Tuyển chọn và phân loại xạ khuẩn có khả năng sinh enzym xylannaza

LỜI CÁM ƠN Trong suốt thời gian thực đề tài này, nhận giúp đỡ tận tình thầy cán khoa học tai phịng Cơng nghệ lên men, Viện Cơng nghệ sinh học thuộc viện Khoa học Việt Nam Trước hết, xin gửi lời cám ơn sâu sắc tới TS Phạm Thị Bích Hợp - Trưởng Phịng Cơng nghệ Lên men - tạo điều kiện cho học tập, thực hành thí nghiệm suốt q trình thực đề tài tốt nghiệp Phịng Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ThS Phan Thị Hồng Thảo, THS Vv Hiếu KS Vũ Văn Lợi người trược tiếp dẫn thao tác ghiên cứu đưa lời khuyên bổ ích giúp giải đáp nhiều thắc mắc trình nghiên cứu Đồng thời, qua cho tơi gửi lời cám ơn chân thành tới tập thể cán phịng Cơng nghệ lên men ln động viên, nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện để tơi hồn thành tốt đề nghiên cứu Nhân dịp này, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy cô giáo khoa Lâm học - Trường đại học Lâm Nghiệp, người truyền đạt, hướng dẫn cho tơi kiến thức q trình học tập Trường Cuối cùng, xinh chân thành cảm ơn tới gia đình bạn giúp đỡ, động viên tạo điều kiện cho suốt q trình học tập làm tốt nghiệp Tơi xin chân thành cám ơn! Sinh viên Vũ Văn Quân MỞ ĐẦU Hi n n y ng nh ng nghi p giấy l n v o ti n tr nh ph t tri n ng t ng tr ởng nh nh h ng v n n kinh t x h i ng g p to h kh n l n qu tr nh sản xuất b t giấy l loại bỏ lignin r khỏi elluloz nguyên hất hâu n y gồm ng oạn: nấu v tẩy trắng hi nấu tạo th nh sản phẩm b t ặ s t tạo giấy hất l ợng thấp Đ tạo giấy hất l ợng o ng ời t ti p tụ dùng Clo hoặ Clorioxit tẩy trắng nhằm loại bỏ phần lignin òn lại Nh ng l m ng n ản ho mặt xyl n v liên k t giữ xylan - lignin hất tẩy trắng xâm nhập v o bẻ gẫy ấu trú lignin Mặt kh n y tạo r hất hại gây qu tr nh nhiễm m i tr ờng Đ hạn h l ợng ho hất v o qu tr nh tẩy trắng ần phải sử dụng xyl n z ph vỡ r o ản xyl n h ng ph t tri n b n vững Bên ạnh Hữu Phong v ng nh xyl n z ng nghi p giấy ti m n ng ứng dụng l n h n nu i Theo Trần ng (2007) xyl n z từ A ninger GM56 (ĐB106) nhi u loại hất xyl n sử dụng h n nu i nh th nh xyloz ờng oligo-xyloz v xyloz dễ hấp thụ ho ịn l t ng sứ ây l hất kí h thí h ph t tri n khả n ng phân m ng ậu t ơng tạo ng vật nu i C ờng oligo- vi khuẩn lợi ờng ru t l m kh ng ho vật nu i [6] Xyl n z th thu ợ vi khuẩn nấm mố xạ khuẩn n ng sinh xyl n z mạnh [26] Tuy nhiên xạ khuẩn l ối t ợng nấm khả ợ lự họn nghiên ứu thu hồi xyl n z nhi u hi n n y i u ki n nu i xạ khuẩn kh ng qu phứ tạp khả n ng sinh tr ởng tốt i u ki n khắ nghi t: nhi u xạ khuẩn khả n ng sinh tr ởng m i tr ờng tr ờng pH ki m qu ki m v nhi t kh thí h hợp ho sử dụng xử lý n r n ng nghi p v ng nghi p thải xyl n Ngo i r xạ khuẩn òn l n ng sinh r nhi u loại enzym nh phân h y lip z thự hi n Chính vi h b i thải ối t ợng enzym phân huỷ lignin enzym myl z khả enzym ng ph t tri n v khả n ng ứng dung to l n húng t i t i nghiên ứu: “ Tuyển chọn phân loại xạ khuẩn có khả sinh enzym xylanaza” Trong phạm vi Thu thập t i n y ạt mụ tiêu hính nh s u: mẫu ất v mùn gỗ Tuy n họn xạ khuẩn Nghiên ứu ặ phân h y hoạt tính enzym xyl n z i m phân loại m t số h ng Định tên lo i ho m t số h ng lự Đ t i ng nghi p giấy v o ợ thự hi n Phòng nh gi số l ợng vi sinh vật o ợ lự họn ng ngh lên men Vi n kho họ v C ng ngh Vi t N m H N i họn ng ngh sinh họ Vi n Phần I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Xylan Xyl n m n n v g l t n l b th nh phần h y u hemi elluloz Hemi elluloz l polymer kh ng ồng v l polys nhi u thứ h i tự nhiên Xyl n l th nh phần hính hi m 20-35% trọng l ợng kh ây sống vùng n i V ây nhi t hemi elluloz i v hi m 8% ối v i mạ h hính xyl n liên k t β-1,4-D-xylopyranoxyl, v mạ h bên D-glu uronosyl… Số lần xuất hi n gố rit nh m etyl 4-O-methy- mạ h nh nh tùy thu v o nguồn xyl n Hình 1: Cấu tạo xylan hệ enzym phân hủy xylan Xyl n liên k t v i lignin liên k t 4-O-methyl-D-glucuronic axit Ngo i liên k t k òn xyl n v i hydr t xuất hi n liên k t phi h trị giữ bon [22] Đ phân huỷ xyl n tự nhiên nhi u nh m vi sinh vật thự hi n qu tr nh huy n h tạo th nh h y n y b o gồm xạ khuẩn nấm v vi khuẩn ờng xyloz v sử dụng tạo r mùn Đ thự hi n ờng n y tạo r sinh khối hoặ phân ợ qu tr nh huy n h nh m vi sinh vật phân h y xyl n phải n y tất ả h enzym xyl n z 1.2 Hệ enzym phân giải xylan Trong thập kỷ vừ qu xyl n z ng y nh kho họ v ti m n ng ứng dụng nghi p Enzym n y dụng ng thu hút hú ý húng ng nh ợ nghiên ứu kỹ vi khuẩn xạ khuẩn v nấm ng ngh sinh họ Do ấu trú kh ng ồng thuỷ phân ho n to n xyl n th nh hydr t ng ứng xyl n nên bon ơn giản ần m t h enzym b o gồm endo-1,4--xylanaza, -xylosidaza, - th m gi glucuronidaza -L- r binofur nosid z Enzym qu n trọng số l endo1 4--D-xyl n z xú t glu ozit mạ h hính xylo-oligosacch rid th y phân ngẫu nhiên mối liên k t β-1,4 xyl n tạo th nh xylo-oligosaccharid Sau ợ th y phân enzym -xylosid z tạo th nh ờng xyloz [22] hối l ợng phân tử -D-endoxyl n z từ ẳng i n khoảng n 10 Xyl n z v o nh m hính Nh m thứ i m ẳng i n thấp v tử t ơng ối thấp ảm v i mặt i m ợ phân loại theo ấu trú khối l ợng phân tử t ơng ối hịu nhi t Nh m thứ xyl n z i m ẳng i n th y ổi th n 150 kD v o khối l ợng phân o v th ờng bị hoạt tính v nhạy i u ki n m i tr ờng nh pH nhi t v ion kim loại [23] C enzym gồm nh m th mạ h nh nh xyl n giải ph ng nh m th tạo i u ki n thuận lợi ho vi th y phân mạ h hính Nh m enzym n y b o gồm: -L- r binofur nosid z giải ph ng r r binoz ; -D – glu uronid z xit D-glucuronic axit 4-O-methyl-S-glucuronic; etyl xyl n ester z loại bỏ xit loại bỏ xit feruli ; p- oum ri eti ; feruli xit ester z (EC 73) xit ester z loại bỏ xit p-coumaric [26] H enzym phân h y xyl n th khuẩn v vi khuẩn hoặ mặt ầy nấm mố xạ nh m vi sinh vật n y hỉ m t enzym h enzym phân h y xyl n Do tùy mụ í h v khả n ng ứng dụng ng ời t ti n h nh n họn h ng vi sinh vật h enzym 1.3 Khả phân hủy xylan vi sinh vật Xyl n z nấm ợ sinh r ặ bi t l nấm mố h y u nấm vi khuẩn xạ khuẩn Trong khả n ng sinh xyl n z mạnh Chất ảm ứng th ờng sử dụng ho qu tr nh sinh xyl n z l xyl n hemi elluloz v rbonhydr t phân tử l ợng thấp nh xyloz [22] 1.3.1 Khả phân giải xylan nấm vi khuẩn Trong tự nhiên, nấm sợi phân bố r ng r i v th m gi tí h ự v o vịng tuần ho n vật hất l qu tr nh phân giải hất hữu v h nh th nh mùn Trong ợ nấm Trichoderma reesei Saccharomyces cerevisiae nh nghiên ứu qu n tâm khả n ng sinh ả h i loại enzym cellulaza xylanaza Tuy nhiên vi sản sinh ả h i loại enzym n y lại gây bất lợi ho qu tr nh ứng dụng ng nghi p giấy v b t giấy vi sinh ellul z dẫn n phân h y elluoz l m h o hụt m t l ợng nguyên li u V nhi u t S.cerevisiae nhằm tạo r giả h ng khả n ng ứng dụng to l n nhi t ợ xyl n mạnh ặ bi t hú ý C nghiên ứu t t bi n hỉ xyl n z loại nấm ng k ng v o h gen khả n ng sinh xyl n z S u hịu nhi t nên nhi t h ng nấm h enzym phân giải ợ nghiên ứu l Thermoascus aurantiacus, Thermomyces lanuginosus, Humicola grisea var thermoidea, Chaetomium thermophile var coprophile and Humicola insolens Ngo i ũng h ng nấm khả n ng sinh xyl n m t số vi khuẩn s u khả n ng sinh enzym xyl n z : Bacillus stearothermophius, Thermophilic Bacillus spp B.stearothermophilus, B thermocatenulatus, B.thermocatenulatus, B thermoleovorans, B denitrificans, B flavothermus, B thermoglucosidasius Theo Yu v vi khuẩn ng xyl n z từ nấm th y phân xyl n pH tối u l pH tối u u hoạt vi khuẩn từ 40-500C Trong ng nhi t enzym b n nhi t mặt kh o Hầu h t xyl n z từ nấm v ợ sử dụng v hi u th y phân lại l m t ng hi phí ho qu tr nh sản xuất Ngo i r v mặt kỹ thuật v kinh t enzym từ tính khả thi qu tr nh th y phân xyl n ũng ờng sử dụng enzym b n nhi t nhi t h ng nghi p ứng dụng h ng nấm v vi khuẩn ợ ứng dụng nhi u m ợ t ng o v thời gi n kéo d i Do ứng dụng v o h y u enzym n y ng nghi p giấy ợ thu từ h ng xạ ợ qu n tâm nhi u nấm mặ dù nấm h enzym khuẩn [20] 1.3.2 Khả phân giải xylan xạ khuẩn Xạ khuẩn phân giải xyl n mạnh nh ng ứng dụng húng thự tiễn òn gặp m t số vấn v nu i quy m r ng Thứ nấm ần nu i ặ bi t nh ẩm th ng khí nhi t n y kh ng t ơng hợp v i m i tr ờng xử lý ph l g kéo d i v phân h y xyl n kh i u ki n pH m i u ki n ng nghi p Thứ h i nấm hậm Ngo i r nấm sinh r nhi u xyl n z nh ng húng th ờng