kiện mơi trường ni cấy Mơi trường WPM có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng khác tuỳ theo mục đích thí nghiệm.Nguồn carbon đường saccharose.Môi trường làm đặc agar Môi trường nuôi cấy khử trùng 121oC 18 phút - Nghiên cứu điều kiện khử trùng nhân giống dạng dinh dưỡng hỗn hợp Hyponex số (3g/l), sucrose (30g/l), (1,5mg/l), peptone (1,5 g/l), NAA (5mg/l) agar (10g/l)[18] Hình 2.2 Chồi in vitro hình thành sau tuần nuôi cấy môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/l BAP 3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng BAP kết hợp với nước dừa lên khả tạo cụm chồi từ chồi đỉnh Chồi đỉnh củ nảy chồi từ thí nghiệm cắt khúc cm, cấy lên môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp với nước dừa với thể tích từ 20% Sau - tuần nuôi cấy, mẫu bắt đầu cảm ứng dài Một số mẫu có tượng tạo chồi Kết sau tuần ni cấy trình bày Bảng 3.3 Bảng 2.3 Ảnh hưởng BAP kết hợp với nước dừa lên khả tạo cụm chồi chồi đỉnh BAP (mg/l) Nước dừa (% V) Số chồi/ mẫu Chiều cao chồi (cm) 0,5 3,67 d ± 0,13 2,23 a ± 0,03 0,5 10 5,96ab ± 0,18 0,59bc ± 0,16 0,5 15 6,33a ± 0,12 0,84 b ± 0,19 0,5 20 5,17c ± 0,62 0,62bc ± 0,08 Các chữ khác cột sai khác có ý nghĩa thống kê với P< 0,05 Từ kết Bảng 3.3, nhận thấy tất mơi trường có khả tạo cụm chồi Chồi phát triển khỏe mạnh Tuy nhiên, mơi trường có bổ sung nước dừa chồi phát triển khỏe mạnh hơn, chồi hình thành sớm so với môi trường không bổ sung nước dừa Ở môi trường bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp 15% nước dừa cho kết tốt Số chồi trung bình cao đạt 6,33 chồi/mẫu Chiều cao trung bình 0,84 cm Sau tuần nuôi cấy thấy khác biệt Chồi to khỏe, số mẫu sau thời gian kéo dài (3 tuần) có tượng thắt ngọn, từ hình thành cụm chồi Nước dừa kích thích chồi phát triển mạnh thân nước dừa chứa vitamin, acid amin, đường cần thiết cho Trân châu xanh phát triển Bên cạnh đó, số chồi to khỏe khơng tạo chồi mà kéo dài có tượng tạo Lá to, có màu xanh phát triển sau tuần nuôi cấy Môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/l BAP bổ sung nước dừa với tỉ lệ thể tích 10%, 20% cho kết tốt với số lượng chồi cao, chồi khỏe mạnh Các tượng tương tự môi trường WPM chứa 0.5 mg/l BAP bổ sung nước dừa với tỉ lệ thể tích 15% Từ đó, chúng tơi rút kết luận BAP kích thích tạo cụm chồi, nước dừa kích thích chồi phát triển nhanh khỏe Khi chồi cung cấp chất dinh dưỡng cần thiết số lượng chồi tăng lên Hình 2.3 Chồi in vitro hình thành từ chồi đỉnh sau tuần ni cấy môi trường WPM bổ sung 0.5 mg/l BAP 15% nước dừa 3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng BAP kết hợp với nước dừa lên khả tạo cụm chồi từ chồi nách Chồi nách củ nảy chồi từ thí nghiệm cắt khúc cm, cấy lên môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp với nước dừa với thể tích từ 20% Sau - tuần ni cấy, mẫu bắt đầu cảm ứng dài Một số mẫu có tượng tạo chồi Kết sau tuần ni cấy trình bày Bảng 3.4 Bảng 2.4 Ảnh hưởng BAP kết hợp với nước dừa lên khả tạo cụm chồi từ chồi nách BAP (mg/l) Nước dừa (% V) Số chồi/ mẫu Chiều cao chồi (cm) 0,5 1,67 c ± 0,13 0,23 cd ± 0,03 0,5 10 2,81b ± 0,18 0,38ab ± 0,16 0,5 15 4,53a ± 0,12 0,46a ± 0,19 0,5 20 3,02b ± 0,62 0,32bc ± 0,08 Từ kết Bảng 3.4, nhận thấy tất mơi trường có khả tạo cụm chồi Chồi phát triển khẻ mạnh Tuy nhiên môi trường có bổ sung nước dừa chồi phát triển khỏe mạnh hơn, chồi hình thành sớm so với môi trường không bổ sung nước dừa Ở môi trường bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp 15% nước dừa cho kết tốt Số chồi trung bình