Bài viết tiến hành đánh giá chất lượng Ba kích thông qua một thành phần hóa học chính, so sánh với các giống Ba kích ở Miền Bắc, nhằm cung cấp các cơ sở khoa học cho việc sử dụng cây Ba kích trồng tại Quảng Nam.
2 Chen C R., Zhang J., Wu K W., Liu P Y., Wang S J., Chen D Y., Ji Z N (2015), “Gracillin induces apoptosis in HL60 human leukemic cell line via oxidative stress and cell cycle arrest of G1”, Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 70(3), pp 199-204 DarbourN., Bayet C., Doreau A., Raad I., Phung B H., Dumontet C., Di Pietro A., Dijoux-Franca M G., Guilet D (2009), “Selective modulation of P-glycoprotein activity by steroidal saponines from Paris polyphylla”, Fitoterapia, 80(1), pp 39-42 Kang L P., Ma B P., Zhang J., Xiong C Q., Tan D W., Cong Y W (2005), “Isolation and identification of steroidal saponins from Paris polyphylla Smith”, Chinese Journal of Medicinal Chemistry, 15, pp 25-30 Qin X J., Sun D J., Ni W., Chen C X., Hua Y., He L., Liu H.Y (2012), “Steroidal saponins with antimicrobial activity from stems and leaves of Paris polyphylla var yunnanensis”, Steroids, 77(12), pp 1242-1248 Yun H., Lijian C., Wenhong Z., Yuhong D., Yongli W., Qiang W., Ding Z (2007), “Separation and identification of steroidal compounds with cytotoxic activity against human gastric cancer cell lines in vitro from the rhizomes of Paris polyphylla var chinensis”, Chemistry of Natural Compounds, 43(6), pp 672-677 Zheng W., Yan C M., Zhang Y B., Li Z H., Z Q Li, Li X Y., Wang Z W., Wang X L., Chen W Q., Yu X H (2015), “Antiparasitic efficacy of gracillin and zingibernsis newsaponin from Costus speciosus (Koen ex Retz) Sm against Ichthyophthirius multifiliis”, Parasitology, 142(3), pp 473-479 Wang Y., Zhang Y J., Gao W Y., Yan L.L (2007), “Anti-tumor constituents from Paris polyphylla var yunnanensis”, China Journal of Chinese Materia Medica, 32(14), pp 1425-1428 SUMMARY 400 mg of a high purity compound was extracted, isolated and purified from rhizome of Paris polyphylla var chinensis by using column chromatographic method The chemical structure of the isolated compound was identify as Gracillin based on comparision of the UV-Vis, IR, MS, 1H-NMR and 13C-NMR of isolated Gracillin and those of standard Gracillin purchased from Shanghai Yuanye Bio-Technology Co., Ltd, (China) company The product can be used to establish reference standard (Ngày nhận bài: 18/5/2020 ; Ngày phản biện: 14/07/2020 ; Ngày duyệt đăng: 25/08/2020) NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, ĐA DẠNG DI TRUYỀN VÀ THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA CÂY BA KÍCH TẠI HUYỆN TÂY GIANG, TỈNH QUẢNG NAM PHẠM THỊ LINH GIANG, HOÀNG QUỲNH HOA, NGHIÊM ĐỨC TRỌNG, TRẦN VĂN ƠN Trường Đại học Dược Hà Nội Từ khóa: Ba kích, Ba kích Tây Giang, đa dạng di truyền Ba kích, monotropein, nystose Đặt vấn đề Ba kích dược liệu sử dụng rộng rãi Y học cổ truyền với tác dụng bổ thận dương, mạnh gân xương với nhu cầu sử dụng ngày tăng Ba kích trồng số tỉnh phía Bắc Quảng Ninh, Bắc Giang nhiên sản lượng chưa đáp ứng nhu cầu thị trường dẫn đến tình trạng dược liệu Ba kích giả, Ba kích khơng rõ nguồn gốc bán tràn lan Trước 24 thực trạng đó, cần thiết phải xây dựng vùng trồng Ba kích rõ nguồn gốc chất lượng để đáp ứng nhu cầu loại dược liệu Trong trình điều tra thực địa số khu vực thuộc huyện Tây Giang, tỉnh Quảng Nam, nhóm nghiên cứu nhận thấy có xuất nhiều mẫu Ba kích sinh trưởng phát triển tốt vành đai ôn đới độ cao 700 m Trong đó, theo ghi nhận tài liệu Tạp chí KIỂM NGHIỆM THUỐC - Số 3.2020; Tập 18.(69) có, giống Ba kích Miền Bắc Quảng Ninh, Bắc Giang sinh trưởng tốt độ cao 400 m Khi quan sát đặc điểm thực vật mẫu Ba kích huyện Tây Giang, tỉnh Quảng Nam, số mẫu có đặc điểm thực vật khác so với mẫu Ba kích mơ tả trước Miền Bắc Việt Nam Ngồi ra, cịn xuất số giống Ba kích từ Miền Bắc du nhập thông qua dự án địa phương Để nghiên cứu rõ đặc điểm thực vật, đa dạng di truyền Ba kích huyện Tây Giang, tỉnh Quảng Nam, tiến hành đánh giá chất lượng Ba kích thơng qua thành phần hóa học chính, so sánh với giống Ba kích Miền Bắc, nhằm cung cấp sở khoa học cho việc sử dụng Ba kích trồng Quảng Nam, nghiên cứu “Đặc điểm hình thái, đa dạng di truyền thành phần hóa học Ba kích huyện Tây Giang, tỉnh Quảng Nam” thực Thực nghiệm 2.1 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất, chất chuẩn 2.1.1 Thiết bị, dụng cụ - Máy sắc ký lỏng hiệu cao Shimadzu UFLC DAD; - Máy sắc ký lỏng hiệu cao HITACHI DADELSD; - Cân phân tích Shimadzu (AY 220), độ xác 0,1 mg; - Máy xác định hàm ẩm AND MF-50; -Tủ lạnh sâu - 23°C; -30°C (Biomedical Freezer – Sanyo); - Máy ly tâm để bàn tốc độ cao Eppendorf 5415R; - Dụng cụ tách chiết bao gồm: Chày, cối sứ, ống eppendorf, bể ổn nhiệt Memmert WNB10, máy lắc vortex IKA - Dụng cụ nhân gen: Eppendorf mastercycler pro S, máy soi chụp ảnh gen UVP Gel-docIt, máy điện di Consort EV 222 - Dụng cụ giải trình tự gen: Máy giải trình tự ABI 3730xl DNA Analyzer, máy nhân gen DNA Engine Tetrad Peltier Therma Cycler (BIO-RAD) 2.1.2 Hóa chất, chất chuẩn - Chất chuẩn Monotropein: Nguồn gốc: Sigma – Aldrich; Số lô: SLBN8437V; Hàm lượng 99% C16H22O11 (nguyên trạng); - Chất chuẩn Nystose: Nguồn gốc: Sigma – Aldrich; Số lô: BCBN6357V; Hàm lượng 99,6% C24H42O21 (ngun trạng); - Hóa chất thơng dụng dùng sinh học phân tử hãng Sigma, Merck: CTAB, tris base, boric acid, natri clorid, dNTPs, EDTA, 6X orange loading dye solution, Taq polymeraza, ethanol, 2-propanol, acetic acid glacial, phenol, cloroform, isoamyalcohol, agarose, kit Qiagen; - Mồi ITS 1: 5’TCCGTAGGTGAACCTTGCGG3’; - Mồi ITS 8: 5’GCACTACGATGAAGAACGCT3’; Kích thước đoạn DNA khuếch đại cặp mồi ITS 1-8 nằm khoảng từ 600 - 800 bp 2.2 Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu - 09 mẫu Ba kích thu thập từ quần thể mọc tự nhiên trồng huyện Tây Giang, tỉnh Quảng Nam giai đoạn từ tháng 7/2018 - 4/2019 ký hiệu là: 1TG05, 1TG06, 1TG10, 1TG34, 3TG04, 3TG08, 4TG63, 4TG65 5TG07 - Mẫu so sánh đối chiếu 05 mẫu Ba kích Miền Bắc thu hái Thái Nguyên Quảng Ninh ký hiệu BK1, BK2, BK3 BK4 BK6 Trong đó, mẫu 1TG05, 3TG04, 4TG63, 5TG07, BK1, BK3, BK4 BK6 sử dụng cho nội dung phân tích hóa học Các mẫu giám định tên khoa học lưu mẫu Phòng Tiêu - Trường Đại học Dược Hà Nội 2.2.2 Phương pháp nghiên cứu Phương pháp mơ tả đặc điểm hình thái phương pháp mơ tả phân tích Tên khoa học xác định dựa phương pháp đối chiếu với khóa phân loại mơ tả lồi tài liệu thực vật Các mẫu sau tra khóa so sánh đối chiếu với tiêu type isotype lồi tham khảo từ mẫu lưu Phịng Tiêu Việt Nam Thế giới Sau mô tả đặc điểm hình thái giám định tên khoa học mẫu, nghiên cứu tiến hành tách chiết, khuếch đại, điện di thạch, tinh gel xác định trình tự nucleotid vùng ITS1-5.8S-ITS2 mẫu Ba kích thuộc lồi Morinda officinalis F.C.How đối chiếu với mẫu Ba kích Miền Bắc Sự khác biệt trình tự vùng ITS1-5,8S-ITS2 mẫu khảo sát thể thông qua hệ số tương đồng cặp mẫu, tính tốn công cụ đo khoảng cách di truyền phần mềm CLC v8.02, thống kê xây Tạp chí KIỂM NGHIỆM THUỐC - Số 3.2020; Tập 18.(69) 25 dựng quan hệ phát sinh dựa đoạn trình tự ITS mẫu nghiên cứu phần mềm Mega 6.0 theo phương pháp maximum likelihood Phương pháp xử lý mẫu: Rễ Ba kích sau thu hái rửa sạch, bỏ lõi, thái nhỏ sấy nhiệt độ 55°C hàm ẩm 12% Xay thành bột, rây qua rây 250 µm bảo quản túi ni-lơng kín, đặt vào bình hút ẩm chứa hạt silica gel hút ẩm để tiến hành phân tích định tính định lượng hóa học Phương pháp định lượng nystose mẫu nghiên cứu phương pháp HPLC-ELSD tham khảo chuyên luận Ba kích Dược điển Trung Quốc [6] Tiến hành thẩm định độ tương thích hệ thống khoảng tuyến tính phương pháp định lượng nystose HPLC – ELSD Phương pháp định lượng monotropein mẫu rễ Ba kích tiến hành phương pháp HPLCDAD tham khảo theo quy trình Bùi Quốc Thái cộng [5] xây dựng thẩm định năm 2016 Tuy nhiên, dung môi chiết mẫu sử dụng nghiên cứu ethanol 40% thay methanol nghiên cứu Bùi Quốc Thái Phương pháp tiến hành thẩm định số tiêu như: Độ đặc hiệu, độ thích hợp hệ thống sắc ký, độ tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại độ xác trung gian mẫu 5TG07 trước định lượng mẫu Ba kích nghiên cứu Kết bàn luận 3.1 Kết 3.1.1 Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái Các mẫu nghiên cứu Tây Giang có đặc điểm hình thái mô tả sau: Cây dây leo thân quấn Rễ phình to thành củ, hình trụ, mập, vặn vẹo, từ củ phân thành nhiều nhánh gồm 2-3 nhánh cấp hai; từ nhánh cấp hai phân thành 3-5 nhánh cấp ba, phân tới nhánh cấp năm Đường kính củ từ 4-8 mm; chiều dài củ từ 15-40 cm Củ thường thắt lại tạo thành đốt có chiều dài từ 1-3 cm, trơng giống ruột gà Vỏ ngồi màu vàng trắng, thịt màu trắng vàng, có ánh tím, mặt vỏ có nhiều vân dọc, lõi dạng sợi, có gai, tỷ lệ lõi/củ thay đổi từ 1/5-1/3 Thân leo, đường kính mm màu xanh tím, bề mặt nhẵn phủ lơng thưa dày; thân già có màu nâu, xanh đậm tím đậm, lơng rụng dần; thường nhẵn, gióng dài 4-15 cm 26 Lá đơn, mọc đối; cuống dài 3-9 mm, đường kính 1-2 mm, nhẵn phủ lông ngắn hay dài; phiến dày mỏng, có hình trứng, hình bầu dục thn nhọn, hình bầu dục hình gần trịn, dài 5-13 cm, rộng 2,5-5 cm, số 1-3,5; gốc tròn nhọn, mép ngun hay lượn sóng đơi có lông mi; nhọn tù; mặt mặt nhẵn có lơng ngắn; thường có hốc Domatia - hốc gân phụ có phủ lơng; gân hình lơng chim, gồm -12 cặp gân phụ rời nối tiếp gân mép lá; gân rõ có lơng nhẵn mặt dưới; màu xanh, gân cấp hình mạng Lá kèm mỏng, dính nhau, ơm lấy thân, hàn liền, dài 2-4 mm, màu trắng xanh hay tím, có phủ lông ngắn thưa, đỉnh ngang nhọn Cụm hoa dạng tán, gồm 4-5 tán mọc nách hay đầu cành, tán mang 1-5-10 hoa; cuống tán dài 0,3-4 cm, đường kính 1-2 mm, có phủ lơng Hoa nhỏ, đều, lưỡng tính, nở màu xanh, trắng, sau ngả sang vàng Đài 3-4, hàn liền hình ống, rộng 2-3 mm, dài 3-4 mm, màu xanh, thường phủ lông dày thưa, chia 2, thùy, dài 1-4 mm, rộng 1-3 mm Tràng 3-4, có phần móng dính tạo thành ống hình chum hình trụ, đường kính 2-3 mm, cao 2-4 mm, phủ lơng mặt ngồi dày hay thưa; phần rời, hình tam giác, dài, rộng khoảng mm, mặt ngồi nhẵn hay phủ lơng, mặt có vịng lơng phía họng tràng dày đặc, thẳng, màu trắng, dài khoảng mm Bộ nhị 3-4, rời, nhị dính vào họng tràng; nhị ngắn; bao phấn ô, dài mm, thuôn hai đầu, nứt dọc Bộ nhụy gồm nỗn dính tạo thành bầu dưới, ơ, đường kính 2-3 mm; bề mặt bầu nhẵn có lơng thưa, ngắn Cụm mọc thành tán Quả hình cầu, từ 1-5 quả/1 tán, rời kép Bề mặt phủ lông nhẵn, xanh non chuyển màu cam chín, mang đài cịn lại đỉnh Hạt 3-4/ quả, bề mặt có lơng màu trắng (Hình 1) 3.1.2 Giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu Dựa đặc điểm hình thái mơ tả, đối chiếu với mơ tả khóa phân loại chi Nhàu (Morinda L.) thực vật chí Trung Quốc [10], mơ tả lồi thuộc chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam [1],[2], mẫu nghiên cứu xác định có tên khoa học Morinda officinalis F.C.How Tạp chí KIỂM NGHIỆM THUỐC - Số 3.2020; Tập 18.(69) Dạng sống; Hình thái rễ; 3a, 3b, 3c Bề mặt thân; 4a, 4b, 4c, 4d Hình thái kèm; Các dạng phiến lá; 6a, 6b Mép lá; 7a, 7b Mặt lá; 8a, 8b Mặt lá; 9a, 9b, 9c, 9d Các kiểu cụm bề mặt quả; 9e Quả bổ ngang hạt; 10a, 10b, 10c, 10d Các kiểu cụm hoa; 10e, 10f, 10g, 10h Hình thái tràng hoa; 10i Đặc điểm tràng hoa nhị; 10k Bầu cắt ngang Hình Đặc điểm hình thái mẫu Ba kích nghiên cứu Tây Giang 3.1.3 Kết nghiên cứu đa dạng di truyền Kết phân tích dựa vào đoạn trình tự ITS1-5,8S-ITS2 cho thấy, mẫu Ba kích thuộc lồi Morinda officinalis F.C.How thu thập địa phương khác Việt Nam, tập trung chủ yếu số tỉnh Miền Bắc Miền Nam Trung Bộ (huyện Tây Giang, tỉnh Quảng Nam) đa dạng mặt di truyền, có tương đồng di truyền cao số mẫu 14 trình tự Hệ số tương đồng cao 100%, hệ số thấp 98,02%; khoảng cách di truyền gần 0,00 xa 0,0198 Tạp chí KIỂM NGHIỆM THUỐC - Số 3.2020; Tập 18.(69) 27 Kết phân tích quan hệ phát sinh hình cho thấy 14 mẫu Ba kích nghiên cứu phân thành nhánh chính: * Nhóm I: gồm mẫu: 1TG05, 1TG06, 1TG34, 3TG04, 4TG65 * Nhóm II: gồm mẫu: BK1, BK2, BK3, BK4, BK6, 1TG10; 3TG08, 4TG63, 5TG07 Như vậy, mẫu Ba kích 1TG05, 1TG06, 1TG34, 3TG04, 4TG65 địa Tây Giang, Quảng Nam có mối quan hệ gần gũi với mẫu cịn lại 1TG10; 3TG08, 4TG63, 5TG07 có mối quan hệ di truyền gần gũi với mẫu Ba kích thu Miền Bắc Hình Cây quan hệ phát sinh 14 mẫu Ba kích nghiên cứu 3.1.4 Kết nghiên cứu thành phần hóa học Sau tiến hành thẩm định phương pháp định lượng nystose kỹ thuật HPLC với detector tán xạ bay – ELSD phương pháp định lượng monotropein kỹ thuật HPLC – DAD tiêu trình bày cho thấy hai phương pháp đạt yêu cầu phương pháp phân tích theo tiêu chuẩn AOAC Tiến hành định lượng hai chất 08 mẫu dược liệu Ba kích thu vùng khác Việt Nam thu kết hàm lượng nystose dao động từ 0,970 đến 9,488% so với dược liệu khô tuyệt đối bỏ lõi; mẫu 3TG04 4TG63 hai mẫu có hàm lượng cao thấp Trong đó, hàm lượng monotropein dao động từ 0,739 đến 2,156%; mẫu 5TG07 4TG63 hai mẫu có hàm lượng cao thấp 3.2 Bàn luận 3.2.1 Bàn luận đặc điểm hình thái Đề tài thu 14 mẫu Ba kích có tên khoa học Morinda officinalis F C How có 05 mẫu Ba kích thu hái Miền Bắc (Thái Nguyên Quảng Ninh) 09 mẫu Ba kích thu hái huyện Tây Giang, tỉnh Quảng Nam Kết phân tích đặc điểm hình thái 09 mẫu nghiên cứu Tây Giang cho thấy đặc điểm đa dạng mặt hình thái tương tự nghiên cứu khác mật độ nút thắt ruột gà, màu sắc rễ, màu sắc, bề mặt thân, hình thái, màu sắc, bề mặt lá, kiểu cụm hoa, cụm quả, hình dạng tràng, đơn/kép [3],[4] Tuy nhiên, 09 mẫu Tây Giang xuất số đặc điểm khác biệt so với đặc điểm công bố nghiên cứu phiến mỏng (mẫu 1TG34; 4TG63; 1TG06), hốc lơng gân gân phụ rõ mặt (mẫu 1TG06); đài hoa phát triển (mẫu 1TG06); phiến có hình gần trịn (mẫu 4TG65) 28 Tạp chí KIỂM NGHIỆM THUỐC - Số 3.2020; Tập 18.(69) Bảng Kết hàm lượng nystose monotropein số mẫu Ba kích nghiên cứu (%) STT Ký hiệu mẫu BK1 BK3 BK4 BK6 1TG05 3TG04 4TG63 5TG07 Lần Hàm lượng nystose khối lượng dược liệu khô tuyệt đối (%) 7,33 7,31 7,22 0,897 4,65 1,435 4,54 4,64 1,440 8,76 0,774 9,05 9,07 0,772 6,21 0,927 6,15 6,05 0,906 9,16 1,425 9,12 9,26 1,431 9,59 2,095 9,56 9,31 2,092 0,98 0,748 0,97 0,95 0,734 6,20 2,147 6,19 6,19 Hàm lượng trung bình (%) RSD (%) Hàm lượng Hàm lượng monotropein trung bình dược liệu khô (%) tuyệt đối (%) RSD (%) 0,866 7,285 4,610 8,958 6,139 9,180 9,488 0,970 6,195 0,75 1,26 1,95 1,36 0,77 1,61 1,53 0,12 0,889 1,441 0,772 0,920 1,432 2,085 0,735 2,164 0,884 1,83 1,439 0,22 0,773 0,18 0,918 1,14 1,430 0,25 2,090 0,25 0,739 1,12 2,156 0,41 2,159 Hình Đặc điểm hình thái đặc trưng Ba kích Tây Giang Phiến mỏng; Hốc lơng rõ mặt lá; Đài hoa phát triển; Phiến hình gần trịn Tạp chí KIỂM NGHIỆM THUỐC - Số 3.2020; Tập 18.(69) 29 3.2.2 Bàn luận đa dạng di truyền Kết nghiên cứu đa dạng di truyền rằng, 14 mẫu nghiên cứu có sai khác mặt di truyền từ 0,00 - 1,8% Nghiên cứu Ding cộng [7],[8] sai khác đoạn trình tự ITS mẫu Ba kích Trung Quốc 0,00 - 6,00% nghiên cứu Ngô Thị Thu Hiền [3] cho kết sai khác 11 mẫu Ba kích tỉnh Miền Bắc Việt Nam 1,00 - 9,00% Như vậy, 14 mẫu Ba kích nghiên cứu khơng có khác biệt q lớn mặt di truyền so sánh với hai nghiên cứu Mặt khác, dựa quan hệ phát sinh, 09 mẫu Ba kích Tây Giang chia làm hai nhóm, mẫu Ba kích Miền Bắc khơng có phân nhóm Mẫu 1TG10 nghi ngờ có nguồn gốc Miền Bắc từ dự án tài trợ giống cho việc trồng phát triển Ba kích địa phương, 03 mẫu cịn lại mẫu thu vùng sinh thái tự nhiên Ba kích có mẫu 3TG08 hóa vườn trồng xã Lăng, huyện Tây Giang, tỉnh Quảng Nam, khác biệt cho thấy đa dạng định mẫu Ba kích trồng tự nhiên Tây Giang 3.2.3 Bàn luận thành phần hóa học Phương pháp định lượng nystose, hợp chất thuộc nhóm polysaccharid sử dụng detector tán xạ bay ELSD cho độ tin cậy cao Phương pháp tham khảo theo chuyên luận Ba kích Dược điển Trung Quốc [6] có tính xác so với kỹ thuật HPTLC số nghiên cứu Việt Nam [9] Tại Trung Quốc, Liu cộng xác định hàm lượng nystose mẫu Ba kích Quảng Đơng, Trung Quốc kỹ thuật HPLC cho kết hàm lượng nystose khoảng 6,65% [11] Tại Việt Nam, năm 2018, Nguyễn Thị Phương sử dụng kỹ thuật HPTLC kết hợp máy SCAN sau phun thuốc thử để xác định hàm lượng nystose mẫu Ba kích Việt Nam, kết cụ thể là: Trà Lĩnh - Cao Bằng (4,56 - 5,13%); Ba Chẽ Quảng Ninh (5,93 - 7,23%) Hoành Bồ - Quảng Ninh (4,11 - 5,84%) [9] Trong đó, hàm lượng nystose mẫu nghiên cứu đề tài từ 0,970 - 9,488% Hàm lượng nystose mẫu rễ Ba kích thu Miền Bắc mẫu thu Tây Giang - Quảng Nam không cho thấy khác biệt rõ rệt với dao động 6,139 - 8,958% 0,970 - 9,488% Mẫu 4TG63 có kích thước củ tương đối lớn (theo kinh nghiệm người dân địa phương củ từ 4-6 năm) lại cho hàm lượng nystose thấp (0,97%) Rễ mẫu BK1 có màu tím rõ nhất, đường kính lớn nhất, nhiều nút thắt ruột gà 30 hàm lượng hoạt chất nystose lại không cao so với mẫu lại (7,285%) Như vậy, chưa thể khẳng định liên quan mức độ tím thịt rễ số tuổi đến hàm lượng nystose rễ Để đánh giá đầy đủ chất lượng Ba kích Tây Giang, nhóm nghiên cứu tiến hành định lượng thêm chất thuộc nhóm iridoid glycosid monotropein Sau thẩm định phương pháp định lượng monotropein – hợp chất có tác dụng chống viêm quan trọng có hàm lượng cao rễ Ba kích kỹ thuật HPLC-DAD với tiêu cần thiết độ đặc hiệu, tính tương thích hệ thống sắc ký, khoảng tuyến tính, độ xác độ cho kết có độ tin cậy cao Hàm lượng monotropein số mẫu Ba kích theo số nghiên cứu Thế giới dao động từ 11,832 đến 12,791 mg/g dược liệu khô [11] kết đề tài hàm lượng dao động từ 0,739 đến 2,156% Trong đó, mẫu thu Tây Giang có xu hướng hàm lượng monotropein cao mẫu Miền Bắc với giá trị 0,739 - 2,156% 0,773 - 1,439% Mẫu 4TG63 Tây Giang có hàm lượng thấp (0,739%) gần với hàm lượng mẫu BK4 Miền Bắc (0,773%) hai mẫu 3TG04 5TG07 Tây Giang hai mẫu có hàm lượng monotropein cao mẫu nghiên cứu (2,090 2,156%) Trong số 04 mẫu rễ Ba kích thu Tây Giang, 3TG04 5TG07 hai mẫu có hàm lượng hai thành phần nystose monotropein cao mẫu phân tích 4TG63 lại mẫu có hàm lượng thấp Đây sở ban đầu nhằm lựa chọn số giống Ba kích Tây Giang có hàm lượng hoạt chất cao, phục vụ cơng tác nhân giống, trồng trọt Ba kích địa phương Như vậy, với kết nghiên cứu bước đầu đặc điểm thực vật, đa dạng di truyền thành phần hóa học, nhận thấy mẫu Ba kích Tây Giang có đa dạng định đặc điểm hình thái di truyền so với mẫu Ba kích phổ biến Miền Bắc Về chất lượng rễ Ba kích, qua kết nghiên cứu thu nhận thấy khơng có khác biệt rõ ràng hàm lượng hai thành phần nystose monotropein mẫu khác vị trí địa lý, khác biệt xuất phát từ đặc tính khác giống Ba kích khác Điều sở cho việc lựa chọn giống Ba kích thích hợp để tăng hiệu kinh tế cho địa phương Kết luận Đã mơ tả đặc điểm hình thái 09 mẫu mang tên Ba kích Tây Giang, giám định tên khoa học Morinda Tạp chí KIỂM NGHIỆM THUỐC - Số 3.2020; Tập 18.(69) officinalis F.C.How Các mẫu M officinalis F.C.How Tây Giang có dạng hình thái, số đặc điểm độ dày phiến lá, hình dạng phiến lá, hình dạng đài hoa có khác biệt với mẫu M officinalis F.C.How mô tả Việt Nam Đã tách chiết giải trình tự đoạn trình tự ITS-rADN, xây dựng đa dạng dựa đoạn trình tự ITS 14 mẫu thuộc lồi M officinalis F.C.How có sai khác đoạn trình tự ADN, khoảng cách di truyền gần 0,00 xa 0,0198 Kết phân tích quan hệ phát sinh cho thấy 14 mẫu Ba kích nghiên cứu phân thành nhánh Đã định lượng nystose monotropein mẫu rễ Ba kích có độ tuổi từ 4-6 năm tuổi, hàm lượng tương ứng 0,970 – 9,488% 0,739 - 2,156% tính theo trọng lượng khô tuyệt đối dược liệu bỏ lõi Tài liệu tham khảo 1.Võ Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, tập 1, tr 68- 69 Võ Văn Chi (2004), Từ điển thực vật thông dụng, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, tập Ngô Thị Thu Hiền (2016), “Nghiên cứu đa dạng di truyền nguồn gen Ba kích (Morinda officinalis How.) Miền Bắc Việt Nam”, Luận văn Thạc sĩ Dược học - Trường Đại học Dược Hà Nội Lê Hoàng Khẩn (2018), “Nghiên cứu tính đa dạng di truyền Ba kích Quảng Nam - Đà Nẵng thị phân tử RAPD”, Văn phịng hợp tác khoa sinh mơi trường hội động vật Frankfur Bùi Quốc Thái (2016), Nghiên cứu chiết xuất, phân lập tinh chế Monotropein từ Ba kích làm nguyên liệu thiết lập chuẩn, Luận văn Thạc sĩ Dược học - Trường Đại học Dược Hà Nội Chinese Pharmacopoeia Commission (2015), Pharmacopoeia of people’s republic of China, vol I, 284-285 Ding P et al (2006), “RAPD analysis on germplasm resources of different farm races of Morinda officinalis”, Zhong Yao, vol 29(1), 1-3 Ding P et al (2012), “Genuineness of Morinda officinalis How germplasm inferred from ITS sequences variation of nuclear ribosomal DNA”, Acta pharmaceutica Sinica, vol 47(4), 535-540 Nguyen Thi Phuong et al (2018), “HPTLC Densitometry method for the quantification of nystose in Radix Morindae officinalis collected from different regions in Vietnam”, Journal of Medicinal Materials, vol 23, 131- 136 10 Tao Chen et al (2011), Rubiaceae In: Wu, Z Y., P H Raven & D Y Hong, (eds.), Flora of China, Vol 19 (Cucurbitaceae through Valerianaceae, with Annonaceae and Berberidaceae), Science Press, Beijing, and Missouri Botanical Garden Press, St Louis 11 Zhang J.H et al (2018), “Morinda officinalis How - A comprehensive review of traditional uses, phytochemistry and pharmacology”, J Ethnopharmacol, vol 213, 230-255 SUMMARY The study has collected night samples called “Ba kích” at Tay Giang, Quang Nam These samples were identified scientific name are Morinda officinalis F.C.How with some botany characteristics that different from 05 samples collected from Quang Ninh and Thai Nguyên such as leaf thickness, leaf shape, sepals ITS-rADN sequences were extracted and sequenced, 14 samples of M officinalis F.C.How had differences in DNA sequences, the nearest genetic distance was 0.00 and the farthest was 0.0198 The results of the relation tree analysis generated that 09 samples were divided into branches with a number of samples lying in the same branch with the Northern research samples Evaluation Nystose and Monotropein content in eight samples of M officinalis F.C.How roots aged 3-6 years old, the contents were 0.970 – 9.488% and 0.739 – 2.156% by dried materials, respectively There was the same in content of two main components between Tay Giang and Northern samples (Ngày nhận bài: 0/03/2019 ; Ngày phản biện: 20/04/2020 ; Ngày duyệt đăng: 27/06/2020) Tạp chí KIỂM NGHIỆM THUỐC - Số 3.2020; Tập 18.(69) 31 ... trọt Ba kích địa phương Như vậy, với kết nghiên cứu bước đầu đặc điểm thực vật, đa dạng di truyền thành phần hóa học, nhận thấy mẫu Ba kích Tây Giang có đa dạng định đặc điểm hình thái di truyền. .. kích trồng Quảng Nam, nghiên cứu ? ?Đặc điểm hình thái, đa dạng di truyền thành phần hóa học Ba kích huyện Tây Giang, tỉnh Quảng Nam? ?? thực Thực nghiệm 2.1 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất, chất chuẩn... Bàn luận đa dạng di truyền Kết nghiên cứu đa dạng di truyền rằng, 14 mẫu nghiên cứu có sai khác mặt di truyền từ 0,00 - 1,8% Nghiên cứu Ding cộng [7],[8] sai khác đoạn trình tự ITS mẫu Ba kích Trung