sinh r thêm ellul z , i u n y h ởng n qu tr nh ứng dụng i u hỉnh nấm sinh xyl n z kh ng kh ng hoạt ng ng nghi p giấy Tuy nhiên ellul z hoặ th ảnh th ellul z h i u hỉnh i u ki n lên men Ví dụ sử dụng xyl n tinh t nh m t nguồn tr ờng lên men v lự bon tỉ l nitơ họn nhi t thí h hợp nồng khuấy sử dụng kỹ thuật di truy n nh ợ bon thấp m i khí O2 tố hỉ sinh r xyl n z Trong i m n y th ờng kh ng gặp xạ khuẩn Ngo i r xạ khuẩn n ng sinh r hất kh ng sinh, ặ i m n y trở th nh u i m dụng ti n h nh thu enzym qui m húng khả ợ ứng ng nghi p v i ti m n ng l n v ợ qu n tâm nghiên ứu nhi u thời gi n gần ây 2.1 Xạ khuẩn Xạ khuẩn (Actinomycetes) nhóm vi sinh vật ơn b o phân bố r ng r i tự nhiên: ất n hữu kh th o hồ m t phần bùn v hất Xạ khuẩn giống nấm hỗ tạo th nh h sợi nh ng lại ơn b o kh ng nhân thự giống vi khuẩn Số l ợng xạ khuẩn ất kh ng phụ thu ất v khả n ng b o ph v o loại ất m òn phụ thu v o thự vật Trong xạ khuẩn trọng phân bố r ng r i tự nhiên nh t h i hi qu n l Streptomyces Nocardia Những loại xạ khuẩn th m gi v o qu tr nh phân giải sơ ấp v mùn h hất hữu ất trung tính ki m hoặ r xâm nhập v o u khả n ng hất kh ng t n nh ligno elluloz 2.2 Đặc điểm cấu tạo xạ khuẩn Xạ khuẩn khuẩn Nhân ấu tạo nh nấm mố xạ khuẩn ùng loại v i nhân xạ khuẩn kh ng phân b o v sắ nh ng kí h th t ơng tự nh vi vi khuẩn Th nh t b o enlluloz h y kitin T b o phân hi theo ki u hính l tính hất ặ tr ng vi khuẩn [4] Cấu tạo m ng t b o xạ khuẩn kh phứ tạp b o gồm th nh t b o v m ng nguyên sinh hất Th nh t b o gồm l p: l p ngo i d y khoảng 60 – 120 Ao l p giữ rắn hắ dầy khoảng 50 Ao v l p xetyl glu os liên k t v i xit N- xetyl mus mi liên k t 4-glu ozid D i l p th nh t b o l m ng nguyên sinh hất h y u gồm th nh phần: phospholipid v protein v i trò ặ bi t qu tr nh tr o ổi hất Cấu trú khuẩn lạ ợ phân bi t h t b o ng sinh tr ởng v ngo i m i tr ờng thạ h tạo th nh khuẩn ty hất ( TCC) v khuẩn ty khí sinh ( T S) TCC ắm sâu v o m i tr ờng tri n r ngo i kh ng khí v phần uối b o tử Đ ờng kính n ịn T S ph t khuẩn ty bi n th nh uống sinh khuẩn ty th y ổi khoảng từ 2-1 µm µm Đ số xạ khuẩn khuẩn ty kh ng oạn Mầu sắ khuẩn ty bắt gặp lấy thứ n 2- v h ng n v kh ng tự ứt xạ khuẩn bi n ổi h t sứ phong phú; m u trắng v ng d m ỏ lụ l m tím nâu v th ti t r m i tr ờng m t số loại sắ tố en TCC sắ tố t n n hỉ t n dung m i hữu Thời gi n nhân th sắ tố i t b o xạ khuẩn m i tr ờng lỏng l khoảng 90 phút Xạ khuẩn ph t tri n theo ki u mọ phân nh nh (khoảng 30 µm phân m t nh nh) Tố d ir khuẩn ty xạ khuẩn gi i oạn ph t tri n khoảng 11 µm/ 1h Nhân khuẩn ợ x p hồi t b o xạ u ặn hi u d i khuẩn ty [4] 2.3 Đặc điểm sinh trƣởng phát triển Phần l n xạ khuẩn l vi sinh vật hi u khí nh ng kh ng phải l hi u khí nghiêm ngặt Tùy theo xuất xứ m nhi t hí lo i ph t tri n 50 oC Hầu h t òn h ng húng l vi sinh vật ợ nhi t ấm hoặ hoặ h ng xạ khuẩn ph t tri n tốt dải nhi t o từ 25-37 0C, nhi t ph t tri n tốt 45-500C [1] Xạ khuẩn ph t tri n tốt m i tr ờng trung tính v ki m; ph t tri n hậm hoặ kh ng ph t tri n pH m i tr ờng qu Sự sinh tr ởng xit hoặ ki m xạ khuẩn hi l m ph : Ph l g: sinh khối t ng kh ng ng k Ph log: l ợng sinh khối t ng theo h m logarit Ph ân bằng: ph n y sinh khối kh ng t ng Ph suy t n: sinh khối giảm nh nh 2.3.1 Đặc điểm bào tử xạ khuẩn Cũng nh vi khuẩn sinh b o tử kh xạ khuẩn th ờng sinh b o tử gặp i u ki n bất lợi v dinh d ỡng hoặ tr ờng (nhi t ẩm lý m i xạ khuẩn dạng h nh ầu h y h nh bầu dụ h nh que h nh trụ h y h nh d …D i kính hi n vi qu ng họ h nh dạng pH) B o tử i u ki n h b o tử vẻ ổn ịnh nh ng qu n s t d vi i n tử th h nh dạng húng kh ng hẳn l m t huỗi b o tử h nh th i b o tử ũng k t ấu b mặt ngo i hoặ g i) th lại l xit pi olini b o tử (trơn th ặ th kh nh u Ng ợ lại nh m nh n nheo i m t ơng ối ổn ịnh B o tử b o tử nhi u hi xạ khuẩn khuẩn Cuống sinh b o tử th ờng xoắn thật h y dạng lò xo (S) v vòng kh ồng hí th phân loại uống ợ xạ dạng thẳng h y ong (RF) dạng huỗi b o tử kh ng ph t tri n hoặ xoắn ơn âu (RA) Cuống sinh b o tử dạng xoắn nh u Cuống sinh b o tử dạng thẳng dạng lỏng ứng hoặ mấu lồi xạ khuẩn nxi v m t m giê Dự v o h nh th i kí h th sinh b o tử v giản h nh m i kính hi n hi u d i v số th d i hoặ ngắn v i th thon lại uốn ong h y kéo d i B o tử h nh th nh ồng thời tất ả hi u d i oạn h y khú v th ờng uống sinh b o tử theo h: k t h nh trụ ov n h nh ầu h nh que v i mép nhẵn hoặ xù x m t số lo i b o tử òn h nh th nh dạng kh nh u Vi tr ờng m t số nguyên tố vi l ợng [3 4] mấu lồi v i h nh th nh uống b o tử diễn r mạnh mẽ m i 2.3.2 Khả phát triển sử dụng chất dinh dƣỡng Glu oz m ltoz su roz l nguồn h t h ng xạ khuẩn C nguồn ờng kh bon ợ sử dụng tốt hầu nh D-xyloza, xenlobioza, D-m noz ũng ợ xạ khuẩn sử dụng qu tr nh ph t tri n nh ng riêng L-so boz v melisitoz th hỉ m t số h ng ồng h hầu h t xạ khuẩn kh ng ph t tri n m i tr ờng l m nguồn muối mon ợ sử dụng tốt nitr t ngo i r n u sử dụng nguồn nitơ từ muối kh h ng xạ khuẩn Nguồn nitơ hữu từ phụ thu xit ki m xit trung tính ngoại trừ L-serin Hầu h t xạ khuẩn enzym ngoại b o enlluloz tạo th nh nguồn dinh d ỡng Đối v i muối sử dụng ờng muối v o ợ sử nh m th thuỷ phân tinh b t protein h ng vi sinh vật vi sử dụng hoặ o l m t ặ tính qu n trọng Xạ khuẩn 5% òn nồng òn bon [12] Đối v i nguồn nitơ th dụng tốt ợ hịu ợ nồng khả n ng hịu muối từ 3- o th th ờng bị tiêu di t 2.4 Phân loại định tên xạ khuẩn Trong số xạ khuẩn ợ ịnh tên th Actinomyces (Hart, 1970) lo i lâu ời Actinomyces israeli h ng ầu tiên (1889) v tr ng kh th kh bị thất lạ ợ oi l h ng xạ khuẩn kị khí ph t tri n ph ơng thứ giữ giống th bảo quản vi sinh vật lâu d i v i nhi u h ng giống Do kh ng h ng xạ khuẩn n o ợ t m r s m h ng m W ksm n ph t hi n v l u d nh mụ b s u tập giống ng (1916-1919) Cho nn y thêm nhi u xạ khuẩn ợ l u d nh mụ giống xạ khuẩn B ph ơng ph p phân loại xạ khuẩn th ờng dùng hi n n y l ph ơng ph p phân loại truy n thống ph ơng ph p phân loại kỹ thuật phân tử v phân loại số 2.4.1 Phƣơng pháp phân loại truyền thống r inski (1914) lần ầu tiên r hỉ tiêu v ặ i m sinh lý v Qu bảng t thấy ả h i h ng xạ khuẩn nghiên ứu n ng ti t r enzym ngoại b o phân giải tinh b t v ti m n ng ứng dụng u khả sein Đi u n y mở r húng ời sống 3.5 Phân loại hai chủng CP31X8 CP45X10 S u ti n h nh thử hoạt tính ối kh ng h ng xạ khuẩn ối v i m t số vi khuẩn ki m ịnh v dự v o hoạt tính xyl n z b n ầu Chúng t i nhận thấy ng l ặ tính ng qu n tâm xạ khuẩn ợ nghiên ứu v ứng dụng Hại h ng xạ khuẩn phân loại theo kh phân loại ợ thự hi n Ch ơng tr nh Xạ khuẩn quố t (International Streptomyces Project - ISP) 3.5.1 Đặc điểm nuôi cấy C v h ng xạ khuẩn ợ nu i m i tr ờng G uze I G uze II m i tr ờng ISP ký hi u từ 1-7 i u ki n nh m tả S u 14 v 21 ng y qu n s t m u sắ khuẩn ty khí sinh khuẩn ty hất hình dạng kí h th khuẩn lạ v i bảng m u huẩn t khả n ng sinh sắ tố sinh mel nin v so s nh ợ tr nh b y bảng Bảng 3.5: Đặc điểm nuôi cấy hai chủng CP31X8 CP45X10 Chủng xạ khuẩn CP31X8 Môi KTKS KTCC trƣờng ISP1 Y.2fb Y.1/2fb ISP2 Y.2fb Y.1/2fb ISP3 Y.2fb Y.2ba ISP4 R.2ca Y.2fb ISP5 Y.2fb Y.2ba ISP6 Y.2fb Y.1db ISP7 Y.2fb Y.2db Gauze1 R.2ca Y.1ba Gauze Y.2fb Y.1ba ISP1 Y.11/2db Y.1ba Sắc tố tan Vàng nt nt nt nt nt nt nt nt Không Melanin nâu Nâu en - - Sinh trƣởng ++ +++ ++ +++ ++ +++ ++ + + ++ CP45X10 ISP2 ISP3 ISP4 Y.fb GN.2gf Y.2db W.a GY.2ge Y.241/2d c ISP5 Wb Wa ISP6 Y.11/2db R.4ec ISP7 GY.2ge Y.241/2dc Gauze1 Y.11/2db Y.2ba Gauze Y.db Wb màu nt nt nt - +++ +++ ++ nt nt nt nt nt - +++ ++ +++ ++ +++ Ghi chú: + sinh trưởng bình thường; ++ sinh trưởng tốt; +++ sinh trưởng tốt (c) (a) (b) Hình 3.5: Mặt trƣớc (a), mặt sau (b) hình dạng khuẩn lạc (c) chủng xạ khuẩn CP31X8 số môi trƣờng khác (a) (b) (c) Hình 3.6: Mặt trƣớc (a), mặt sau (b) hình dạng khuẩn lạc (c) chủng xạ khuẩn CP45X10 số môi trƣờng khác 3.5.2 Đặc điểm hình thái chủng CP31X8 CP45X10 H nh th i nh ấu tạo th nh t b o h nh dạng uống sinh b o tử v trú b mặt b o tử l ặ i m qu n trọng phân loại xạ khuẩn H nh dạng uống sinh v o tử v hụp ảnh d v ấu ấu trú b mặt b o tử ợ qu n s t v i kính hi n vi qu ng họ v kính hi n vi i n tử Vi hụp ảnh kính hi n vi i n tử qu n s t ợ thự hi n Vi n vật li u Vi n kho họ Vi t N m H nh dạng bảo