cao đạt 4,53 chồi/mẫu Chiều cao trung bình 0,46 cm Sau tuần nuôi cấy mẫu nhú chồi Chồi to khỏe Một số mẫu sau thời gian tuần có tượng tạo củ Củ phình to, có màu trắng có tượng tạo chồi từ củ Nước dừa kích thích chồi phát triển mạnh thân nước dừa chứa vitamin, acid amin, đường cần thiết cho chồi náchcây Trân châu xanh phát triển.Môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/l BAP bổ sung nước dừa với tỉ lệ thể tích 10%, 20% cho kết tốt với số lượng chồi cao, chồi khỏe mạnh Các tượng tương tự môi trường WPM chứa 0,5 mg/l BAP bổ sung nước dừa với tỉ lệ thể tích 15% Từ đó, chúng tơi rút kết luận BAP kích thích tạo cụm chồi từ chồi nách, nước dừa kích thích chồi phát triển nhanh khỏe tạo củ Khơng có tượng tạo rễ Nguyễn Văn Song (2010) với đề tài “Nhân nhanh in vitro lan Kim Điệp (Dendrobium chrysotoxum)” lồi lan có nguy tuyệt chủng, Tạp chí khoa hoc, Đại học Huế (số 64, trang 127) thấy môi trường tốt cho nảy mầm, phát sinh protocom, nhân nhanh protocom, phát sinh chồi từ protocom môi trường MS bổ sung chất điều hòa sinh trưởng kết hợp với 15% nước dừa [10] Huỳnh Thị Đan San, Võ Thị Bạch Mai (2009) với đề tài “Tìm hiểu phát sinh phơi soma từ mô sẹo hà thủ ô đỏ Polygonum multiflorum Thunb in vitro”, Tạp chí phát triển Khoa học Công nghệ (tập 12, số 17) khẳng định nước dừa 10% bổ sung vào môi trường MS cho kết tốt cho phát sinh phơi soma [9] Hình 2.4 Chồi in vitro hình thành từ chồi nách sau tuần nuôi cấy môi trường WPM bổ sung 0.5 mg/l BAP 15% nước dừa 3.5 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu khả tạo củ Trân châu xanh điều kiện in vitro Chồi đỉnh, chồi nách củ nảy chồi từ thí nghiệm cắt khúc cm, cấy lên môi trườngWPM bổ sung từ - mg/l BAP kết hợp với nước dừa với thể tích từ - 20% Kết sau tuần nuôi cấy trình bày Bảng 3.4 Bảng 2.5 Khả tạo củ trân châu xanh môitrường nuôi cấy Môi trường WPM WPM WPM +0,5mg/l +1mg/l BAP BAP Mẫu WPM WPM WPM + +0,5mg/l +0,5mg/l 0,5mg/l BAP+10% BAP+15% BAP+20% nước dừa nước dừa nước dừa Chồi đỉnh - - - - - - Chồi nách - - - - + - Chú thích: - Dấu (-) không cho kết tạo củ - Dấu (+) cho kết tạo củ Trong tất môi trường sử dụng ni cấy có mơi trường WPM bổ sung 0,5mg/l BAP kết hợp với 15% nước dừa cho kết tạo củ ( với tỉ lệ 20%) từ mẫu vật chồi nách, lại tất môi trường khác không cho kết tạo củ Mẫu sau tuần ni cấy có biểu tạo chồi Nhưng sau chồi phình to ra, có màu trắng sau tuần ni cấy có hình thái củ rõ ràng Sau tuần ni cấy củ chuyển sang màu hồng bắt đầu xuất chồi từ củ Bên cạnh song song với trình tạo củ chồi xuất từ chồi nách Chúng tơi nhận thấy có môi trường bổ sung nồng độ nước dừa có tượng Hình 2.5 Củ Trân châu xanh hình thành sau tuần ni cấy môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp với 15% nước dừa 3.6 Thí nghiệm 6: Nghiên cứu khả tạo Trân châu xanh điều kiện in vitro Các mẫu vật khác gồm có chồi đỉnh có kích thước lớn (đường kính khoảng 0,4mm), chồi đỉnh có kích thước nhỏ (đường kính khoảng 0,1mm) chồi náchtừ thí nghiệm cắt khúc cm, cấy lên môi trường WPM bổ sung từ - mg/l BAP kết hợp với nước dừa với thể tích từ - 20% Sau tuần nuôi cấy thu kết sau Bảng 2.6 Khả tạo trân châu xanh môi trường nuôi cấy Môi trường Mẫu Chồi đỉnh WPM WP +0,5m M g/l BAP - - WPM WPM BAP+15 BAP+20 % nước % nước % dừa - WPM +0,5mg/l +0,5mg/l +0,5mg/l +1mg/ BAP+10 l BAP WPM dừa - nước dừa - - nhỏ Chồi đỉnh lớn Chồi nách - - - - + - - - - - - - Chú thích - Dấu (-) khơng cho kết tạo - Dấu (+) cho kết tạo Từ kết Bảng 3.6, nhận thấy loại mẫu vật có chồi đỉnh có kích thước lớn