Nghiên cứu sự phát sinh hình thái in vitro của cây nho (vitis vinifera l ) không hạt

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ MINH NGUYỆT NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT SINH HÌNH THÁI IN VITRO CỦA CÂY NHO (VITIS VINIFERA L.) KHƠNG HẠT Chun ngành: Cơng nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Lâm Hải PGS.TS Nguyễn Thị Lý Anh NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, bảng biểu, hình ảnh kết trong báo cáo hoàn toàn trung thực, chưa sử dụng công bố báo cáo, luận văn, luận án hay cơng trình khoa học trước Tôi xin cam đoan thơng tin trích dẫn sử dụng báo cáo ghi rõ nguồn gốc, đảm bảo trích dẫn theo quy định Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm lời cam đoan này! Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Minh Nguyệt i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn thạc sĩ này, nỗ lực phấn đấu thân, tơi nhận giúp đỡ, hướng dẫn, hỗ trợ động viên từ gia đình, quý thầy cơ, tập thể cá nhân Với lòng biết ơn sâu sắc, trước hết xin gửi lời cảm ơn tới anh chị Viện Sinh học nông nghiệp, thầy cô khoa Công nghệ Sinh học - Trường Học Viện Nông nghiệp Việt Nam Với tri thức tâm huyết mình, thầy cơ, anh chị tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn KS Nguyễn Thị Hân - cán Viện sinh Học Nơng nghiệp, người ln nhiệt tình giúp đỡ, bảo, tạo điều kiện thuận lợi mặt cho suốt thời gian thực luận văn tốt nghiệp Đặc biệt, với lòng biết ơn sâu sắc gửi lời cảm ơn chân thành tới cô giáo hướng dẫn TS Nguyễn Thị Lâm Hải, PGS.TS Nguyễn Thị Lý Anh, người hướng dẫn đề tài giúp giải vấn đề nảy sinh trình làm hồn thành luận văn định hướng ban đầu Cuối cùng, tơi muốn nói lời cảm ơn tới bố, mẹ, gia đình ủng hộ, chăm sóc, động viên tơi tồn thể bạn bè giúp đỡ suốt thời gian thực luận văn tốt nghiệp Báo cáo không tránh khỏi thiếu sót, mong nhận ý kiến dóng góp q báu Q Thầy Cơ để báo cáo hoàn thiện Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Minh Nguyệt ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn ix Thesis Abstract xi Phần Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Yêu cầu Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Giới thiệu nho 2.1.1 Nguồn gốc phân loại 2.1.2 Đặc điểm thực vật học 2.1.3 Đặc điểm sinh thái 2.1.4 Giá trị dinh dưỡng công dụng 2.1.5 Tình hình sản xuất nho giới nước ta 2.2 Công nghệ nuôi cấy mô, tế bào thực vật 2.2.1 Khái niệm nuôi cấy mô, tế bào thực vật 2.2.2 Cơ sở lý luận nuôi cấy mô, tế bào thực vật 2.2.3 Các giai đoạn nhân giống vơ tính 2.2.4 Một số nhân tố ảnh hưởng tới q trình ni cấy mơ, tế bào thực vật 2.3 Một số kết nghiên cứu nhân giống nho không hạt 15 2.3.1 Các nghiên cứu nước 15 2.3.2 Các nghiên cứu nước 17 Phần Nội dung phương pháp nghiên cứu 18 3.1 Địa điểm nghiên cứu 18 iii 3.2 Thời gian nghiên cứu 18 3.3 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 18 3.4 Nội dung nghiên cứu 18 3.4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng dung dịch HgCl2 dung dịch Troclosene Sodium (NaDCC) đến trình khử trùng mẫu 18 3.4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng đơn chất chất điều tiết sinh trưởng đến phát sinh hình thái in vitro nho không hạt 19 3.4.3 Nghiên cứu phát sinh hình thái nguồn callus mơ nho khơng hạt 21 3.4.4 Nghiên cứu ảnh hưởng phối hợp BA, Ki α-NAA đến phát sinh hình thái callus nho không hạt 21 3.4.5 Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi nho không hạt 22 3.5 Phương pháp nghiên cứu 23 3.5.1 Khử trùng mẫu cấy tạo nguồn mẫu ban đầu từ đoạn thân mang mắt ngủ 23 3.5.2 Bố trí thí nghiệm 24 3.5.3 Các tiêu theo dõi 24 3.5.4 Phương pháp xử lý số liệu 25 Phần Kết nghiên cứu thảo luận 26 4.1 Kết 26 4.1.1 Ảnh hưởng dung dịch HgCl2 dung dịch Troclosene Sodium (NaDCC) đến trình khử trùng mẫu 26 4.1.2 Ảnh hưởng đơn chất chất điều tiết sinh trưởng đến phát sinh hình thái in vitro nho không hạt 27 4.1.3 Nghiên cứu phát sinh hình thái nguồn callus mơ nho khơng hạt 35 4.1.4 Ảnh hưởng phối hợp BA, Ki α-NAA đến phát sinh hình thái callus nho không hạt 38 4.1.5 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi nho không hạt 40 4.1.6 Ảnh hưởng α-NAA đến hình thành rễ chồi nho khơng hạt 45 4.2 Thảo luận 46 4.2.1 Khử trùng mẫu tạo vật liệu ban đầu 46 4.2.2 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng tới khả phát sinh hình thái 46 iv 4.2.3 Nghiên cứu phát sinh hình thái nguồn callus mô 47 4.2.4 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi rễ 47 Phần Kết luận kiến nghị 48 5.1 Kết luận 48 5.2 Kiến nghị 48 Tài liệu tham khảo 49 Phụ lục 51 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt α-NAA alpha-Naphthyl acetic acid 2,4D 2,4 dicloro-phenoxiaxetic BA Benzyl adenine CT Công thức CTĐC Công thức đối chứng Ki Kinetin LSD0,05 Độ sai khác nhỏ đáng tin cậy mức 95% MS Môi trường Murahige & Skoog NXB Nhà xuất TB Trung bình vi DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Ảnh hưởng dung dịch HgCl2 dung dịch Troclosene Sodium (NaDCC) đến trình khử trùng đoạn thân có chứa mắt ngủ 26 Bảng 4.2a Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng BA đến phát sinh hình thái đoạn thân khơng mang mắt ngủ mô 28 Bảng 4.2b Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng BA đến phát sinh hình thái đoạn thân mang mắt ngủ 29 Bảng 4.3 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng Ki đến phát sinh hình thái 31 Bảng 4.4 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng 2,4D đến phát sinh hình thái 33 Bảng 4.5 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng α-NAA đến phát sinh hình thái 34 Bảng 4.6 Ảnh hưởng nguồn mẫu callus mô môi trường 2,4D đến phát sinh hình thái 36 Bảng 4.7 Ảnh hưởng nguồn mẫu callus mô môi trường α-NAA đến phát sinh hình thái 37 Bảng 4.8 Ảnh hưởng phối hợp BA α-NAA đến phát sinh hình thái callus 38 Bảng 4.9 Ảnh hưởng phối hợp Ki α-NAA đến phát sinh hình thái callus 39 Bảng 4.10 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi 41 Bảng 4.11 Ảnh hưởng tổ hợp BA + Ki đến khả nhân nhanh chồi 42 Bảng 4.12 Ảnh hưởng nước dừa đến khả nhân nhanh chồi 44 Bảng 4.13 Ảnh hưởng α-NAA đến hình thành rễ chồi nho 45 vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Đặc điểm hình thái nho khơng hạt giống Prime Hình 4.1 Mẫu nho sống môi trường sau tuần theo dõi 27 Hình 4.2a Sự tái sinh tạo callus đoạn thân không mang mắt ngủ, mô môi trường bổ sung BA 29 Hình 4.2b Sự tái sinh chồi đoạn thân mang mắt ngủ mơi trường bổ sung BA 30 Hình 4.3 Sự tái sinh chồi, callus CT2 loại mô ni cấy 31 Hình 4.4 Callus tái sinh môi trường bổ sung 2,4D 33 Hình 4.5 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng α-NAA đến phát sinh hình thái CT3 35 Hình 4.6 Callus từ nguồn mẫu mô môi trường 1,5 mg/l BA 36 Hình 4.7 Callus tái sinh môi trường BA 1,5 mg/l 37 Hình 4.8 Ảnh hưởng phối hợp BA