tử v uống sinh b o tử ợ th hi n d i hình 3.7 3.8 t nghiên ứu h nh th i h i h ng CP31X8 v CP45X10 ợ tr nh b y t m tắt bảng Bảng 3.6: Đặc điểm hình thái chủng CP31X8 CP45X10 Các đặc điểm uống sinh b o tử CP31X8 CP45X10 RF SRF Sm Sp Số b o tử huỗi 10-50 10-50 Màu sách KTKS Vàng Xanh Màu sác KTCC Vàng, vàng xám V ng nhạt vàng Không Vàng nâu không B mặt b o tử Sắ tố t n Sắ tố mel nine (a) (b) Hình 3.7: Bào tử (a) cuống sinh bào tử (b) chủng CP31X8 (a) (b) Hình 3.12: Bào tử (a) cuống sinh bào tử (b) chủng CP45X10 3.5.3 Đặc điểm sinh lý-sinh hóa hai chủng CP31X8 CP45X10 3.5.3.1 Khả sinh trƣởng nguồn đƣờng C bon l y u tố dinh d ỡng qu n trọng ối v i sinh tr ởng vi sinh vật l b khung ấu trú hất sống ần ho tất ả hợp hất hữu ấu tạo nên t b o V nghiên ứu khả n ng ồng ho ờng l loại hỉ tiêu qu n trọng nguồn ti n h nh phân loại xạ khuẩn theo kho phân Nomomur ISP Đ thử khả n ng ồng ho nguồn dụng m i tr ờng sở ISP9 th y ổi ờng kh loại nh u, húng t i sử ờng: D-glucoza, galactoza, maltoza, lactoza, mannoza, L-arabinoza, D-xylose, myo-inositol, D-manitol, D-fructoza, L-rhamnoza, saccharoza, raffinoza, cellobioza, sorbitol, treh noz nguồn n ng ph t tri n ờng h ng CP31X8 v CP45X10 ợ th hi n bảng Bảng 3.7: Khả sử dụng nguồn đƣờng khác hai chủng CP31X8 CP45X10 Nguồn đƣờng Khả sinh trƣởng CP31X8 CP45X10 D-glucoza + + Galactoza ++ +++ Maltoza +++ ++ Lactoza ± + Mannoza ++ +++ L-arabinoza ± + D-xyloza ++ ++ Myo-inositol + ++ D-manitol ++ + D-fructoza +++ ± L-rhamnoza ++ ++ Saccaroza + ± Raffinoza ± + Cellobioza ± +++ Sorbitol ± - Trehaloza ++ ± Khoáng - - Ghi : + phát triển tốt tốt đối chứng dương ( D-glucoza) - không phát triển phát triển yếu đối chứng âm (khoáng) ± phát triển đối chứng dương tốt đối chứng âm Qu bảng t thấy h ng xạ khuẩn n y nguồn ờng kh ờng kh nh u Vi ồng h nhi u nghiên ứu khả n ng sử dụng nh u nhằm giúp lự bon thí h hợp th họn v ịnh h ng ho vi nguồn t m nguồn tạo m i tr ờng lên men thí h hợp qu tr nh sản xuất thu hồi h phẩm enzym 3.5.3.2 Ảnh hƣởng nồng độ muối, pH, nhiệt độ Hoạt ho ng h ng loạt thu v o nhi t xạ khuẩn ũng nh vi sinh vật kh phản ứng theo trật tự x pH v khả n ng hịu nồng hỉ tiêu sinh lý – sinh ho qu n trọng bi t khả n ng thí h nghi l y u tố ịnh C phản ứng n y tuỳ muối t b o ây l vi sinh vật Những hỉ tiêu n y ho vi sinh vật v i m i tr ờng sống Trong ảnh h ởng mạnh phản ứng n y t ng dự huy n hi nhi t n loại xạ khuẩn hi nhi t nhi t t ng t ng qu gi i hạn ịnh th tố phả ứng th giảm C h ng xạ khuẩn ki n thí nghi m kh ợ nu i m i tr ờng Bennett i u nh u v k t th hi n bảng 3.9 Bảng 3.8 Nồng độ muối, pH, nhiệt độ, thích hợp cho hai chủng CP31X8 CP45X10 Đặc điểm Khả sinh trƣởng Nhi t (oC) Nồng muối (%) pH b n ầu CP31X8 CP45X10 15