có khả tạo Sau tuần nuôi cấy chồi không hình thành nên chồi mà phát triển chiều cao chiều rộng Sau chồi đỉnh bung phát triển thành Lá có màu đỏ thẫm sau chuyển sang màu xanh nhạt Ở số mẫu vật sau tuần nuôi cấy phần gốc chồi đỉnh tiếp tục hình thành chồi Trong tất loại mơi trường sử dụng có mơi trường WPM bổ sung 0,5% BAP kết hợp với 15% nước dừa cho kết tạo với tỉ lệ 25% Nước dừa cung cấp dưỡng chất cần thiết thúc đẩy chồi phát triển mạnh Khi đến ngưỡng q trình hình thành bắt đầu Lá phát triển đến kích thước khoảng 5cm chiều ngang chiều rộng khơng phát triển rễ khơng hình thành để hút đầy đủ chất dinh dưỡng cho tiếp tục phát triển Hình 2.6 Lá Trân châu xanh hình thành sau tuần nuôi cấy môi trường WPM bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp với 15% nước dừa KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ Kết luận: Trên sở kết nghiên cứu thu được, rút số kết luận sau: - Nồng độ chất khử trùng thời gian tối ưu cho khử trùng mẫu từ củ Trân châu xanh Ca(OCl)2 nồng độ 10%, 10 phút Tỷ lệ mẫu vô trùng 15%, tỉ lệ mẫu tạo chồi 4% - Trong mơi trường bổ sung BAP, mơi trường có bổ sung 0,5 mg/l BAP môi trường tối ưu cho việc tạo cụm chồi in vitro từ chồi đỉnh nảy mầm từ củ in vitro, với số chồi trung bình/mẫu 3,67 chồi/mẫu, chiều cao chồi trung bình 2,23 cm - Trong môi trường nuôi cấy chồi đỉnh có bổ sung BAP kết hợp với nước dừa, môi trường bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp 15% nước dừa cho khả tạo cụm chồi in vitro tốt với số chồi trung bình 6,33 chồi/mẫu Chiều cao trung bình 0,84 cm - Trong mơi trường ni cấy chồi nách có bổ sung BAP kết hợp với nước dừa, môi trường bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp 15% nước dừa cho khả tạo cụm chồi in vitro tốt với số chồi trung bình 4,53chồi/mẫu Chiều cao trung bình 0,46 cm - Trong môi trường nuôi cấy chồi đỉnh chồi nách có bổ sung BAP kết hợp với nước dừa, môi trường bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp 15% nước dừa cho khả tạo củtốt với tỉ lệ 20% - Trong môi trường nuôi cấy chồi đỉnh nhỏ, chồi đỉnh lớn chồi nách có bổ sung BAP kết hợp với nước dừa, môi trường bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp 15% nước dừa cho khả tạo tốt với tỉ lệ 25% Khuyến nghị: Cây Trân châu xanh loài quý hiếm, có nguy tuyệt chủng tự nhiên cao tương lai khơng xa Là lồi nằm sách đỏ Việt Nam lồi có giá trị dược liệu cao, sinh sản ít, thời gian sinh sản theo mùa năm từ củ thường cho Để bảo vệ nhân nhanh lồi chúng tơi kiến nghị: - Tiếp tục nghiên cứu khả khử trùng chất lên cuống lá, để tìm hiệu khử trùng tốt - Tiếp tục khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến tạo rễ chồi in vitro - Khảo sát yếu tố môi trường dinh dưỡng như: nồng độ khoáng, nồng độ đường, ánh sáng, nhiệt độ để tìm điều kiện tối ưu cho phát triển chồi in vitro - Theo dõi khả phát triển vườn ươm TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Đái Duy Ban Lê Thanh Hịa (1996), Cơng nghệ sinh học vật nuôi trồng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội [2] Dương Mộng Hùng (2005), "Nhân giống lan tai trâu phương pháp nuôi cấy ống nghiệm", Tạp chí Nơng nghiệp phát triển nơng thơn 3, Tr.126-127 [3] Phan Xuân Huyên, Nguyễn Trung Ái, Nguyễn Thị Lang, cs (2004), "Phục tráng nhân nhanh giống địa lan Cymbidium nuôi cấy đỉnh sinh trưởng", Tạp chí Sinh học 26(1), Tr.48-54 [4] Đỗ Tất Lợi (2003), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y Học, Hà Nội [5] Nguyễn Hồng Lộc (1998), "Cơng nghệ gen thực vật bậc cao", Tạp