α-NAA đến phát sinh hình thái callus 39 Hình 4.9 Ảnh hưởng phối hợp Ki α-NAA đến phát sinh hình thái callus 40 Hình 4.10 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi 41 Hình 4.11 Ảnh hưởng tổ hợp BA + Ki đến khả nhân nhanh chồi 43 Hình 4.12 Ảnh hưởng nước dừa đến khả nhân nhanh chồi nho khơng hạt 44 Hình 4.13 Ảnh hưởng α-NAA đến hình thành rễ chồi nho 45 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên học viên: Nguyễn Thị Minh Nguyệt Tên luận văn: Nghiên cứu phát sinh hình thái in vitro nho (Vitis vinifera L.) không hạt Ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 60.42.02.01 Tên sở đào tạo: Học viện Nơng Nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Cây nho (Vitis vinifera L.) không hạt loại ăn có giá trị dinh dưỡng cao bao gồm: đường, protein, chất khoáng, axit amin vitamin Đặc biệt, thị trường tiêu thụ ngành công nghiệp chế biến trái Việt Nam có tiềm lớn Tuy nhiên, từ trước đến nay, giống nho nói chung, giống nho khơng hạt nói riêng chủ yếu nhân giống phương pháp giâm cành, hệ số nhân giống thấp, không đồng lây nhiễm bệnh Chính vậy, tiến hành thực đề tài nhằm nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến phát sinh hình thái bước đầu đánh giá khả nhân giống in vitro nho không hạt, làm sở cho nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống nghiên cứu chọn tạo giống Phương pháp nghiên cứu Đoạn thân chứa mắt ngủ, thu từ nho không hạt trồng Viện Sinh học Nông nghiệp – Học viện Nông nghiệp Việt Nam Phương pháp nghiên cứu phát sinh hình thái nho khơng hạt gồm giai đoạn bản: (1) khử trùng tạo vật liệu ban đầu, (2) xác định chất điều hòa sinh trưởng phù hợp đến phát sinh hình thái, (3) xác định chất điều hòa sinh trưởng phù hợp giai đoạn nhân nhanh chồi, (4) xác định chất điều hòa sinh trưởng phù hợp giai đoạn rễ Kết nghiên cứu kết luận Đối với mẫu cấy đoạn thân mang mắt ngủ, chế độ khử trùng kép thích hợp phút HgCl2 0,1% + 10 phút NaDCC 0,5% (Troclosene Sodium) nuôi cấy môi trường MS + 20 g/l đường saccarose + 5,0 g/l agar tuần với tỷ lệ mẫu 53,33% tỷ lệ mẫu sống 46,67% Các chất điều tiết sinh trưởng BA, Ki, 2,4D, α-NAA có cảm ứng kích thích mẫu nuôi cấy theo hướng tạo callus, tạo chồi, tạo rễ tùy thuộc vào mẫu nuôi cấy mô lá, mô thân hay đoạn thân mang mắt ngủ Sự phát ix 4.2 THẢO LUẬN 4.2.1 Khử trùng mẫu tạo vật liệu ban đầu Trong nghiên cứu phát sinh hình thái in vitro nho, chúng tơi sử dụng môi trường MS, môi trường nuôi cấy nho tương tự môi trường nuôi cấy in vitro nho giới (Aazami, 2010), (Jakani et al., 2008) Để tạo mẫu sống ban đầu, có nhiều chất khử trùng sử sụng giới,ở nghiên cứu sử dụng dung dịch HgCl2 0,1% thời gian phút NaDCC 0,5% 10 phút cho tỷ lệ mẫu đạt cao 53,33% mẫu sống đạt cao 46,67% Kết nghiên cứu Đại học Pakistan sử dụng chất khử trùng chlorox 10% thời gian 10 15 phút cho tỷ lệ mẫu sống cao 80 - 90% (Jakani et al., 2008) Kết thử nghiệm cho thấy sử dụng dung dịch HgCl2 0,1% NaDCC 0,5% có hiệu việc tạo mẫu ban đầu Mặc dù, dung dịch sử dụng chủ yếu phòng thí nghiệm nước ta, khơng thể tiêu diệt hồn tồn vi khuẩn bề mặt mẫu đưa vào ni cấy, nên tỷ lệ mẫu cao đạt 53,33% mà khơng đạt 100% Bên cạnh đó, dung dịch HgCl2 0,1% NaDCC 0,5% khử trùng phần làm nhiễm độc cho mẫu ni cấy Vì vậy, tỷ lệ mẫu sống đạt cao 46,67% Kết thấp so với khử trùng chlorox 10% (Jakani et al., 2008) 4.2.2 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng tới