Nghiên cứu sự phát sinh hình thái và tăng trưởng của cây pongamia pinnata l pierre nuôi cấy in vitro

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Lê Thị Kim Sanh NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT SINH HÌNH THÁI VÀ TĂNG TRƯỞNG CỦA CÂY PONGAMIA PINNATA (L.) PIERRE NUÔI CẤY IN VITRO LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Lê Thị Kim Sanh NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT SINH HÌNH THÁI VÀ TĂNG TRƯỞNG CỦA CÂY PONGAMIA PINNATA (L.) PIERRE NUÔI CẤY IN VITRO Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN THỊ QUỲNH Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2015 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan luận văn cơng trình nghiên cứu riêng tơi Kết trình bày luận văn trung thực chưa tác giả cơng bố cơng trình Các trích dẫn bảng biểu, kết nghiên cứu tác giả khác; tài liệu tham khảo luận văn có nguồn gốc rõ ràng theo quy định TP Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng năm 2015 Lê Thị Kim Sanh LỜI CẢM ƠN   Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến tất thầy cô trường Đại học Sư Phạm TP.HCM tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành năm học tập, nghiên cứu hoạt động trường Chân thành cám ơn quý thầy cô Khoa Sinh quý thầy cô dạy dỗ, truyền đạt kinh nghiệm năm vừa qua Tôi xin chân thành cám ơn PGS.TS Nguyễn Thị Quỳnh, người hướng dẫn, tạo điều kiện đưa định hướng tốt cho tơi hồn thành đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo phịng thí nghiệm trọng điểm phía nam Cơng nghệ tế bào thực vật, Viện Sinh Học Nhiệt Đới TP.HCM tạo điều kiện để thực đề tài Tôi xin chân thành cám ơn chị Vân, chị Nhung, anh Duy, bạn Duyên, bạn Lư, bạn Hương em Trí, Ngọt, Nhung, Minh quan tâm, giúp đỡ hướng dẫn tận tình, truyền đạt nhiều kinh nghiệm, kỹ thực tế chuyên môn học sống Chân thành cảm ơn tập thể lớp cao học chuyên ngành sinh học thực nghiệm K23, bạn phịng trọ Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ba, mẹ, cô anh chị tôi, người nuôi dưỡng, chăm lo, yêu thương, bên cạnh động viên tơi Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng 03 năm 2015 Lê Thị Kim Sanh MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CÁM ƠN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC BẢNG MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Đối tượng nghiên cứu Mục tiêu Phạm vi nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận văn Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Pongamia pinnata 1.1.1 Đặc điểm phân loại học 1.1.2 Đặc điểm hình thái phân bố 1.1.3 Sinh trưởng tự nhiên Pongamia pinnata .4 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Giá trị sử dụng 1.1.6 Các nghiên cứu nuôi cấy mô Pongamia pinnata 1.2 Sự phát sinh hình thái thực vật 1.2.1 Sự phát sinh mô sẹo nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.2 Phát sinh quan nuôi cấy mô tế bào thực vật .8 1.2.3 Sự phát sinh phôi soma 11 1.3 Phương pháp vi nhân giống thực vật .12 1.3.1 Phương pháp vi nhân giống truyền thống (conventional micropropagation) .12 1.3.2 Phương pháp vi nhân giống quang tự dưỡng (photoautotrophic micropropagation) .13 1.3.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến tăng trưởng thực vật vi nhân giống 17 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 22 2.1.Vật liệu 22 2.1.1.Vật liệu thí nghiệm 22 2.1.2 Các thiết bị dụng cụ dùng thí nghiệm 22 2.1.3 Các loại giá thể .23 2.1.4 Các hóa chất sử dụng thí nghiệm 23 2.2 Phương pháp nghiên cứu .24 2.2.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật (CĐHSTTV) lên phát sinh hình thái mẫu cấy P pinnata .24 2.2.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng cytokinin lên khả tạo chồi từ nuôi cấy đoạn thân P pinnata 26 2.2.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng số loại auxin (NAA, IBA) lên tạo rễ chồi P pinnata nuôi cấy in vitro .29 2.2.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát khả tăng trưởng chồi in vitro tạo rễ P pinnata nuôi cấy quang tự dưỡng nuôi cấy quang dị dưỡng loại giá thể khác 30 2.3 Phương pháp tính xử lý số liệu 33 2.3.1 Phương pháp tính số tăng trưởng .33 2.3.2 Số lượng khí khổng 34 2.3.3 Hiệu suất quang hợp (Pn, µmol mol-1 h-1/cây) 34 2.3.4 Hàm lượng chlorophyll a, b (mg/g khô) theo phương pháp Arnon, (1949) 35 2.3.5 Tỷ lệ (%) nước 60 phút 35 2.3.6 Phương pháp xử lý số liệu thống kê .36 2.3.7 Phương pháp giải phẫu quan sát phát sinh hình thái 36 2.3.8 Nơi thực đề tài nghiên cứu .36 2.3.9 Thời gian thực luận văn 36 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật (CĐHSTTV) lên phát sinh hình thái mẫu cấy P pinnata 37 3.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng cytokinin lên khả tạo chồi từ nuôi cấy đoạn thân P pinnata .44 3.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng số loại auxin (NAA, IBA) lên tạo rễ chồi P pinnata nuôi cấy in vitro 52 3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát khả tăng trưởng chồi in vitro tạo rễ P pinnata nuôi cấy quang tự dưỡng loại giá thể khác .58 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 71 Kết luận 71 Đề nghị 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO 72 PHỤ LỤC .82   DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT   cs : cộng 2,4-D : 2,4-dichlorophenoxyacetic acid BA : 6-benzyladenine CĐHSTTV : Chất điều hòa sinh trưởng thực vật CPPU : n-phenyl-N’-2-chlo-4-pyridyl urea IBA : Indole-3 butyric acid IAA : Indole-3 acetic acid Kinetin : 6-furfurylaminopurine MS : Murashige Skoog, 1962 NAA : 1-naphthylacetic acid TDZ : Thidiazuron   DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây Pongamia pinnata (L.) Pierre Hình 1.2 Cấu tạo mơ phân sinh chồi thực vật Hình 1.3 Các giai đoạn hình thành rễ bất định Paulownia spp.nuôi cấy in vitro11 Hình 1.4 Sự đa dạng nắp hộp, độ cao hộp ni cấy phương pháp trao đổi khí tự nhiên 16 Hình 1.5 Hộp ni cấy quang tự dưỡng bơm khí trực tiếp tích 20L 17 Hình 1.6 Cấu trúc số loại auxin 18 Hình 1.7 Cấu trúc hóa học số loại cytokinin 19 Hình 2.1 Cây P pinnata trồng vườn ươm 22 Hình 2.2 Lá chét dùng làm mẫu cấy 24 Hình 2.3 Mẫu cấy ban đầu 24 Hình 2.4 Mẫu cấy mơi trường ni cấy vào ngày 25 Hình 2.5 Mẫu cấy môi trường nuôi cấy vào ngày 27 Hình 2.6 Mẫu cấy đoạn thân mang chồi ngủ môi trường ni cấy ngày 27 Hình 2.7 Chồi P.pinnata in vitro 29 Hình 2.8 Mẫu cấy đoạn thân in vitro mang mở 31 Hình 3.1 Mơ sẹo hình thành vết thương mẫu cấy vào ngày thứ 10 39 Hình 3.2 Phẫu thức cắt ngang gân mẫu cấy ngày 40 Hình 3.3 Phẫu thức cắt ngang gân mẫu cấy látrên mơi trường ni cấy vào ngày thứ 10 41 Hình 3.4 Mơ sẹo tăng sinh môi trường nuôi cấy vào ngày thứ 28 42 Hình 3.5 Tế bào mơ sẹo ngày thứ 28 quan sát kính hiển vi quang học 43 Hình 3.6 Đoạn thân mang chồi ngủ vào ngày 46 Hình 3.7 Phẫu thức cắt dọc đoạn thân mang chồi ngày thứ 21 47 Hình 3.8 Ảnh hưởng CĐHSTTV lên chiều cao chồi P pinnata ngày thứ 42 48 Hình 3.9 Sự hình thành rễ mơ sẹo gốc đoạn thân vào ngày thứ 42 50 Hình 3.10 Phẫu thức cắt ngang gốc thân 51   Hình 3.11 Sự hình thành sơ khởi rễ ngày thứ 55 Hình 3.12 Phẫu thức cắt ngang rễ bất định P pinnata 56 Hình 3.13 Ảnh hưởng auxin (IBA, NAA) lên tạo rễ bất định chồi P pinnata ngày thứ 56 57 Hình 3.14 Ảnh hưởng auxin lên gia tăng trọng lượng tươi chồi P pinnata ngày thứ 56 58 Hình 3.15 Cây P pinnata tăng trưởng hộp Magenta ngày thứ 56 60 Hình 3.16 Nồng độ CO2 bên ngồi bên trọng hộp ni cấy theo thời gian 61 Hình 3.17 Hiệu suất quang hợp P pinnata in vitro điều kiện nuôi cấy quang dị dưỡng quang tự dưỡng loại giá thể khác theo thời gian nuôi cấy 62 Hình 3.18 Cây P pinnata tăng trưởng từ đoạn thân mang mở, nuôi cấy điều kiện quang dị dưỡng quang tự dưỡng loại giá thể khác ngày thứ 56 66 Hình 3.19 Rễ bất định P pinnata in vitro ngày nuôi cấy thứ 11 68 Hình 3.20 Phẫu thức cắt ngang gân thịt P pinnata in vitro tăng trưởng điều kiện nuôi cấy quang dị dưỡng quang tự dưỡng loại giá thể nuôi cấy khác ngày thứ 56 70   Coefficient of Variation: 0.00% Variable: Tổng số chồi/mẫu ngày 21 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 2.216 0.739 70.9167 0.0000 Factor B 0.211 0.211 20.2500 0.0004 AB 0.716 0.239 22.9167 0.0000 -7 Error 16 0.167 0.010 Total 23 3.310 Coefficient of Variation: 7.15% Variable: Tổng số chồi/mẫu ngày 28 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 2.779 0.926 71.1333 0.0000 Factor B 0.128 0.128 9.8000 0.0065 AB 1.008 0.336 25.8000 0.0000 -7 Error 16 0.208 0.013 Total 23 4.122 Coefficient of Variation: 7.35% Variable: Tổng số chồi/mẫu ngày 35 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 3.008 1.003 48.1250 0.0000 Factor B 0.128 0.128 6.1250 0.0249 AB 1.008 0.336 16.1250 0.0000 -7 Error 16 0.333 0.021 Total 23 4.477 Coefficient of Variation: 9.06% Variable: Tổng số chồi/mẫu ngày 42 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E   K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 3.591 1.197 35.3590 0.0000 Factor B 0.128 0.128 3.7692 0.0700 AB 1.237 0.412 12.1795 0.0002 -7 Error 16 0.542 0.034 Total 23 5.497 Coefficient of Variation: 11.25% Bảng ANOVA thí nghiệm số liệu hình 3.9 Variable: Chiều cao chồi (mm) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 61.612 20.537 14.7961 0.0001 Factor B 19.711 19.711 14.2008 0.0017 AB 94.091 31.364 22.5960 0.0000 -7 Error 16 22.208 1.388 Total 23 197.622 Coefficient of Variation: 11.17% Bảng ANOVA thí nghiệm số liệu bảng 3.3 Variable: Tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo (%) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 0.000 0.000 0.0000 Factor B 0.000 0.000 0.0000 AB 0.000 0.000 0.0000 -7 Error 16 0.000 0.000 Total 23 0.000 Coefficient of Variation: 0.00% Variable: Tỷ lệ mẫu tạo rễ (%) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E   K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 703.125 234.375 4.5000 0.0180 Factor B 26.042 26.042 0.5000 AB 78.125 26.042 0.5000 -7 Error 16 833.333 52.083 Total 23 1640.625 Coefficient of Variation: 230.94% Variable: Số rễ/mẫu A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 3.125 1.042 2.5000 0.0965 Factor B 0.042 0.042 0.1000 AB 0.125 0.042 0.1000 -7 Error 16 6.667 0.417 Total 23 9.958 Coefficient of Variation: 309.84% Variable 13: Chiều dài rễ (mm) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 36.125 12.042 4.5156 0.0178 Factor B 2.042 2.042 0.7656 AB 6.125 2.042 0.7656 -7 Error 16 42.667 2.667 Total 23 86.958 Coefficient of Variation: 230.54% Bảng ANOVA thí nghiệm số liệu Bảng 3.4 Variable: Số rễ/ chồi A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 4.067 1.017 8.714 0.0027 Within 10 1.167 0.117   Total 14 5.233 Coefficient of Variation = 10.90% Variable:% rễ tạo rễ phụ A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 3687.496 921.874 68.379 0.0000 Within 10 134.818 13.482 Total 14 3822.314 Coefficient of Variation = 5.35% Variable:Chiều dài rễ (mm) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 19178.933 4794.733 172.447 0.0000 Within 10 278.042 27.804 Total 14 19456.975 Coefficient of Variation = 4.82% Variable: Số đốt A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 4.100 1.025 20.500 0.0001 Within 10 0.500 0.050 Total 14 4.600 Coefficient of Variation = 7.71% Bảng ANOVA thí nghiệm số liệu hình 3.15 Variable: Gia tăng trọng lượng tươi(mg/cây) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 493504.794 123376.198 3998.420 0.0000 Within 10 308.562 30.856 Total 14 493813.356   Coefficient of Variation = 1.22% Variable:Trọng lượng tươi rễ (mg/cây) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 97531.649 24382.912 140.474 0.0000 Within 10 1735.765 173.576 Total 14 99267.414 Coefficient of Variation = 6.52% Variable:Trọng lượng tươi mô sẹo (mg/cây) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 5528.052 1382.013 65.344 0.0000 Within 10 211.497 21.150 Total 14 5739.549 Coefficient of Variation = 8.74% Bảng ANOVA thí nghiệm số liệu bảng 3.5 Variable: Gia tăng trọng lượng tươi (mg/cây) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 474823.205 158274.402 174.678 0.0000 Within 7248.749 906.094 Total 11 482071.954 Coefficient of Variation = 6.20% Variable: Số chét/cây A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 39.682 13.227 9.406 0.0053 Within 11.250 1.406 Total 11 50.932 Coefficient of Variation = 25.08% Variable: Diện tích (cm2) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 801.262 267.087 8.666 0.0068   Within 246.569 30.821 Total 11 1047.830 Coefficient of Variation = 31.16% Bảng ANOVA thí nghiệm số liệu bảng 3.6 Variable: Trọng lượng tươi (mg/cây) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 117144.354 39048.118 39.266 0.0000 Within 7955.619 994.452 Total 11 125099.973 Coefficient of Variation = 14.96% Variable: Trọng lượng tươi thân (mg/cây) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 26576.379 8858.793 8.760 0.0066 Within 8090.615 1011.327 Total 11 34666.994 Coefficient of Variation = 21.19% Variable: Trọng lượng tươi rễ (mg/cây) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 64852.059 21617.353 18.360 0.0006 Within 9419.422 1177.428 Total 11 74271.481 Coefficient of Variation = 20.78% Variable : Trọng lượng khô (mg/cây) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 10316.098 3438.699 12.826 0.0020 Within 2144.910 268.114 Total 11 12461.007 Coefficient of Variation = 26.30% Variable : Trọng lượng khô thân (mg/cây)   A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 424.170 141.390 1.697 0.2443 Within 666.583 83.323 Total 11 1090.754 Coefficient of Variation = 31.83% Variable : Trọng lượng khô rễ (mg/cây) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 1702.547 567.516 29.050 0.0001 Within 156.285 19.536 Total 11 1858.833 Coefficient of Variation = 18.49% Bảng ANOVA thí nghiệm số liệu bảng 3.7 Variable : Chiều cao chồi (mm) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 208.667 69.556 5.274 0.0267 Within 105.500 13.187 Total 11 314.167 Coefficient of Variation = 23.68% Variable : Đường kính thân (mm) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 1.825 0.608 9.091 0.0059 Within 0.535 0.067 Total 11 2.361 Coefficient of Variation = 24.31% Variable: Số rễ/cây A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 28.917 9.639 2.422 0.1410 Within 31.833 3.979   Total 11 60.750 Coefficient of Variation = 46.94% Variable : Chiều dài rễ (mm) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 19373.307 6457.769 17.129 0.0008 Within 3016.083 377.010 Total 11 22389.391 Coefficient of Variation = 26.22% Variable : % rễ tạo rễ phụ A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 3697.314 1232.438 6.461 0.0157 Within 1525.886 190.736 Total 11 5223.200 Coefficient of Variation = 26.66% Bảng ANOVA thí nghiệm số liệu bảng 3.8 Variable : Trọng lượng tươi mô sẹo (mg/cây) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 29991.880 9997.293 2.957 0.0979 Within 27049.949 3381.244 Total 11 57041.829 Coefficient of Variation = 73.50% Variable : Trọng lượng khô mô sẹo (mg/cây) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 495.356 165.119 4.355 0.0427 Within 303.320 37.915 Total 11 798.675 Coefficient of Variation = 56.48%   Phụ lục Bảng trắc nghiệm phân hạng cho số liệu thí nghiệm Bảng trắc nghiệm phân hạng cho số liệu thí nghiệm Trọng lượng tươi mô sẹo (mg) Error Mean Square = 9.037 Error Degrees of Freedom = No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 8.236 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 42.93 D Mean = 357.9 Mean = 237.7 C Mean = 249.3 Mean = 249.3 B Mean = 237.7 Mean = 357.9 A Mean = 42.93 A B C D Tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo (%) Error Mean Square = 41.14 Error Degrees of Freedom = No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 17.57 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 22.22 B Mean = 100.0 Mean = 96.30 A Mean = 100.0 Mean = 100.0 A Mean = 96.30 Mean = 100.0 A Mean = 22.22 A A A B Bảng trắc nghiệm phân hạng cho số liệu thí nghiệm bảng 3.2 Tổng số chồi/mẫu ngày 21 Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.1731 s_ = 0.05774 at alpha = 0.050 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = = 1.000 1.000 1.250 1.420 1.920 1.750 1.920 1.170 Ranked Order A A A BC B D D CD Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Tổng số chồi/mẫu ngày 28 Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.1974 s_ = 0.06583 at alpha = 0.050 x = = = = = = = = 1.920 1.920 1.750 1.420 1.250 1.170 1.000 1.000 A A A B BC CD D D   Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = = 1.000 1.000 1.580 1.830 1.920 1.920 2.000 1.170 Ranked Order C C Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean B A A A A C = = = = = = = = 2.000 1.920 1.920 1.830 1.580 1.170 1.000 1.000 A A A A B C C C Tổng số chồi/mẫu ngày 35 Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.2508 s_ = 0.08367 at alpha = 0.050 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = = 1.000 1.000 1.670 1.920 1.920 1.920 2.080 1.250 Ranked Order C C B AB AB AB A Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean C = = = = = = = = 2.080 1.920 1.920 1.920 1.670 1.250 1.000 1.000 A AB AB AB B C C C Tổng số chồi/mẫu ngày 42 Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.4397 s_ = 0.1065 at alpha = 0.010 x Original Order Ranked Order Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = = Ranked Order 1.000 1.000 1.670 1.920 2.000 2.080 2.170 1.250 D D BC AB AB AB A CD Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = = 2.170 2.080 2.000 1.920 1.670 1.250 1.000 1.000 A AB AB AB BC CD D D Bảng trắc nghiệm phân hạng cho số liệu thí nghiệm hình 3.9 Chiều cao chồi (mm) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 2.810 s_ = 0.6802 at alpha = 0.010   Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = = 8.750 11.08 7.670 8.830 16.25 8.500 13.17 10.17 Ranked Order CD BC D CD A B CD CD Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = = 16.25 13.17 11.08 10.17 8.830 8.750 8.500 7.670 A B BC CD CD CD CD D Bảng trắc nghiệm phân hạng cho số liệu thí nghiệm bảng 3.4 Số rễ/chồi Least Significant Difference Test LSD value = 0.8314 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 2.500 3.670 2.830 2.830 3.830 A B Mean Mean Mean Mean Mean B B A = = = = = 3.830 3.670 2.830 2.830 2.500 A A B B B % rễ tạo rễ phụ Least Significant Difference Test LSD value = 8.925 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 40.28 77.98 86.90 70.28 67.50 D AB A BC C Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 86.90 77.98 70.28 67.50 40.28 A AB BC C Chiều dài rễ (mm) Least Significant Difference Test LSD value = 12.82 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 44.25 141.7 115.3 141.7 103.8 C A A B B Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 141.7 141.7 115.3 103.8 44.25 A A B B Số đốt/chồi Least Significant Difference Test LSD value = 0.5435 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean = = = = 2.000 3.500 2.830 2.830 C A B B Mean Mean Mean Mean = = = = 3.500 3.330 2.830 2.830 A AB B B C D   Mean = 3.330 AB Mean = 2.000 C Bảng trắc nghiệm phân hạng cho số liệu thí nghiệm hình 3.15 Gia tăng trọng lượng tươi (mg/chồi) Least Significant Difference Test LSD value = 13.50 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 98.61 535.0 483.8 568.5 586.9 C B A E D Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 586.9 568.5 535.0 483.8 98.61 A B C D E Trọng lượng tươi rễ (mg/chồi) Least Significant Difference Test LSD value = 32.02 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 50.52 214.5 206.5 258.8 280.5 A A B B C Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 280.5 258.8 214.5 206.5 50.52 A A B B C Trọng lượng tươi mô sẹo (mg/chồi) Least Significant Difference Test LSD value = 11.18 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 16.53 62.29 52.37 72.67 59.29 AB B A B C Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 72.67 62.29 59.29 52.37 16.53 A AB B B C Bảng trắc nghiệm phân hạng cho số liệu thí nghiệm bảng 3.5 Gia tăng trọng lượng tươi (mg/cây) Least Significant Difference Test LSD value = 56.68 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean = = = = 578.2 767.4 286.7 310.3 B A C C Mean Mean Mean Mean = = = = 767.4 578.2 310.3 286.7 A B C C Số chét(lá/cây) Least Significant Difference Test LSD value = 2.233 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean = 2.583 C Mean = 7.417 A   Mean Mean Mean = = = 7.417 5.250 3.667 A AB BC Mean Mean Mean = = = 5.250 3.667 2.583 AB BC C Diện tích (cm2) Least Significant Difference Test LSD value = 10.45 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean = = = = 12.99 31.89 11.95 14.43 B A B B Mean Mean Mean Mean = = = = 31.89 14.43 12.99 11.95 A B B B Bảng trắc nghiệm phân hạng cho số liệu thí nghiệm bảng 3.6 Trọng lượng tươi (mg/cây) Least Significant Difference Test LSD value = 59.38 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean = = = = 128.7 379.8 168.7 166.3 B A B B Mean Mean Mean Mean = = = = 379.8 168.7 166.3 128.7 A B B B Trọng lượng tươi thân (mg/cây) Least Significant Difference Test LSD value = 59.88 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean = = = = 213.7 175.1 117.0 94.45 A AB BC C Mean Mean Mean Mean = = = = 213.7 175.1 117.0 94.45 A AB BC C Trọng lượng tươi rễ (mg/cây) Least Significant Difference Test LSD value = 64.61 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean = = = = 246.5 230.0 99.74 84.39 A A B B Mean Mean Mean Mean = = = = 246.5 230.0 99.74 84.39 A A B B Trọng lượng khô (mg/cây) Least Significant Difference Test LSD value = 30.83 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean = = = = 40.36 111.8 56.39 40.51 A B B B Mean Mean Mean Mean = = = = 111.8 56.39 40.51 40.36 A B B B   Trọng lượng khô rễ (mg/cây) Least Significant Difference Test LSD value = 8.322 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean = = = = 37.29 24.00 14.42 9.890 A B C C Mean Mean Mean Mean = = = = 37.29 24.00 14.42 9.890 A B C C Bảng trắc nghiệm phân hạng cho số liệu thí nghiệm bảng 3.7 Chiều cao chồi (mm) Least Significant Difference Test LSD value = 6.837 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean = = = = 17.67 21.00 11.33 11.33 AB A B B Mean Mean Mean Mean = = = = 21.00 17.67 11.33 11.33 A AB B B Đường kính thân (mm) Least Significant Difference Test LSD value = 0.4874 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean = = = = 1.360 1.530 0.7670 0.6000 A A B B Mean Mean Mean Mean = = = = 1.530 1.360 0.7670 0.6000 A A B B Chiều dài rễ (mm) Least Significant Difference Test LSD value = 36.56 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean = = = = 102.7 124.0 29.25 40.33 A A B B Mean Mean Mean Mean = = = = 124.0 102.7 40.33 29.25 A A B B % rễ tạo rễ phụ Least Significant Difference Test LSD value = 26.00 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean = = = = 73.89 63.94 37.08 32.29 A A B B Mean Mean Mean Mean = = = = 73.89 63.94 37.08 32.29 A A B B Bảng trắc nghiệm phân hạng cho số liệu thí nghiệm bảng 3.8   Trọng lượng khô mô sẹo(mg/cây) Least Significant Difference Test LSD value = 11.59 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean = = = = 19.73 13.89 2.930 7.070 A AB B B Mean Mean Mean Mean = = = = 19.73 13.89 7.070 2.930 A AB B B ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH L? ? Thị Kim Sanh NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT SINH HÌNH THÁI VÀ TĂNG TRƯỞNG CỦA CÂY PONGAMIA PINNATA (L. ) PIERRE NUÔI CẤY IN VITRO Chuyên ngành: Sinh. .. để tạo số l? ?ợng l? ??n loại trồng có chất l? ?ợng cao Trước yêu cầu thực tế trên, đề tài “NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT SINH HÌNH THÁI VÀ TĂNG TRƯỞNG CỦA CÂY PONGAMIA PINNATA (L. ) PIERRE NUÔI CẤY IN VITRO? ?? góp... 1.1.6 Các nghiên cứu nuôi cấy mô Pongamia pinnata 1.2 Sự phát sinh hình thái thực vật 1.2.1 Sự phát sinh mô sẹo nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.2 Phát sinh quan nuôi cấy mô tế