chí Sinh học 20(2), Tr.4-11 [6] Nguyễn Đức Lượng Nguyễn Thị Thủy Tiên (2002), Công nghệ tế bào, Nxb Y học, Hà Nội [7] Dương Tấn Nhựt Đỗ Thị Tâm (1996), "Nhân giống vơ tính số giống địa lan Cymbidium đỉnh sinh trưởng", Tạp chí Sinh học 18(1), Tr.4042 [8] Mai Văn Phơ Nguyễn Hồng Lộc (1995), "Ni cấy mô lan nghing xuân", TT Khoa học công nghệ Thừa Thiên-Huế, Tr.65-67 [9] Huỳnh Thị Đan San Võ Thị Bạch Mai (2009), “Tìm hiểu phát sinh phôi soma từ mô sẹo hà thủ ô đỏ Polygonum multiflorum Thunb in vitro”, Tạp chí phát triển Khoa học Công nghệ, ( tập 12, số 17) [10] Nguyễn Văn Song (2010), “Nhân nhanh in vitro lan Kim Điệp (Dendrobium chrysotoxum)”, Tạp chí khoa học, Nxb Đại học Huế, Tr 127 [11] Lê Ngọc Tú, Đỗ Ngọc Liên, Đặng Thị Thu (2002), Tế bào trình sinh học, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội [12] Nguyễn Quang Thạch, Hoàng Thị Nga, Lê Văn Vi, cs (2008), "Xây dựng quy trình kỹ thuật nuôi trồng địa lan Cymbidium spp cấy mô", TC Nông nghiệp phát triển nông thôn, Tr.18-22 [13] Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật - Nghiên cứu ứng dụng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội [14] Nguyễn Văn Uyển (1993), Nuôi cấy mô thực vật phục vụ công tác giống trồng, Nxb Nơng Nghiệp, Tp Hồ Chí Minh [15] Viện khoa học công nghệ Việt Nam (2007), “ Sách đỏ Việt Nam”, phần II Thực vật Nxb Khoa học công nghệ, Hà Nội Tiếng Anh [16] Arditti Joseph (2008), Micropropagation of orchids, Blackwell Pub., Malden, MA ; Oxford [17] Chen Jenn-Yih Mau-Shing Yeh (2002), "In vitro Propagation of Nervilia purpurea (Hay.) Schetr And N aragoana Gaud", Journal Of Agriculture and Forestry, National Chung Hsing University College of Agriculture 51(2), Tr.21-32 [18] Du Q., W L Chen, Z H Wang (2005), "Study on tissue culture and plant regeneration of Nervilia fordii", China journal of Chinese materia medica 30(11), Tr.812-814 [19] He Fuchang, He Dingquan, Chen Xinghua (1990), "In vitro culture of Nervilia fordii", Chinese Journal of Tropical Crops 11(1), Tr.97-101 [20] Li Bin (2008), "Tissue Culture of Nervilia fordii(Hance)Schltr Corm", Journal of Anhui Agricultural Sciences (35), Tr.15358-15359 [21] M Atique Akbar Shyamal Roy K (2006), "Effects of liquid medium on rooting and acclimation of regenerated micro shoots of banana (Musa sapientum L.) cv Sagar", Plant Tissue Culture & Biotech 16(1), Tr.11-18 [22] Reddy K Himakar, P.V.G.K Sharma, O.V.S Reddy (2010), "A comparative in vitro study on antifungal and antioxidant activities of Nervilia aragoana and Atlantia monophylla", Pharmaceutical Biology 48(5), Tr.595-602 [23] ShouLing Li, Bai YanBing, Gao Yan, cs (2009), "Propagation technique for Nervilia fordii corm tissue culture.", Guangxi Agricultural Sciences 40(7), Tr 810-812 [24] T Rober N Dennis J G (2000), Plant Tisue Culture Concept and Lahoratory Exercises, CRC Press, New York ... tài: ? ?Nghiên cứu vi nhân giống Trân châu xanh (Nervilia aragoana Gaudich)? ?? Mục tiêu đề tài Xác định điều kiện khử trùng mơi trường thích hợp đ? ?vi nhân giống Trân châu xanh Đối tượng phạm vi nghiên. .. Magnoliophyta Hình 3.1 Củ Trân châu xanh 3.2 Phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu điều kiện khử trùng môi trường tối ưu nhân giống vô tính in vitro Trân châu xanh Q trình nghiên cứu diễn phòng thực hành... 2014 - 2018 NGHIÊN CỨU VI NHÂN GIỐNG CÂY TRÂN CHÂU XANH (Nervilia aragoana Gaudich) Ngành: Sư phạm Chuyên ngành: Sư phạm sinh học Giảng vi? ?n hướng dẫn : ThS NGUYỄN THANH THUẬN Sinh vi? ?n thực hiện: