Dựa vào trang thiết bị hiện có và tham khảo một số phương pháp phân tích đã được các tác giả công bố, đồng thời dựa trên nguyên lý của phương pháp sắc ký lỏng - khối phổ, bài viết đã tiến hành nghiên cứu định lượng vildagliptin trong huyết tương người bằng phương pháp LC-MS/MS.
T chứa chuẩn nội chuẩn VDG có nồng độ xác khoảng ng/ml (mẫu LLOQ) lơ mẫu Xác định nồng độ VDG có mẫu LLOQ từ đường chuẩn tiến hành làm song song điều kiện Kết thẩm định giới hạn định lượng phương pháp trình bày Bảng Bảng Kết xác định giá trị LLOQ phương pháp Mẫu chuẩn (3 ng/ml) Ngày Ngày Ngày Diện tích mẫu zero (n = 1) 15694 7220 Diện tích trung bình mẫu LLOQ (n = 6) 139644 118311 125566 Tỷ lệ LLOQ/zero 8,9 16,4 - Độ (%) n = 103,7 108,2 105,8 1,7 13,6 1,8 CV (%) n = Độ (%) n = 18 105,9 CV (%) n = 18 7,9 Kết thẩm định cho thấy, thời điểm trùng với 3.4 Xác định độ đúng, độ lặp lại phương pháp thời gian lưu VDG, đáp ứng pic trung bình mẫu Tiến hành thẩm định độ đúng, độ lặp lại lô mẫu LLOQ, LQC, MQC, HQC chứa VDG có nồng độ tương ứng ng/ml; ng/ml; 240 ng/ml 480 ng/ml Xác định hàm lượng VDG có mẫu đường chuẩn phân tích điều kiện Độ phương pháp tỷ lệ % nồng độ xác định so với nồng độ lý thuyết Độ lặp lại phương pháp biểu thị giá trị CV% Kết xác định độ đúng, độ lặp lại phương pháp trình bày Bảng LLOQ gấp lần đáp ứng pic mẫu zero Tỷ lệ nồng độ VDG trung bình xác định từ đường chuẩn so với nồng độ lý thuyết có mẫu LLOQ nằm khoảng từ 80% - 120% CV nhỏ 20%, đáp ứng yêu cầu giới hạn định lượng phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học [1],[6] Bảng Kết thẩm định độ đúng, độ lặp lại ngày khác ngày Độ đúng, độ lặp lại LLOQ (≈ ng/ml) LQC (≈ ng/ml) MQC (≈ 240 ng/ml) HQC (≈ 480 ng/ml) Độ (%) CV (%) Độ (%) CV (%) Độ (%) CV (%) Độ (%) CV (%) Trong ngày 103,7 1,7 106,4 4,3 107,7 3,2 107,2 2,5 Khác ngày 105,7 6,2 98,5 4,9 103,1 3,7 105,1 2,9 Kết thẩm định cho thấy nồng độ thấp, trung bình cao, phương pháp có độ ngày khác ngày xấp xỉ 100%; độ lặp lại ngày khác ngày với giá trị CV nhỏ 15% 3.5 Nghiên cứu độ ổn định hoạt chất huyết tương Tiến hành nghiên cứu độ ổn định VDG HT lô mẫu LQC HQC Đánh giá độ ổn định VDG HT cách so sánh nồng độ VDG có mẫu bảo quản so với nồng độ lý thuyết Kết nghiên cứu độ ổn định VDG trình bày Bảng 16 Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 4.2020; Tập 18.(70) Bảng Kết nghiên cứu độ ổn định VDG huyết tương Độ ổn định Mẫu Nồng độ lý thuyết (ng/ml) LQC HQC LQC Độ ổn định thời gian ngắn (5 giờ, nhiệt độ phòng) HQC Độ ổn định autosampler LQC (75 giờ/nhiệt độ phòng) HQC LQC Độ ổn định dài ngày 0 (-70 C ± -5 C, 77 ngày) HQC chu kì đông - rã 8,96 477,70 8,96 477,70 8,96 477,70 8,96 477,70 Nồng độ sau bảo quản (ng/ml; n = 6) 8,71 460,60 7,99 467,50 9,26 469,29 7,88 480,65 % Sai khác -2,8 -3,6 10,8 -2,1 -3,3 -1,8 12,1 0,6 Kết nghiên cứu độ ổn định cho thấy, mẫu độ ổn định sai khác so với nồng độ lý thuyết nhỏ 15%, đáp ứng yêu cầu độ ổn định hoạt chất huyết tương phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học [1],[6] Kết luận Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng vildagliptin huyết tương người kỹ thuật LC-MS/MS Kết thẩm định cho thấy, phương pháp có giá trị giới hạn định lượng nhỏ (3 ng/ml); khoảng tuyến tính rộng (từ ng/ml đến 600 ng/ml); độ dao động khoảng từ 98,5% - 107,7%; độ lặp lại với giá trị CV% nhỏ (1,7% - 6,2%), thời gian phân tích ngắn (2 phút cho mẫu), đáp ứng yêu cầu phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học US-FDA EMA [1],[6] Phương pháp xây dựng ứng dụng nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học chế phẩm chứa hoạt chất vildagliptin Tài liệu tham khảo European Medicines Agency, Committee for Medicinal Products for Human Use (2012): Guideline on Bioanalytical Method Validation Medicines and Healthcare products Regulatory Agency, Public Assessment Report UKPAR Vildagliptin 50 mg tablets, PL 39352/0395, Pages 1-14 Ramzia I El Bagary, Hassan M.E Azzazy, Ehab F El Kady, Faten Farouk (2016), “Simultaneous Determination of Metformin, Vildagliptin and 3-Amino-1- adamantanol in human plasma: Application to pharmacokinetic studies”, Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies Roberto Pontarolo, Ana Carolina Gimenez, Thais Martins Guimarães de Francisco, Rômulo Pereira Ribeiro, Flávia Lada Degaut Pontes, João Cleverson (2014), “Simultaneous determination of Metformin and Vildagliptin in human plasma by a HILIC–MS/MS method”, Journal of Chromatography B-Volume 965, Pages 133-141 Thông tin sản phẩm Galvus® 50 mg, Novartis Farmaceutica S.A U.S Department of Health and Human Services Food and Drug Administration (2018): Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation SUMMARY A high throughput and specific method using Ultra Performance Liquid Chromatography tandem Mass Spectrometry was developed for determination of Vildagliptin in human plasma The Vildagliptin and internal standard were separated from human plasma by liquid - liquid extraction technique Analytes were chromatographed on a C8 column (50 x 2.1 mm; 1.9 µm) with isocratic elution using a tandem quadrupole mass detector (QTRAP 6500+ – AB Sciex) The mobile phase consists of Acetonitrile and Ammonium bicarbonate mM solution with suitable ratio The assay was linear over the concentration range of - 600 ng/ml The LLOQ was ng/ml The intra-day and inter-day accuracy were within 98.5% - 107.7%; This method can be used for BE studies of Vildagliptin preparations (Ngày nhận bài: 28/04/2020 ; Ngày phản biện: 28/10/2020 ; Ngày duyệt đăng: 16/12/2020) Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 4.2020; Tập 18.(70) 17 ... học [1],[6] Kết luận Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng vildagliptin huyết tương người kỹ thuật LC-MS/MS Kết thẩm định cho thấy, phương pháp có giá trị giới hạn định lượng nhỏ (3 ng/ml);... -3,3 -1,8 12,1 0,6 Kết nghiên cứu độ ổn định cho thấy, mẫu độ ổn định sai khác so với nồng độ lý thuyết nhỏ 15%, đáp ứng yêu cầu độ ổn định hoạt chất huyết tương phương pháp phân tích thuốc dịch...Bảng Kết nghiên cứu độ ổn định VDG huyết tương Độ ổn định Mẫu Nồng độ lý thuyết (ng/ml) LQC HQC LQC Độ ổn định thời gian ngắn (5 giờ, nhiệt độ phòng) HQC Độ ổn định autosampler LQC