khả phát sinh hình thái Các chất điều tiết sinh trưởng có vai trò quan trọng đến kết ni cấy in vitro, định thành cơng tồn q trình ni cấy Nó ảnh hưởng tới biệt hoá, phản biệt hoá sinh trưởng tế bào, đặc biệt biệt hoá quan chồi rễ Chúng tiến hành thí nghiệm với chất tiết sinh trưởng: BA, Ki, 2,4D, α-NAA loại mô nuôi cấy: mô lá, mô thân, đoạn thân mang mắt ngủ Kết cho thấy chất điều tiết sinh trưởng có cảm ứng kích thích mẫu ni cấy theo hướng tạo callus, tạo chồi, tạo rễ Kết cảm ứng tạo callus rễ tương tự kết nghiên cứu Nguyễn Thị Minh Hiền (2015) Mặc dù nghiên cứu Việt Nam, có kết khả quan làm sở cho xây dựng quy trình nhân giống in vitro nho 46 4.2.3 Nghiên cứu phát sinh hình thái nguồn callus mô Kết nghiên cứu cho thấy phát sinh hình thái callus cấy chuyển sang mơi trường có bổ sung 1,5 mg/l BA phụ thuộc vào nguồn gốc callus Nguồn callus từ môi trường sung α-NAA có phát sinh hình thái chồi tỷ lệ mẫu tạo chồi đạt 20% Trong mẫu callus từ mơi trường 2,4D khơng có phát sinh hình thái Mặc dù,trên giới chưa có kết nghiên cứu ảnh hưởng nguồn callus mô nho Nhưng kết làm tiền đề cho nghiên cứu nhân giống in vitro nho 4.2.4 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi rễ Trong chất điều tiết sinh trưởng, chất BA sử dụng để bổ sung vào môi trường nhân nhanh chồi nồng độ khác Môi trường bổ sung 1,0 mg/l BA cho hệ số nhân chồi cao đạt 2,07 (chồi/mẫu) Khi bổ sung nước dừa 15% cho hệ số tăng nhân chồi tăng lên cao đạt 3,17 (chồi/mẫu).Trong nghiên cứu nhân nhanh nho Abido et al (2013) sử dụng phối hợp BA NAA, số lượng chồi đạt cao môi trường bổ sung 3,0 mg/l BA + 0,2 mg/l NAA Nghiên cứu rễ cho chồi nho, môi trường nuôi cấy bổ sung αNAA nồng độ 0,25 mg/l cho tỷ lệ mẫu tạo rễ cao Một số nghiên cứu rễ giới sử dụng kết hợp chất điều tiết sinh trưởng IBA NAA Kết khác với nghiên cứu rễ cho nho (Jakani et al., 2008), (Abido et al., 2013) 47 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Đối với mẫu cấy đoạn thân mang mắt ngủ, chế độ khử trùng kép thích hợp phút HgCl2 0,1% + 10 phút NaDCC 0,5% (Troclosene Sodium) nuôi cấy môi trường MS + 20 g/l đường saccarose + 5,0 g/l agar tuần với tỷ lệ mẫu 53,33% tỷ lệ mẫu sống 46,67% Các chất điều tiết sinh trưởng BA, Ki, 2,4D, α-NAA có cảm ứng kích thích mẫu ni cấy theo hướng tạo callus, tạo chồi, tạo rễ tùy thuộc vào mẫu nuôi cấy mô lá, mô thân hay đoạn thân mang mắt ngủ Sự phát sinh hình thái callus cấy chuyển sang mơi trường có bổ sung1,5 mg/l BA phụ thuộc vào nguồn gốc callus + Nguồn callus từ môi trường 2,4 D cấy chuyển sang môi trường bổ sung 1,5 mg/l BA khơng có phát sinh hình thái + Nguồn callus từ môi trường α-NAA nồng độ 1,5 mg/l có phát sinh hình thái chồi tỷ lệ mẫu tạo chồi đạt 20% Môi trường cho hệ số nhân chồi cao là: MS + 20g/l saccarose + 5,0g/l agar + 1,0 mg/l BA + 15% nước dừa cho hệ số nhân đạt 3,17 (chồi/mẫu) Mơi trường thích hợp cho rễ chồi nho không hạt là: MS + 20g/l saccarose + 5,0g/l agar + 0,25 mg/l α-NAA 5.2 KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu để xây dựng quy trình nhân giống in vitro nghiên cứu chọn tạo giống nho không hạt 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Bùi Trang Việt (2000) Sinh lý thực vật đại cương Đại học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh, 333 trang Dương Công Kiên (2002) Nuôi cấy mô thực vật Nhà xuất Đại Học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh, TPHCM Hồng Tấn Minh cs (2004) Sinh lý thực vật Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Lê Văn Hồng (2007) Cơng nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật Nhà xuất Khoa học – kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Thị Minh Hiền (2015) Nghiên cứu quy trình nhân giống in vitro Sâm nam núi Dành Luận văn Thạc sĩ, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Nguyễn Như Khanh (2006) Sinh học phát triển thực vật Nhà xuất Giáo dục, Hà Nội Nguyễn Đức Thành (2000) Nuôi cấy bào thực vật – nghiên cứu ứng dụng Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh Nguyễn Thị Phương Thảo (2005) Giáo trình cơng nghệ Sinh học NXB Nơng nghiệp, Hà Nội Nguyễn Văn Uyển (1985) Ứng dụng nuôi cấy mô tế bào thực vật công tác chọn giống trồng NXB Thành phố Hồ Chí Minh 10 Phạm Tiến Dũng (2002) Xử lý kế thí nghiệm máy vi tính Irristat 4.0 window NXB Nông Nghiệp, Hà Nội 11 Thái Thị Phương Hạnh, Lê Trọng Tình, Phan Thanh Kiếm (2015) Xác định nồng độ thời gian xử lý Atonik giâm cành nho (Vitis vinifera L.) Sở khoa học công nghệ Ninh Thuận 12 Vũ Công Hậu (2001) Kỹ thuât trồng nho Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội 13 Vũ Quang Sáng (2005) Sính lý học thực vật ứng dụng NXB Nông nghiệp, Hà Nội 14 Vũ Văn Vụ (1999) Sinh lý thực vật ứng dụng Nhà xuất Giáo dục, Hà Nội Tiếng nước ngoài: 15 Aazami A M., (2010) Effect of some growth regulators on in vitro culture of two Vitis vinifera Romanian Biotechnological Letters Vol 15(3) 49 16 Abido A I A., M A.M Aly, S.A Hasanen and G A Rayan (2013) In vitro Propagation of Grapevine (Vitis vinifera L) muscat of Alexandria cv For Conservation of Endangerment Meddle-East Journal of Scientific research Vol 13(3) pp 328-337 17 Brant B B., (2010) Micropropagation and acclimatization of ‘norton’ grapevine http://digitalcommons.unl.edu/agronhortdiss 18 Jaskani J M., R Sultana, M M Khan, M Qasim and I A Khan (2008) Effect growth hormones on micropropagation of Vitis vinifera L cv Perlette Vol 40(1) pp 105-109 19 Bhojwani S S., (1980) Factors affecting in vitro stage of micropropagation Plant physiol 20 Gunter E A and Y S Ovodo (2003) Production of polysaccharides by Silene vugaris callus culture depending on carbohydrate of the medium Nauka Interperiodiaca Vol 68 (6) pp 882-889 21 Murashige T and F Skoog (1962) A revised medium or rapid growth and biossays with tobacco tissue cultures Physiol plant Vol 15 pp 473-479 22 Murashige T (1980) Plant growth Substances & Commercial uses of tissues Verlarg, Berlin 23 Shanmugavelu G K., (2003) Grape Cultivarion and Processing Hardcover 24 Sheper T (2001) Advances in biochemical engineering biotechnology plantcells Vol 72 25 Zhong J J and T Yoshida (1995).High-density cultivation o Perilla frutescens cell suspensions for anthocyanin production Enzyme and Microbial Technology Vol 17 pp 1073-1079 Nguồn internet: 26 www.fruitvietnam.com 27 http://vi.wikipedia.org 28 www.ncbi.nlm.nih.gov 29 http://Khoahoc.tv 50 PHỤ LỤC Thành phần môi trường MS (Murashige & Skoog) Thành phần môi trường Các nguyên tố đa lượng Các nguyên tố vi lượng Vitamin Hàm lượng (mg/l) FeSO4.H2O 27,8 MnSO4.H2O 22,3 ZnSO4 8,6 Na2EDTA 37,3 CaCl2 332 KH2PO4 170 KNO3 1900 NH4NO3 1650 MgSO4.7H2O 370 CuSO4.7H2O 0,025 NaMoO4 0,25 CoCl2 0,025 H3BO5 6,2 Glycin Myo-Inositol 100 Thicemine HCl 0,1 Axit vicotinic 0,5 Pyridoxine HCl 0,5 51 Kết xử lý thống kê Ảnh hưởng BA đến khả psht đoạn thân mang mắt ngủ BALANCED ANOVA FOR VARIATE SC/M FILE BA NGU 26/10/** 2:14 PAGE anh huong BA den psht choi mat ngu VARIATE V003 SC/M LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.20250 734167 880.95 0.000 LL 350000E-01 175000E-01 21.00 0.002 * RESIDUAL 500030E-02 833383E-03 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.24250 203864 - BALANCED ANOVA FOR VARIATE CD FILE BA NGU 26/10/** 2:14 PAGE anh huong BA den psht choi mat ngu VARIATE V004 CD LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.26250 2.08750 834.97 0.000 LL 116667E-01 583335E-02 2.33 0.177 * RESIDUAL 150005E-01 250008E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 6.28917 571742 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL/C FILE BA NGU 26/10/** 2:14 PAGE anh huong BA den psht choi mat ngu VARIATE V005 SL/C LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.49667 1.49889 317.41 0.000 LL 316666E-01 158333E-01 3.35 0.105 * RESIDUAL 283335E-01 472225E-02 - 52 * TOTAL (CORRECTED) 11 4.55667 414242 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BA NGU 26/10/** 2:14 PAGE anh huong BA den psht choi mat ngu MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ dc NOS SC/M 0.600000 1.76667 1.26667 1.46667 CD SL/C 1.06667 1.33333 2.86667 3.00000 1.26667 2.36667 2.16667 2.56667 SE(N= 3) 0.166672E-01 0.288680E-01 0.396747E-01 5%LSD 6DF 0.576544E-01 0.998590E-01 0.137241 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS 4 SC/M 1.30000 1.32500 1.20000 CD SL/C 1.80000 1.85000 1.87500 2.25000 2.32500 2.37500 SE(N= 4) 0.144342E-01 0.250004E-01 0.343593E-01 5%LSD 6DF 0.499302E-01 0.864804E-01 0.118854 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BA NGU 26/10/** 2:14 PAGE anh huong BA den psht choi mat ngu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | SC/M CD SL/C |LL OBS TOTAL SS RESID SS | | | 12 1.2750 0.45151 0.28868E-01 2.3 0.0000 0.0024 12 1.8417 0.75614 0.50001E-01 2.7 0.0000 0.1775 12 2.3167 0.64362 0.68719E-01 3.0 0.0000 0.1049 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE NHAN BA 26/10/** 0:26 PAGE 53 | VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.02917 676389 221.36 0.000 LL 166666E-02 833332E-03 0.27 0.772 * RESIDUAL 183334E-01 305556E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.04917 186288 - BALANCED ANOVA FOR VARIATE CD FILE NHAN BA 26/10/** 0:26 PAGE VARIATE V004 CD LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 15.8167 5.27222 ****** 0.000 LL 116667E-01 583335E-02 1.24 0.356 * RESIDUAL 283361E-01 472268E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 15.8567 1.44152 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL/C FILE NHAN BA 26/10/** 0:26 PAGE VARIATE V005 SL/C LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ============================================================================= CT$ 33.4625 11.1542 ****** 0.000 LL 116667E-01 583333E-02 1.00 0.424 * RESIDUAL 349989E-01 583315E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 33.5092 3.04629 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NHAN BA 26/10/** 0:26 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ dc NOS HSN CD 1.00000 1.23333 1.36667 3.66667 2.06667 4.20000 SL/C 1.83333 3.26667 6.36667 54 3 1.13333 2.43333 4.56667 SE(N= 3) 0.319143E-01 0.396765E-01 0.440952E-01 5%LSD 6DF 0.110397 0.137247 0.152532 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS HSN CD 1.40000 2.85000 1.40000 2.87500 1.37500 2.92500 SE(N= 4) 5%LSD 6DF SL/C 4.00000 4.05000 3.97500 0.276386E-01 0.343609E-01 0.381875E-01 0.956063E-01 0.118860 0.132097 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NHAN BA 26/10/** 0:26 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ |LL | (N= 12) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | HSN 12 1.3917 0.43161 0.55277E-01 4.0 0.0000 0.7719 CD 12 2.8833 1.2006 0.68722E-01 2.4 0.0000 0.3564 SL/C 12 4.0083 1.7454 0.76375E-01 1.9 0.0000 0.4237 Ảnh hưởng tổ hợp BA + Ki đến nhân nhanh chồi BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BA+KI 9/11/** 8:37 PAGE anh huong ba+ki den kha nang nhan nhanh choi VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.44889 724444 260.80 0.000 LL 888889E-02 444444E-02 1.60 0.309 * RESIDUAL 111113E-01 277782E-02 * TOTAL (CORRECTED) 1.46889 183611 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CD FILE BA+KI 9/11/** 8:37 PAGE 55 anh huong ba+ki den kha nang nhan nhanh choi VARIATE V004 CD LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 15.9200 7.96000 ****** 0.000 LL 266666E-01 133333E-01 4.00 0.112 * RESIDUAL 133335E-01 333338E-02 * TOTAL (CORRECTED) 15.9600 1.99500 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL/C FILE BA+KI 9/11/** 8:37 PAGE anh huong ba+ki den kha nang nhan nhanh choi VARIATE V005 SL/C LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 19.0956 9.54778 ****** 0.000 LL 888887E-02 444444E-02 0.57 0.607 * RESIDUAL 311129E-01 777824E-02 * TOTAL (CORRECTED) 19.1356 2.39194 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BA+KI PAGE anh huong ba+ki den kha nang nhan nhanh choi MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ dc NOS HSN CD 2.06667 4.13333 1.13333 1.13333 1.33333 1.53333 SL/C 5.93333 2.96667 2.73333 SE(N= 3) 0.304293E-01 0.333336E-01 0.509190E-01 5%LSD 4DF 0.119276 0.130660 0.199592 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS HSN CD SL/C 56 9/11/** 8:37 3 3 1.46667 1.53333 1.53333 2.20000 2.33333 2.26667 3.83333 3.90000 3.90000 SE(N= 3) 0.304293E-01 0.333336E-01 0.509190E-01 5%LSD 4DF 0.119276 0.130660 0.199592 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BA+KI PAGE anh huong ba+ki den kha nang nhan nhanh choi 9/11/** 8:37 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ |LL | (N= 9) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | HSN 1.5111 0.42850 0.52705E-01 3.5 0.0004 0.3090 CD 2.2667 1.4124 0.57735E-01 2.5 0.0001 0.1116 SL/C 3.8778 1.5466 0.88194E-01 2.3 0.0001 0.6073 Ảnh hưởng nước dừa đến khả nhân nhanh chồi BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE NUOC DUA 9/11/** 11: PAGE nhan nhanh tren nuoc dua VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.59000 530000 79.50 0.000 LL 666666E-02 333333E-02 0.50 0.633 * RESIDUAL 400003E-01 666672E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.63667 148788 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CD FILE NUOC DUA 9/11/** 11: PAGE nhan nhanh tren nuoc dua VARIATE V004 CD LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.36917 789723 258.46 0.000 LL 166666E-02 833331E-03 0.27 0.772 57 * RESIDUAL 183333E-01 305555E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.38917 217197 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL/C FILE NUOC DUA 9/11/** 11: PAGE nhan nhanh tren nuoc dua VARIATE V005 SL/C LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.64667 882222 67.57 0.000 LL 166668E-02 833340E-03 0.06 0.939 * RESIDUAL 783336E-01 130556E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.72667 247879 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NUOC DUA 9/11/** 11: PAGE nhan nhanh tren nuoc dua MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ dc NOS HSN 2.16667 2.46667 2.66667 3.16667 CD 4.16667 4.50000 4.96667 5.33333 SL/C 5.80000 5.13333 5.36667 6.36667 SE(N= 3) 0.471406E-01 0.319142E-01 0.659687E-01 5%LSD 6DF 0.163067 0.110396 0.228196 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS 4 HSN 2.65000 2.60000 2.60000 CD 4.72500 4.75000 4.75000 SL/C 5.65000 5.67500 5.67500 SE(N= 4) 0.408250E-01 0.276385E-01 0.571305E-01 5%LSD 6DF 0.141220 0.956061E-01 0.197624 - 58 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NUOC DUA 9/11/** 11: PAGE nhan nhanh tren nuoc dua F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | HSN 12 2.6167 0.38573 0.81650E-01 3.1 0.0001 0.6330 CD 12 4.7417 0.46604 0.55277E-01 1.2 0.0000 0.7719 SL/C 12 5.6667 0.49787 0.11426 2.0 0.0002 0.9386 |LL | Ảnh hưởng NAA đến khả rễ BALANCED ANOVA FOR VARIATE CD FILE RE CHOI 10/11/** 10:51 PAGE Anh huong NAA den kha nang re choi VARIATE V003 CD LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.98333 661111 340.00 0.000 LL 416666E-01 208333E-01 10.71 0.011 * RESIDUAL 116667E-01 194446E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.03667 185151 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL/C FILE RE CHOI 10/11/** 10:51 PAGE Anh huong NAA den kha nang re choi VARIATE V004 SL/C LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ============================================================================= CT$ 4.99000 1.66333 499.00 0.000 LL 666665E-02 333333E-02 1.00 0.424 * RESIDUAL 200001E-01 333336E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 5.01667 456061 - 59 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE RE CHOI 10/11/** 10:51 PAGE Anh huong NAA den kha nang re choi MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ dc NOS CD SL/C 1.26667 3.06667 2.06667 3.73333 1.20000 2.43333 1.00000 2.03333 SE(N= 3) 5%LSD 6DF 0.254588E-01 0.333335E-01 0.880662E-01 0.115306 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS CD 1.42500 1.42500 SL/C 2.80000 2.80000 2.85000 1.30000 SE(N= 4) 0.220480E-01 0.288676E-01 5%LSD 6DF 0.762676E-01 0.998577E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE RE CHOI 10/11/** 10:51 PAGE Anh huong NAA den kha nang re choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | CD 12 1.3833 0.43029 0.44096E-01 3.2 0.0000 0.0111 SL/C 12 2.8167 0.67532 0.57735E-01 2.0 0.0000 0.4237 60 |LL | ... Nghiên cứu ảnh hưởng đơn chất chất điều tiết sinh trưởng đến phát sinh hình thái in vitro nho không hạt 19 3.4.3 Nghiên cứu phát sinh hình thái nguồn callus mô nho không hạt 21 3.4.4 Nghiên. .. sinh trưởng đến phát sinh hình thái in vitro nho không hạt 27 4.1.3 Nghiên cứu phát sinh hình thái nguồn callus mô nho không hạt 35 4.1.4 Ảnh hưởng phối hợp BA, Ki α-NAA đến phát sinh. .. Nghiên cứu ảnh hưởng đơn chất chất điều tiết sinh trưởng đến phát sinh hình thái in vitro nho không hạt 3.4.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng 6-Benzyladenine (BA) đến phát sinh